骨髓间充质干细胞的分离与培养

目的 摸索体外分离培养骨髓间充质干细胞的最佳条件 ,并观察其部分生物学活性。方法 采用常规的细胞培养传代技术以及光、电镜技术和细胞增殖活性检测法 ,观察不同贴壁时间、不同浓度血清、不同种植密度对骨髓间充质干细胞生长、增殖、形态的影响 ,并观察培养细胞的部分生物学特性。结果 以选用 4～ 2 4h贴壁的有核细胞 ,加入 5 %～ 1 0 %胎牛血清、种植密度(4～ 8)× 1 0 4个 /ml的培养条件为最适宜细胞生长 ;在此条件下 ,培养扩增的细胞仍具有干细胞多向分化性 ;其形态呈梭状 ,具有快速增殖的能力 ;培养细胞在 3～ 4d进入对数生长期 ,随后进入平台期 ,分裂相细胞明显减少 ;光镜下细胞呈梭状或类成纤维状 ,2～1 0代的细胞呈均质状 ;超微结构显示为早期幼稚细胞形态。结论 建立了骨髓间充质干细胞体外分离、培养的条件 ,探讨了骨髓间充质干细胞部分生物学特性 。

诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞和成软骨细胞分化

目的探讨小香猪骨髓间充质干细胞(MSC)向成骨细胞和成软骨细胞诱导分化的能力。方法选用早期贴壁培养的小香猪骨髓MSC,在传代两三次后加入条件培养基,观察了细胞的形态学变化,同时检测碱性磷酸酶、钙盐沉积以及细胞外基质和II型胶原的表达。结果MSC在骨形成蛋白(BMP)、地塞米松和β-磷酸甘油钠的作用下,两三天细胞从梭形变为圆形或类圆形,细胞体积增大,12～15d时细胞集落的表面可见有颗粒状物质分泌,碱性磷酸酶染色为阳性,20～25d时,分泌颗粒更加明显,核固红染色为阳性,表现出成骨细胞的特点;在培养体系中加入地塞米松和转化生长因子-β1后两三天,可见细胞由类成纤维状变为圆形或椭圆形状,有的呈肾性,体积增大,10d后可见细胞周围有基质分泌,II型胶原染色为阳性,表现为软骨细胞分化的特点。结论在一定培养条件下成功诱导小香猪骨髓MSC向成骨细胞和成软骨细胞分化,为我们进一步的研究打下基础。

肠道粘膜免疫的构成与功能

正常生理状况下 ,肠道的细菌和毒素并不对机体产生危害 ,这与机体各系统之间的相互协调和肠道特有的完整屏障功能有关。其中 ,由肠上皮内淋巴细胞、固有层淋巴细胞、Peyer’s淋巴结等肠相关性淋巴组织成的肠道粘膜免疫屏障 ,在防御和抵制细菌、病毒和毒素的入侵中起着举足轻重的作用。如何增强粘膜免疫功能 ,降低肠源性感染的发生具有重要的意义。

大鼠长期摄入贫铀后的病理形态学特点观察

目的观察大鼠长期食入不同剂量的贫铀后,亲代(F0)和子代(F1)大鼠各组织器官的病理形态改变。方法给F0和F1 Wistar大鼠共64只喂食贫铀饲料,分为F0代低、中、高剂量组和F1代中、高剂量组,另取10只大鼠做对照。给低、中、高剂量组大鼠喂食的贫铀含量分别为0.4mg/(kg·d)、4mg/(kg·d)和40mg/(kg·d)。F0代大鼠分别于7、14和20个月后处死,F1代大鼠分别于5、10和15个月后处死,分别取睾丸(卵巢)、脾脏、肾脏、肝脏、骨髓等脏器进行病理形态学观察。结果F0代的中、高剂量组大鼠摄入贫铀14个月后可见雄性的精曲小管萎缩,管壁增厚呈空虚网状,生精细胞层次减少,间质细胞增生,但仍见有精子生成;高剂量组可见到精子呈异型性改变,细胞核浓缩深染,且随着摄入时间延长改变愈趋明显;F1代大鼠摄入贫铀5个月后就有上述改变且更为严重。F0代中、高剂量组大鼠摄入贫铀14个月后肾小球轻度萎缩,间质增生明显,20个月时肾小球萎缩纤维化;F1代大鼠摄入贫铀5个月后就有上述改变。F0代中、高剂量组摄入贫铀7个月时脾脏生发中心和淋巴鞘增生,淋巴母细胞增生活跃,20个月时脾小体减少,生发中心稀疏;F1代大鼠摄入贫铀早期和晚期有类似改变。F0和F1代高剂量组摄入贫铀早期肝脏有炎症细胞浸润,晚期骨髓有核细胞减少,脂肪细胞增加。其余脏器未见明显的病理形态学改变。结论长期摄入贫铀对大鼠组织脏器的损伤具有一定的时间性和组织特异性,主要损伤集中在雄性生殖系统、免疫系统和造血系统,而对其他组织的损伤不明显。

创面微环境对植入骨髓间充质干细胞的影响研究

目的 探讨创面局部微环境对植入的骨髓间充质干细胞 (MSC)的影响。方法 采用常规的细胞培养传代技术、超微结构观察、免疫组化、RT PCR和细胞增殖活性检测等方法。结果 将MSC植入到创面后 ,可见肉芽组织中有大量成纤维细胞形成 ,排列成“瀑布”状 ,成纤维细胞胞浆中有大量原胶原颗粒形成 ;免疫组化显示碱性成纤维因子 (bFGF)、Ⅰ型胶原在新生的成纤维细胞中表达增强 ;伤口液促进MSC的增殖活性和迁移能力 ;局部微环境促进MSC基质源性因子(SDF 1)、IL 8、Ⅰ型胶原的基因表达。

放射损伤合并烧伤肠源性感染发生特点的实验研究

目的：探讨放射损伤合并烧伤肠源性感染的特点及其复合效应。方法：采用小鼠１５％Ⅲ度烧伤、８Ｇｙ放射损伤及两伤复合的动物模型，用３Ｈ－ＴｄＲ标记大肠杆菌，喂饲小鼠，分别于伤后１～９６ｈ，９个时相点检测肝、脾、肠系膜淋巴结的ｄｐｍ值△。结果：①三类损伤后均发生了肠道细菌移居，但定植于肠道的标记菌进入组织的量和达峰值的时间不尽一致。单烧、复合伤肠道细菌移居发生早（４ｈ），单放稍晚（６ｈ），说明烧伤在早期肠道细菌移居中占主要地位；伤后６ｈ，单烧和复合伤达峰值，而单放于伤后１２ｈ细菌移居达峰值；随后细菌移居逐渐减少，到９６ｈ单烧肠道细菌移居已不明显，而此时单放和复合伤仍很严重。②单放和复合伤细菌移居的程度重，以复合伤最重，ｄｐｍ值大于单一伤，但小于两伤之和，即“１＜１＋１＜２”。结论：复合伤动物与两单伤比较，肠道细菌移居具有发生早、程度重、恢复慢的特点，防治时应予重视。

重组人白细胞介素-4对几类损伤时受损小肠粘膜免疫功能论著的促恢复作用

目的：探讨重组人白细胞介素－４（ｒｈＩＬ－４）对放射损伤合并烧伤时肠粘膜免疫功能障碍的调节作用。方法：采用小鼠１５％的Ⅲ度烧伤、８Ｇｙ放射损伤及两伤复合的动物模型，用免疫酶联吸附、免疫组化和细菌培养等方法，观察了ｒｈＩＬ－４对肠道粘膜免疫的调控作用。结果：ｒｈＩＬ－４能增加小肠固有层中分泌ＩｇＡ的浆细胞数量，提高肠粘液中ｓＩｇＡ的含量，降低肠源性感染的发生。结论：ｒｈＩＬ－４对恢复肠道粘膜免疫功能，降低肠源性感染的发生是有效的。

白细胞介素4对受照小鼠小肠粘膜免疫功能的促恢复作用

采用光镜、免疫酶联吸附实验、免疫组化、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR )等方法,观察了小鼠受8Gy^(60)Coγ射线全身1次性照射后,肠道粘膜免疫功能损伤机理及其调控的措施。结果表明,射线可直接损伤肠道淋巴细胞,导致肠道固有层中分泌免疫球蛋白A的浆细胞数量减少。同时,射线还能抑制肠道淋巴组织中调控免疫球蛋白M型B淋巴细胞向免疫球蛋白A型B淋巴细胞转化的白细胞介素-4基因表达,使分泌免疫球蛋白A的细胞进一步减少,从而使小肠粘液中分泌性免疫球蛋白A含量明显减少。用重组人白细胞介素4调控后,肠道固有层中浆细胞的数量明显增加,提高粘液中分泌性免疫球蛋白A的含量,对放射损伤后肠道粘膜免疫功能的恢复有一定防治作用。

热带医学的起源与发展趋势

热带医学（tropicalmedicine）是研究发生于热带或亚热带地区各种疾病的诊断、治疗、预防、控制和如何消灭这些疾病的一门综合性科学，主要Fh热带病学和热带卫生学两部分组成[1]。热带医学有着非常久远的历史，在19世纪末、20世纪初世界各国成立了专门的热带医学研究和教育的机构，热带医学得到较好的发展，热带病的预防、诊断、治疗取得了较好的效果，部分热带病得到有效的控制。随着全球气候变暖、_T业污染、人口增长、f】然疫源地的商业开发、旅游业的发展、抗生素和杀虫剂等大量使川，促使病原物种变异和传染源、媒介昆虫活动途迁范同扩大，新发币¨再发的热带病给人类提出了新的挑战，现就热带医学的起源和发展趋势做一评述。

双基因表达载体的构建及生物活性观察

为了促进肠上皮细胞增殖、加速肠上皮机械屏障修复和防止肠源性感染的发生,利用分子克隆技术首先获得含胰高血糖素样肽-2(GLP-2)编码序列的高血糖素原cDNA片段,通过PCR重叠延伸技术成功拼接GLP2的信号肽及成熟肽,同时将成熟肽N-末端第二位丙氨酸的序列(GCT)定点突变为GGT序列(甘氨酸);并以我室保存的pcDNA3.1-HD-5-cDNA为模板克隆防御素-5(HD-5)信号肽及成熟肽序列,分别构建到双基因表达载体pVITRO3,转染肠上皮细胞并观察其对肠上皮细胞增殖活性和杀菌能力的影响,结果显示构建的pVITRO3-HD-5-GLP2双基因性表达载体具有促进肠上皮细胞增殖和抑制细菌增殖和黏附的作用。

浅谈如何上好一堂课

如何上好一堂课是一个古老的话题,在不同的时期又赋予了这个话题新的任务和新的观点。结合笔者20年来在教学中的点点滴滴以及我们学校开展的"迎评创优"活动,从如何备课、如何上课、如何与学生交流及如何完善自己,谈谈自己的一点心得体会。

如何为部队官兵讲好核武器损伤与救治这门课

未来战争是核威慑条件下的高科技局部战争，如何应对核袭击或核事故下的医学救援，让广大的官兵和人民群众了解核武器损伤的因素和致伤的特点以及如何救治是防原医学的重要任务，本文针对不同文化层次的学员较为详尽地介绍了核武器损伤与救治学。

羊膜负载骨髓间充质干细胞与表皮细胞对放创性皮肤损伤促愈合研究

目的 探讨治疗放创性全厚皮肤缺损创面的方法及效果。 方法 贵州小香猪 8只 ,每只背部脊柱两侧均有放创性全层皮肤缺损圆形创面 (Ф 3.6 7cm)各 3个 ,共 4 8个创面。将经处理的人羊膜 (human amniotic mambrane,HAM)分别负载自体骨髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cells,MSCs)和表皮细胞 ,移植到其左侧 2 4个创面作为实验组 (A组 ) ;以单纯无种植细胞的 HAM敷盖其右侧前 16个创面 (B组 ) ;以单纯油纱布敷盖其右侧后 8个创面 (C组 )。B、C作为对照组。观察移植后 1～ 3周内各组创面愈合、肉芽组织生长及上皮化等情况 ,并进行创面组织 HE染色及 v WF免疫组织化学检测。用图像分析法测算各组各时间点创面平均面积 (cm2 ) ,并计算其愈合百分率。 结果 C组于伤后2 2～ 2 3天愈合 ,B组于伤后 19～ 2 1天愈合 ;A组于伤后 15～ 17天愈合 ,较 B、C组分别提前 6～ 7天和 5～ 6天 ,愈合质量好。移植 15～ 17天 ,A组与 B、C组创面平均残留面积及愈合面积百分率比较 ,差异有统计学意义 (P<0 .0 1)。 A组创面的新生上皮已完全覆盖整个创面 ,肉芽组织生长旺盛 ,肉芽组织中 v WF、成纤维细胞和毛细血管含量丰富 ,可见胶原沉积 ;B、C组创面仍见许多炎性细胞浸润 ,肉芽组织中 v WF、成纤维细胞和毛细血管含量少 ,?

人羊膜负载猪骨髓间充质干细胞生长的形态学研究

目的 建立人羊膜 (HAM)负载培养骨髓间充质干细胞 (MSCs)生长的组织工程方法 ,观察MSCs生长增殖的形态特点。方法 将贵州小香猪的MSCs原代培养 ,传代扩增后 ,以不同密度多次接种于HAM基质面 ,逐日于倒置显微镜下观察MSCs的生长增殖变化情况 ,并于培养 8、1 8d后进行光镜、电镜观察。结果 接种后 30min内明显见到MSCs在HAM上贴附生长 ,MSCs能以合适的接种密度在羊膜上良好生长。结论 HAM对MSCs有明显的促增殖作用 ,MSCs可以HAM为载体在体外进行培养 。

慢性情绪应激对大鼠卵巢功能影响的初步观察

目的观察慢性情绪应激对大鼠卵巢功能的影响。方法以不确定性空瓶饮水刺激作为情绪应激源,考察20d的慢性情绪应激对雌性大鼠行为、脾脏指数、动情周期和血中FSH、LH、E2和P含量的影响。结果慢性情绪应激明显诱发雌性大鼠的攻击行为,增加脾脏指数,差异非常显著(P<0.01)。慢性情绪应激延长雌性大鼠的动情周期,差异非常显著(P<0.01),但对卵巢指数没有显著影响(P>0.05)。慢性情绪应激减少雌性大鼠血中E2含量,差异非常显著(P<0.01),而对血中P含量没有显著影响(P>0.05);同时慢性情绪应激后大鼠血中FSH和LH含量下降,差异非常显著(P<0.01)。结论慢性情绪应激影响大鼠卵巢分泌功能,该模型可用于情绪应激对生殖内分泌影响的研究。

电离辐射对伤口中性粒细胞的影响及康复新的促愈作用

目的 研究电离辐射对伤口中性粒细胞数量和部分功能的影响及康复新的作用。方法 从置入大鼠背部的海绵中收集中性粒细胞 ,测定其数量和吞噬、运动功能变化。结果 伤后 2 4～ 48h ,4、6、8Gy全身照射复合创伤组 ,伤口白细胞和中性粒细胞数量均显著低于单创组 ,且中性粒细胞吞噬功能和运动功能也降低。康复新对单纯创伤、6Gy放射复合伤组伤口中性粒细胞数量和功能有明显的提高。结论 创伤愈合早期 ,伤口中性粒细胞数量和功能的下降是全身照射引起愈合延迟的原因之一 ;

人羊膜负载猪角朊细胞重建表皮的形态学研究

目的 采用细胞组织工程技术 ,将人羊膜 (Humanamnioticmembrane ,HAM)负载培养猪角朊细胞构建皮肤表皮替代物 ,并观察猪角朊细胞在HAM上生长增殖的形态特点。方法 将贵州小香猪的角朊细胞原代培养 ,传代扩增后 ,接种于HAM基质面 ,逐日于倒置显微镜下观察角朊细胞的生长增殖变化情况 ,并于培养 3～ 15d进行光镜、电镜观察 ,检测角朊细胞在HAM上的生长情况。结果 接种后 3 0min内就明显见到角朊细胞在HAM上贴附 ,2 4h内大部分贴附生长 ,3d形成单层完全覆盖HAM。结论 HAM是角朊细胞在体外培养的良好载体 。

三七总皂苷对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响及意义。方法通过电镜观察大鼠肝脏的超微结构,以不同剂量PNS分别对肝纤维化大鼠进行预防和治疗。结果肝纤维化大鼠可出现肝细胞胞浆内肿胀空泡和脂滴、微绒毛稀少、窦内皮细胞肥胖、细胞器增多、Disse间隙内胶原纤维增生等超微结构改变。PNS可减轻大鼠肝纤维化模型肝细胞内脂滴形成、内质网增生、线粒体肿胀及间质胶原增生。结论无论治疗和预防组,PNS均可有效减轻肝纤维化大鼠肝脏超微结构的损伤。

G-CSF动员循环间充质干细胞及其对小鼠颅脑损伤修复的可行性分析

目的建立小鼠严重颅脑创伤模型探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)动员循环间充质干细胞(mesenchym alstem cells,MSCs)的可行性,并观察G-CSF动员的修复效应。方法以G-CSF作为动员剂,培养骨髓和外周血来源的MSCs,计数动员前后的CFU-F。制作小鼠严重颅脑创伤模型,致伤后采用G-CSF对MSCs进行动员,在2、24、48、96、120、144、192、264、336h进行神经行为学评分、运动功能评分,并观察小鼠死亡率和病理组织切片。结果从小鼠外周血培养出MSCs,G-CSF动员后骨髓和外周血MSCs的CFU-F数量显著高于正常对照组(P<0·01)。致伤后小鼠神经行为学和运动功能评分显著低于正常对照组(P<0·01),创伤治疗组在144～192h期间评分显著高于创伤组(P<0·05)。致伤后小鼠死亡率增高,病理切片可见创伤处有出血和空泡。结论成功培养及用G-CSF动员了外周血MSCs,在成功建立小鼠严重颅脑创伤模型的基础上,显示G-CSF动员可以降低严重颅脑创伤小鼠死亡,参与了创伤修复。

轻度肠型放-烧复合伤救治的实验研究

目的探讨颈交感阻滞、壳聚糖包裹的pVITRO3-HD5-GLP2纳米粒联合L203对轻度肠型放-烧复合伤小鼠的治疗作用,探索救治肠型放-烧复合伤的综合措施。方法TBSA15%Ⅲ度烧伤合并10Gy放射损伤小鼠分为综合救治组及复合伤对照组,观察两组动物的平均存活时间以及小肠湿重、小肠隐窝细胞早期凋亡、恢复期增殖和肠道细菌移位等相关指标。结果综合救治可以使放-烧复合伤后动物平均存活时间延长;减轻小肠湿重的降低程度,减少肠隐窝细胞凋亡,促进恢复期肠上皮的增殖以及减少肠道细菌移位的发生。结论综合救治措施可以改善肠型放-烧复合伤肠道的损伤,延迟小鼠的死亡时间。