慢速程序冷冻对透明带显微操作后人类胚胎冻存率及发育的影响

【目的】探讨慢速程序冷冻对透明带显微操作后胚胎冻存率及继续发育的影响。【方法】将 96个Ⅱ级以上人类多精受精胚胎随机分为单纯透明带打孔组 (n =2 4) ,胚胎活检组 (n =40 )及对照组 (n =32 )。为模拟临床种植前诊断活检后胚胎冷冻过程 ,将透明带显微操作后胚胎继续培养 6～ 10h再进行慢速程序冷冻 ,观察各组胚胎冷冻解冻后的冻存率及胚胎继续发育能力。【结果】活检及透明带打孔后冻融胚胎中发生裂解的卵裂球多位于透明带破口附近。活检组胚胎完整率、胚胎存活率及卵裂球存活率分别为 10 % ,2 5 0 %和 2 9 0 % ,较对照组 (4 3 7% ,6 6 0 %和 6 2 4% )明显降低 (P <0 0 1)。虽然单纯透明带打孔组冷冻后胚胎完整率及胚胎存活率与活检组无明显差异 ,但卵裂球存活率较胚胎活检组高 (分别为 40 9%和 2 9 0 % ) (P<0 0 1) ,以上各组存活胚胎继续发育率差异无显著性 (P>0 0 5 )。【结论】以丙二醇和蔗糖为冷冻保护剂的人类分裂期胚胎慢速冷冻程序并不适用于化学法透明带打孔活检胚胎的冷冻保存 。

Ca^(2+)载体A23187对受精失败人类成熟卵母细胞的补救激活作用

目的 :观察Ca2 + 载体A2 31 87对受精失败人类成熟卵母细胞的补救激活及激活后的胚胎发育情况。方法 :收集常规体外受精 (IVF)及卵浆内单精子注射 (ICSI)后 2 4h仍无受精征象的成熟卵母细胞作为研究对象 ,5μmol/LCa2 + 载体A2 31 87中处理 5min,观察第二极体排出及原核形成情况 ,激活后卵母细胞在体外继续培养 2d。结果 :IVF组及ICSI组卵母细胞激活率分别为 64 9% (2 4 / 37)和 73 2 % (30 / 4 1 )。ICSI组受精失败卵母细胞激活后主要表现为二极体二原核 (2PB +2PN) (80 % ,2 4 / 30 ) ,而IVF组仅有 2 0 %的被激活卵母细胞表现为 2PB +2PN ,两组间差异具极显著 (P <0 0 1 )。 31个 2PN卵母细胞继续培养 ,2 5个发生分裂 ,1 1个发育到 2 - 4细胞 ,8个发育到 4 - 8细胞 ,6个发育到 8-细胞以上阶段。结论 :Ca2 + 载体A2 31 87能够有效地激活ICSI后受精失败卵母细胞恢复受精并继续发育成胚胎。

应用钙离子载体A23187及6-甲基嘌呤对人卵母细胞进行孤雌激活

目的 :观察钙离子载体 A2 3 1 87( Ca-A2 3 1 87)及 6-甲基嘌呤 ( 6-DMAP)对人类卵母细胞的孤雌激活作用。方法 :收集体外受精周期中不适于进行卵胞浆内单精子注射的生发泡期或第一次减数分裂中期的不成熟卵母细胞 2 44个在体外培养成熟 ,其中 1 55个体外成熟卵母细胞按不同激活方案分组 :5μmol/ L Ca-A2 3 1 87组、1 0 μmol/ L Ca-A2 3 1 87组、对照组、6-DMAP组及 Ca-A2 3 1 87+6-DMAP组。激活处理后 1 2～ 1 8h观察第二极体排出及原核形成情况。结果 :5及 1 0 μmol/ L Ca-A2 3 1 87组卵母细胞激活率分别为 40 .7% ( 1 1 / 2 7)和 3 7.1 % ( 1 3 / 3 5) ,较对照组的 9.5% ( 2 / 2 1 )明显增加 ( P<0 .0 1 ) ;6-DMAP组的激活率 ,1 1 .5% ( 3 / 2 6)较 Ca-A2 3 1 87+6-DMAP组 ,58.7% ( 2 7/ 46)明显下降。 Ca-A2 3 1 87激活后卵母细胞主要表现为一原核二极体 ,而 Ca-A2 3 1 87+6-DMAP激活的卵母细胞以一原核一极体占多数 ( 1 9/ 2 7,70 .4% )。结论 :卵母细胞孤雌激活的发生及原核形成类型与激活方案有关 ,单独 Ca-A2 3 1 87或与蛋白激酶抑制剂 6-DMAP联合应用都能使人类卵母细胞发生孤雌激活 。

补肾益气活血方对宫内生长迟缓胎儿一氧化氮及脂质过氧化水平的影响

探讨补肾益气活血方对胎儿宫内生长迟缓（ＩＵＧＲ）胎盘微循环障碍的影响。方法：应用ＮＡＤＰＨ一黄递酶组织化学方法检测胎盘组织一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性，采用镇铜镉还原法及硫代巴比妥酸比色法（ＴＢＡ法）测定了新生儿脐血血浆亚硝酸盐／硝酸盐（ＮＯ２－／ＮＯ３－）和丙二醛（ＭＤＡ）浓度。结果：ＩＵＧＲ孕妇胎盘组织ＮＯＳ活性较正常足月妊娠明显下降，新生儿脐血ＮＯ２－／ＮＯ３－低于正常新生儿（<０．０１），而ＭＤＡ水平高于正常（Ｐ<０．０１），中药治疗后与正常对照组差异无显著性（Ｐ均＞０．０５），相关性分析表明ＮＯ２－／ＮＯ３－与ＭＤＡ呈明显负相关（ｒ＝－０．６１２４，Ｐ<０．０５）。结论：脂质过氧化可能是引起ＩＵＧＲ胎盘微循环障碍的中介因子之一，补肾益气活血方促进胎儿宫内生长发育与其抗自由基损伤，增强胎盘组织一氧化氮（ＮＯ）合成和分泌有关。

人卵母细胞的电脉冲辅助激活

[目的]探讨电脉冲刺激进行人卵母细胞的人工辅助激活的可行性。[方法]不同卵龄和来源的人卵母细胞分为4组,49个新鲜成熟的卵母细胞作为A组,42个常规体外受精(IVF)中未受精的成熟卵母细胞为B组,C组为卵浆内单精子注射(ICSI)后未受精卵母细胞57个,D组为体外培养48h的ICSI后未受精卵母细胞37个,所有卵母细胞以直流电脉冲刺激2次,观察电脉冲刺激后卵母细胞激活和胚胎发育情况。[结果]A组卵母细胞激活率为43％(21/49),与B、C、D3组相比偏低,差异具有统计学意义(P均<0.05),A组中激活后卵母细胞主要表现为一原核二极体(IPN+2PB),而C组和D组则以二原核二极体(2PN+2PB)占多数。A、B、C组激活后卵母细胞分裂率分别为81％(17/21),83％(24/29)和88％(38/43),较D组(19％,5/26)显著增加(P<0.01),在电脉冲刺激后第3天,A、B、C组分别有18％(3/17),29％(7/24),31％(11/35)的胚胎发育到8-细胞阶段。[结论]不同来源和卵龄的人卵母细胞在电脉冲刺激后表现为不同的激活类型和胚胎发育情况,直流电脉冲作为一种有效的卵母细胞人工激活方法可以应用于辅助受精。

胎儿纤连蛋白在产科中的应用

随着单克隆抗体技术的发展,胎儿纤连蛋白(FFN)在产科中得到广泛应用。近年研究表明,孕妇血浆、羊水及宫颈阴道分泌物中FFN的异常表达可见于多种产科情况。FFN不仅可用于监测先兆子痫,在胎膜早破、早产、过期妊娠等的预测和诊断中也有一定价值。

无精子症病人100例取精方法及妊娠结局

目的 :回顾性分析 2 0 0 1年 1月～ 2 0 0 2年 1月在生殖中心行卵胞质内单精子注射 (ICSI)治疗的 10 0例无精子症男性的治疗结果。 方法 :经皮附睾精子抽吸术 (PESA)或睾丸精子抽提术 (TESE)获得精子 ,女方进行常规超排卵。分析激素水平 ,行睾丸组织学检查 ,评估取精的成功率、受精率、种植率和临床妊娠率。 结果 :76例(76 % )经PESA获得精子 ,2 3例 (2 3% )通过TESE获得精子。PESA和TESE组的受精率、种植率和临床妊娠率分别为 71.3%和 75 .18% ,2 0 .35 %和 2 2 .0 5 % ,4 2 .11%和 4 1.6 0 %。PESA组有 32例临床妊娠 ,其中 15例继续妊娠 ,15例已分娩 ,2例流产。TESE组有 10例临床妊娠 ,其中 6例继续妊娠 ,2例已分娩 ,2例流产。两组的受精率、种植率和临床妊娠率差异无显著性。在TESE组有 1例取精失败而放弃治疗。 结论 :激素水平和睾丸组织学检查不能预测附睾或睾丸取精的成功 ,PESA和TESE获得精子进行单精子注射是治疗男性无精子症的有效方法 ,两组的受精率 ,种植率和临床妊娠率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。

反复附睾或睾丸取精的无精子症病人妊娠结局

目的 :分析反复附睾或睾丸取精进行卵胞质内单精子注射治疗的妊娠结局。 方法 :收集 2 0 0 1年 1月～2 0 0 2年 12月进行 2周期以上附睾或睾丸取精进行卵胞质内单精子注射治疗的无精子症病人 31例 (共 4 3个周期 ) ,对取精情况及受精、种植和妊娠结局进行总结。 结果 :2 4例病人顺利从附睾取精 ,7例病人从睾丸取精 ,无 1例出现感染、血肿或局部的功能障碍。与第 1周期附睾或睾丸取精 15 4例 (共 15 4个周期 )的受精率、种植率和临床妊娠率比较 ,结果分别是 78.39%与 73.6 4 % ,19.6 8%与 18.38%和 34.88%与 37.91% ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。 结论 :无精子症病人进行反复附睾或睾丸取精 ,是安全和可耐受的 ,其妊娠结局与第 1周期比较无统计学差异。

多囊卵巢综合征卵泡颗粒细胞提前对黄体生成素反应

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)卵泡液中激素和颗粒细胞黄体生成素(LH)受体mRNA表达的关系。方法:对PCOS组12例和对照组15例患者于月经周期的第7-10 d手术获取卵泡和卵泡液,采用微粒子化学发光法检测卵泡液中卵泡刺激素(FSH)、LH、孕酮(P)、雌二醇(E2)和胰岛素(insulin)的水平,采用ELISA检测卵泡液中雄烯二酮(A)的水平,对颗粒细胞和卵泡膜细胞LH受体mRNA进行RT-PCR半定量检测。结果:PCOS组卵泡液中LH[(3.8±2.1vs1.7±0.8)U/L,P<0.01]、A[(600.0±373.4vs212.4±205.4)μg/L,P<0.05]和颗粒细胞LH受体mRNA的表达(0.29±0.16vs0.12±0.13,P<0.01)显著高于对照组,PCOS组卵泡的颗粒细胞提前表达LH受体mRNA;对照组卵泡直径小于7 mm时,RT-PCR检测不到颗粒细胞LH受体mRNA表达,而PCOS组卵泡直径达到4 mm时,发现颗粒细胞LH受体mRNA已提前表达。颗粒细胞LH受体mRNA的表达与卵泡液中LH(r=0.67,P<0.01)、胰岛素(r=0.51,P<0.05)及卵泡膜细胞LH受体mRNA表达的水平(r=0.6,P<0.01)呈正相关。结论:PCOS的卵泡液中存在高水平的LH,PCOS卵泡颗粒细胞提前对LH反应,颗粒细胞和卵泡膜细胞合成A和P增强,这可能是PCOS卵泡发育停滞的原因之一。

补肾益气活血中药治疗胎儿宫内生长迟缓的临床研究

目的：观察补肾益气活血中药治疗胎儿宫内生长迟缓（ＩＵＧＲ）的临床疗效，探讨其可能的作用机理。方法：将５５例胎儿宫内生长迟缓孕妇分为两组，用补肾益气活血中药（中药组）治疗３０例，并与用氨基酸治疗（氨基酸组）２５例进行比较。结果：中药组新生儿出生体重显著高于氨基酸组。中药组母体宫高、腹围以及胎儿生长参数，包括双顶径、头围、腹围、股骨长的增长均较氨基酸组快。治疗后中药组孕妇血清雌三醇、胎盘泌乳素接近于正常组，氨基酸组与正常组有明显差异。胎儿脐静脉血浆必需氨基酸浓度中药组较ＩＵＧＲ未治疗组明显改善，氨基酸组改变不及中药组；未发现补肾益气活血中药对母儿有明显不良反应。结论：补肾益气活血中药具有改善胎盘功能，促进胎盘转运氨基酸的作用。

α-地中海贫血种植前基因诊断妊娠成功

【目的】探讨种植前基因诊断的临床应用。【方法】对 1例夫妇均为东南亚缺失型α 地中海贫血携带者 ,经超排取卵、卵母细胞单精子显微注射受精及胚胎细胞活检 ,吸取的单个卵裂球采用针对α SEA基因的 gap PCR引物和荧光探针用荧光定量PCR技术进行诊断 ,将诊断为不致病的 3个胚胎进行宫腔内移植。【结果】胚胎移植后 7周B超诊断单胎妊娠 ,18周羊膜腔穿刺产前诊断证实为不致病胎儿。【结论】应用成熟的显微操作技术进行胚胎细胞活检 ,活检的单个卵裂球用荧光定量PCR技术进行诊断 ,获得国内首例α 地中海贫血胚胎种植前基因诊断后妊娠成功。

人卵母细胞和胚胎线粒体DNA缺失的研究

目的:检测人类卵子和胚胎线粒体DNA(mtDNA)4977bp缺失,并探讨这种缺失存在的病理生理学意义。方法:收集不受精的成熟卵母细胞和不适合移植及冷冻保存的胚胎;碱裂解法制备单个细胞DNA;单细胞巢式PCR检测人卵母细胞和胚胎mtDNA4977bp缺失情况。结果:122个卵母细胞中,56个(45.9%)发现有4977bp缺失;90个胚胎中,21个(23.3%)发现有缺失,二者间差异有显著性意义。将卵母细胞和胚胎分别按患者的年龄分为<30岁组、30-34岁组和>34岁组,卵母细胞缺失率分别为:43.6%、44.4%和51.7%,各组间差异无显著性意义;各组胚胎的缺失率分别为21.4%、20.0%和29.6%,差异亦无显著性意义。将卵母细胞和胚胎分别按患者是否妊娠分组,结果发现妊娠组与非妊娠组间mtDNA缺失率的差异也无显著性意义。结论:mtDNA4977bp缺失与受精失败有关,其是否参与卵子老化及其机制有待进一步研究。

土槿皮乙酸作用PI3K／Akt通路诱导HeLa细胞凋亡

【目的】探讨土槿皮乙酸对宫颈癌HeLa细胞凋亡和增殖的作用。【方法】通过Hoechst 33342荧光染色等观察细胞核固缩和染色体碎片等形态学变化,MTT法测定土槿皮乙酸对HeLa细胞的生长抑制作用,采用流式细胞仪和免疫印迹实验检测HeLa细胞的生长凋亡情况及其相关蛋白的表达变化。【结果】土槿皮乙酸对宫颈癌HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,并能诱导细胞发生凋亡,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高。土槿皮乙酸抑制细胞生长及诱导细胞发生凋亡的过程中,细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合酶激酶3(GSK3)、FKHRL(Forkhead like family)表达水平及活性显著降低,导致抑制凋亡抑制因子bcl-2受到表达抑制,同时Bax表达增加。【结论】土槿皮乙酸能够通过多条信号途径促进人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,通过抑制PI3K/Akt的活性是其体外诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡和抑制增值的重要作用机制。

补肾益气活血方对胎儿宫内生长迟缓胎盘组织一氧化氮合酶活性的影响

为了探讨补肾益气活血方对胎儿宫内生长迟缓（ＩＵＧＲ）胎盘组织一氧化氮（ＮＯ）生成的影响，本文对正常孕妇、ＩＵＧＲ患者及补肾益气活血中药治疗后患者各１２例，采用ＮＡＤＰＨ黄递酶法研究了一氧化氮合酶（ＮＯＳ）在胎盘组织的分布，应用化学发光法测定胎盘组织ＮＯＳ活性。结果表明：正常孕妇胎盘绒毛合体滋养层细胞ＮＯＳ呈强阳性反应，绒毛干血管壁呈阳性反应，终末绒毛毛细血管壁呈阴性反应；ＩＵＧＲ患者绒毛合体滋养层细胞和绒毛干血管壁ＮＯＳ染色明显变浅，而终末绒毛毛细血管壁呈阳性反应；中药治疗后合体滋养层细胞和绒毛干血管壁ＮＯＳ染色明显加深。ＮＯＳ活性测定中药组较ＩＵＧＲ未治疗组显著增高，与正常孕妇相比其差异无显著性。结果提示：ＮＯ参与ＩＵＧＲ的病理生理过程。

补肾益气活血法改善子宫内膜微环境和促进胎儿生长的应用与基础研究

随着自然环境和人们生活方式的变化，不孕不育症的患病率显著上升，虽然现代辅助生殖技术的迅速发展给不育夫妇带来了希望，但其总的孕育成功率依然不高，约25％～30％，而造成如此低的成功率的主要原因是胚泡着床障碍；胎儿宫内生长受限则是导致胎儿围产期发病及死亡的主要原因，并且影响胎儿出生以后的体格和智力的正常发育，严重影响着我国人口素质的提高和人民的生活质量。目前现代生殖医学对于胚泡着床障碍和胎儿宫内生长受限的防治尚无突破性进展，而中医药在辅助人工助孕及防治FGR方面却显示了良好的发展势头。

不育症患者精子X,Y及18染色体的荧光原位杂交分析

目的:分析不育症患者精子X,Y,18染色体的荧光原位杂交情况。方法:在男性不育症组中,2例无精子症患者从附睾抽吸获取精子、3例从睾丸获取精子、2例严重少精症患者从射出精液中找到精子。选择5例正常射出精液者作为对照组。应用荧光原位杂交法(FISH)检查精子X,Y以及18号染色体,比较两组精子染色体非整倍体的发生率。结果:不育症组睾丸精子、附睾精子的非整倍体率无差别,但不育症组精子与正常男性组精子比较,非整倍体总发生率、性染色体二体性率及缺对染色体率明显增高(2.8％vs0.58％,0.81％vs 0.19％,2.1％vs0.37％),P<0.001。结论:无精子症与严重少精子症患者的精子比正常精子具有更高的染色体非整倍体率,需要进行大样本的研究,为不育症患者的治疗和遗传咨询提供有效的证据。

罗式易位携带者胚胎植入前遗传学诊断的研究

【目的】应用荧光原位杂交 (FISH)技术对罗式易位携带者进行胚胎植入前遗传学诊断。【方法】分别用化学打洞法及机械打洞法对 3例罗式易位t(13q14q)患者的体外受精的胚胎活检 ,用VysisLSI 13q14,TelVysion14q探针对卵裂球进行FISH分析 ,选取正常或平衡的胚胎移植入子宫腔。【结果】 3个周期共获卵 2 3个 ,受精率 79%。活检 14个胚胎 ,其中化学打洞法活检 9个胚胎 ,活检后胚胎继续分裂率 6 7% ;机械打洞法活检 5个胚胎 ,活检后胚胎继续分裂率为 40 %。 2个周期分别有 1个胚胎显示正常或平衡 ,进行移植 ,其中 1例获得妊娠 ,妊娠 2 0周时经羊水细胞核型分析证实为正常。【结论】对罗式易位携带者进行胚胎植入前遗传学诊断 。

荧光定量聚合酶链式反应种植前胚胎β-地中海贫血基因诊断

目的 用荧光定量聚合酶链式反应 (PCR)方法进行种植前β-地中海贫血一种中国人常见突变类型 CD4 1/ 4 2 (- TCTT)的基因诊断。 方法 来源于β-地中海贫血病人或携带者的 2 89个淋巴细胞和人体外受精 -胚胎移植志愿者剩余的胚胎分离 137个单细胞用荧光定量 PCR方法进行分析。 结果 用单个淋巴细胞诊断β-地中海贫血扩增效率达 96 % ,准确率达 99%～ 10 0 % ,等位基因丢失 (ADO)率仅 0～ 5 %。单个胚胎细胞扩增效率 86 %。 结论 荧光定量 PCR技术是一种敏感、快速、可靠和准确的技术 ,适合包括β-地中海贫血在内的单基因疾病的种植前诊断。

无卵丘的水牛卵母细胞体外成熟方法的初步探讨

主要探讨无卵丘水牛卵母细胞体外成熟的可行性,以便为研究卵母细胞成熟机理提供模型。无卵丘的水牛卵母细胞随机分为5组,然后分别进行直接成熟培养(M1),与卵丘细胞单层共培养(M2),用未扩展的卵丘细胞块包围培养(M3),与扩展的卵丘细胞团共培养(M4)和用卵巢组织包围培养(M5)。无卵丘的水牛卵母细胞体外成熟培养24 h后检查第一极体(PB1)排出率,随后对这些卵母细胞进行孤雌激活,评定其成熟质量。结果发现,M4组的第一极体排出率明显高于M1组和M5组,其它各组间没有显著差异(P>0.05);M5组的孤雌激活卵裂率显著低于M1组和M4组(P<0.05),而与M2组和M3组没有显著差异(P>0.05),但M3和M4两组的囊胚发育率显著高于M1组和M5组(P<0.05)。这些研究结果表明:(1)未扩展卵丘细胞包围法和扩展卵丘细胞团支撑法可促进无卵丘水牛卵母细胞的体外成熟,但与卵丘细胞单层共培养没有作用;(2)卵巢组织包围培养不利于水牛卵母细胞的体外成熟。