耐药鲍曼不动杆菌ADC型β-内酰胺酶基因分子流行病学研究

目的了解临床分离的92株耐药鲍曼不动杆菌ADC型β-内酰胺酶基因存在状况以及其基因进化分析。方法 92株耐药鲍曼不动杆菌分离自某省级医院痰液标本,药敏纸片法检测其药物敏感性,聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析ADC型β-内酰胺酶基因。结果 92株鲍曼不动杆菌对头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/三唑巴坦、阿米卡星、左氧氟沙星、米渃环素、复方磺胺甲噁唑的耐药率分别为:91.3%、91.3%、91.3%、89.1%、89.1%、90.2%、67.4%、83.7%、58.7%、84.7%;ADC型β-内酰胺酶的阳性率为93.5%;ADC型β-内酰胺酶基因分子进化显示,可分为4个簇群。结论 ADC型β-内酰胺酶基因在多重耐药的鲍曼不动杆菌中广泛存在,这有可能是造成青霉素、第一至第三代头孢类药物和单环类β-内酰胺类药物耐药的主要原因。

尿沉渣6种染色方法的应用比较

目的 选择针对AMP2 0 0 0 -U尿沉渣自动扫描系统的最佳染色液 ;探讨评价染色质量优劣的新方法。方法 对 110例尿沉渣分别采用核红与美蓝 ,考马斯亮蓝与中性红 ,甲苯胺蓝与中性红 ,S染液 ,S -M染液 ,EmerK染液染色 ,用AMP2 0 0 0 -U进行观察。结果 S染液、S -M染液背景清晰 ,尿沉渣有形成分与背景色彩对比鲜明 ,结构清楚 ;其他的 4种染液或背景模糊或有形成分结构不清楚。结论 S染液、S -M染液染色效果佳。

IL-17对小鼠心肌成纤维细胞Ⅰ/Ⅲ胶原表达的作用研究

目的:探讨IL-17对小鼠心肌成纤维细胞Ⅰ/Ⅲ胶原蛋白表达的影响及其分子机制。方法:从7～14 d BALB/c小鼠心脏中分离培养心肌成纤维细胞,分别用100 ng/mL IL-17刺激0、24、48、72 h,PCR检测其表面IL-17受体、免疫荧光检测I/III型胶原表达水平,Western blot法检测PKCβ、Erk1/2、NF-κB磷酸化水平。结果:心肌成纤维细胞表面有IL-17RA/C的表达;IL-17刺激心肌成纤维细胞24 h后Ⅰ/Ⅲ型胶原表达明显增加,Western blot显示IL-17刺激心肌成纤维细胞后分别在30、45、45 min导致PKCβ、Erk1/2、NF-κB的磷酸化。结论:IL-17可以诱导心肌成纤维细胞Ⅰ/Ⅲ型胶原的表达,其分子机制可能是PKCβ-ERK1/2-NF-кB依赖性的。

发展医学教育坚持以学生为主体

科学发展观的本质和核心是“以人为本”；在医学教学中“以人为本”就是以学生为主体、学生积极自主学习实践、独立分析思考并能有所创新。《国家中长期教育改革和发展规划纲要（2010-2020年）》（纲要）也明确提出教育的工作方针：优先发展，育人为本，改革创新，促进公平，提高质量。

幽门螺杆菌耐药的分子机制及检测方法研究进展

幽门螺杆菌是胃肠疾病的重要病原体,现其耐药率日渐增高,笔者对其耐药现状与趋势进行分析,探讨其耐药机制及耐药检测手段,为与幽门螺杆菌相关疾病的诊断、治疗提供依据,积累资料。

人HMGB1 B box蛋白的表达、鉴定及其单克隆抗体的制备

目的:表达人HMGB1 B box蛋白,制备其单克隆抗体(mAb),为进一步研究HMGB1 B box在免疫调节和抗感染免疫中的作用奠定基础。方法:将pET28-HMGB1 B box转化DH5α摇菌表达,使用His标记的蛋白纯化柱纯化、鉴定后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0细胞进行常规融合,经间接ELISA筛选阳性克隆,获得分泌人HMGB1 B box蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot等方法鉴定其特性(mAb的效价、Ig类别及特异性)。结果:成功地建立了2株稳定分泌抗人HMGB1 B box的mAb细胞株,分别命名为1D2F4E3和2D4E3A2。2株mAb的免疫球蛋白类型均为IgG,Western blot显示,2株mAb均能与HMGB1 B box发生特异性反应,其滴度为1×106,mAb1 D2F4E3和2D4E3A2的A450值分别为0.324±0.093和0.296±0.085。结论:获得了2株分泌HMGB1 B box mAb的细胞株,为HMGB1 B box蛋白的生物学功能研究奠定了基础。

重组高迁移率族蛋白1(rHMGB1)体外诱导小鼠骨髓细胞向髓源性抑制性细胞(MDSC)分化

目的探讨重组高迁移率族蛋白1(r HMGB1)对髓源性抑制性细胞(MDSC)的体外分化作用。方法分离BALB/c小鼠的骨髓细胞,分别使用r HMGB1、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合白细胞介素6(GM-CSF-IL-6)、GM-CSF、IL-6和r HMGB1三者联合(GM-CSF-IL-6-r HMGB1)进行体外刺激48 h,流式细胞术检测CD11b+Gr1+MDSC、CD11c+和F4/80+巨噬细胞的比例。用免疫磁珠体外分选出粒细胞源性MDSC(G-MDSC)和巨噬细胞源性MDSC(M-MDSC)分别用r HMGB1刺激48 h,流式细胞术检测各组细胞中CD11b+Gr1+MDSC、CD11c+细胞和F4/80+巨噬细胞的比例。结果与对照组相比,r HMGB1、GM-CSF-IL-6、GM-CSF-IL-6-HMGB1刺激48 h后,CD11b+Gr1+MDSC比例增加,CD11c+细胞和F4/80+巨噬细胞的比例减少;免疫磁珠体外分选出G-MDSC和M-MDSC,用r HMGB1蛋白刺激48 h,与对照组相比,r HMGB1刺激后,CD11b+Gr1+MDSC、CD11c+细胞和F4/80+巨噬细胞的比例无显著性差异。结论 r HMGB1体外可以诱导分化MDSC比例增加,GM-CSF、IL-6与r HMGB1联用可以增强诱导效果。

低氧诱导高迁移率组蛋白B1对人胰腺癌细胞凋亡抵抗和迁移的作用研究

目的观察低氧诱导人胰腺癌细胞系(SW1990)分泌高迁移率组蛋白B1(HMGB1)作用,并探讨胞外HMGB1在胰腺癌细胞凋亡抵抗及转移中的作用。方法取对数生长期SW1990细胞分别给予以下处理:(1)常氧+PBS;(2)低氧+PBS;(3)低氧+HMGB1(100μg/L);(4)低氧+HMGB1(100μg/L)+EP(胞外HMGB1特异性抑制剂)。细胞处理72 h后,ELISA检测(1)及(2)2组细胞培养上清中HMGB1表达的差异;Annexin V/PI流式细胞术检测(2)、(3)、(4)各组细胞的凋亡率;Transwell迁移实验检测(2)、(3)、(4)各组细胞迁移能力差异;Western-blotting检测(2)、(3)、(4)各组细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2)及迁移相关蛋白(E-cadherin、MMP-9)表达的差异。结果 ELISA结果显示低氧条件下,细胞培养上清中HMGB1表达含量升高,是常氧条件下的5倍;Annexin V/PI流式细胞术检测以上3组细胞的凋亡率分别为:(23.47±2.20)%、(6.57±1.20)%、(20.03±1.89)%;低氧+HMGB1处理组细胞凋亡比率明显低于其他2组,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell迁移实验中各组穿至下室的细胞数分别平均为(161.3±16.0)、(399.7±13.0)、(184.3±16.0)个,差异有统计学意义(P<0.05),提示低氧条件下HMGB1能明显促进人胰腺癌SW1990细胞的迁移;Western-blotting结果显示HMGB1处理组Bcl-2及MMP-9表达增高,E-cadherin表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低氧可以促进肿瘤细胞释放HMGB1,从而促进人胰腺癌SW1990凋亡抵抗与迁移。

US-2100R半自动尿液分析仪及配套试纸检测性能评估

目的对Sysmex提供的US-2100R半自动尿液分析仪及配套试纸条进行实验评估并观察在日常尿液分析中应用的可行性。方法通过同时再现性试验、不同的加样方法试验、不同的吸收方法试验、重复性、稳定性、线性试验以及温度、时间和标本对结果影响试验进行性能评估。结果同时再现性试验、不同的加样方法试验、不同的吸收方法试验、重复性、稳定性试验以及温度和时间对结果影响试验中大多数项目都在一个等级内变动;线性试验结果显示线性良好;标本对实验结果有一定的影响。结论该仪器及试条性能良好,完全适合各大小医院使用,值得推广。

一株Pseudomonas sp.的分离鉴定与所产絮凝剂性能研究

从土壤中分离筛选出一株絮凝剂产生菌,命名为C-2,通过nPCR扩增试剂盒鉴定得出这株絮凝剂产生菌为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens);絮凝性能实验表明:生物絮凝剂(命名为PS-2)在碱性条件下,以CaCl2作为助凝剂处理高岭土悬浊液时,用量仅为20mL/L,搅拌强度要求不高,能够使高岭土的絮凝率达到98%以上,絮体形成快,矾花大,沉降速度快,且温度的影响不大;将PS-2应用于多种高浊度废水的处理中,结果表明其对多种废水均具有良好的絮凝效果;成分分析表明PS-2是一种多糖和核酸的混合物。

多重耐药鲍曼不动杆菌中β内酰胺酶基因的检测

目的调查多重耐药鲍曼不动杆菌中β内酰胺类耐药基因的流行状况。方法收集2012年8月至2013年2月江苏大学附属医院和镇江市第一人民医院住院患者标本中分离得到的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株。应用K-B纸片扩散法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性。应用PCR法检测β内酰胺类耐药基因。结果 47株多重耐药鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮-舒巴坦,米诺环素和氨苄西林-舒巴坦的耐药率相对较低外,对其他抗菌药物的耐药率均较高。β内酰胺类耐药基因TEM、ADC、OXA-23和OXA-51的阳性率分别为91.5%(43株)、93.6%(44株)、93.6%(44株)和95.7%(45株)。结论多重耐药鲍曼不动杆菌对β内酰胺类抗生素耐药可能与β内酰胺类耐药基因的表达相关。

二甲双胍联合加巴喷丁及曲马多治疗神经病理性疼痛的疗效及安全性分析

目的观察二甲双胍联合加巴喷丁及曲马多治疗神经病理性疼痛(NP)的临床疗效与安全性。方法选取2014年3月—2015年3月江苏大学附属医院疼痛科诊断为NP且符合纳入与排除标准的患者125例为研究对象。剔除治疗过程中依从性差的患者,最终共纳入66例患者。采用随机数字表法将患者分为Ⅰ组(n=33)和Ⅱ组(n=33)。两组均常规给予加巴喷丁和曲马多口服,Ⅱ组加服二甲双胍治疗,疗程为6个月。记录患者治疗前(T0)、治疗后3个月(T1)、治疗后6个月(T2)药物疗效指标〔视觉模拟评分法(VAS)评分、睡眠评分〕及安全性指标〔肝肾功能指标、空腹血糖、维生素B_(12)水平、不良反应发生率〕。结果治疗方法与治疗时间在VAS评分上有交互作用(P<0.05);Ⅱ组T1、T2时VAS评分低于Ⅰ组(P<0.05);Ⅰ组、Ⅱ组T1、T2时VAS评分均低于T0时(P<0.05),Ⅱ组T2时VAS评分低于T1时(P<0.05)。治疗方法与治疗时间在睡眠评分上有交互作用(P<0.05);睡眠评分组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);Ⅰ组、Ⅱ组T1、T2时睡眠评分均低于T0时(P<0.05),Ⅱ组T2时睡眠评分低于T1时(P<0.05)。NP患者VAS评分与睡眠评分在T0时无直线相关关系(P>0.05);NP患者VAS评分与睡眠评分在T1、T2时呈正相关(P<0.05)。治疗方法与治疗时间在丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、空腹血糖、维生素B_(12)水平上无交互作用(P>0.05);ALT、AST、BUN、Cr、空腹血糖、维生素B_(12)水平组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);ALT、AST、BUN、Cr、空腹血糖、维生素B_(12)水平治疗时间间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者胃肠道不适、嗜睡、头晕、共济失调、皮肤麻木发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论二甲双胍联合加巴喷丁及曲马多治疗NP安全、有效。

36株多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药基因的流行病学研究

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类耐药基因的存在情况。方法收集2012年8—11月江苏大学附属医院和镇江市第一人民医院住院患者的临床标本中分离到的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株36株。应用K-B纸片扩散法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性、应用PCR检测细菌对氨基糖苷类药物的耐药基因。结果 36株多重耐药鲍曼不动杆菌对头孢哌酮-舒巴坦有较高的敏感率(33.3%),对其他抗菌药物的敏感率均较低(<20.0%)。36株多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类耐药基因aac(3)-I、aac(6’)-Ib、aph(3’)-I和16S rRNA甲基化酶基因armA的阳性率分别为72.2%(26株)、72.2%(26株)、80.6%(29株)和80.6%(29株)。结论本组多重耐药鲍曼不动杆菌多耐药情况比较严重,其对氨基糖苷类药物耐药与氨基糖苷类耐药基因的存在密切相关。

肺腺癌转移相关转录本1在乳腺癌患者血浆中的表达及临床意义

目的:探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript1,MALAT-1)在乳腺癌患者血浆中的表达及其临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测60例乳腺癌患者癌组织及癌旁组织中MALAT-1的表达,60例乳腺癌患者及60例乳腺纤维瘤患者血浆中MALAT-1的表达;分析乳腺癌患者血浆MALAT-1表达量与临床病理特征的关系;采用电化学发光免疫测定法检测血浆中CA125和CA153含量,建立多元逻辑回归模型分析血浆中MALAT-1、CA125和CA153对乳腺癌的诊断效能及3项指标联合诊断价值。结果:乳腺癌患者癌组织MALAT-1表达量明显高于癌旁组织;与乳腺纤维瘤患者相比,乳腺癌患者血浆中MALAT-1表达明显增高,且血浆中MALAT-1表达与基因分型和淋巴结转移明显相关(P<0.05)。血浆MALAT-1单独诊断乳腺癌的ROC曲线下面积(AUC)为0.961(P<0.001),敏感度和特异性分别为96.7%和93.3%,其诊断价值高于CA125(AUC=0.618,P=0.022)和CA153(AUC=0.623,P=0.016);3项指标联合诊断敏感度(98.3%)高于单独检测。结论:乳腺癌患者血浆中MALAT-1呈高表达,其可能为乳腺癌诊断的潜在生物学标志物。

MyD88-铜绿假单胞菌表位核酸疫苗的构建及其真核表达

目的:构建重组MyD88基因的铜绿假单胞菌(PA)表位核酸疫苗,并研究其在真核细胞中的表达。方法:将PA的OprF的三个中和性B细胞表位及一个外源通用T细胞表位串联,表位之间用赖氨酸间隔,采用重叠PCR方法合成全基因,并在此序列前插入组织纤溶酶原激活物(tPA)的信号肽基因,将获得的片段与MyD88基因分别克隆到pIRES载体的两个多克隆位点,构建真核双表达重组质粒pIRES-tPA-OprF-MyD88。电穿孔法将pIRES-tPA-OprF-MyD88转入COS-7细胞,通过Westernblot检测其细胞上清tPA-OprF蛋白及细胞内MyD88蛋白的表达。结果:构建的真核表达质粒pIRES-tPA-OprF-MyD88,经电转COS-7细胞后,在其培养的上清液及细胞内检测到目的蛋白。结论:成功构建pIRES-tPA-OprF-MyD88表达载体,并在转染的真核细胞中得以有效地表达,为研究PA预防性疫苗奠定了实验基础。

精氨酸酶1在食管癌患者外周血的表达及其临床意义

目的检测精氨酸酶1(arginase1,Arg1)在食管癌中的表达,分析其与髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressorcells,MDSCs)消长的关系,探讨癌症患者机体免疫抑制状态的可能机制。方法应用流式细胞术检测30例食管癌患者PBMC中的MDSCs比例;实时荧光定量PCR检测PBMC中Arg1、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆Arg1,IL-6和TNF-α含量。结果食管癌患者外周血PBMC中MDSCs比例及Arg1的mRNA水平均明显高于健康对照组(P<0.05),而IL-6和TNF-α的mRNA水平均低于健康对照组(P<0.05)。食管癌患者血浆Arg1含量高于健康对照组(P<0.05),而IL-6和TNF-a含量与健康对照组相比无明显差异(P>0.05)。此外,食管癌患者Arg1 mRNA水平和蛋白水平均与MDSC含量呈正相关(P<0.01)。结论 Arg1在食管癌患者外周血中的高表达与MDSCs水平和食管癌的发生、发展有着密切的关系,其检测将有助于临床食管癌的辅助诊断和预后判断。

子宫内膜异位症患者血清IL-4/IFN-γ和TGF-β/IL-17的变化及意义

目的观察子宫内膜异位症(EM)患者血清IL-4、IFN-γ、TGF-β和IL-17的表达水平,分析Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡状态并探讨其与子宫内膜异位症发生发展的关系。方法选取确诊为子宫内膜异位症的病例42例为研究对象,并以无子宫内膜异位症的健康女性为对照组,采集其血清用ELISA法检测并比较IFN-γ、IL-4、IL-17和TGF-β的水平,计算IL-4/IFN-γ、TGF-β/IL-17的比值。结果子宫内膜异位症患者外周血IFN-γ、IL-17的水平均显著低于对照组(P<0.01),而IL-4和TGF-β均显著高于对照组(P<0.05)。IL-4/IFN-γ和TGF-β/IL-17的比值都显著高于对照组(P<0.01),EM组Ⅲ～Ⅳ期患者的IL-4/IFN-γ和TGF-β/IL-17水平显著高于Ⅰ～Ⅱ期的患者。结论 EM组患者外周血中Th1细胞相关的细胞因子IFN-γ和TH17细胞相关的IL-17水平均下降,而Th2和Treg细胞因子水平上升,且IL-4/IFN-γ和TGF-β/IL-17随病程的进展而显著升高,提示在子宫内膜异位症患者可能存在着Th1/Th2和TH17/Treg细胞的平衡失衡,且与病程发展紧密相关。

Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型IL-25表达水平的变化及意义

目的以Ⅱ型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎模型为研究对象,动态观察其IL-25的表达水平,探讨IL-25与关节炎发生发展的关系及其可能的机制,为寻找新的类风湿性关节炎免疫干预新途径积累实验数据。方法采用RT-PCR法扩增目的基因,构建mIL-25标准质粒,QRT-PCR检测模型鼠脾脏及其关节病变局部IL-25的表达水平;应用ELISA技术检测模型鼠血清和脾细胞培养上清IL-25蛋白的含量。结果在Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎的发病过程中,模型鼠脾细胞和关节滑膜组织IL-25的mRNA表达水平、均呈持续上升趋势,与对照小鼠相比差异显著(P<0.05)。这种IL-25蛋白和转录水平的表达,随着关节炎症程度的增加而升高。此外,模型鼠脾细胞对ConA的刺激表现出强IL-25表达性应答。结论 IL-25的表达水平与Ⅱ型胶原诱导的关节炎的发生发展密切相关。

铜绿假单胞菌多表位核酸疫苗的构建及其生物学作用的研究

目的:构建铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)多表位-MyD88基因疫苗并对其免疫原性进行研究。方法:将PA外膜蛋白F(OprF)的三个中和性B细胞表位及一个外源通用T细胞表位串联,采用重叠PCR方法合成DNA,并在此序列前插入组织型纤溶酶原(tPA)的信号肽基因,将此获得的片段与MyD88基因分别克隆入pIRES载体构建重组质粒pIRES-tPA-OprF:MyD88,并将该质粒免疫Balb/c小鼠,采用ELISA法测定特异性抗体水平。气管内接种PA,进行肺组织匀浆PA细菌计数。结果:成功构建真核表达质粒pIRES-tPA-OprF:MyD88,用该质粒免疫小鼠,能刺激机体产生高度特异性抗体,气管接种PA后,免疫组小鼠肺匀浆细菌计数明显低于其他对照组。结论:成功构建了重组有MyD88基因的PA表位核酸疫苗,接种小鼠后可诱导特异性免疫应答,产生较好的抗铜绿假单胞菌感染的免疫保护作用。

糖尿病肾病患者Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)活性增强参与代谢综合征多组分聚集状态形成

目的探讨终末期2型糖尿病肾病(DN)患者Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)活性及其与代谢综合征(MS)多组分聚集状态的关系。方法募集维持性血透治疗超过3个月病情稳定的DN患者30例、单纯2型糖尿病(T2D)患者30例和健康对照30例。Ficoll-泛影葡胺密度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),实时荧光定量PCR检测ILC2相关的视黄酸受体相关孤核受体α(RORα)、白细胞介素17受体B(IL17RB)、IL-33受体T1/ST2、IL-5、IL-13的mRNA水平;流式细胞术检测PBMC中ILC2的百分比;ELISA检测血浆IL-5、IL-13水平;计算3组受试对象MS发生率、组分个数;Pearson法分析各组分与ILC2相关因子的相关性。结果单纯T2D和DN患者的腰围、空腹血糖、收缩压、舒张压、甘油三酯及MS组分数均升高,MS发生率分别为46.67%和86.67%。DN患者ILC2的比例增加,ILC2相关转录因子RORα及膜受体T1/ST2的mRNA表达水平均升高,且与IL-5和IL-13的表达水平呈正相关。此外,DN患者PBMC的IL-13 mRNA水平与收缩压、血浆总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇水平呈正相关,ILC2膜受体T1/ST2与低密度脂蛋白-胆固醇水平也呈正相关。结论维持性血透治疗的DN患者比单纯T2D患者存在更明显的MS多组分聚集现象,ILC2活性增强可能通过对血压及脂质代谢的影响参与糖尿病肾病患者MS状态的形成。