HAX-1的生物学功能及其在病毒感染中作用的研究进展

造血干细胞特异蛋白1-相关蛋白X-1(HAX-1)是一种多功能细胞调节性蛋白,通过与多种蛋白相互作用在各种重要的生理过程中发挥作用。HAX-1可以通过维持线粒体的完整性或调节细胞通路的方式调控细胞凋亡,同时还参与细胞增殖、迁移和黏附等过程的调控。近年有许多研究结果表明,HAX-1可与多种病毒蛋白密切结合,在病毒感染过程中也发挥重要作用。文章综述了HAX-1的功能及其在病毒感染中作用的研究进展,以期为病毒的致病机制研究及感染宿主的潜在药物靶点研发提供新的思路。

猪塞内卡病毒A、猪水疱病毒和口蹄疫病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种鉴别猪塞内卡病毒A(SVA)、猪水疱病毒(SVDV)、口蹄疫病毒(FMDV)的方法,针对3种病毒的基因保守区域设计引物和探针,建立了可同时检测上述3种病毒的Taq Man三重荧光定量PCR方法。该方法仅能特异性扩增SVA和FMDV病毒基因以及SVDV阳性质粒,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、经典猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒的阳性样品cDNA或DNA无交叉反应,对3种病毒核酸的最低检出限均为10 copies/μL,组内和组间变异系数均小于4%。应用该方法对2019-2022年采集的吉林省部分地区267份病料和本实验室留存的30份猪血清样品进行检测,未检出SVA、FMDV以及SVDV。建立的三重荧光PCR方法有利于对3种病毒进行有效的流行病学调查,可给快速准确鉴别致猪水疱症状病毒性疾病提供诊断方法。

PEDV感染对宿主肠黏膜屏障和细胞影响的分子机制研究进展

近年来,猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)给我国畜牧业造成了严重的经济损失。随着人们对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)研究的深入,其致病机制也逐渐被揭晓,即PEDV进入宿主体内通过抑制干扰素的表达和诱导小肠细胞凋亡等机制对宿主产生严重影响。文章综述了PEDV蛋白组成及其对肠黏膜屏障和细胞影响的分子机制,以期为PED科学防控提供参考。

外泌体介导细胞损伤的研究进展

外泌体作为一种胞外小囊泡,由不同细胞主动分泌。有证据表明外泌体能够参与并介导靶细胞的许多生理过程。外泌体中包含多种类型的microRNA(miRNA)、DNA和蛋白质,有助于细胞间信息的传递,能调节受体细胞相关基因的表达,还能影响靶细胞的功能。细胞损伤作为疾病发生的病理基础,其调节过程中有外泌体的参与,外泌体不仅能作用于细胞间信号通路,还能通过外泌体miRNA作用于靶向蛋白等对细胞损伤修复起到调节作用。对外泌体在细胞损伤中作用的研究进展进行总结,并对其在动物疾病中的应用进行了展望。

小鹅瘟PCR诊断方法的建立和初步应用

根据发表的鹅细小病毒B株VP3基因序列 ,设计合成了 1对寡聚核苷酸引物。以国内分离的小鹅瘟病毒为摸板 ,筛选了 (PCR)最佳反应条件 ,并进行了敏感性、特异性和初步应用试验。结果表明 ,在 4 0 μL体积中 ,PCR最佳系统组成为 2uTaq酶、0 5mol/LdNTP和 2 0 pmol引物 ;最佳反应参数为 96℃变性 4 0s ,5 4℃退火 1min ,72℃延伸 1min ,30个循环。本方法可检出 2 5× 10 -1 5EID50 小鹅瘟病毒 ,并且仅能从小鹅瘟病毒的鹅胚培养物中扩增出与设计值大小相同的 375bp核苷酸片断 ,对照病毒扩增结果为阴性。通过对 6份临床病料的检查 ,2份呈阳性 ,其中 1份来自有典型小鹅瘟症状的雏鹅 ,1份来自无典型小鹅瘟症状的雏鹅。由此说明 。

大熊猫犬冠状病毒的分离与鉴定

以犬肾传代细胞(MDCK)从1只病死大熊猫肝脏中分离到1株病毒,命名为DXMV。电镜观察磷钨酸负染的病毒细胞培养物,发现冠状病毒样粒子,超薄切片上可见细胞浆内病毒包涵体。理化学和生物学鉴定结果表明,DXMV核酸类型为RNA,对氯仿、乙醚敏感,可耐受1%胰蛋白酶的作用,具有一定的耐酸性和耐热性,可在MDCK、FCWF、F81细胞中增殖,无血凝性和血吸附特性。血清中和试验结果表明,DXMV可被犬冠状病毒阳性血清中和。采用犬冠状病毒间接荧光抗体法染色DXMV细胞飞片,可在细胞浆内见到特异性荧光。以冠状病毒通用引物和犬冠状病毒特异性引物,可从大熊猫肝脏和不同代次的病毒细胞培养物中扩增出与预期值251bp和515bp大小相同的核苷酸片段。由此说明,该病毒为犬冠状病毒,大熊猫可被犬冠状病毒感染。

犬冠状病毒的分离鉴定及其纤突蛋白基因的克隆与序列比较

以犬胎原代细胞，采用同步接种、带毒传代和添加新细胞的方法，从１例腹泻犬脾脏和１例临床健康犬肠内容物中分离出２株犬冠状病毒（ＣＣＶＹＳ１，ＣＣＶＣＩ１）。该２株病毒可使ＣＲＦＫ细胞出现典型的细胞融合病变，与从美国引进的ＣＣＶＮＬ－１８参考株形成的细胞病变相似；电镜负染和超薄切片观察，分离毒株细胞培养物中均含有典型的冠状病毒粒子，并形成胞浆内包涵体；经理化学、生物学鉴定，具有ＣＣＶ的特性；间接免疫荧光试验鉴定，证明为ＣＣＶ；动物回归试验证明，ＣＣＶＹＳ１毒力较强，ＣＣＶＣＩ１毒力较弱。利用ＲＴ－ＰＣＲ技术，分别扩增了ＣＣＶＮＬ－１８、ＣＣＶＹＳ１和ＣＣＶＣＩ１株纤突蛋白（Ｓ）主要功能区基因片段，经克隆、序列测定、计算机比较核苷酸和推导的氨基酸序列，结果为：（１）ＣＣＶＹＳ１和ＣＣＶＣＩ１与国外发表的Ｋ３７８等５株ＣＣＶ和ＣＣＶＭＬ－１８株的同源性为９１．７％～９９．４％和９２．０％～９９．４％，而与ＴＧＥＶ和ＦＩＰＶ的同源性为９０．２％和８８．０％～９０．０％；Ａｂ抗原亚位点与ＣＣＶ相同，不同于ＴＧＥＶ和ＦＩＰＶ，进一步证明本研究分离的病毒为ＣＣＶ；（２）ＣＣＶＹＳ１、ＣＣＶＣＩ１株与Ｋ３７８等ＣＣＶ强毒株同源?

小鹅瘟病毒分离与初步鉴定

取死于具有小鹅瘟典型症状的 7日龄吉林白鹅脾脏 ,制成乳剂 ,接种于未免疫小鹅瘟疫苗的健康母鹅所产种蛋的 12日龄鹅胚尿囊腔。结果当盲传至第 3代 ,鹅胚死亡 ,电镜负染尿囊液观察到细小病毒样粒子。雏鹅接种试验结果表明 ,试验组雏鹅表现出小鹅瘟临床症状和剖检特征。由此证明 。

犬冠状病毒RT-PCR检测方法的建立和初步应用

根据Ｗｅｓｅｌｉｎｇ发表的犬冠状病毒（ＣＣＶ）Ｋ３７８株纤突蛋白（Ｓ）基因序列，设计合成了４条寡聚核苷酸引物Ｐ１（１８ｂｐ，１５２０～１５３７ｂｐ）、Ｐ２（１９ｂｐ，２０７２～２０９０ｂｐ）和Ｐ３（２０ｂｐ，２６２１～２６４０ｂｐ）、Ｐ４（２０ｂｐ，２９４４～２９６３ｂｐ）。以此为引物，以从美国引进的ＣＣＶＮＬ－１８参考株反转录产物为模板，在国内首先建立了ＣＣＶＲＴ－ＰＣＲ方法，并初步应用于国内ＣＣＶ分离株的鉴定。结果表明，以Ｐ１、Ｐ２和Ｐ３、Ｐ４为引物，只能从ＣＣＶＮＬ－１８株反转录产物中扩增出大小分别为５７１ｂｐ和３４３ｂｐ核苷酸片段，与理论设计值大小一致，而正常ＣＲＦＫ细胞和狂犬病等５种对照病毒扩增结果为阴性。ＲＴ－ＰＣＲ可检出１μＬ做１０５和１０３倍稀释的ＣＣＶＮＬ－１８株反转录产物，说明其具有很高的敏感性。初步应用试验结果，可从２株国内分离的ＣＣＶ反转录产物中扩增出５７１ｂｐ和３４３ｂｐ核苷酸片段。通过本研究不仅建立了敏感、特异的ＣＣＶＲＴ－ＰＣＲ检测方法，也为其Ｓ基因的克隆和序列测定奠定了基础。

基因序列分析鉴定犬冠状病毒分离株

采用双脱氧末端终止法测定了克隆于重组质粒YS1pUC、CI1pUC上的2株国分离病毒CCV YS1、CI1部分纤突蛋白基因序列,以计算机软件推导氨基酸序列,进行核苷酸和氨基酸序列的多重比校,绘制系统进化树,分析重要抗原位点氨基酸残基的变化情况,预测蛋白质疏水性和二级结构。结果表明:重组质粒中含有571bp的外源基因,核苷酸和氨基酸序列与国外发表的K378等5株CCV相应序列的同源性分别为91.7％～99.4％和92.0％～99.4％,而与猪传染性胃肠炎病毒PUR46株和猫传染性腹膜炎病毒1146株的同源性为90.2％和88.0％～90.0％。A抗原的Ab亚位点上的氨基酸残基与各株CCV相同,不同于其他冠状病毒。由此进一步证明,2株国内分离病毒CCV YS1、CI1为犬冠状病毒。

动物黏膜免疫佐剂研究新进展

黏膜佐剂可提高疫苗的免疫原性,延长抗原与黏膜及免疫活性细胞的作用时间,减少黏膜免疫耐受,增强疫苗免疫效果。本文主要综述了细菌脂肽、polyI:C和单磷酰类脂A等Toll样受体配体佐剂,芽胞、脂质体和纳米乳等黏膜传递系统以及其他新型黏膜佐剂的研究新进展,展望了黏膜佐剂在免疫学上的应用前景。

犬冠状病毒的分子生物学研究进展

本文对犬冠状病毒的蛋白组成和功能，病毒的基因组结构，复制和转录机制等分子生物学研究的最新进展进行了综述。

大熊猫肝脏分离病毒部分特性的研究

电镜观察磷钨酸负染的大熊猫肝脏分离病毒细胞培养物,发现冠状病毒样粒子。细胞培养物超薄切片上可见细胞浆内病毒包涵体。理化学和生物学特性研究结果表明,病毒对氯仿、乙醚敏感,可耐受1%胰蛋白酶的作用,具有一定的耐酸性和耐热性;病毒对FCWF细胞敏感,对Vero细胞不敏感,无血凝性和血吸附特性。采用犬冠状病毒阳性血清,经中和试验确定该分离病毒是一株犬冠状病毒,命名为CCVDXMV。以犬冠状病毒特异性PCR引物,可以从大熊猫肝脏组织和不同代次的病毒细胞培养物中,扩增出目的核苷酸片断。序列分析结果表明,该株病毒部分纤突蛋白基因序列与分离自美国的CCVNVSL株相应基因序列的同源性高达100%。

核酸探针检测犬冠状病毒方法的建立和初步应用

以3 2 P标记犬冠状病毒特异性RT_PCR产物制成核酸探针 ,与CCVNL_18株、犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒、狂犬病病毒反转录产物、正常CRFK细胞以及做 10～ 10 0 0 0倍稀释的CCVNL_18株反转录产物杂交 ,进行核酸探针的敏感性和特异性试验。结果表明 ,该探针仅与CCVNL_18株反转录产物呈阳性杂交 ,与对照病毒和正常细胞反转录产物均呈阴性反应。初步应用试验结果 ,该探针可与国内CCV分离病毒YS1、CI1株杂交 ,且可从 8份腹泻犬粪便中检出 5份CCV阳性病料。本研究为在我国开展犬冠状病毒感染的分子流行病学调查和临床诊断提供了一种敏感。

犬冠状病毒纤突蛋白基因的序列测定与比较分析

将两株犬冠状病毒国内分离毒CCVYS1、CCVCI1接种于CCV中和抗体效价低于 1∶4的 2月龄幼犬 ,观察接种犬临床表现、体温和剖检变化。结果表明 ,CCVYS1株毒力较强 ,CCVCI1株毒力较弱。采用RT_PCR方法扩增出两株病毒部分S基因序列 ,克隆于pUC1 9SmaI位点或pGEM_T载体中 ,以双脱氧末端终止法测定插入质粒的cDNA核苷酸序列。用PROSIS计算机软件推导氨基酸序列 ,并与从Genbank上查到的CCV、TGEV和FIPV相应氨基酸序列进行多重比较。分别推测 ,CCVS蛋白上Ac抗原位点的氨基酸残基可能是影响病毒毒力的因素之一。

犬冠状病毒感染

犬冠状病毒感染是由犬冠状病毒引起犬的一种以急性胃肠炎为主要症状的高度接触性传染病 ,对养犬业危害严重。本文对近年来该病的病原、流行病学、诊断和防治等方面的国内外研究进展进行了综述。

大熊猫犬冠状病毒部分纤突蛋白基因的扩增与序列分析

大熊猫是我国特有的濒危物种,近年来人们在研究其生态环境、生理特点、繁殖性能、人工繁育等方面取得了显著成绩[1].然而,大熊猫疾病,特别是传染性疾病对大熊猫的生存构成了严重的威胁.

犬冠状病毒在犬体内分布的初步研究

对电镜检查粪便中发现有犬冠状病毒的 4只犬 ,进行了血常规、尿常规、肝肾功能和心电图检查 ,均未发现明显异常。扑杀后经电镜负染检查 ,除肠内容物外 ,在其肝、心、脾。