黄芪建中汤临床应用及实验研究进展

黄芪建中汤（Huangqi Jianzhong Tang,HQJT）为仲景经方,出自《金匮要略》,具有温中补虚、缓急止痛之功效,治疗＂虚劳里急,诸不足＂。该方由黄芪、饴糖、炙甘草、桂枝、芍药、生姜、大枣7味药组成,全方用药精当,配伍严谨。有学者指出凡脾胃虚弱、阴阳两虚的内伤杂病,不论临床表现如何变化,只要切合病机,均可考虑选用本方,可见其临床应用范围广泛。

抑制CYP2E1增强何首乌水提物肝毒性作用及其毒性成分筛选研究

目的研究肝细胞色素氧化酶P450(CYP450)亚型CYP2E1与何首乌肝毒性的关系并筛选有关毒性成分。方法MTT法检测CYP2E1特异性抑制剂二乙基二硫代氨基甲酸钠(DDTC)作用后何首乌水提物(PMR)对人肝细胞L02的毒性作用,及PMR和6种成分2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4-tetrahydroxy stilbene glycoside,TSG)、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(emodin-8-O-β-D-glucoside,EG)、大黄素(emodin,EM)、没食子酸(gallic acid,GA)、大黄素甲醚(physcione,PH)和大黄酸(rhein,RH)对稳定转染shCYP2E1的HepaRG细胞的毒性作用;利用CYP2E1特异性抑制剂4-甲基吡唑(4-methylpyrazole,4-MP)作用大鼠,进一步验证何首乌对大鼠的肝毒性作用与CYP2E1抑制的关系。结果DDTC处理L02细胞24 h后,CYP2E1活性显著下降(P<0.05),PMR联用DDTC后细胞活力明显下降(与PMR、DDTC组相比,P<0.01);成功构建了HepaRG-shCYP2E1细胞系,与空质粒对照组相比,其CYP2E1 mRNA表达下降70%以上;与对照组相比,何首乌提取物PMR、EM、PH及RH对HepaRG-shCYP2E1的细胞毒作用显著增加(P<0.01),而TSG和EG在一定浓度下细胞毒作用降低(P<0.01);大鼠实验表明,何首乌与CYP2E1抑制剂联合作用于大鼠后,与空白组、抑制剂组相比,ALT及AST的水平均明显升高,与何首乌组相比,AST水平显著升高,说明大鼠体内CYP2E1被抑制后,何首乌的肝毒性作用增强。结论CYP2E1活性或表达下降可导致何首乌水提物肝细胞毒性及大鼠肝毒性增加,其毒性成分可能为游离蒽醌类成分EM,PH及RH。

血清胃蛋白酶原检测在慢性萎缩性胃炎早期筛查中的价值分析

慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis,CAG）是临床常见的消化道系统疾病之一,其病理表现伴有腺体数量减少、萎缩、肠上皮化生和不典型增生。该病病程长且易恶变,是消化系统难治性疾病之一,也是现代医学研究的热点和难点[1]。1978年世界卫生组织将CAG列为胃癌前状态。目前,CAG的发病率呈上升趋势,且出现低龄化现象,严重威胁人类的生存质量[2]。因此,做到对CAG早期诊断和及时治疗,对有效降低胃癌的发病率具有现实意义。然而,由于CAG的临床症状不明显且缺乏特异性,因此易被忽视。目前,消化内镜技术、病理活检、尿素呼气试验和尿素酶试验快速检测等手段被用作CAG临床诊断的主要依据。

基于细胞色素氧化酶CYP2D6的何首乌肝细胞毒性及相关成分研究

目的探究何首乌及其主要成分对人肝细胞L02中细胞色素氧化酶CYP2D6 mRNA表达的影响以及抑制CYP2D6活性或表达对何首乌肝细胞毒性的影响及相关成分辨识。方法利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)确定何首乌水提物(Polygoni Multiflori Radix,PMR)及其主要成分对L02细胞CYP2D6 mRNA表达的影响;使用CYP2D6抑制剂奎尼丁初步探究PMR对CYP2D6低活性L02细胞系的细胞毒作用;构建CYP2D6沉默的L02细胞系L02-shCYP2D6,进一步研究L02细胞中CYP2D6表达降低对PMR及其主要成分肝细胞毒性的影响;可能的肝细胞毒性成分与人肝微粒体进行体外孵育,通过考察加入不同CYP450酶特异性抑制剂对其代谢消除率的影响,探究影响其代谢的主要CYP450酶。结果在实验浓度下,PMR和芦荟大黄素(AE)对CYP2D6 mRNA表达有显著抑制作用(P<0.01),大黄素(EM)无明显影响,2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(TSG)仅在高浓度有一定激活作用,其余浓度无影响;PMR联合奎尼丁作用于L02细胞,发现PMR在高浓度下对L02细胞有一定毒性(P<0.01),各浓度抑制剂与之联用后均明显加重了其肝细胞毒性(P<0.01);PMR及其主要成分作用于CYP2D6敲低的L02细胞系,除TSG在高浓度下提升了肝细胞毒性外(P<0.01),PMR、EM、AE在实验浓度范围内肝细胞毒性均显著增加(P<0.01);人肝微粒体体外孵育实验显示,CYP2D6为EM、AE重要的代谢酶。结论PMR能够抑制肝细胞中CYP2D6的表达,而CYP2D6的低活性或低表达能够加重PMR肝细胞毒性,其中主要的毒性成分为EM和AE。

CYP1A2低表达增强何首乌水提物及其相关单体成分肝细胞毒性的研究

目的建立CYP1A2低表达人正常肝细胞株,探究何首乌水提物(PMR)及其相关单体成分的肝细胞毒性与CYP1A2低表达的关系。方法运用RNA干扰技术构建稳定转染shCYP1A2的2种人正常肝细胞系L02、HepaRG,RT-qPCR验证干扰效果;PMR及其相关单体成分:二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(emodin-8-O-β-D-glucopyranoside,EG)、没食子酸(gallic acid,GA)、大黄素(emodin,EM)、大黄素甲醚(physcion,PH)、芦荟大黄素(aloe-emodin,AE)、大黄酸(rhein,RH)作用CYP1A2敲低的L02及HepaRG细胞48 h,MTT检测细胞活力。结果成功构建了稳定转染shCYP1A2的2种人正常肝细胞系,L02-shCYP1A2、HepaRG-shCYP1A2与相应空质粒对照组相比,CYP1A2 mRNA表达分别下降了59.81%(L02-shCYP1A2)和66.60%(HepaRG-shCYP1A2)。1.5~3 mg/mL PMR作用CYP1A2敲低的L02-shCYP1A2细胞48 h,细胞毒性显著增加(P<0.01);2.5~3 mg/mL PMR作用CYP1A2敲低的HepaRG-shCYP1A2细胞48 h,细胞毒性显著增加(P<0.05、P<0.01);40~120μmol/L GA作用CYP1A2敲低的L02-shCYP1A2及HepaRGshCYP1A2细胞48 h,细胞毒性显著增加(P<0.01、P<0.01);AE作用CYP1A2敲低的HepaRG-shCYP1A2细胞48 h,细胞毒性显著增加(P<0.01)。结论CYP1A2低表达显著增加PMR的肝细胞毒性,推测GA和AE可能为相关的增毒成分。

何首乌与制何首乌对人尿源性干细胞的作用差异及机制研究

目的以人尿源性干细胞(human urine-derived stem cells,hUSCs)为研究对象,探究何首乌(Polygoni Multiflori Radix,PMR)与制何首乌(Polygoni Multiflori Radix Praeparata,PMRP)对人成体干细胞的作用差异及机制。方法利用高效液相色谱法对何首乌水提物(PMR)与制何首乌水提物(PMRP)中主要活性成分大黄素(emodin,EM)和二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxy-stilbene-2-O-β-D-glycoside,TSG)进行定量分析;MTT法研究PMR及PMRP对hUSCs活力的影响;根据EM和TSG在2种水提物中的含量和比例,比较单成分及2种成分按比例联用对hUSCs活力的影响;流式细胞术检测hUSCs细胞周期和细胞凋亡,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果PMR中TSG和EM的含量分别为77.68、0.53 mg/g,PMRP中TSG和EM的含量分别为29.37、0.36 mg/g;0.5、1.0 mg/mL浓度的PMR对细胞有明显毒性,相同剂量下,PMRP促进细胞增殖;0.5~4μmol/L EM促细胞增殖,320、640μmol/L TSG抑制细胞活力;按1∶160(约为PMR比例)和1∶80(约为PMRP比例)联用后对细胞活力的抑制作用较单用显著增加;PMR组及1∶160联用组细胞周期出现G0/G1期阻滞,且细胞凋亡率较PMRP组及1∶80联用组高;Western blot结果显示,PMR组中细胞p21水平上调;CDK1、CDK2及Rb磷酸化水平降低,而PMRP组呈相反趋势。结论相同条件下,PMR较PMRP表现明显细胞毒作用,而PMRP表现促细胞活力作用,说明EM与TSG比例的改变可能是何首乌炮制减毒的机制之一。

黄芪建中汤临床应用及实验研究进展

黄芪建中汤为仲景经方，出自《金匮要略》，具有温中补虚、缓急止痛之功效，治疗“虚劳里急，诸不足”。该方由黄芪、饴糖、炙甘草、桂枝、芍药、生姜、大枣7味药组成，全方用药精当，配伍严谨。有学者指出凡脾胃虚弱、阴阳两虚的内伤杂病，不论临床表现如何变化，只要切合病机，均可考虑选用本方，可见其临床应用范围广泛，并且充分体现了其“异病同治”的科学内涵。

中药复方调控肠道菌群改善泄泻的作用及机制研究进展

泄泻是一种临床表现为大便质地稀薄,排便频次与排便量均增多的胃肠道病症,缠绵难愈,给患者的生活质量带来严重影响,而在治疗上,中医药展现出了独特的优势。众多研究表明,肠道菌群失衡乃引发泄泻的关键因素之一。中药复方凭借其多组分、多靶点的综合效应,能够有效调节肠道菌群及其代谢产物平衡,通过多种途径改善泄泻,如抑制肠道炎症、修复肠道屏障、抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴活性失调等。通过聚焦于不同中医证候泄泻的肠道菌群特征,系统梳理了常用的中药复方对这些特征的调控作用,并深入探讨了肠道菌群在泄泻发病中的作用机制,为中药复方治疗泄泻及相关肠道疾病提供更为坚实的理论支撑。

UHPLC-Q Exactive轨道肼高分辨质谱在线快速识别黄芪建中汤的化学成分

本文采用UHPLC-Q Exactive轨道肼高分辨质谱建立了快速、灵敏的液质联用方法在线快速鉴定黄芪建中汤的化学成分,构建了较为全面的黄芪建中汤化学成分谱,用于该复方的质量评价。依据离子峰的保留时间、精确分子量和多级质谱碎片,与对照品及文献报道数据比较,对黄芪建中汤的整体化学成分进行了在线快速鉴定。共鉴定了黄芪建中汤中71种化学成分,主要包括皂苷类和黄酮类,另外还有个别生物碱类和酚类化合物等。这些成分中,来源于黄芪的有20种、白芍14种、甘草37种、生姜3种、桂枝大枣各2种,为黄芪建中汤的质量控制以及药效物质基础研究提供了科学依据。

黄芪建中汤治疗大鼠慢性萎缩性胃炎的代谢组学研究

目的分析黄芪建中汤(Huangqi Jianzhong Decoction,HQJZ)对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠血浆内源性代谢物紊乱的调控作用,阐明其对靶标的调控途径。方法以脱氧胆酸钠和氨水溶液交替饮用进行化学诱导,结合饥饱失常方法复制CAG大鼠模型。将大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药(替普瑞酮)组和HQJZ高、中、低剂量组,连续4周ig给药。利用传统药效学指标(体质量、生化指标和组织病理学)评价HQJZ药效。用1H-NMR采集血浆代谢物数据,进行多元统计分析,寻找与HQJZ疗效相关的药效标志物。并结合偏最小二乘回归分析(PLS-RA)和Met PA筛选出与疗效最相关的代谢通路。结果 HQJZ可显著抑制CAG病变,与替普瑞酮作用相当。1H-NMR代谢组学找到18个与CAG密切相关的血浆代谢物。HQJZ可显著调节3-羟基丁酸、乳酸、醋酸、琥珀酸等10个代谢物的紊乱,通路分析显示精氨酸-脯氨酸代谢、甘油代谢和甘氨酸-丝氨酸-苏氨酸代谢为其治疗CAG的主要靶标途径。结论 HQJZ对CAG治疗作用的主要效应机制涉及其对能量平衡、免疫失调、炎症和和氧化应激的调节作用。

非靶标代谢组学研究的影响因素分析

代谢组学技术是近10年来国际上提出和发展的新型组学技术,是系统生物学的重要组成部分。其中,非靶标代谢组学是研究最早且应用最广的方法。然而,由于代谢物种类多,理化性质差异大,加之样本对环境变化较敏感,导致了样本从收集、处理到储存过程的波动都会对代谢轮廓的分析产生一定影响。此外,代谢组学研究还涉及分析科学以及化学计量学等专业知识的应用。如何应用现代高通量分析技术(核磁共振和质谱)高精度快速对大量样本进行分析,对海量的原始数据进行预处理及挖掘,对差异代谢物准确定性和定量分析,是非靶标代谢组学研究现存的难点和热点。本文综述分析了近年来非靶标代谢组学研究过程中的一些影响因素及应对策略。