FMDV VP1基因与HSP70基因在毕赤酵母中的融合表达及免疫特性

利用毕赤酵母系统对O型口蹄疫病毒VP1基因与结核杆菌HSP70基因进行融合表达,并检测此融合蛋白对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响。将人工合成的O型口蹄疫病毒VP1基因与结核杆菌HSP70基因克隆入酵母表达载体pPICZαA中,以电穿孔法转化酵母菌X-33,用Zeocin+YPDS平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物。以皮下接种的方式给小鼠进行3次免疫,同时设两组对照,分别免疫PBS和常规灭活疫苗,然后通过MTT法和ELISA分别检测淋巴细胞的增殖情况和抗体水平。结果表明融合蛋白既能诱导细胞免疫应答又能诱导体液免疫应答,其诱导产生的抗体水平略低于常规灭活疫苗,而细胞免疫水平则高于后者。

重组猪IL-2对口蹄疫重组腺病毒免疫增强效果的研究

目的构建表达猪白细胞介素-2(poIL-2)的重组腺病毒,研究其作为佐剂对口蹄疫重组腺病毒免疫效果的影响。方法将poIL-2基因克隆到腺病毒的穿梭载体中,与腺病毒骨架载体共转化BJ5183感受态细胞,获得的重组病毒质粒通过脂质体转染HEK-293A细胞,获得表达poIL-2的重组腺病毒(rAd5poIL-2)。以rAd5poIL-2作为佐剂与表达PMDV VP基因的重组腺病毒(rAd5VP1)联合免疫小鼠,以单独免疫rAd5VP1的小鼠作为对照。通过测定淋巴细胞增殖指数、特异性抗体、IL-4和IFN-γ的水平来衡量rAd5poIL-2对rAd5VP1的免疫增强效果。结果经PCR鉴定,成功构建了rAd5poIL-2。MTT与抗体检测结果显示,rAd5poIL-2既能增强rAd5VP1诱导小鼠淋巴细胞增殖,又能促进rAd5VP1诱导小鼠特异性抗体的产生,细胞因子检测结果显示,rAd5poIL-2能促进rAd5VP1诱导Th1和Th2的分化。结论 rAd5poIL-2可望成为口蹄疫疫苗的候选佐剂。

晚期非小细胞肺癌免疫治疗现状及未来方向

肺癌仍然是中国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占80%以上。以靶向程序性死亡[蛋白]-1(programmed death protein-1,PD-1)或程序性死亡[蛋白]配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)的免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor,ICI)为基础的治疗已成为了晚期肺癌的标准治疗手段之一。本综述将对晚期NSCLC免疫治疗的现状予以梳理,探讨现阶段面临的问题与挑战,并思考与展望未来发展方向。

不育男性精液白细胞增高对精子质量影响临床研究

精液是由5%的精子和95%精浆构成的复合液,主要为睾丸、附睾、精囊、前列腺、尿道球腺分泌的液体。精子由睾丸产生,是生殖细胞经一系列有丝分裂形成的,在附睾中未成熟的精子最终形成有动力的精子,整个过程需要70天。精浆的化学成分十分复杂,包含各种蛋白、酶类、激素、微量金属元素等,是运送精子的载体,并为精子提供存活所需的能量和营养物质[1,2]。精液中有形成分除精子外,

共表达口蹄疫病毒VP1-2A基因与猪IL-2重组腺病毒的构建及其免疫效果研究

构建共表达口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因和猪白细胞介素2(IL-2)基因的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。将FMDV VP1-2A基因和猪IL-2基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中,在受体菌中与腺病毒骨架载体pAdenoVatorΔE1/E3同源重组。重组腺病毒质粒转染HEK-293A细胞,得到重组腺病毒rAd5VP1-2A-Po IL-2。MTT法检测重组IL-2的生物活性。用rAd5VP1-2A-poIL-2免疫接种小鼠,同时设免疫单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1和空腺病毒的对照组。通过检测淋巴细胞增殖功能,特异性抗体分泌,IL-4和IFN-γ的表达水平衡量rAd5VP1-2A-poIL-2对小鼠特异性免疫应答的影响。结果显示,成功获得了rAd5VP1-2A-poIL-2,MTT法检测重组IL-2具有生物学活性。小鼠免疫试验结果显示,与rAd5VP1免疫组相比,rAd5VP1-2ApoIL-2免疫既能增强重组病毒诱导小鼠淋巴细胞增殖的能力,又能提高重组病毒诱导小鼠特异性抗体的水平。细胞因子检测结果显示,串联IL-2能促进重组病毒诱导Th1和Th2的分化。研究结果说明,rAd5VP1-2A-poIL-2可望成为口蹄疫的候选疫苗。

25SiMn2钢部分170mm连铸板坯吊运断裂原因分析和改进措施

分析了在吊运过程部分25SiMn2钢重22t170mm×1650mm×10000mm连铸板坯断裂的原因。结果表明，浇铸时中间包钢水过热度高（30—36℃），引起铸坯厚度1／4位置柱状晶发达，钢液凝固时流动性不好，补缩不足，出现大量显微缩孔，并在反复吊运后在自身重力作用下，显微缩孔处应力集中开裂而造成铸坯断裂。通过降低中间包钢水过热度（10—30℃）、减少吊运次数可有效避免铸坯断裂。

轧制-直接淬火参数对Ti-B微合金化低碳Si-Mn钢组织和性能的影响

用0.06%(Ti+B)微合金化(%)0.17C-0.92Si-1.63Mn钢135mm连铸坯在实验室φ500mm中厚板轧机轧成24 mm板材,试验了终轧、开始和终止水冷温度对实验钢组织和力学性能的影响。结果表明,终轧920℃开冷900℃终冷180℃,冷却速度30℃/s和终轧880℃,开冷860℃终冷280℃,冷却速度22℃/s,钢的组织和性能与传统的880℃1h淬火+220℃6h回火的组织和性能相当。

表达NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的构建

将新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因1700bp克隆到真核表达载体pIRES中,构建成表达F基因的载体pIRESF,然后将包含F基因及其上游的内含子和下游的polyA的2900bpDNA片段再克隆入包含gB启动子的SK载体中,并使其克隆到gB启动子600bp的下游,最后将包含gB启动子和F基因表达盒3500bp克隆到包含MDVCVI988非必须片段US10的载体SK中。该研究为进一步在细胞中转染并获得表达F基因的MDVCVI988重组病毒奠定了基础。

缺血修饰白蛋白对高脂血症合并冠心病早期诊断的临床研究

高血脂症是引起冠心病（Coronary Heart dis-ease，CHD）、心肌梗死（Myocardial infarction，MI）、急性冠状动脉综合征（Acute Coronary Syndrome， ACS）等心脑血管疾病的主要原因［1，2］，同时也有研究表明糖尿病合并高血脂症患者，患冠心病的几率较大，并且较危险［3，4］。

定点旋转手法治疗颈型颈椎病的护理

颈椎病男性多于女性,发病率约在3.8%～17.6%之间,且有上升趋势,常于中年后发病[1]。根据患者表现的症状,以颈部症状为主的颈椎病列为颈型颈椎病[2]。笔者2009年3月-2010年11月对156例采用定点旋转复位手法治疗的颈型颈椎病患者进行系统护理,取得满意疗效。现报告如下。

2022年度肺癌领域重要临床研究进展

肺癌仍然是中国发病率和死亡人数最高的恶性肿瘤,其中,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占80%以上。围手术期NSCLC辅助免疫治疗和新辅助免疫治疗相关临床研究推陈出新。靶向治疗方面,罕见及难治性肺癌靶点探索和药物研发持续推进,抗体药物偶联物的研发方兴未艾,有望开辟肺癌诊疗新途径。NSCLC诊疗逐渐步入精准化、规范化时代。在晚期NSCLC患者免疫治疗方面,免疫联合新方案有望进一步提高疗效。本文回顾2022年度NSCLC治疗领域的临床进展,阐述现阶段面临的问题和挑战,并探讨未来发展方向。

FMDV抗原表位与hsp_(70)的融合表达及表达产物对小鼠的免疫应答

将人工合成的O型口蹄疫病毒主要表位基因与结核杆菌热休克蛋白70(HSP70)基因克隆入酵母表达载体pPICZαA中,以电穿孔法转化酵母菌X-33,用Zeocin平板筛选重组子,PCR鉴定后甲醇诱导表达。SDS-PAGE显示,其相对分子质量为89 000,表达量约为190 mg.L-1;免疫印迹分析证实表达产物具有免疫反应性。融合蛋白以皮下接种的方式对8只小鼠进行3次免疫,然后通过ELISA和MTT分别检测抗体水平和淋巴细胞增殖反应。结果表明,融合蛋白既能诱导细胞免疫应答,又能诱导体液免疫应答,其产生的抗体水平接近于常规灭活疫苗。MTT试验结果显示,融合蛋白的A570为0.381±0.072,灭活疫苗的A570为0.340±0.050,表明融合蛋白的细胞免疫应答水平高于后者。提示,hsp70作为分子佐剂在口蹄疫基因工程疫苗研究中具有很好的应用前景。

口蹄疫病毒VP1基因重组腺病毒的构建与鉴定

目的构建表达O型口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth disease Virus,FMDV)VP1基因的重组腺病毒并对其进行鉴定。方法将FMDV VP1基因克隆到腺病毒的穿梭载体pAdeno Vator-CMV5-IRES-GFP中。得到的阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后,利用电转化技术将线性化的阳性质粒与腺病毒骨架载体pAdenoVatorΔE1/E3共转化大肠杆菌BJ5183感受态细胞,使其在大肠杆菌中进行同源重组。将筛选到的重组病毒质粒经PacⅠ酶线性化后暴露出包装信号,通过脂质体LipofectamineTM2000转染HEK-293A细胞后得到重组病毒。利用报告基因GFP和细胞病变检测重组病毒滴度和感染效率,通过PCR和western-blot检测FMDV VP1基因在重组腺病毒中的表达。结果成功构建了表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5-VP1,其滴度为1011.87个TCID50/mL。western-blot检测重组腺病毒rAd5-VP1能与FMDV阳性血清发生反应。结论重组腺病毒rAd5-VP1能与FMDV阳性血清发生反应,PCR和western-blot检测FMDV VP1基因在重组腺病毒中稳定表达。

Ⅳ型胶原对耐顺铂人肺腺癌细胞化疗诱导凋亡的影响

目的:探讨细胞外基质(extracelluarmatrix,ECM)成分中Ⅳ型胶原对耐药NSCLC细胞的药物敏感性和凋亡的影响,及磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3′kinase,PI3K)在其信号转导通路中的作用。方法:体外培养顺铂耐药人肺腺癌细胞株A549(A549/DDP),应用MTT比色法测定细胞增殖抑制率;通过细胞粘附实验观察细胞粘附状况;流式细胞仪检测DDP作用前后Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ,CⅣ)及PI3K抑制剂LY294002对细胞凋亡的影响。结果:CⅣ组及多聚赖氨酸(polylysine,PLL)组与不包被组相比,细胞粘附明显增加(P<0.001);而纤连蛋白(fibronectin,FN)的粘附与不包被组相比无明显差异(P>0.05)。CⅣ包被后DDP对A549/DDP的IC50由169.9μmol/L升高至258.3μmol/L,再联合LY294002则DDP对A549/DDP的IC50降至87.1μmol/L;CⅣ明显降低DDP引起的A549/DDP细胞凋亡,LY294002则可阻断CⅣ的这种保护作用(均为P<0.05)。结论:Ⅳ型胶原可能参与NSCLC耐药形成,PI3K可能是其信号转导通路之一。

厚规格低碳低合金钢探伤缺陷原因分析

采用低倍、金相、显微硬度等检验手段,对厚规格低碳低合金钢板探伤缺陷进行了分析,确定造成探伤缺陷的原因是钢中存在严重的组织偏析,引起组织应力,与冷却时产生的热应力综合作用,使钢中塑性较差的区域出现裂纹。同时采取了轧后堆垛缓冷的控制措施,避免了钢中显微裂纹的出现。

非手术治疗儿童寰枢关节半脱位的护理

儿童寰枢关节半脱位多是由于外力损伤、感染、姿势不良等原因使寰枢关节的解剖关系异常,从而刺激局部的血管、肌肉,产生颈部倾斜、僵硬等一系列临床表现。由于患儿年龄小,耐受能力差,容易出现恐惧情绪,给治疗和护理工作带来一定困难。2009年7月至2010年12月,笔者配合颈椎牵引、手法复位、药物治疗等非手术治疗方法对12例寰枢关节半脱位患儿采取有效的护理措施,取得了良好的效果,现报道如下。

共表达口蹄疫病毒VP1-2A与猪IFN-α的重组腺病毒增强小鼠免疫功能

目的构建串联表达口蹄疫病毒VP1-2A和猪干扰素-α的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法将FMDV VP1-2A基因和α干扰素基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体中,得到的阳性穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组。重组腺病毒质粒感染HEK293A细胞,获得重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。用rAd5VP1-2ApoIFN-α免疫BALB/c小鼠,同时设注射单独表达FMDV VP1的重组腺病毒(rAd5VP1)和空腺病毒的对照组。通过ELISA检测血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a及细胞因子IL-4、IFN-γ的表达水平;MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果成功构建了共表达FMDV VP-2A和IFN-α的重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。小鼠免疫实验结果显示,与单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1相比,重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能增强特异性IgG、IgG1和IgG2a的分泌,促进IL-4和IFN-γ的分泌,并能增强小鼠淋巴细胞增殖功能。结论重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能明显增强小鼠特异性免疫应答。

人类软骨糖蛋白-39在非小细胞肺癌患者血清中的含量与临床意义研究

目的检测人类软骨糖蛋白-39(YKL-40)在非小细胞肺癌患者血清中的含量,并探讨其在肺癌临床诊断中的意义。方法采集我院收治的非小细胞肺癌患者(40例)和正常人(40例)血液,所有患者均经过痰脱落细胞检测,支气管检查等最终获得病理学证据,确诊为非小细胞肺癌。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测收集样本中YKL-40的浓度,并分析实验结果。结果非小细胞癌患者血液中YKL-40含量比正常人高,差异具有显著性P<0.01.M1期患者组血清YKL-40含量明显高于M0期患者组,差异具有显著性,P<0.01。结论 YKL-40与非小细胞肺癌有密切关系,它可能成为肺癌诊断的指标。

细胞外基质在非小细胞肺癌中的表达及与新辅助化疗的关系

目的:探讨细胞外基质在非小细胞肺癌中的表达及与新辅助化疗的关系和临床意义。方法:免疫组化Envision法检测73例非小细胞肺癌(分新辅助化疗组与对照组)细胞外基质的表达,并结合临床和病理资料进行相关统计分析。结果:单因素分析发现,2组纤连蛋白阴性表达的患者中位生存期为67个月,而纤连蛋白阳性表达者为38个月,两者之间有统计学差异(P=0.048)。新辅助化疗组中层连蛋白阴性表达与临床缓解率高有关(P=0.022)。Cox比例风险模型对新辅助化疗组的多因素分析发现,病期是影响预后的指标(P=0.003),纤连蛋白和层连蛋白的阴性表达有可能影响患者的预后,但差异未达到统计学意义。结论:某些细胞外基质的高表达可能导致临床缓解率降低,纤连蛋白表达阴性者生存期可能较阳性表达者长。

重组干扰素-α增强口蹄疫重组疫苗诱导滤泡辅助性T细胞的研究

目的通过观察重组干扰素-α(IFN-α)佐剂在口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)重组疫苗免疫应答中对滤泡辅助性T细胞(follicular T helper cells,Tfh细胞)的免疫调节作用,为IFN-α佐剂免疫调节的新机制提供实验依据。方法 6周龄雌性Balb/c小鼠分为3组,实验组联合免疫表达猪IFN-α的重组腺病毒(r Ad5po IFN-α)和表达FMDV VP1的重组腺病毒(r Ad5VP1),另设2对照组,分别注射r Ad5VP1和空载体腺病毒(Advirus)。免疫后7 d,应用流式细胞术检测脾脏淋巴细胞中Tfh细胞(CD4+CXCR5+PD-1+)和生发中心(germinal center,GC)B细胞(B220+GL-7+)的增殖分化;real-time PCR技术检测Tfh细胞转录因子Bcl-6m RNA的表达水平;ELISA方法检测血清中细胞因子IL-21蛋白的表达水平。结果与单独免疫r Ad5VP1组相比,联合免疫r Ad5po IFN-α和r Ad5VP1能明显促进FMD重组腺病毒疫苗诱导小鼠Tfh细胞和GC B细胞的增殖分化;重组IFN-α能明显促进FMD重组腺病毒疫苗诱导小鼠Bcl-6 m RNA的表达,提高小鼠血清中IL-21蛋白的分泌水平。结论重组IFN-α能有效增强FMD疫苗诱导小鼠Tfh细胞免疫,为IFN-α佐剂免疫调节作用的新机制提供了理论依据。