目的探讨流式探针法在分析、分选丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)特异性B细胞以及全人源单克隆抗体发现中的作用。方法采用伯胺标记法制备HCV特异性探针;使用流式细胞术检测和分选HCV特异B细胞,并体外通过单个B细胞抗体克隆技术...目的探讨流式探针法在分析、分选丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)特异性B细胞以及全人源单克隆抗体发现中的作用。方法采用伯胺标记法制备HCV特异性探针;使用流式细胞术检测和分选HCV特异B细胞,并体外通过单个B细胞抗体克隆技术从分选的HCV特异性B细胞中克隆表达抗体;应用ELISA技术和假病毒中和试验检测抗体的结合活性以及中和活性。结果探针法能有效地检测HCV特异的记忆性B细胞,HCV患者探针阳性细胞频率明显高于正常人(U=0.0004,P <0.0001)。通过单细胞分选HCV特异的记忆性B细胞,体外克隆表达获得6个单克隆抗体,其中有5个与HCV膜蛋白具有结合活性,2个显示具有较强中和活性。结论伯氨标记法制备HCV特异性探针是一种简单高效的探针制备方法,结合流式细胞术可用于HCV特异B细胞的检测以及分选。展开更多
目的了解郴州地区静脉吸毒人群中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)和丁型肝炎病毒(hepatitis D virus,HDV)的感染状况及基因型的分布特征;探究共感染患者病毒载量的水平变化以及HBV/HCV共感...目的了解郴州地区静脉吸毒人群中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)和丁型肝炎病毒(hepatitis D virus,HDV)的感染状况及基因型的分布特征;探究共感染患者病毒载量的水平变化以及HBV/HCV共感染中病毒相互作用的影响因素。方法收集2014~2018年郴州市戒毒所和美沙酮门诊中静脉吸毒志愿者血样,排除艾滋、梅毒等感染性疾病后共纳入样本2909例。使用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、丙型肝炎IgG抗体(hepatitis C IgG antibody,HCV-IgG)或丁型肝炎IgG抗体(hepatitis D IgG antibody,HDV-IgG)的水平。巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增感染样本的脱氧核糖核酸(deoxyribo nucleic acid,DNA)或核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),测序鉴定其基因型,并通过Real-time PCR对病毒载量进行定量分析。结果(1)HBsAg、HCV-IgG和HDV-IgG在静脉吸毒人群血清中的阳性率分别为20.49%、34.03%、3.85%。(2)基因型分析发现HBV基因型以B型(86.74%)为主,C型(11.94%)相对少见;HCV基因6a型为主要感染型(51.33%),其次为3a(20.28%)、3b型(16.98%);HDV基因型均为Ⅱ型。(3)HCV单感染患者的HCV RNA病毒载量高于HBV/HCV共感染患者(P=0.007);HBV单感染患者的HBV DNA病毒载量高于HBV/HDV共感染患者(P=0.013)和HBV/HCV/HDV三重感染患者(P=0.042);HBV/HDV共感染患者HBsAg水平高于HBV单感染患者(P=0.003)和HBV/HCV共感染患者(P=0.004)。(4)Logistic回归模型分析结果表明HBsAg水平与慢性HCV感染的自发清除显著相关(OR=1.53,95%CI:1.19~1.96),HCV RNA载量可独立并且准确地预测HBV血清清除(OR=1.36,95%CI:1.03~1.80)。结论HBsAg而非HBV DNA是竞争HCV复制的主要因素,高HCV病毒载量可能有益于HBV感染的自发清除。展开更多
全球有超过7 000万名丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)慢性感染患者,给社会带来严重的公共卫生安全问题。直接抗病毒药物(Direct antiviral drugs,DAA)能够有效地治愈慢性丙型肝炎病毒感染,但治愈后患者仍存在再感染的可能,预防性疫...全球有超过7 000万名丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)慢性感染患者,给社会带来严重的公共卫生安全问题。直接抗病毒药物(Direct antiviral drugs,DAA)能够有效地治愈慢性丙型肝炎病毒感染,但治愈后患者仍存在再感染的可能,预防性疫苗(Prophylactic vaccine)是彻底切断HCV传播的最有效途径。目前HCV预防性疫苗的研发已取得一定进展,能够诱导极少数受试者产生广谱中和抗体(Broadly neutralizing antibodies),如何在绝大多数个体中诱导保护性广谱中和抗体则是当前HCV预防性疫苗研究所面临的最大挑战。本文总结了当前疫苗免疫学的研究进展:包括抗原特异的B细胞前体(Precursor B cell)、滤泡辅助性T细胞(Follicular T helper cell,Tfh)、滤泡调节性T细胞(Follicular T regulatory cell,Tfr)、抗体重链基因1-69(VH1-69)编码抗体成熟特点;基于胚系靶向(Germline-targeting)的免疫原设计与序贯免疫策略(Sequential immunization)等,期望能为HCV疫苗研究提供新的思路。展开更多
文摘目的探讨流式探针法在分析、分选丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)特异性B细胞以及全人源单克隆抗体发现中的作用。方法采用伯胺标记法制备HCV特异性探针;使用流式细胞术检测和分选HCV特异B细胞,并体外通过单个B细胞抗体克隆技术从分选的HCV特异性B细胞中克隆表达抗体;应用ELISA技术和假病毒中和试验检测抗体的结合活性以及中和活性。结果探针法能有效地检测HCV特异的记忆性B细胞,HCV患者探针阳性细胞频率明显高于正常人(U=0.0004,P <0.0001)。通过单细胞分选HCV特异的记忆性B细胞,体外克隆表达获得6个单克隆抗体,其中有5个与HCV膜蛋白具有结合活性,2个显示具有较强中和活性。结论伯氨标记法制备HCV特异性探针是一种简单高效的探针制备方法,结合流式细胞术可用于HCV特异B细胞的检测以及分选。
文摘目的了解郴州地区静脉吸毒人群中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)和丁型肝炎病毒(hepatitis D virus,HDV)的感染状况及基因型的分布特征;探究共感染患者病毒载量的水平变化以及HBV/HCV共感染中病毒相互作用的影响因素。方法收集2014~2018年郴州市戒毒所和美沙酮门诊中静脉吸毒志愿者血样,排除艾滋、梅毒等感染性疾病后共纳入样本2909例。使用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、丙型肝炎IgG抗体(hepatitis C IgG antibody,HCV-IgG)或丁型肝炎IgG抗体(hepatitis D IgG antibody,HDV-IgG)的水平。巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增感染样本的脱氧核糖核酸(deoxyribo nucleic acid,DNA)或核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),测序鉴定其基因型,并通过Real-time PCR对病毒载量进行定量分析。结果(1)HBsAg、HCV-IgG和HDV-IgG在静脉吸毒人群血清中的阳性率分别为20.49%、34.03%、3.85%。(2)基因型分析发现HBV基因型以B型(86.74%)为主,C型(11.94%)相对少见;HCV基因6a型为主要感染型(51.33%),其次为3a(20.28%)、3b型(16.98%);HDV基因型均为Ⅱ型。(3)HCV单感染患者的HCV RNA病毒载量高于HBV/HCV共感染患者(P=0.007);HBV单感染患者的HBV DNA病毒载量高于HBV/HDV共感染患者(P=0.013)和HBV/HCV/HDV三重感染患者(P=0.042);HBV/HDV共感染患者HBsAg水平高于HBV单感染患者(P=0.003)和HBV/HCV共感染患者(P=0.004)。(4)Logistic回归模型分析结果表明HBsAg水平与慢性HCV感染的自发清除显著相关(OR=1.53,95%CI:1.19~1.96),HCV RNA载量可独立并且准确地预测HBV血清清除(OR=1.36,95%CI:1.03~1.80)。结论HBsAg而非HBV DNA是竞争HCV复制的主要因素,高HCV病毒载量可能有益于HBV感染的自发清除。
文摘全球有超过7 000万名丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)慢性感染患者,给社会带来严重的公共卫生安全问题。直接抗病毒药物(Direct antiviral drugs,DAA)能够有效地治愈慢性丙型肝炎病毒感染,但治愈后患者仍存在再感染的可能,预防性疫苗(Prophylactic vaccine)是彻底切断HCV传播的最有效途径。目前HCV预防性疫苗的研发已取得一定进展,能够诱导极少数受试者产生广谱中和抗体(Broadly neutralizing antibodies),如何在绝大多数个体中诱导保护性广谱中和抗体则是当前HCV预防性疫苗研究所面临的最大挑战。本文总结了当前疫苗免疫学的研究进展:包括抗原特异的B细胞前体(Precursor B cell)、滤泡辅助性T细胞(Follicular T helper cell,Tfh)、滤泡调节性T细胞(Follicular T regulatory cell,Tfr)、抗体重链基因1-69(VH1-69)编码抗体成熟特点;基于胚系靶向(Germline-targeting)的免疫原设计与序贯免疫策略(Sequential immunization)等,期望能为HCV疫苗研究提供新的思路。
