TaqMan多重实时定量PCR快速检测3种常见食源性病原菌

建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌的多重实时定量PCR(qPCR)方法。依据大肠杆菌O157:H7 tir基因、单增李斯特菌mpl基因和蜡样芽孢杆菌entFM基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立多重qPCR反应体系,进行灵敏度、特异性和稳定性试验,同步检测人工染菌牛奶样品中的病原菌并与国家标准方法作对比。结果表明,建立的多重qPCR方法灵敏度高,最低检出限为12 CFU/mL;特异性强,只对3种目标菌进行PCR扩增;稳定性好,各重复性试验中Ct值的变异系数<1%;所有受污染样品阳性检出率均为100%,与国家标准方法检测结果一致,且检测周期缩短至6 h。本研究建立的TaqMan多重qPCR方法能同时快速、准确地检测乳品中的大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌,为食品安全提供技术支撑。

4种食源性致病菌多重PCR检测体系的建立及其在乳品检测中的应用

食源性致病菌是通过食物进入人体引起食物中毒和诱发疾病的有害微生物,严重威胁着人类健康和环境安全,为了预防和控制食源性疾病的发生,有效对策之一是对食品中的病原微生物进行安全检测。本研究采用一种多重聚合酶链式反应法(multiplex polymerase chain reaction,MPCR)快速检测乳品中4种食源性致病菌,结果表明,选取单核细胞增生李斯特氏菌prfA基因、蜡样芽胞杆菌gyrB基因、鼠伤寒沙门氏菌invA基因、大肠埃希氏菌O157∶H7 stx2A基因的保守序列设计4对引物,在优化的PCR反应体系和退火温度58℃下,PCR扩增表现出良好的特异性,分别扩增出274、221、482、108 bp条带,无非特异性扩增,4种病原菌检出限达到10~100 CFU/mL;对17份人工染菌牛奶样品进行检测,检出结果与国标培养法完全一致。该研究结果为快速、高效、准确地检测出乳品中单核细胞增生李斯特氏菌、蜡样芽胞杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌O157∶H7提供了一种实用方法,也为其他食源性致病菌的快速检测提供了思路。

4种常见食源性病原菌多重PCR检测技术研究

为了解决常规方法检测食源性病原菌存在操作繁琐、周期长的问题,基于4种常见食源性病原菌特异基因序列扩增提出了一种快速、高效的多重PCR(multiplex polymerase chain reaction, MPCR)检测方法。根据单增李斯特菌iap基因、蜡样芽孢杆菌gyrB基因、产志贺毒素大肠埃希氏菌stxⅠ基因、肠炎沙门氏菌invA基因的特异序列分别设计引物后建立MPCR反应体系,测试其特异性、敏感性和可行性,并与国标培养法进行比较。结果表明:MPCR扩增出4个目标基因的特异性条带大小依次为371、221、432、171 bp;在58℃的退火温度下,MPCR扩增表现出良好的特异性,无非特异性扩增,4种病原菌最低检出限达到102CFU/mL;MPCR方法和国标培养法对多种食源性病原菌感染的牛奶样品的检测结果完全一致,检测周期由原来的5~7 d缩减到8~9 h。所建立的MPCR技术作为一种快速、高效的检测方法,可为食品安全生产提供保障。

高校遗传学课程思政教学提升研究与探索实践

理工科专业课程思政的实施需要密切关注思政元素的融入与专业课程内容的有机结合。遗传学课程专业性较强,课程思政的开展有其独特的方式方法,本文首先对当代大学生的特点进行探讨,并指出思政理念在当代大学教学中的必要性。针对遗传学课程特点以及遗传学课程思政建设现状,从教学团队建设、教学设计优化、思政元素挖掘和思政素材在课程内容有机融入四个方面对课程思政教学提升策略进行探究,并以笔者所在教学团队的实际教学情况为例,进行后续的教学评价和反思,收到了较为良好的效果,80%以上的学生认为,遗传学课程思政的实施提高了他们的学习兴趣和综合能力,且促进了专业课程的学习,学生总成绩平均提高约5.5%。以此抛砖引玉,为其他相关课程的课程思政建设提供启示,让课程思政为学生能力的提升和品格的优化保驾护航。

机场类项目管廊高低跨处大型管道运输技术

本文以珠海机场改扩建工程(一标段)—航站楼为例,对狭小空间大型管道起吊、转运的技术问题进行探讨,并提出解决问题的方法和措施,设计制作了与现场实际状况适用的吊装转运设备,同时将该方法运用到现场实际施工中,顺利完成了高低跨位置大管道吊装。

卡尔曼滤波改进虚拟同步机控制研究

虚拟同步发电机(VSG)通过模拟同步发电机的动态特性为电网提供惯性支持,但是VSG系统中通信传输过程的噪声会影响精度,从而造成频率抖动。针对上述问题,在传统的VSG控制系统上加入卡尔曼滤波环节,形成一种新型的抗扰控制方式。在控制中利用遗传算法将卡尔曼滤波器的协方差矩阵Q和R作为遗传算法的个体编码,设计适应度函数来评估不同参数组合下的滤波效果,以提升VSG系统的性能。仿真结果表明,所提出的控制策略能够有效提高运行稳定性,消除机端频率抖动。

调意初探——《神品蕤宾意·神奇秘谱》打谱后记

古琴调意之说历来已久,其研究多为调意本体的单一研究。作为琴曲之前的调意,从标题到音乐本体,理应与后续琴曲有所关联。本文将以乐律学、演奏经验、中国古代哲学等多角度的辩证思考,对《神品蕤宾意·神奇秘谱》进行打谱研究。

柿和君迁子试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及再生植株遗传稳定性研究

对柿(Diospyros kaki Thunb.)和君迁子(D. lotus L.)试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及再生植株遗传稳定性进行了研究。结果表明,试管苗在添加有蔗糖0.3 molL-1的改良MS培养基 (KNO3和NH4NO3减半)上,于低温6±1℃下锻炼6周后,切取侧芽茎尖1.5～2.0 mm在含蔗糖0.7 molL-1的改良MS培养基上预培养2 d,室温(20℃)下装载液(2.0 molL-1甘油+0.4 molL-1蔗糖)过渡20 min,0℃下玻璃化液PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4 molL-1蔗糖)处理80 min,换成新鲜的PVS2后投入液氮保存1 d,40℃水浴化冻1 min,含蔗糖1.2 molL-1的改良MS培养基洗涤20 min,接种于含0.2 mgL-1 CPPU、1.0 mgL-1 BA、0.05 mgL-1 IAA、500 mgL-1 可溶性PVP、30 gL-1蔗糖和7 gL-1琼脂的改良MS培养基(再生培养基)的滤纸上,暗处理1 d后转移到新鲜的上述再生培养基中,暗培养1周后转到正常光下,再生率超过30%;再生植株通过细胞学和AFLP标记检测,没有发现核DNA含量、染色体数目和AFLP谱带的改变。该结果为柿属植物种质资源的长期保存提供了理论依据。

仁用杏抗寒性生理指标评价的研究

对抗寒性不同的3个仁用杏品种(抗寒性强弱排序为优一>白玉扁>龙王帽)枝条低温处理后,检测其萌芽率和抗寒性生理指标,并对这些生理指标与抗寒性的关系作了研究。结果表明,随温度的降低,萌芽率降低,电解质渗出率、可溶性糖和脯氨酸的含量、SOD和POD的酶活性呈上升趋势;仁用杏品种间抗寒性差异显著性分析显示,枝条的电解质渗出率、表皮的可溶性糖和游离脯氨酸的含量、木质部和表皮的POD酶活性可以作为仁用杏抗寒性能力评价指标,SOD酶活性不宜作为抗寒性评价指标;主成分分析表明,采用这些生理指标对仁用杏抗寒性进行综合评价的结果是可靠的。

柿休眠芽茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

对柿 (DiospyroskakiThunb .)休眠芽茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究 ,结果表明 ,1.5～2 .0mm茎尖在含有 0 .3、0 .5和 0 .7mol·L-1蔗糖的改良MS培养基 (KNO3 和NH4NO3 减半 )上预培养各 1d ,室温(2 0℃ )下装载液 (2mol·L-1甘油 ,0 .4mol·L-1蔗糖 )停留 2 0min ,0℃下玻璃化液 (PVS2 或PVS3 )处理 30～ 4 0min ,投入液氮保存 1d后 ,4 0℃水浴化冻 1min ,含蔗糖 1.2mol·L-1的改良MS培养基洗涤 2 0min ,接种于含 0 .2mg·L-1CPPU、1mg·L-1BA、0 .0 5mg·L-1IAA、5 0 0mg·L-1可溶性PVP、30g·L-1蔗糖和 7g·L-1琼脂的改良MS培养基 (再生培养基 )表面的滤纸上 ,暗处理 1d后转移到新鲜的上述再生培养基中 ,暗培养 1周后转到正常光下 ,成活率高达 70 .2 % ,再生植株生长和分化正常。本研究结果为柿种质的长期保存提供了新途径。

柿和君迁子试管苗缓慢生长法保存及其遗传稳定性研究

对柿(Diospyros kaki Thunb.)和君迁子(D.lotus L.)试管苗缓慢生长法保存及其恢复生长植株的遗传稳定性进行了研究,结果表明:低温(6±1)℃和光照800 lx(12 h/d)的条件下,试管苗在添加有甘露醇20g/L或PP333 1.0 mg/L的MS(1/2N)+蔗糖20g/L+琼脂7 g/L+PVP 500 mg/L培养基上或在含有CPPU 0.2 mg,/L的1/2 MS(1/2N)+蔗糖15 g/L+琼脂g/L+PVP 500 mg/L培养基上保存18个月,平均存活率在90％以上;上述3种方法保存后恢复生长的植株,在核DNA含量和染色体数目上没有发生改变;RAPD分析时表明,只有在添加PP333的保存中,次郎3个单芽姊妹系扩增出的1827条谱带中,增加了3条新带,变异率为0.16％,君迁子3个单芽姊妹系扩增出的1736条谱带中,增加了1条新带,缺失了14条带,变异率为0.86％。该结果为柿属植物种质资源缓慢生长法保存的有效性和可行性提供了理论依据。

仁用杏SRAP-PCR体系的正交设计优化

改良CTAB法提取仁用杏基因组DNA,用于建立SRAP-PCR体系。采用L16(44)正交设计试验,对影响仁用杏SRAP-PCR反应体系的4因素(dNTPs浓度、Mg2+浓度、引物浓度、Taq聚合酶量)4水平进行筛选,PCR结果经统计软件SPSS V13.0分析,并对退火温度进行了摸索,确立了仁用杏SRAP-PCR的优化体系:总体积为20 L,dNTPs浓度为0.2 mmol/L,Mg2+浓度为2.5mmol/L,引物浓度为0.9μmol/L,Taq聚合酶量为1.5 U,退火温度为52℃。本优化体系为仁用杏资源遗传分析奠定了技术基础。

柿品种‘禅寺丸’花粉超低温保存研究

对柿品种‘禅寺丸’(DiospyroskakiThunb .cv .Zenjimaru)花粉进行了干燥脱水法 (Dehydration)和玻璃化法 (Vitrification)液氮超低温保存研究 ,结果表明 :0℃下硅胶干燥 8h或 (2 0± 1)℃下玻璃化液PVS2 处理4 0～ 6 0min后直接投入液氮保存 ,4 0℃解冻 70s后 ,相对存活率 (TTC检测 )和萌发率都在 90 %以上 ,且活力与保存时间长短无关。该结果为柿花粉的长期保存提供了技术支持。

甘草SRAP-PCR正交试验设计优化及引物筛选

为了建立甘草SRAP技术,采用四因素(Taq酶,Mg^(2+),dNTP,引物)四水平的正交试验设计[L16(44)]对甘草进行SRAP-PCR试验,电泳结果采用软件SPSS分析,退火温度和引物筛选采用单因子试验。结果发现,4种因素对甘草SRAP-PCR的影响依次为dNTP>Taq酶>Mg^(2+)>引物;优化后的甘草SRAP-PCR体系(20μL)为1×PCR缓冲液,引物0.6μmol/L,Mg^(2+)2.5mmol/L,Taq酶1.5U,dNTP 0.3mmol/L,模板DNA 40ng;最佳的退火温度为50℃;81对引物中有22对扩增出明亮、清晰的谱带。该优化的SRAP-PCR反应体系为进行甘草资源遗传分析提供了技术支持。

Y2O2S：Eu^3＋空心微球的制备与性能

以单分散的碳球为硬模板,采用均匀共沉淀法合成了Y2O2S∶Eu3+空心微球。通过XRD、SEM、TEM、荧光光谱对其进行表征。X射线衍射测试表明所制备的Y2O2S∶Eu3+空心微球为单相,六方晶。扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)测试表明所制备的Y2O2S∶Eu3+空心微球粒径小,分布均匀。激发和发射光谱测试表明Eu3+离子能有效地掺入硫氧化钇基质中,并具有良好的发光性能。

仁用杏SSR反应体系的建立与优化

采用正交设计结合单因素分析,建立并优化了仁用杏SSR反应体系。结果表明:20μL反应体系中,Mg2+、Taq DNA聚合酶、dNTPs和引物的浓度分别为1.5 mmol/L1、.5 U、0.2mmol/L、0.25μmol/L,引物退火温度为52℃。应用该体系对24份仁用杏资源进行SSR分析,DNA谱带多态性丰富,将为仁用杏资源的SSR分析提供技术支持。

甜柿试管苗生根条件的研究

采用正交设计,探讨了影响甜柿试管苗生根的复合因素,结果表明:在添加细胞分裂素CPPU 0.2mg/L的MS(1/2N)继代培养基上,经适当时间继代培养的嫩梢经IBA 250 mg/L浸基部15 s后转接到1/2MS(1/2N)+活性炭1 000mg/L的生根培养基中或直接接种到添加有IBA 1 mg/L的上述生根培养基中诱导生根的效果好。不仅生根率高,根生长快,且根条数多,易于移栽成活。

小麦SRAP-PCR体系的正交设计优化

[目的]优化小麦SRAP-PCR技术体系。[方法]以小麦丰优68为试材,利用正交设计L16(45)对小麦SRAP-PCR反应体系中的5因素(Taq聚合酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物)在4个水平上进行优化试验。[结果]不同因素对小麦SRAP反应体系的影响为:Mg2+>Taq聚合酶>dNTPs>模板DNA>引物;优化的小麦SRAP-PCR体系为:在20μl反应体系中,包括10×PCRBuffer2.0μl、Mg2+2.0mmol/L、Taq聚合酶2.0U、dNTPs0.2mmol/L、模板DNA40ng、引物0.6μmol/L。[结论]该优化体系为小麦资源SRAP遗传分析奠定了技术基础。

CPPU在柿试管繁殖中的应用

对CPPU和ZT在柿试管繁殖中的应用价值进行了比较研究,结果表明:CPPU是一种可代替ZT的特效细胞分裂素,添加有CPPU0.2mg/L的MS(1/2N)培养基能促进芽的增殖和生长,且用此培养基继代培养的试管苗生根能力也有所提高。

纳米晶Y2O2S∶Eu^3＋,Mg^2＋,Ti^4＋长余辉发光材料的制备

采用溶剂热-高温固相法,合成了纳米晶Y2O2S∶Eu3+,Mg2+,Ti4+红色长余辉发光材料。通过XRD、TEM、荧光光谱对其进行表征。X射线衍射测试表明所制备的Y2O2S∶Eu3+,Mg2+,Ti4+纳米材料为单相,六方晶。透射电子显微镜(TEM)测试表明所制备的Y2O2S∶Eu3+,Mg2+,Ti4+纳米材料粒径小,分布集中。激发和发射光谱测试表明Eu3+离子能有效地掺入硫氧化钇基质中,并具有良好的发光性能。余辉测试表明其余辉颜色为红色,具有良好的余辉效果。