猪肠外致病性大肠杆菌SGPLB02株的分离鉴定与特性研究

研究了某屠宰场待上市猪分离的肠外致病性大肠杆菌SGPLB02菌株的特性.进行了细菌分离培养、形态与生化试验鉴定、药敏试验、毒力基因PCR检测、小鼠致病性试验等.鉴定结果显示该菌株生化特性符合大肠杆菌产酸产气、能分解多种糖分等的生化特性;药敏试验结果显示其对头孢噻吩、青霉素、氨苄青霉素等22种药物耐药,对头孢唑林、羧苄西林、丙氟哌酸及罗美沙星4种药物中度敏感,对头孢他啶、头孢拉定、头孢曲松钠等10种药物敏感;PCR检测出该菌株携带STb、fyuA、fimC等6种毒力基因;小鼠致病性试验结果表现为高剂量感染组小鼠均死亡,低剂量感染组小鼠均存活.研究为SGPLB02菌株能够成为疫苗候选株提供数据参考.

粤北地区鸭源沙门菌分离鉴定及生物学特性研究

为了解粤北地区鸭源沙门菌流行菌株生物学特性,本研究对鉴定的鸭源沙门菌菌株进行了血清型鉴定、毒力基因检测、药敏试验及致病性初步试验。结果显示,病死鸭组织沙门菌分离率为57.14%(16/28);鉴定为鼠伤寒沙门菌占62.5%(10/16),肠炎沙门菌占31.25%(5/16)。分离菌株最少携带了12个毒力基因,最多携带了19个毒力基因。分离菌株对阿莫西林、青霉素、罗红霉素等耐药率超过90%,对多西环素、大观霉素、环丙沙星、阿米卡星等较为敏感,所有菌株呈多重耐药。分离菌株可导致小鼠发病和部分死亡。研究结果表明,沙门菌在粤北地区发病肉鸭中有较高感染率,流行的优势血清型为鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌,流行菌株普遍存在多重耐药性且具有一定的致病性。

5种猪源消化道传播病原体荧光定量PCR检测方法的建立

猪源人兽共患病不仅威胁公共卫生安全,还威胁生猪养殖业的健康发展;其中消化道传播是其主要的传播途径。为及时鉴定出经消化道传播的病原体,本试验建立了猪源大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌和志贺菌的四重荧光定量PCR和戊型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法,并优化反应体系和条件,实现5种病原体的同时检测;并利用荧光定量PCR与普通PCR对117份猪临床样品(病变组织、粪便和肌肉等)进行对比检测。结果显示,建立的荧光定量PCR能够在1.5 h内完成对大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌、志贺菌和戊型肝炎病毒5种病原体的特异性检测,与其他常见细菌和病毒无交叉反应,检测极限值可达5个拷贝,标准曲线相关系数均不低于0.997,线性范围涵盖1×10^(1)~1×10^(9),批内和批间变异系数(CV)均低于3.16%。建立的荧光定量PCR与普通PCR方法检测结果的符合率达到95.73%~100%,具有较好的一致性。117份临床样品中大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌、志贺菌和戊型肝炎病毒各自的阳性率分别为31.62%、17.95%、6.84%、5.13%和11.11%。结果表明,本试验所建立的荧光定量PCR方法灵敏、特异、稳定,能够同时、快速区分检测上述5种猪源消化道传播病原体,可为猪肉制品从产地到餐桌全环节样品的监测提供有力的技术支持。

动物免疫学实验课程教学改革实践

从实验教学内容、教学手段和考核评价3个方面入手,对动物免疫学实验课程教学现状进行分析,并以应用为导向进行教学改革实践。教学内容方面,选用自编动物免疫学实验教学指导书,结合案例设计实验教学内容和学时,以及加强对学生数据分析和应用能力的培养;教学手段方面,减少验证性和重复性实验,利用线上教学资源满足学生学习需求;考核评价方面,综合考核实验教学效果。结果表明,在该教学模式下,学生的就业竞争力得到明显增强,教学实践成效明显,为动物医学专业人才培养模式创新与优化提供参考。

猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒一步法双重RT-PCR检测方法的建立与应用

本研究旨在建立一种用于临床腹泻病例中猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)快速检测的一步法双重RT-PCR方法。根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特性引物,经最佳反应条件的优化和选择,结果显示,该一步法双重RT-PCR检测方法能同时特异性扩增PEDV和TGEV,该方法可检测到稀释度1×10-5的疫苗毒。应用本方法检测2015年度实验室收集的疑似样品,PEDV阳性率为100%。本研究建立的方法快速、敏感性高、特异性强,可用于临床PEDV和TGEV的快速检测及流行病学调查。

梅花猪品种资源的保护与遗传保种研究探讨

大白花猪是一种优良的地方猪种,随着规模化养猪的扩大,有的品系数量锐减,甚至濒临灭绝。作者综述了大白花猪粤北品系的代表——梅花猪的现有养殖状况及其特性,提出以梅花猪为例等地方优质畜禽品种资源保护的重要性,重点阐述了现有的猪种遗传资源的保存方法、猪体细胞克隆技术的发展与应用、猪体细胞克隆操作技术的探索等方向的研究概况,并探讨了梅花猪可开发与利用的方向。

高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株Nsp2基因分段克隆表达及其单克隆抗体的制备

分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2,扩增和克隆JXA1株Nsp2基因的4个片段,并将它们分别插入pGEX-6P-1表达载体构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达得到蛋白,纯化后进行活性鉴定。以分段表达的蛋白为抗原,建立间接ELISA方法用于杂交瘤细胞株的筛选。用PRRSVNVDC-JXA1株灭活疫苗对BALB/c小鼠进行常规免疫,最后一次用活毒加强免疫,取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,经过选择性培养、有限稀释筛选到1株针对Nsp2的杂交瘤细胞株6B8。鉴定结果表明,该株杂交瘤细胞仅与4个蛋白片段中的Nsp2F1有反应,细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体,上清效价达1∶210,腹水效价达1∶106。本研究成功表达了4个PRRSV JXA1株的非结构蛋白Nsp2的片段,以其为抗原建立筛选方法,得到1株针对Nsp2的单克隆抗体,为研究Nsp2功能和建立相关诊断方法奠定物质基础。

猪瘟疫苗研究进展

文章综述了国内外猪瘟(classical swine fever,CSF)疫苗的研究现状。对灭活疫苗、弱毒疫苗和新型疫苗的研究情况进行概述,重点阐述了新型疫苗的研究进展,为进一步研究和开发新的猪瘟疫苗、制定良好猪瘟免疫方案有效控制猪瘟提供参考。

猪流行性腹泻弱毒疫苗研究进展

分析了我国猪流行性腹泻疫苗的使用现状,从疫苗毒株的选择、野毒株的分离和培养、毒株的致弱、疫苗安全性和免疫效力等方面综述了猪流行腹泻弱毒疫苗的研究进展,以期为新形势下进一步开展猪流行腹泻疫苗的研发提供借鉴与参考。

猪舍空气病原微生物与环境通风的关系研究进展

在介绍生猪生产环境控制因素的基础上,综述了猪舍空气中病原微生物种类、猪舍环境通风控制、评价方法、检测技术等方面的研究现状与进展,并对今后的研究方向进行了展望。

现代商品仔猪传代肾细胞株的培育与应用研究

细胞系是动物病毒分离培养的重要载体。本研究以现代商品化仔猪肾脏为原始材料,拟培育新的细胞系用于动物病毒的分离和培养。利用胰酶消化法和差速贴壁相结合方法,分离纯化仔猪肾上皮细胞,并在体外进行传代培养和筛选。结果显示,试验成功得到一株可以连续传代的细胞株,命名为SDPK-D,且已在体外连续传代90代。SDPK-D细胞株F33和F83代倍增时间分别为40.9和32.7h,细胞活率分别为97.55%和98.86%,8h细胞贴壁率分别为91.67%和97.06%。在该细胞株接种猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪流感病毒(SIV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性病料均出现明显的细胞病变。本研究首次针对现代商品猪培育出一株可以在体外连续传代的细胞株,并对多种动物病毒敏感,为相关动物病毒的分离培养提供了新的细胞系选择。

养殖重金属污染的现状与修复方法研究概况

随着规模化养殖业的发展,重金属添加剂使用量增多,生产中所产生的养殖废弃物重金属污染对环境造成不小的危害,且没有及时有效处理,有的则日积月累造成短期内难以恢复,甚至影响农产品质量安全及人类健康。文章介绍了养殖业中重金属的使用概况、我国养殖重金属污染的现状、重金属污染检测方法、重金属污染修复方法及绿色饲料添加剂的使用,并对如何有效减少畜禽养殖业的重金属排放及土壤重金属污染的修复工作进行了展望。

2014年-2015年粤北规模猪场H1亚型猪流感血清学调查与分析

为调查粤北地区规模化猪场H1亚型猪流感病毒的流行和感染情况,采用H1亚型猪流感抗体检测试剂盒检测2014年-2015年采自粤北25个未进行SIV免疫的规模化猪场的376份猪血清。结果表明,2014年和2015年H1亚型猪流感感染总抗体率分别为13.04%和14.58%,而1月~3月的感染抗体阳性率分别为19.05%和25.00%。该地区H1亚型猪流感感染抗体阳性率相对较低,表现出一定的区域性特征,1月~3月感染抗体阳性率均明显高于其他月份,该地区冬季抗体阳性率相对较高。

梅花猪猪肺炎支原体母源抗体对疫苗免疫抗体影响的研究

梅花猪是我国地方猪种的宝贵资源,呼吸道疾病对地方猪种的养殖造成较大影响,而猪肺炎支原体在猪呼吸道疾病综合征的发生中起到重要的作用,疫苗免疫是有效控制该病感染的重要途径.本研究检测疫苗免疫后不同日龄梅花猪抗体的变化规律,结果表明大部分猪只35日龄抗体达到最低值,梅花猪的猪肺炎支原体母源抗体越高对疫苗免疫影响越大.

中华竹狸的特性及人工开发饲养前景

结合当前特种动物养殖情况,分别介绍了中华竹狸的特性和饲养要点,并指出竹狸饲养有利于发展南方山区特种经济,具有较高的开发养殖前景.

基于OBE理念的“动物微生物学”实验课堂教学改革探索

“动物微生物学”是动物科学专业的必修课程,其实验课程教学是将动物微生物相关基础知识转化为实践技能的重要环节。基于OBE理念,探索“动物微生物学”实验课程教学的改革,构建了多种教学方式组合模式下的实验教学体系。结果表明,与传统方法相比,该体系获得更多的认可,90%以上的学生认识到团队合作的重要性,实验成绩优秀率逐年增加,并在大学生创新创业教育中有所突破。

现代商品仔猪肾细胞系SDPK-D的培育

将胰酶消化法和差速贴壁等方法相结合,分离纯化仔猪肾上皮细胞,在体外进行传代培养,成功得到一株可以连续传代的细胞株SDPK-D.SDPK-D是首次针对现代商品猪培育的新的传代细胞系,将为相关病毒的分离培养提供新的细胞系选择.

某规模化猪场猪瘟抗体水平的监测

为了对某猪场猪瘟疫苗免疫效果做出评估并进一步优化免疫程序,应用猪瘟疫苗抗体阻断ELSIA检测试剂盒对该场不同日龄仔猪及育肥猪的猪瘟疫苗抗体水平进行检测,对抗体合格率、平均阻断率和变异系数统计分析。检测数据显示,该猪场猪瘟免疫空白期过长,疫苗免疫接种后抗体合格率较低,增加了感染猪瘟病毒的风险,应及时进行猪瘟免疫程序的优化。猪瘟疫苗抗体水平监测对猪瘟防控具有重要意义,可为规模化猪场开展猪瘟疫苗抗体检测,制定合理的免疫措施提供参考。

粤北地区新生仔猪腹泻病原学调查及PEDV ORF3基因分子特征和遗传变异分析

为了解粤北地区新生仔猪腹泻病的主要病原,本试验采用实时荧光定量RT-PCR方法对2015年粤北地区6个规模化猪场31份新生仔猪腹泻样品进行了猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)检测,并对5株PEDV流行毒株ORF3基因进行测序分析。病原检测结果显示,83.87%(26/31)样品为PEDV阳性,没有检测到TGEV和PoRV阳性样品。对PEDV ORF3基因序列分析结果显示,5个流行毒株ORF3基因全长均为675bp,相互之间核苷酸同源性为98.7%~100.0%,与参考序列同源性为94.5%~100.0%,多个核苷酸位点发生了共同突变。系统进化树分析结果表明,PEDV可分为两个基因群,粤北地区流行的PEDV与2013-2015年间在中国部分地区、东南亚、北美洲和欧洲流行的PEDV遗传关系较近,位于基因1群中的同一个亚群,而2011-2012年中国流行的PEDV主要毒株及疫苗毒株则归类于另外两个基因亚群。结果表明,粤北地区新生仔猪腹泻主要是由PEDV感染引起的,PEDV基因随着时间推移呈现不断进化和变异趋势。

粤北地区仔猪腹泻大肠杆菌分离鉴定及耐药性分析

为了解粤北地区规模化猪场仔猪腹泻大肠杆菌耐药情况,为该病防控提供用药参考,对来自6个规模化猪场疑似仔猪大肠杆菌引起的腹泻粪便和肠道内容物进行了大肠杆菌分离鉴定,对分离鉴定的40株大肠杆菌进行了药敏试验。结果表明,分离菌株对22种受试药物均产生不同程度耐药性,强力霉素和四环素耐药菌株比例最高,达到97.5%,其次是复方新诺明、庆大霉素、氯霉素和红霉素耐药菌株达到80%以上。敏感性最高的药物为丁胺卡那霉素,其次是头孢西丁,敏感菌株比例分别为85%和84.5%。试验菌株均产生不同程度多重耐药性,最少为4重耐药性,10重及以上耐药性菌株比例达到80%以上。研究表明,粤北地区仔猪腹泻大肠杆菌耐药性严重,要重视药敏监测,以指导合理选用药物防控该病。