日本血吸虫22.6kDa重组蛋白对小鼠的免疫保护性研究

目的:研究日本血吸虫(中国大陆株)22.6 kDa 抗原作为血吸虫病疫苗候选分子的潜能,并探讨Sj22.6/Sj26 GST 融合蛋白作为复合疫苗的可能性。方法:用亲和层析法制备Sj22.6/Sj26 GST融合蛋白。将这两种蛋白分别免疫BALB/c小鼠后进行攻击感染试验。结果:Sj22.6 重组蛋白和Sj22.6/Sj26 GST 融合蛋白分别可诱导小鼠产生32.1% (P< 0.005) 和34.9% (P< 0.02)的成虫减虫率, 28.4% (P< 0.02)和45.1% (P< 0.005)的总减卵率。结论:rSj22.6 与Sj22.6/Sj26

日本血吸虫22.6 kDa重组抗原的高效融合表达及特性鉴定

目的： 大量获得纯化的日本血吸虫２２６ ｋ Ｄａ 重组抗原。方法： 用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法将其编码基因序列经改造后亚克隆入载体质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｘ１λ Ｔ 进行表达。结果： 得到了融合表达的蛋白抗原。此融合蛋白表达量大， 用凝血酶酶切后易大量制备纯化的重组２２６ ｋ Ｄａ 抗原。结论： 以此融合蛋白免疫的小鼠抗血清进行免疫印迹试验， 表明 Ｓｊ２２６／ Ｓｊ２６ Ｇ Ｓ Ｔ 融合重组蛋白具有与 Ｓｊ２２６ 蛋白一样的免疫学活性。

日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原对小鼠免疫保护性的初步研究

目的：为研究日本血吸虫（中国大陆株）22．6kDa抗原的免疫保护性。方法：将其编码cDNA经PCR扩增后亚克隆入载体质粒PGEX—1λt进行表达，并用重组抗原免疫了一批昆明鼠。结果：与对照组相比，重组抗原免疫小鼠获得了38．93％的减虫率。结论：证明重组的日本血吸虫22．6kDa抗原可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力。

日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原编码基因的核酸疫苗研究

为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ 抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性，将ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６基因重组质粒经肌肉注射免疫了一批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠并进行攻击感染试验，结果表明此重组质粒能在小鼠体内持续存在、稳定表达并诱导小鼠产生特异性的抗Ｓｊ２２．６ 抗体。

日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原编码基因在C2C12细胞内的表达

目的为探索日本血吸虫（中国大陆株）22．6kDa抗原（Sj22．6）编码基因用作核酸疫苗的可行性。方法以PCR法对此编码基因改造后将其亚克隆入真核表达载体质粒PCMV－β并转化入大肠杆菌JM109进行大量扩增。将提纯的PCMV／Sj22．6基因重组质粒在体外转化C2C12真核细胞。结果免疫组化试验证明，该重组质粒能够在体外培养的C2C12细胞中表达Sj22.6抗原。结论表明该重组质粒有用作真核疫苗的可能性。

日本血吸虫32kDa重组抗原的进一步研究

用慢性日本血吸虫病病人血清筛选以βgill构建的日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA表达库，获得一阳性克隆Sjgt4，将其插入片段经聚合酶链反应（PCR）法扩增后亚克隆入表达载体pTrcHisB并进行表达，获37kDa融合蛋白，它可溶于8M尿素，并可被日本血吸虫病病人血清中特异抗体所识别。以此37kDa融合蛋白免疫家免所得的抗血清，可特异地识别日本血吸虫成虫抗原的67kDa分子。

日本血吸虫(中国大陆株)22.6 ku抗原编码基因的核酸疫苗pCMV/Sj22.6的构建

目的 探索日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6ku抗原 ( Sj2 2 .6)编码基因用作核酸疫苗的可行性。方法 用新设计的引物以 PCR法对 Sj2 2 .6编码基因进行改造 ,然后亚克隆入真核表达载体 p CMV -β并转化入大肠杆菌 JM 10 9。结果 提取重组质粒经酶切分析 ,筛选出了含有正向插入片段的阳性重组质粒。

我国医学寄生虫学教育应“走土洋结合”之路

文章从我国与发达国家寄生虫感染与医学寄生虫学教育的特点出发,分析了我国医学寄生虫学教育面临的问题,探讨性地提出为了更好地适应我国国情、满足我国新时期培养医学生的需要,进行医学寄生虫学教育改革的几点建议。

日本血吸虫rSj338及膜蛋白rSj22.6抗原表位联合免疫对小鼠的保护性研究

目的 观察日本血吸虫 (中国大陆株 )的线粒体相关蛋白 r Sj338及膜蛋白 r Sj2 2 .6有效抗原表位混合后对小鼠的免疫保护性 ,为将来复合疫苗的研制提供理论依据。方法 分别用特异性抗r Sj338抗体和抗 r Sj2 2 .6的抗体筛选噬菌体随机 12肽库 ,将获得的 r Sj338的有效抗原表位与r Sj2 2 .6有效抗表位混合后免疫 BAL B/ c小鼠 ,并与 r Sj338的有效抗原表位混合免疫组进行比较。结果 r Sj338的 4种表位和 r Sj2 2 .6抗原的 4种表位混合免疫组小鼠获得了 4 5 .4 % (P<0 .0 1)的减虫率及 5 9.1% (P<0 .0 1)肝总减卵率 ,r Sj338的 4种表位混合免疫组小鼠获得了 34.2 % (P<0 .0 1)的减虫率及 4 6 .8% (P<0 .0 1)肝总减卵率 ;r Sj3384种表位和 r Sj2 2 .6的 4种表位混合免疫组获得的减虫率和肝总减卵率均高于 r Sj338的 4种表位混合免疫组 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。

日本血吸虫22.6kDa有效抗原表位对小鼠免疫保护性的研究

目的 研究日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6 k Da有效抗原表位对小鼠的免疫保护性 ,预测其在抗血吸虫感染中的作用。方法 用纯化的抗 Sj2 2 .6 k Da的多克隆抗体 Ig G对噬菌体 12肽库进行 5轮免疫学筛选 ,挑取克隆 ,经 Western- blot免疫识别、动物初筛及序列分析后 ,将获得的阳性克隆免疫 BABL/ c小鼠。结果 共获得 4个有效抗原表位 ,各免疫组和对照组相比 ,4种表位混合免疫组小鼠 ,获得了 39.5 % (P<0 .0 5 )的减虫率及 5 7.1% (P<0 .0 1)肝总减卵率 ;4种表位分别免疫4组小鼠 ,各组分别获得了 2 7.5 % (P<0 .0 5 )、5 .4% (P<0 .0 5 )、2 2 .8% (P<0 .0 5 )、11.6 % (P<0 .0 5 )的减虫率及 41.4% (P<0 .0 1)、2 9.7% (P<0 .0 5 )、32 .2 % (P<0 .0 5 )、30 .9% (P<0 .0 5 )肝总减卵率。结论 所获得 4种有效抗原表位均可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力 。

日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库的免疫筛选及PCR初步鉴定

用成虫抗原免疫免血清筛选构建于表达载体λgt11的日本血吸虫成虫cDNA文库，再以多聚酶链反应（PCR）技术鉴定免疫筛选的阳性克隆。结果，对cDNA表达库中随机选取的约6.2×104个噬菌斑进行了筛选．初筛时共挑出52个可能的阳性斑，经两次复筛后，有25个噬菌仍呈阳性反应；以阳性噬菌斑DNA为模板，经PCR扩增均可获得一定大小的片段，从564bp到1200bp不等。这样能快速大量地筛选cDNA文库，便于高效地获得有价值的重组抗原基因克隆。

人外周血CD4^+ CD25^+调节性T细胞的分离、鉴定和功能特征

目的:分离人外周血CD4+CD25+Treg细胞,并检测其功能。方法:RT-PCR技术检测CD4+CD25+Treg细胞中Foxp3的mRNA表达;与CD8+T细胞和CD4+CD25-T细胞共同培养,或加入外源性IL-2及IL-4,检测其抑制功能;流式细胞术检测IFN-γ、IL-4和IL-10。结果:CD4+CD25+Treg细胞高表达Foxp3,主要分泌IL-10,能够抑制CD8+T细胞和CD4+CD25-T细胞的增殖,高浓度IL-2能够阻断CD4+CD25+Treg细胞的抑制功能。结论:CD4+CD25+Treg细胞是一群具有免疫抑制功能的调节性T细胞,这种抑制作用能够被高浓度IL-2阻断。

2008-2010年南京及周边地区儿童肺炎支原体感染情况分析

目的:分析南京及周边地区儿童肺炎支原体(MP)感染的流行病学特征,为该病的预防和治疗提供帮助。方法:采用血清MP被动凝集法对2008年1月至2010年12月在南京医科大学附属南京儿童医院门诊就诊的急性呼吸道感染患儿进行MP-IgM抗体检测,并结合病例资料进行分析。结果:三年间共检测血清标本31843例,总阳性率为41.35%;2008年阳性率最高,达45.08%;≤1岁、1-3岁、3-5岁、>5岁的患儿MP-IgM抗体阳性率分别为9.90%、32.48%、38.24%、57.57%;男性患儿为36.08%,女性患儿为48.16%;春、夏、秋、冬四季阳性率分别为39.56%、36.51%、42.11%、48.69%。结论:MP可能为南京地区儿童呼吸道感染的重要病原之一。MP感染全年均可发生,尤以冬季感染率为高;婴儿感染率较低,而学龄儿童感染率最高;女性患儿感染率高于男性患儿。本研究的结果初步揭示了南京及周边地区MP感染的流行病学特征,对该地区MP的预防和治疗有一定价值。

用噬菌体随机肽库鉴定日本血吸虫22.6kDa抗原分子的表位

目的 筛选和鉴定日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6kDa抗原 (Sj2 2 .6)的表位。 方法 用纯化的抗Sj2 2 .6的多克隆抗体IgG对噬菌体十二肽库进行 5轮免疫学筛选 ,挑取克隆 ;采用Westernblotting免疫识别 ,将获得的阳性克隆免疫小鼠 ,并采用dot ELISA筛选能刺激小鼠产生较高滴度抗Sj2 2 .6抗体的阳性克隆 ;测定核苷酸序列 ,分析其表位与Sj2 2 .6抗原的同源性。 结果 经 5轮免疫学筛选后挑取的 1 4个克隆 ,用Westernblotting方法均能被抗Sj2 2 .6抗体识别。经动物免疫初步实验筛选 ,共获得 6个免疫原性较强的阳性克隆 ,测序结果获得 4种不同表位 ,其中 1种表位与Sj2 2 .6抗原具有较高的同源性 ,其余 3种表位与其无一级结构的同源性。 结论 获得的 4种日本血吸虫中国大陆株抗原表位 ,1种可能为结构表位 。

日本血吸虫再感染相关基因克隆的筛选与鉴定

目的：获取编码可能指示再感染倾向的日本血吸虫特异免疫分子的ｃＤＮＡ克隆。方法：用日本血吸虫病流行区化疗后再感染人群高特异性ＩｇＧ４水平的混合血清筛选构建于表达载体λｇｔ１１的日本血吸虫成虫ｃＤＮＡ文库，以ＰＣＲ鉴定免疫筛选的阳性ｃＤＮＡ克隆插入片段选择插入片段大的克隆进行序列测定及基因数据库同源性检索。结果与结论：对ｃＤＮＡ文库中约８．６×１０４个噬菌斑进行了筛选，有１１个噬菌斑呈阳性反应，其中有可能编码日本血吸虫的线粒体蛋白的基因克隆及可能与人群日本血吸虫再感染相关的基因克隆等４个日本血吸虫基因克隆。

人群日本血吸虫病再感染与优势抗体应答的研究

目的 :为研究日本血吸虫病流行区人群中特异性抗体水平是否为再感染的危险因素。方法 :选择江西省新建县鄱阳湖一小岛上三个毗邻的自然村作为观察试区 ,调查 196名 ( 3- 2 5岁 )感染者中 ,吡喹酮治疗后粪检阴性的 138人经过一个感染季节后再感染的情况 ,并检测其血清特异性同型限制性抗体水平。同时就人群接触疫水的暴露水平及年龄因素、血样中特异的同型限制性抗体水平诸因素同再感染的关系进行非条件 logistic回归分析。结果 :虫卵可溶性抗原和粗制成虫抗原特异的 Ig G4抗体水平是再感染发生的危险因素 ,危险度分别是 2 .83和 2 .4 0。结论 :本研究结果可能成为构建对再感染易感状态作预测性诊断试验的基础。

日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因克隆及特性鉴定

[目的 ]探索研制血吸虫病疫苗的新路径 ,对日本血吸虫线粒体相关蛋白进行基因克隆及特性鉴定。[方法 ]分析本室筛选日本血吸虫成虫cDNA文库获得的 1个cDNA片段 (Sj338 2 4)的开读框序列 ,在其上下游分别设计引物A和B ,并以该cDNA片段为模板进行PCR扩增后 ,将该片段重组于pGEM T中并进行DNA测序鉴定及检索。再经酶切后将该基因片段亚克隆入表达载体pGEX 6P 1,并进行蛋白表达、纯化及抗原性鉴定。 [结果 ]该目的基因PCR产物全长共 487bp ,其开读框由 45 9bp组成 ,编码 15 3个氨基酸经残基组成的多肽。DNA序列同源性分析发现Sj338克隆基因与人及褐鼠的线粒体外膜蛋白的部分编码基因较高度同源。重组质粒pPEX 6P 1 Sj338能高效融合表达 ,理论蛋白的分子量为 17kDa。SDS PAGE和Westernblotting检测结果表明 ,重组蛋白rSj338具有良好的抗原性。 [结论 ]Sj338可能为日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因 ,重组蛋白有望成为新的疫苗候选分子。

重组质粒pGEX-6P-1/Sj-FABPc的构建及在大肠杆菌中的表达

目的 构建基因工程菌株 ,获得重组蛋白 Sj- FABPc(日本血吸虫脂肪酸结合蛋白 )。方法 用 PCR法从日本血吸虫 c DNA文库中扩增 Sj- FABPc基因片段 ,再将该片段重组于 p GEM- T中并进行 DNA测序鉴定 ,经酶切后将目的片段构建成重组质粒 p GEX- 6 P- 1/ Sj- FABPc,转化于大肠杆菌 BL2 1 ,IPTG诱导表达。用 Glutathione Sepharose TM 4B亲和层析柱对表达产物进行纯化 ,Pre Scission TMProtease酶对融合蛋白进行解离 ,获得纯化的 14k Da Sj- FABPc。SDS- PAGE和 West-ern Blot方法对表达产物进行鉴定。结果 获得 p GEX- 6 P- 1/ Sj- FABPc菌株 ,分离纯化出 14k Da Sj-FABPc,表达量为 10 .5 2 m g/ L。Western Blot显示 ,表达蛋白能被日本血吸虫免疫兔血清识别。结论 重组蛋白 Sj- FABPc可高效表达并有良好的抗原性。

日本血吸虫特异性IgE相关抗原编码基因的克隆和鉴定

目的 从日本血吸虫成虫cDNA文库中筛选并克隆日本血吸虫特异性IgE相关抗原编码基因。 方法 用ABC ELISA法从日本血吸虫病流行区筛选出高水平抗血吸虫成虫抗原IgE抗体的个体 15人 ,采集血清并混合。混合血清经Protein G柱吸收后 ,用于日本血吸虫成虫cDNA文库的免疫学筛选。PCR扩增阳性克隆插入cDNA片段。序列分析后 ,于该序列第一开读框两端设计引物并分别引入EcoRⅠ和NotⅠ位点 ,PCR扩增并纯化目的基因片段后克隆入质粒载体pGME T ,再亚克隆入表达载体pGEX 6p 1。经IPTG诱导表达 ,对表达产物进行SDS PAGE和Westernblotting鉴定。 结果 阳性克隆插入片段约 12 0 0bp ,第一开读框长 5 0 7bp ,编码 16 9个氨基酸 ,理论分子量为 19 3kDa。DNA序列分析显示 ,与已知序列同源性小于 4 0 %。重组质粒pGEX 6p 1/Sj4 3B能高效表达融合蛋白 ,且能被日本血吸虫特异性IgE抗体识别。 结论 成功构建的重组质粒pGEX 6p 1/Sj4 3B ,Sj4