健康献血者血浆可溶性糖蛋白A(GPA)在抗-M与抗-“Mia”抗体阳性及阴性中表达差异的分析研究

目的分析健康献血者血浆中可溶性糖蛋白A(glycoprotein A,GPA)表达量与抗-M及抗-“Mia”抗体的相关性。方法收集2022年2月9日~2023年2月15日的健康献血者血浆:不规则抗体阴性的NN型(Ⅰ组,n=118)与MM型(Ⅱ组,n=51),抗-M抗体阳性的NN型(Ⅲ组,n=145)与抗-“Mia”抗体阳性的随机型(Ⅳ组,n=87),分别检测4组人不同个体血浆中GPA的含量,t检验分析GPA表达量的差异。结果Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血浆中GPA平均含量分别为:9.941±0.252,10.97±0.256,5.139±0.129和4.28±0.139ng/ml。Ⅰ组与Ⅱ组的GPA平均含量较高,Ⅲ组与Ⅳ组的GPA平均含量较低,显示GPA平均含量在不规则抗体阴性(Ⅰ组与Ⅱ组)的血浆中较高,在抗-M与抗-“Mia”抗体阳性(Ⅲ与Ⅳ组)的血浆中较低,差异具有统计学意义(均P<0.01)。结论含有抗-M与抗-“Mia”抗体的健康献血者血浆中GPA含量明显低于抗体阴性的群体。该研究结果为深入探讨血浆中GPA是否有中和抗-M与抗-“Mia”抗体的能力,提高疾病诊断与安全输血打下基础。

临床患者血浆中β-内酰胺类药物&抗体致输血无效及对供者红细胞亲和力的研究

目的分析临床患者血浆中β-内酰胺类药物&抗体对供者红细胞的亲和力,探究药源性溶血性贫血及输血无效的临床特点。方法选择2021年11月~2022年4月期间临床送检的4例有β-内酰胺类药物用药史的临床患者,检测ABO与Rh血型,直接抗球蛋白试验(direct antiglobulin test,DAT)、不规则抗体鉴定(identification of irregular antibodies,IAT)与β-内酰胺类药物抗体及效价,对DAT阳性的患者红细胞进行酸放散并检测放散液中β-内酰胺类药物抗体。选择ABO和Rh同型的供者红细胞与患者血浆在37℃无菌条件下体外致敏,监测β-内酰胺类药物&抗体在0,24,48和72 h与供者红细胞的亲和力,并观察加入补体后的溶血程度。结果4例患者血浆中均存在β-内酰胺类药物抗体,停药前输血无效,停药后输血效果良好。患者1:A型,RhCCDee,DAT阳性(3+W),IAT阴性,血浆中存在头孢哌酮药物抗体(效价:1∶64)、阿莫西林药物抗体(效价:1∶16),放散液中存在头孢哌酮药物抗体。患者2:A型,RhCcDee,DAT阳性(4+W),IAT阴性,血浆中存在头孢哌酮药物抗体(效价:1∶128),放散液中存在头孢哌酮药物抗体。患者3:A型,RhCcDee,DAT阳性(4+),IAT阳性,鉴定为抗E抗体,血浆中存在阿莫西林药物抗体(效价:1∶16)、亚胺培南药物抗体(效价:1∶64)、头孢哌酮药物抗体(效价:1∶128),放散液中存在亚胺培南、头孢哌酮药物抗体。患者4:A型,RhCCDee,DAT阳性(1+),IAT阳性,鉴定为抗-E.c抗体,血浆中存在阿莫西林药物抗体(效价:1∶32),放散液中未检测到药物抗体。4例患者血浆与供者红细胞体外致敏24 h后DAT均为阳性,48和72 h内逐渐增强,加入补体后均可引起红细胞溶解。结论头孢哌酮、阿莫西林和亚胺培南三种β-内酰胺类药物&抗体可迅速结合到供者红细胞表面并随时间延长而增强,有补体存在的条件下可在24~72 h内破坏供者红细胞引起溶血,导致输血无效。

MNS血型相关基因GYPA、GYPB、GYPE mRNA全长序列多态性分析

目的:分析MNS血型相关基因GYPA、GYPB、GYPE mRNA全长序列的特征,了解MNS血型基因的多态性。方法:随机选取无偿献血者500人份离体24 h内的抗凝血各8 ml,以血型血清学方法鉴定MN、Ss、Mia血型。从500例样本中随机选取MNS与Mia血型不同组合的5例样本,使用密度梯度离心法分离外周血中的单个核细胞(PBMC)并提取总mRNA,使用逆转录试剂盒制备cDNA,采用巢式PCR(nested PCR)方法扩增目标片段,切胶回收后分别对GYPA、GYPB、GYPE mRNA全长序列进行测序,通过Oligo 6.0软件分析碱基序列。结果:血清学检测得到MN、Ss和Mia表现型,不同个体间的红细胞与抗-Mia血清反应存在凝集强度差异。检测了5例不同表现型组合样本的GYPA、GYPB、GYPE基因mRNA全长序列,1例样本的GYPA mRNA中exon-6完整缺失,其他4例样本的GYPA mRNA全长完整;2例样本的GYPB mRNA中exon-2完整缺失,Mia血型阴性;2例样本的GYPB mRNA全长完整,Mia血型阳性;1例样本的GYPB mRNA中exon-5存在碱基替换;5例样本的GYPE mRNA全长完整。结论:MNS血型相关基因具有明显的多态性,mRNA全长序列的检测为GYPA、GYPB、GYPE基因结构的分析与MNS血型抗原表达的深入研究奠定了基础。

中国汉族人FUT2基因点突变初步研究

目的 了解中国汉族人分泌型基因 (FUT2 )点突变的情况。方法 采用直接测序法及分子克隆测序法对 4 1名中国汉族个体的FUT2基因进行检测 ,并与Kelly报道的分泌型基因的序列作比较分析。 结果 4 1名中国汉族个体中未见G4 2 8A突变 ,但发现A385T和C35 7T突变 ,其中 2 4人有A385T突变 ,17人无A385T突变 ,而所有个体都有C35 7T的同义突变。结论 在 4 1名中国汉族人群中没有发现在非洲和高加索人非分泌型中常见的G4 2 8A点突变 ,但存在着A385T、C35 7T两种不同于白种人的FUT2基因点突变。

类孟买型的FUT1和FUT2等位基因突变的分析

目的分析类孟买型个体的FUT1和FUT2位点基因突变的分子生物学基础。方法采用PCR扩增产物直接测序法,对2例类孟买型个体的FUT1和FUT2位点的等位基因进行序列检测。结果1例类孟买型个体FUT1位点547～552位的3个重复连续的AG中缺失1个AG,使得氨基酸序列发生182框码移位;另1例FUT1位点880～882位3个重复连续的T中缺失2个T,使得氨基酸序列发生294框码移位,而2例类孟买型的FUT2位点均为正常野生型。结论FUT1位点的移码突变是导致H抗原缺乏,形成类孟买型的原因之一。

深圳献血人群Duffy血型基因多态性的研究

目的建立Duffy血型的分子生物学检测方法,研究深圳献血人群Duffy血型基因多态性。方法在2011年8～11月本中心900名无血源关系献血者标本中,用卡式微柱凝胶抗球蛋白方法鉴定Duffy血型表现型,建立Duffy血型的基因分型方法 PCR-SSP法及PCR产物直接测序法,对900例标本DNA进行PCR-SSP法检测,其中50例做Duffy血型基因编码区域序列测定。结果血清学结果为Fy(a+b-)855例,Fy(a+b+)43例,Fy(a-b+)2例,Fy(a-b-)0例。900例Duffy血型PCR-SSP法基因分型结果与血清学表现型完全一致。50例FY基因编码序列部分测序结果与血清学、PCR-SSP法吻合,表现型FY(a+b-)标本测序结果可见FY基因第2外显子第125位核苷酸碱基为纯合子G;表现型FY(a-b+)标本测序结果为第125位核苷酸碱基为纯合子A。结论 Duffy血型PCR-SSP基因分型方法及PCR产物直接测序法可以正确地鉴定Duffy基因型,适用于Duffy血型基因多态性的研究。深圳地区Fya的基因频率为0.973 9,Fyb的基因频率为0.026 1。

罕见B放散型分子遗传背景的分析

目的分析一例罕见B放散型的ABO基因分子遗传背景。方法对一例血型血清学正反定型不符的无偿捐血者样本进行了包括吸收放散、血型物质检测等系列血清学实验后,采用PCR-SSP方法、第6、7外显子PCR产物直接测序,进行ABO基因定型;并对第6、7外显子及第6内含子进行基因克隆序列分析,以及采用PCR扩增样本的ABO基因5端调控(CBF/NF-Y增强子)区域,扩增产物经胶回收后进行直接序列测定。结果经过吸收放散等血型血清学实验鉴定为Bel表现型,在此样本中发现了一个ABO*B变异等位基因,它是在ABO基因的第7外显子695核苷酸位出现T>C突变,导致232位氨基酸由Leu转变为Pro。ABO基因微卫星增强区域序列测定为4个43个碱基长度的重复,第1个重复中nt41为C/G杂合,其余3个重复序列中nt41均为G,定为G/C型(B101/O01等位基因型)。结论在中国人群中再次报道nt695位突变的ABO新等位基因,表明ABO基因的第232位氨基酸对决定ABH糖基转移酶活性是至关重要的。

中国人群LW血型基因多态性的研究

本研究探讨中国人群Landsteiner-Wiener(LW)血型基因的多态性。随机采集深圳市血液中心160名非血缘关系无偿志愿捐血者外周血样EDTA抗凝血标本,并提取DNA。对这160例DNA标本直接进行LW血型基因的第一外显子测序分析,同时用优化的LWa/LWb等位基因PCR-SSP方法进行了的基因分型。结果表明:在对这160例捐血者基因组DNA的分子生物学研究中发现LW血型等位基因均为LWa纯合子。结论:在中国人群中LWa等位基因更常见,本次研究中100%的献血者LW血型等位基因均为LWa,目前还未发现LWb等位基因。

中国人群RhD阴性个体中D基因多态性的研究

目的 建立 RHD基因分型技术 ,分析中国人群 Rh D阴性个体的 RHD基因多态性分布状况。方法 设计 8对特异性引物扩增 RHD 7个外显子 ( 3 ,4,5 ,6,7,9,1 0 )和内含子 4,应用 PCR-SSP技术 ,对 1 1 5例经常规血清学试验和吸收放散试验鉴定的“Rh阴性个体”,进行 D基因多态性的研究。结果 1 1 5例 Rh D阴性个体 ,用吸收放散试验检测后分成 2组 ,一组被确认为 Rh D阴性表现型共 88例 ( 76.5 % ) ,另一组是 Del(放散 )表现型共 2 7例 ( 2 3 .5 % )。应用 PCR-SSP法对1 1 5例 Rh D阴性个体作 RHD内含子 4检查 ,结果 Del型个体都显示有 RHD内含子 4;对 1 1 5例中的 1 7例进一步作 RHD的 7个外显子的鉴定 ,其中 6例 Del带有完整的 RHD基因 ,1 1例经吸收放散试验确认为 Rh D阴性表现型的个体则显示 4种情况 :7例全部缺失 RHD基因 ,2例 ( 1例 cc Ee和 1例 Ccee)带有完整的 RHD基因 ,1例缺失 RHD的第 5外显子和 1例仅携带第 1 0外显子。结论 PCR-SSP技术可用于 RHD基因的研究。常规血清学鉴定的 Rh D阴性者中存在较高比例的 Del型 ,且有可能带有完整的 RHD基因。而被吸收放散试验确认为 Rh D的阴性个体有可能携带 RHD基因并显示出多态性 ,这些个体中有 Rhc抗原表达者 ,有别于文献中认为全属 Rh C抗原表达者的报?

Duffy血型研究及临床应用新进展

Duffy血型是人类最重要的血型系统之一,Duffy血型不仅仅与输血安全及母婴血型不合引起的新生儿溶血病密切相关,Duffy抗原作为趋化因子还在人类疟疾疟原虫受体、炎症、肿瘤、移植排斥等方面发挥着重要作用。本文从Duffy抗原表达和基因结构、Duffy血型在人群中的分布、Duffy血型的检测方法、Duffy血型生物学功能及临床应用等方面,综述国内外关于Duffy血型研究与临床应用的现状及最新进展。

中国人群Duffy血型基因启动子GATA-1序列研究

目的研究中国人群中Duffy血型基因启动子区域GATA-1盒子的遗传特点。方法在中国人群中选择182例无偿献血者,用血清学方法鉴定Duffy血型的表现型,提取基因组DNA,扩增测序Duffy血型基因启动子区域,其中包括GATA-1红细胞结合位点,同时使用PCR-SSP法检测Duffy基因型。结果 182例Duffy血型定型为Fy(ab-)0例,Fy(a-b+)3例,Fy(a+b-)153例,Fy(a+b+)26例。Duffy血型基因分型PCR-SSP结果显示与其表现型吻合。182例样本Duffy启动子区域的测序GATA-1的结合位点46位均为T/T纯合子。检出1例新的杂合子突变C-108T。结论本文首次针对中国人群进行Duffy启动子区域GATA-1序列进行研究,测序结果显示,182例样本GATA-1结合位点均为正常野生型,Duffy血型基因启动子区域C-108T突变为首例报导。

微柱凝胶抗球蛋白技术检测红细胞同种抗体能力的研究

目的 研究微柱凝胶抗球蛋白技术检测红细胞同种抗体的能力.方法 采用微柱凝胶抗球蛋白技术对127例含有红细胞同种抗体的样本进行检测,使用经典的试管抗球蛋白法平行检测,比对两种方法的检测结果.结果 微柱凝胶抗球蛋白法对于红细胞同种抗体的检出率为98.4%,试管抗球蛋白法的检出率为80.3%.其中,试管抗球蛋白法对抗-D,-E,-C,-c,-e,-C＋e,-E＋c,-Mur,-Dia,-Dib,-Fyb,-Jka,-Jkb,-Lea和-P1抗体均能检出,但对于MNS血型系统抗M抗体的检出率仅为36.4%,对未知抗体特异性的冷抗体检出率为57.7%;而微柱凝胶抗球蛋白法对所有样本包含的红细胞同种抗体均能检出,除了Kidd血型系统,漏检率为33.3%.结论 微柱凝胶抗球蛋白法对于红细胞同种抗体的检出率高于试管抗球蛋白法,但是可能会漏检Kidd血型系统同种抗体,建议实验室在使用微柱凝胶抗球蛋白法的同时,应结合试管抗球蛋白方法,可以更有效地检出抗体,特别是输血前相容性试验.

深圳地区1770例疑难交叉配血标本解决方案的回顾性研究

目的总结并探讨深圳地区最近10年临床疑难交叉配血(标本)不合原因,为提高输血疗效提供解决方案。方法收集2011年~2020年深圳地区医疗机构送本中心做疑难血型鉴定的1770例临床标本,分析其交叉配血不合的原因,确定患者血浆中意外抗体的类型,通过分类变量的统计学方法对抗体做总体率评估。以同型输血结合相容性相输的原则来提高输血的安全性。结果1)1770例疑难配血标本来源于956名患者,其中2011年~2015年疑难配血患者人均配血次数为1.32(307/232);自2016年始,疑难配血患者人均配血次数由2016年的1.27(103/81)上升至2018年的2.23(286/128),并在之后2年保持稳定。2)在956名其交叉配血不合患者中,由自身抗体或/和同种抗体阳性的比例为90.38%(864/956),包括42.26%(404/956)自身抗体合并同种抗体阳性、20.71%(198/956)单纯自身抗体阳性、27.41%(262/956)单纯同种抗体阳性;检出特异性同种抗体20种,分属于8个血型系统,其中Rh血型的55种抗体的频率达到70.82%(551/778)[抗-E(37.15%)>抗-c(20.95%)抗-C(5.27%)=抗-e(5.27%)>抗-D(2.19%);其后依次为MNS[11.40%(112/778)]、Kidd[5.66%(44/778)]、Leiws[3.21%(25/778)]、Duffy[1.80%(14/778)]、Diego[1.03%(8/778)]、P1[0.39%(3/778)]、H[0.26%(2/778)]血型系统的同种抗体。3)年龄<20岁的多次输血患者中有86%(37/43)为地中海贫血患者,均检测到自身抗体或红细胞同种抗体1~4种。结论临床交叉配血不合的原因主要是由输血或妊娠免疫导致的同种抗体、自身免疫性疾病如自身免疫性溶血性贫血引发的自身抗体干扰配血所致;临床医疗机构如遇交叉配血不合,应立即送至具有检测能力的血型参比实验室鉴定和配血,这对于保障临床安全用血与提高疗效至关重要。

中国汉族人群FUT2基因385位点突变与Lewis表型的相关性

目的 分析中国汉族人群分泌型基因 ( FUT2 ) 3 85位点突变与 Lewis表型的相关性。方法 对 73例中国汉族人进行 Lewis血型血清学鉴定。采用 SSP法对 73例标本的 FUT2基因进行 3 85位点突变筛检 ,并用测序法验证。结果 3 85 T突变发生率为 5 4.79%。个体 FUT2基因 3 85 T为纯合子且 Lewis为阳性时 ,其 Lewis表型为 Le( a+b+)和 Le( a+b-) ,Le( a+b-)表型占总数的 1 7.8% ,Le( a+b+)占 8.2 %。结论 FUT2基因 A3 85 T的纯合子突变是 Le( a+b+)和Le( a+b-)表型的遗传基础。

Jk^a抗原弱表达与JK基因第4外显子130A的相关性分析

目的研究分析在中国人群中发现的Jka抗原弱表达（Jka＋w）与JK基因第4外显子130A的相关性。方法共有3800例中国深圳地区汉族献血者的全血标本,经尿素溶解试验筛检并采用常规血型学方法鉴定出Jk（a＋w b-）表现型3例,同时选取100例非相关献血者作为对照组。基因组DNA通过聚合酶链反应扩增JK基因第4—11外显子及部分内含子片段,并对PCR产物进行直接测序比对分析。结果 1）3例Jk（a＋wb-）表型中,2例JK基因第4外显子nt130位点为G/G纯合子,且携带JKB/JKB等位基因;另1例为nt130G/A杂合子,携带JKA/JKB等位基因。2）对照组100例Kidd血型表型分别是,24例Jk（a＋b-）型,43例Jk（a＋b＋）型,33例Jk（a-b＋）型。在24例Jk（a＋b-）表型中,1例nt130G/G纯合子,6例nt130G/A,17例nt130A/A;43例Jk（a＋b＋）表型中,为7例nt130G/G,36例nt130G/A;33例Jk（a-b＋）中均为nt130G/G纯合子基因型。3）在这103例标本中JK基因第8内含子5＇端84位A突变为T,且均为84T/T纯合子。结论 130A突变位点在中国人群中较为常见,但未能证明是引起Jka抗原弱表达的原因。

一例Ah-分泌型个体的分子生物学背景的分析

目的研究Ah-分泌型个体的分子基础。方法经血型血清学方法鉴定红细胞上H抗原缺失、但存在弱A抗原的Ah-分泌型个体,用PCR-SSP法鉴定ABO基因型,对FU-T1和FU-T2编码区域进行扩增,并对扩增产物直接测序,FU-T1进一步做克隆测序分析。结果血清学结果显示该个体红细胞不凝集抗H血清,但与抗A定型血清呈弱凝集,Lewis血型表现型为Le(a-b+),唾液中有A、H物质,ABO基因型为A102B02;FU-T1基因型为h35h328,h35等位基因(nt35C>T),使12位(Ala)丙氨酸被(Val)缬氨酸置换;h328等位基因(nt328G>A),导致110位Ala(丙氨酸)被Thr(苏氨酸)置换;FU-T2基因为正常野生型Se357Se357。结论两个错义突变C35T、G328A可能是引起该例Ah-分泌型H抗原缺失、但存在A抗原的弱表达的原因。

WARM试剂在去除温自身抗体检测中的应用

目的探讨并评价WARM试剂在温自身免疫性溶血性贫血患者输血前检查中的应用。方法选取32例直接抗球蛋白试验(DAT)强阳性的自身免疫性溶血性贫血患者样本,使用WARM试剂、氯喹试剂及热放散3种方法,比较自身抗体吸收及去除的效果。结果使用WARM试剂放散后,87.50%患者DAT凝集强度从3+减弱为1+,81.25%患者血清用放散后的细胞吸收自身血清后,IAT凝集强度从2+减弱为w+;而52.17%患者使用氯喹试剂放散后,DAT凝集强度从3+减弱为1+,39.13%患者血清用放散后的细胞作自身抗体吸收后,IAT凝集强度从2+减弱为w+;另一方面使用热放散方法,21.73%患者DAT凝集强度从3+减弱为1+,17.39%患者血清用放散后的细胞作自身抗体吸收后,IAT凝集强度从3+减弱为1+。结论WARM试剂对于温自身抗体的放散及放散后红细胞对自身抗体的吸收效果,明显优于氯喹试剂和热放散方法。

Diego血型基因分型技术的研究及应用

传统的Dia和Dib相应的ISBT符号为DI1和DI2,这是Diego血型系统中最具有临床意义的一对抗原.Diego血型系统抗原相应的抗-Dia可以引起新生儿溶血病,也可以破坏输入的Dia抗原红细胞,抗-Dib非常罕见,但同样能引起新生儿溶血病(HDN)和溶血性输血反应,具有临床意义,Dia和Dib抗原可以用血清学方法鉴定,但试剂较为昂贵,特别是抗-Dib定型试剂,市场上更是难以购买,且临床因产生抗-Dib所引起的输血问题,寻找相合的血源是非常困难的,我国随机人群中调查DI1基因频率为0.0357,DI2基因频率为0.9643,Di(a+b-)表现型的人低于千分之一[1],因此,笔者建立了Diego血型基因分型技术,并用于临床Diego血型的鉴定,以及Di(a+b-)献血员的筛检.……

中国人群真实RhD阴性个体和RhD^(el)型RHD基因研究

为观察中国人群真实 Rh D阴性个体和 Rh Del型 RHD基因存在情况 ,采用常规盐水法和抗人球蛋白试验筛选 Rh D阴性捐血者 ,通过吸收放散试验确定其中 Rh Del和真实 Rh D阴性 ,并采用 PCR技术检测 RHD基因第 4内含子 ,对吸收放散试验结果与基因检测结果不符的样本进一步采用序列特异性引物 PCR (PCR- SSP)技术测定 RHD基因第3、 4、 5、 6、 7、 9和 10外显子 ,观察基因变异。筛选获得 10 4名 Rh D阴性捐血者 ,吸收放散试验鉴定 2 5名 (2 4 .0 % )为 Rh Del型 ,79名 (76 .0 % )为真实 Rh D阴性 ;2 5例 Rh Del全部检测到 D基因 exon4 - intro4 - exon5区域 ,79名真实 Rh D阴性个体中有 5名 (6 .3% )个体 (2名 CCdee,2名 ccd Ee,1名 Ccdee)检测到 D基因第 4内含子 ;PCR- SSP结果显示5名个体中 ,4名存在全部被检测的 D基因区域 ,1名个体 (ccd Ee)第 5外显子检测阴性。结果表明抗人球蛋白试验确认的 Rh D阴性中国人中存在高比率的 Rh Del型 ,且均可检测出 RHD基因第 4内含子 ;若排除 Rh Del,携带 D基因的 Rh D阴性中国人的比率明显降低 ,且这些个体并非如以往报道的均为