广东鹅源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定、耐药表型和耐药基因的检测及相关性分析

为了解广东地区鹅源多杀性巴氏杆菌(Pm)的流行情况、药物敏感性、耐药基因的携带情况以及耐药表型与耐药基因的相关性,本实验对2019年~2022年从广东地区采集的193份疑似感染Pm病鹅的心脏血液和肝脏组织划线接种于不同的培养基分离细菌,对分离菌纯化后采用PCR扩增分离菌的KMT1基因并测序,采用多重PCR扩增分离菌的5个荚膜基因及8个脂多糖基因,分析分离菌的荚膜分型与脂多糖(LPS)分型。结果显示分离到83株鹅源Pm,其中82株为荚膜A型,1株无法通过荚膜定型;LPS分型为L1型。采用K-B纸片扩散法检测分离菌的药物敏感性;通过PCR检测分离菌7类药物的15种耐药基因,包括β-内酰胺类(bla_(CTX-M)、bla_(TEM)、bla_(OXA))、氨基糖苷类(aadA1、aph(3’)Ila)、喹诺酮类(qnrA、qnrB、qnrS)、酰胺醇类(floR)、四环素类(tetM、tetX)、大环内酯类(ermF、ereD)、磺胺类(sul1、sul3)耐药基因。采用统计学软件SPSS22中的完全随机设计两样本率的卡方检验分析分离菌的耐药表型和相应耐药基因的相关性。药敏试验结果显示,83株鹅源Pm对多种药物敏感性较高,其中对喹诺酮类的环丙沙星和氧氟沙星、氨基糖苷类的丁胺卡那和大观霉素、β-内酰胺类的头孢曲松、磺胺类的复方新诺明、大环内酯类的阿奇霉素敏感的菌株占比均在63%以上;对氨基糖苷类的链霉素和卡那霉素耐药的菌株占比高于50%,对氨基糖苷类的新霉素和四环素类的四环素耐药的菌株分别占49.40%(41/83)和46.99%(39/83)。耐药基因的检测结果显示,分离菌检出耐药基因qnrB、sul3、blaTEM、aadA1、aph(3’)Ila、ereD、ermF、tetM、floR,检出率分别为9.63%(8/94)、27.71%(23/83)、28.92%(24/83)、48.19%(40/83)、14.46%(12/83)、49.40%(41/83)、3.61%(3/83)、1.20%(1/83)、32.53%(27/83),未检出耐药基因qnrA、qnrS、sul1、tetX、bla_(CTX-M)、bla_(OXA)。相关性分析结果显示,aadA1基因与Pm对新霉素、链霉素、卡那霉素、大观霉素的耐药性具有极显著的相关性(P<0.001);bla_(CTX-M)基因、floR基因分别与Pm对头孢拉定、氟苯尼考的耐药性具有显著相关性(P<0.05)。上述结果表明,广东地区鹅源Pm主要为A∶L1基因型,对多种药物敏感,耐药基因携带率不高,部分药物的耐药表型与耐药基因具有相关性。本研究为广东地区鹅源Pm病的监测和防治提供参考依据,为Pm耐药机制的研究奠定基础。

不同禽源副鸡禽杆菌的人工交叉致病试验

为探讨鸡源和鹅源副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)对鸡、鹅的跨禽种感染致病力情况,试验将3株鹅源Apg和4株鸡源Apg培养物经鼻窦腔接种60日龄鸡和鹅,观察接种禽的临床症状并进行表征评分。通过组织病理学检查、细菌分离培养和Apg种特异性PCR鉴定,研究鸡源和鹅源Apg对不同宿主的致病性情况。结果显示:鸡源和鹅源Apg均可导致鸡、鹅出现典型症状与病变,且对原宿主禽种致病性高于非原宿主禽种;发病鸡、鹅的病理变化相似,以面部皮下和鼻窦黏膜水肿、充血出血、纤维素性渗出,鼻甲骨变形为特征;发病鹅和鸡组织病理变化相似,鼻窦黏膜与鼻甲黏膜出现大量炎性细胞浸润,黏膜上皮水肿、坏死、崩解脱落,固有层结构疏松,局部可见纤维结缔组织增生;3株鸡源Apg接种鸡试验组能从鼻窦部、肝脏和脾脏中重新分离到接种菌,而接种鹅试验组仅从鼻窦部分离接种菌,未能从其他组织中分离到。研究表明,鸡源和鹅源Apg均可感染鸡或鹅并引起发病,但在致病程度上以本禽源菌株强于非本禽源菌株。

鹅源副鸡禽杆菌全基因组重测序及比较基因组学分析

为了分析鹅源副鸡禽杆菌(Apg)与鸡源菌株的基因组差异,对3株鹅源Apg和4株鸡源Apg进行全基因重测序及基因组分析。全基因重测序结果显示7株菌株基因组片段大小为2.567 832~2.607 127 Mb, GC含量介于40.80%~40.93%之间。SNPs同源性分析结果显示,3株鹅源菌株和鸡源C-AP3株聚集在p4chr1株的小分支上,另外3株鸡源菌株分布在其它国内菌株分支上。基因同源性分析结果显示鹅源菌株特有基因76个,鸡源菌株特有基因37个。对鹅适应性基因的筛查共聚类出79个基因,其中编码已知蛋白的基因有22个,其余编码假定蛋白;对鸡适应性基因的筛查聚类出39个基因,其中10个编码已知蛋白,29个编码假定基因。通过比较基因组学发现与Apg宿主适应性有关的基因为118个,为进一步阐释Apg跨物种感染的分子生物学机制奠定了基础。

18型鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及致病性研究

为确定广东梅州市某养殖场病死鹅的发病原因及病原特征,本研究采集其肝脏、心脏等组织样品,经TSA血清平板培养后观察菌落形态、生化试验、PCR鉴定、血清型鉴定,确定该分离菌为血清18型鸭疫里默氏杆菌(RA-18);对分离菌进行药敏试验、毒力基因检测及马岗鹅的致病性试验;结果显示,分离菌对阿莫西林、头孢拉定、头孢唑啉、头孢噻呋、头孢曲松、大观霉素、氟苯尼考、多西环素、氧氟沙星敏感;对青霉素、新霉素、丁胺卡那、卡那霉素、庆大霉素、阿奇霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、复方新诺明、多粘菌素B耐药;共检出6种毒力基因(Fur、lux E、tct R、luxr1、cwa H、lipid A);以实际接种量5×10^(5)cfu/m L的分离菌经肌肉注射感染马岗鹅,结果显示未引起马岗鹅的死亡;以实际接种量5×10^(8)cfu/m L的分离菌分别经肌肉、脚蹼注射和滴鼻感染白鸭和白鹅,在感染后7 d的观察期内观察动物的临床症状及剖检,无菌采集各组动物的脑组织、心脏、肝脏、脾脏,经相应处理后涂板,采用平板计数法测定各脏器的载菌量。结果显示,白鹅肌肉、白鹅脚蹼、白鸭肌肉接种感染可导致鹅、鸭的发病及死亡,滴鼻接种未能引起鹅、鸭死亡;对各组白鹅、白鸭的各脏器进行平板计数,结果显示各组的各种动物的心脏、肝脏、脑组织、脾脏均可测得一定的菌量。肌肉注射组动物的组织病理学观察结果显示,分离菌感染白鸭及白鹅的病理变化涉及脑组织、心脏、肝脏、脾脏等。结果表明,本研究首次在国内分离到RA-18菌株,该菌株对白鸭和白鹅具有一定的致病性,对广东地区鹅源鸭疫里默氏杆菌病(RAI)的诊断和防治有一定的参考意义。

持续淹水对北苍术幼苗生理生化及抗氧化酶和活性成分生物合成相关基因表达的影响

为探究北苍术幼苗对持续淹水胁迫的生理生化和分子响应特征,以正常水分管理为对照,采用单因素完全随机试验设计,模拟持续淹水18 d和恢复正常水分管理后10 d处理条件下,北苍术幼苗在生理生化特性、根系活力及解剖结构、抗氧化酶活性及其相对表达和活性成分生物合成关键酶ACC基因的响应情况。结果表明:持续淹水2~18 d,北苍术幼苗水的相对质量分数在淹水第2,4,10,16,18天显著(P<0.05)高于对照。可溶性蛋白质量浓度、脯氨酸质量分数、丙二醛质量摩尔浓度随着淹水时间的增加呈现先升高后下降趋势,与对照呈显著差异;通气组织随着淹水时间的延长而增大;SOD,POD和CAT活性呈现先升高后下降趋势,其基因的相对表达量与对照差异显著,SOD和CAT相对表达量在淹水处理第4天达到最大值,POD相对表达量在淹水第10天达到最大值;活性成分生物合成关键酶基因ACC的相对表达水平与对照差异显著,在淹水第14天时达到最大值。恢复正常水分管理第10天时,生理生化指标、抗氧化酶活性和相关基因相对表达量均有所恢复,可溶性蛋白质量浓度、脯氨酸质量分数、丙二醛质量摩尔浓度仍与对照呈显著差异;通气组织明显缩小。北苍术幼苗通过调节渗透物质、抗氧化酶活性及相关基因表达和根系组织机构改变来适应淹水胁迫。

夏玉米不同部位干物质临界氮浓度稀释曲线的构建及对产量的估计

准确和动态地诊断营养生长阶段植株氮状况,对于评估植物氮需求、预测玉米产量以及优化氮素管理至关重要。基于植物的氮诊断工具可优化夏玉米生产中氮素的管理,本研究旨在开发和验证基于玉米地上部不同部位干物质的临界氮浓度稀释曲线,并建立玉米相对产量(relative yield,RY)与不同生长阶段氮素营养指数(nitrogen nutrition index,NNI)和累积氮素亏缺(accumulated nitrogen deficit,AND)的关系。本文以2个不同氮效率的品种为试验材料进行连续4年的田间定位试验,设置4个氮素水平(0、150、225和300 kg hm^−2),分析不同施氮量对2个玉米品种营养生长阶段干物质的影响,基于叶干物质(leaf dry matter,LDM)、茎干物质(stem dry matter,SDM)和植物干物质(plant dry matter,PDM),构建不同的临界氮浓度稀释曲线。结果表明,基于LDM、SDM和PDM建立的临界氮浓度稀释曲线,均能很好地诊断玉米氮营养状况;3条临界氮浓度稀释曲线对产量进行预测比较发现,RY与NNI和AND在不同生长阶段之间的相关性均达到显著水平,相关系数R2值均大于0.65,其中R2值在V12−VT时期最大,同时回归模型的验证结果表明,在V12−VT时期模型显示出可靠性。R2值大于0.92,RMSE值小于10%,证实了模型在V12和VT两个时期关系的稳定性。总的来说,一定的条件下,基于LDM和SDM建立的临界氮浓度稀释曲线可以对基于PDM建立的临界氮浓度稀释曲线进行代替。在V12−VT阶段,RY与NNI和AND的稳定关系很好地说明了在受氮素限制和非氮素限制下RY的变化,并对夏玉米产量进行准确的估计。本研究为花前玉米的氮肥管理提高粮食产量提供理论依据。

腐植酸水溶肥料对燕麦叶片保护酶活性和渗透物质的影响

采用盆栽试验，研究了重度胁迫、中度胁迫、正常供水条件下喷施腐植酸水溶肥料对燕麦保护酶活性和渗透物质的影响。结果表明，不同干旱胁迫条件下，喷施腐植酸水溶肥料均能有效地改善燕麦抗氧化系统和渗透调节物质。与CK相比，SOD活性增加13．41％～26．53％，CAT活性增加13．90％～41．18％，可溶性蛋白增加11．43％～16．58％，游离脯氨酸增加4．19％～39．41％。燕麦产量提高3．79％～6．23％，增产幅度表现为：重度胁迫〉中度胁迫〉正常供水。3种干旱胁迫下，重度胁迫下喷施腐植酸水溶肥料后，燕麦产量增幅最大。

不同基质含水量对白头翁幼苗生长的影响

为确定白头翁幼苗生长的最适基质含水量,本研究以白头翁种子为供试材料,采用秧盘育苗法,进行不同基质含水量对白头翁幼苗生长的影响试验。结果表明,含水量为60%时,根长、根直径、叶面积、地上部鲜重和地下部鲜重最大,根长最大达10.52 cm,是最小处理组的2.32倍;根直径最大达0.20 cm,是最小处理组的2.50倍;叶面积最大达32.34 cm^(2),是最小处理组的2.63倍;地上部生物量和地下部生物量最大分别达1.60 g和0.18 g,分别是最小处理组的4.71倍和2.25倍。含水量为70%处理时株高最高,但与含水量为50%和60%差异不显著。综上所述,基质含水量为50%~60%时,白头翁幼苗生长最好。

燕山地区白头翁生境土壤化学成分研究

本研究对燕山地区白头翁生境土壤进行调查与分析,揭示白头翁生境土壤化学性质,为燕山地区白头翁种质资源保护和可持续开发利用提供科学依据。结果表明,燕山地区白头翁生境土壤pH范围较宽,有机质、全氮、全磷、全钾、碱解氮、有效磷、速效钾含量的变化幅度较大,白头翁生境土壤的多样性引发生境伴生植物的多样性,也预示着燕山地区白头翁种质资源生态适应多样性的特点,有利于其引种栽培。

密度对不同株型夏玉米光合特性与群体冠层结构的影响

为探明高产夏玉米群体光合生理基础及群体光合效率,选用紧凑型品种‘郑单958’与半紧凑型品种‘强盛101’,设置6.75×104 hm^(-2)(D1)、8.25×104 hm^(-2)(D2)、9.75×104 hm^(-2)(D3)3个种植密度,研究密度对不同株型玉米光合特性、群体冠层特征与产量的影响。结果表明,夏玉米叶面积指数(LAI)与产量(Y)均随密度的增加而升高,透光率(LT)、净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、PSⅡ最大光化学效率(F_v/F_m)和PSⅡ实际量子产量(YE)随密度的增加而降低,其中‘强盛101’的F_v/F_m和YE小于‘郑单958’,其他各项指标均大于‘郑单958’,在生育后期能够保持较大绿叶面积,利于有机物的积累。2个株型品种同一密度下的产量并无显著差异,同一品种不同密度下均是D1的产量显著低于D2和D3。

鹅源鼠伤寒沙门菌crp、hfq基因缺失株的构建及生物学特性分析

为构建鹅鼠伤寒沙门菌单基因缺失株并鉴定其生物学特性,本研究以广东地区鹅源鼠伤寒沙门菌流行株A29为研究对象,采用λ-Red同源重组技术,分别构建crp、hfq基因缺失株(A29Δcrp和A29Δhfq)及相应基因回补株,并分别采用相应引物经PCR鉴定。通过细菌培养,对各菌株生物学特性进行比较;通过PCR鉴定各菌株的遗传稳定性;采用K-B纸片扩散法检测各菌株的药物敏感性;将各菌株纯培养物经腹腔注射4周龄小鼠,测定各菌株对小鼠的毒力,并观察感染后小鼠的临床症状及各组织剖检病变与组织病理变化。PCR和测序结果表明,正确构建各基因缺失株和相应回补株。生物学特性试验结果显示,与亲本株相比,A29Δcrp菌落直径极显著变小(P<0.001),不产酸、不产生H_(2)S,菌体极显著变短(P<0.001);A29Δhfq菌落边缘不整齐,不产生H_(2)S,菌体极显著变长(P<0.001),表明crp、hfq基因影响细菌的菌落形态、生化特性和形态特征。菌株遗传稳定试验结果显示,菌株传至60代时,基因缺失株仍能够稳定缺失。药敏试验结果显示,与亲本株比较,A29Δcrp对氨基糖苷类、碳青霉烯类、环丙沙星、甲氧苄啶、阿奇霉素等药物的敏感性降低,对四环素类药物的敏感性增强,A29Δhfq对除青霉素类、头孢唑啉以外的12种药物的敏感性增强。小鼠毒力试验结果显示,与亲本株的LD_(50)(2.479×10^(4)cfu)相比,A29Δcrp的LD_(50)(5.379×10^(5) cfu)和A29Δhfq的LD_(50)(5.012×106 cfu)均明显上升。各菌株感染小鼠后的临床症状及各组织剖检病变基本一致;组织病理变化观察显示,与亲本株相比,A29Δcrp组小鼠肝组织可见多量大小不一的坏死灶,脾组织红髓面积增大、白髓面积减小,A29Δhfq对小鼠脾脏、肝脏及脑组织损伤均较小。本研究为探究鼠伤寒沙门菌crp和hfq基因功能奠定了基础,同时也为进一步研发鹅沙门菌病疫苗提供了参考依据。

药剂处理对北苍术的抑花效果及对根茎干物质质量和苍术素质量分数的影响

为了确定药剂处理对北苍术抑花效果、根茎干物质质量和苍术素质量分数的影响,选用抑芽丹、乙烯利、桔梗奇肥、萘乙酸、石硫合剂、抑花一号等6种药剂喷施处理4年生北苍术植株,并以喷施清水为对照(CK)。结果表明:(1)现蕾期喷施:76.92 mL/L的石硫合剂灰色关联度综合评价值最高,为1.1089,其单株抑花率达70.41%,根茎干物质质量极显著高于CK,为72.01 g/株,苍术素质量分数为0.36%,高于《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)标准。(2)现蕾期+初花期喷施:24.39 mL/L的石硫合剂综合评价值最高,为1.265,其群体抑花率为74.60%,根茎干物质质量达到97.50 g/株,极显著高于其他处理,苍术素质量分数为0.36%,高于《中国药典》标准。(3)初花期喷施:400乙烯利处理综合评价值最高,为1.0604,其单株抑花率最高达92.03%,根茎干物质质量为92.77 g/株,苍术素质量分数为0.31%,高于《中国药典》标准。综合分析表明,喷施药剂处理后抑花效果显著,现蕾期+初花期喷施24.39 mL/L的石硫合剂抑花效果最好,根茎干物质质量最高,是CK的1.8倍;其次是喷施76.92 mL/L的石硫合剂,苍术素质量分数为0.55%,极显著高于其他处理。

播期和种源对冀东地区丹参种苗质量、药材产量和品质的影响

为确定播期和种源对冀东地区丹参种苗、药材产量和品质的影响,选择甘肃、山东、河南、陕西、河北等5个种源地的丹参,设置2019年7月28日、8月5日、8月15日、8月25日等4个播期,采用二因素随机区组试验设计,在冀东地区进行引种试验。结果表明:河南种源播期7月28日种苗根鲜质量和干物质质量最大,分别为9.75,1.90 g/株。河南种源播期7月28日的丹参药材鲜质量和干物质质量最大,分别为316.79,91.84 g/株。河南种源播期8月15日的丹参药材中丹参酮类质量分数、丹酚酸B质量分数均达到最大,分别为0.74%,5.03%。山东种源,播期7月28日的丹参药材水溶性浸出物质量分数最高,为69.98%;其次是河南种源,播期8月15日的,为62.27%;醇溶性浸出物成分符合《中华人民共和国药典》标准。播期和种源对丹参种苗质量、药材鲜质量和品质性状影响较大,冀东地区引种栽培建议选择河南种源,播期为7月下旬至8月中旬。

腐植酸水溶肥料对燕麦生长和产量的影响

为明确腐植酸水溶肥料对燕麦生长及产量的影响,研究了燕麦拔节期、抽穗期和灌浆期喷施相同量不同腐植酸水溶肥料后燕麦株高、干物质积累量、产量及产量构成因素的变化。结果表明,不同腐植酸水溶肥料均可以缩短燕麦生育期,其中含腐植酸≥50g/L水溶肥料与对照相比可提前6d成熟;各腐植酸水溶肥料处理的燕麦株高和干物质积累量在孕穗期、抽穗期和灌浆期均高于对照,各指标均随着腐植酸含量的增加先升高后降低;喷施腐植酸水溶肥料后燕麦穗数、穗粒数、千粒重和产量均增加,喷施含腐植酸≥50g/L的水溶肥料后,燕麦穗数、生物学产量和子粒产量与其他处理间差异均达显著水平,子粒增产达15.7%。

燕山地区白头翁生境伴生植物资源调查与分析

调查与白头翁共存的伴生植物种类、相似性、生活型、分布区类型等,探讨其生态适应性和地理分布规律,针对性地提出白头翁资源保护利用建议,以期为燕山地区白头翁种质资源的保护和利用提供参考。采用访问调查、路线调查和典型样地调查法,对燕山地区白头翁生境伴生植物进行调查与分析。燕山地区从冀东的秦皇岛地区到冀北的承德地区都有白头翁的分布,多生于向阳的山地草坡上,喜光、耐旱、适于阳生性环境。白头翁生境伴生植物共56科128属164种,主要优势科为菊科(Compositae)、豆科(Leguminosae)、禾本科(Gramineae)、蔷薇科(Rosaceae)、唇形科(Labiatae)、百合科(Liliaceae)、毛茛科(Ranunculaceae)、萝藦科(Asclepiadaceae)等,其中乔木共5科5属7种,灌木共22科38属46种,草本植物共35科85属111种。调查的各样地间相似系数普遍较低,说明燕山地区不同地区白头翁生境差别较大,其伴生植物具有多样性的特点。伴生植物属的分布区类型可分为14个,群落具有明显温带性质。燕山地区白头翁生境多样性及伴生植物的多样性,反映出燕山地区白头翁生态适应多样性特点,有利于其引种栽培。

鹅源产气荚膜梭菌的分离鉴定与药物敏感性试验

对2020年7月至2021年6月临床症状与病理剖检初步诊断为鹅坏死性肠炎疑似病例肠道内容物和肝脏进行细菌分离并纯化,获得52株菌。分离菌株经培养特性、生化试验、种特异性PCR鉴定,确定52株菌均为产气荚膜梭菌;采用PCR对分离株毒素基因鉴定,结果显示分离株均为毒素型A型,其中cpβ_(2)基因的检出率为61.5%,未检测到肠毒素cpe基因和netB毒素基因。药敏试验结果显示,分离株对头孢噻肟(100%)、头孢噻呋(100%)、氟苯尼考(100%)和多西环素(94%)表现为高度敏感,其次为恩诺沙星(88%)和氧氟沙星(88%);而耐药率最高的药物为磺胺类药物,其中磺胺甲恶唑耐药率为100%,其次是林可胺类药物,林可霉素与克林霉素耐药率分别为58%和46%;中药体外抑菌试验结果显示,单味中药黄连、黄柏、黄芩和复方中药乌梅散、白头翁汤、郁金散对产气荚膜梭菌均有一定的抑菌作用,其中黄连的MIC值为1.57 g/L,远低于其他试验中药的MIC值,具有较强的抑菌作用。本试验为广东省主要鹅养殖区域鹅产气荚膜梭菌病的有效防治提供了参考依据。

如何提高电力架空线路的防污能力

城市化进程不断加快背景下,环境污染问题也是愈发严峻,其中电力架空线路因分布较广泛且长时间处于露天状态下,经常容易受到一些外界因素影响破坏,进而出现污闪等安全事故,对电力行业健康发展非常不利。本文主要对电力架空线路运行存在问题及防污能力提高措施应用进行针对性分析探讨。

无人机在电力架空线路巡视中的应用

架空线路作为我国电力传输常见的线路类型之一,在实际运行过程中,会受到多种因素的影响,如天气因素、人为因素等,出现不同程度的隐患问题。由于架空线路运行规模过大,实际管理难度颇高。稍有不慎,就很容易引发严重的故障问题。为进一步确保架空线路得以安全运行,电力行业选择利用无人机巡线技术,以加强对架空线路运行的管理力度。针对于此,文章主要对无人机在电力架空线路巡视中的具体应用进行分析,以供参考。

腐植酸水溶肥料对燕麦叶片保护酶活性和渗透物质的影响

该研究采用盆栽试验,以燕麦为试验材料,研究了在重度胁迫、中度胁迫、正常供水条件下喷施腐植酸水溶肥料对燕麦保护酶活性和渗透物质的影响。试验结果表明,不同干旱胁迫条件下,喷施腐植酸水溶肥料均能有效地改善燕麦抗氧化系统和渗透调节物质。与CK相比,超氧化物歧化酶(SOD)活性增加13.41%~26.53%。

电力架空线路防雷的措施

我国电力发展逐渐兴起,为人们日常生产和生活的推进提供了大大的方便,使得其线路的覆盖面积被逐渐加大。在这样的发展背景下,其线路遭受雷击的概率就被加大,如果针对此问题,对其进行有效的解决,促进电力架空线路的防雷效果,保证人们的用电安全,就变得至关重要。本文以此为主要内容,通过对雷击架空电力线路的危害形式进行阐述,对其行业发展中常见的防雷形式进行分析,给出相关的线路接地设计方法,以供参考。