携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌的多重耐药特征和体外致病性研究

【目的】探究携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌的分子流行特点。【方法】检测76株携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌的多重耐药谱、系统进化分群及毒力基因,并分析毒力基因与耐药特点、系统进化分群之间的关联性。【结果】药敏结果显示,携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌对氟苯尼考的耐药率最高,达85.53%(65/76);其次是恩诺沙星,为48.68%(37/76);最常见的多重耐药谱为氟苯尼考+恩诺沙星+乙酰甲喹,达10.53%(8/76)。系统进化分群结果显示,主要的亚群为C群和B1群;其中,C群检出率最高,达53.95%(41/76);其次是B1群,为30.26%(23/76);E群、A群、D群和F群的检出率分别为9.21%(7/76)、2.63%(2/76)、2.63%(2/76)和1.32%(1/76);未检测出B2群和分支I群。毒力基因检测结果显示,76株携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌均检出了至少4种毒力因子,且有11株菌同时携带至少11种毒力基因;其中,有13株菌同时检出禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的5个标志性毒力基因(iroN、iutA、hly、OmpT和iss),检出率为17.11%;有11株菌检出ColV质粒的标志基因(cva/cvi、iroN、iucD/iutA、etsAC、OmpT/hlyF和sitA),检出率为14.47%;有28株菌检出耶尔森菌强毒力岛(high pathogenitility island,HPI)的标志基因irp-2和fyuA,检出率为36.82%。【结论】携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌多为多重耐药菌,且多重耐药菌株携带ColV毒力质粒可能性更高;携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌的多重耐药与致病性有关联,即携带bla_(CTX-M)禽大肠杆菌具有多重耐药的同时,具有致病的可能性更高。

bla_(CMY-2)阳性禽源奇异变形杆菌的多重耐药特征

【目的】研究bla_(CMY-2)阳性禽源奇异变形杆菌的多重耐药特征,并分析菌株CY32全基因组序列结构。【方法】对5株bla_(CMY-2)阳性禽源奇异变形杆菌进行氟苯尼考和质粒介导氟喹诺酮类耐药基因检测、接合试验和bla_(CMY-2)基因的Southern杂交定位,对其中一株菌CY32进行全基因测序和生物信息学分析。【结果】5株奇异变形杆菌携带的bla_(CMY-2)位于染色体,其中,菌株CY12、CY32、S31和S52携带floR,菌株CY12和CY32携带qnrD。CY32的染色体同时含有SXT/R391型整合性接合元件(integrative and conjugative elements,ICEs)(ICEPmiJpn1)和PmGRI1共2种耐药基因岛。ICEs的可变区包含2个串联的复合型转座子(IS10构成),其中一个复合型转座子携带bla_(CMY-2);CY32的PmGRI1耐药岛含有12个耐药基因。与其他奇异变形杆菌携带的PmGRI1相比,多重耐药区差异最大的区域位于Tn21转座子。此外,CY32包含2个质粒,包括携带floR的IncQ质粒和携带qnrD的非接合质粒。奇异变形杆菌CY32携带15个耐药基因,呈现多重耐药的特性。【结论】奇异变形杆菌经基因岛和质粒获得多重耐药,使治疗奇异变形杆菌感染变得更加困难,应加强对动物源奇异变形杆菌耐药性监测。

猪场环境源大肠杆菌的耐药性调查及携带mcr-1和tet(X4)菌株的传播特征

养殖场中抗菌药的长期使用促使耐药菌株快速出现和传播,并可以通过粪肥和污水向环境排放,给公共卫生带来巨大威胁。为了调查猪场环境源大肠杆菌的耐药情况,评估耐药基因的传播风险,本试验采集163份猪场粪便、污水和土壤样本,通过平板划线分离培养法分离大肠杆菌,通过药敏试验检测分离菌株对14种抗菌药物的耐药情况,聚合酶链式反应(PCR)检测临床重要耐药基因,脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测菌株间的亲缘关系,接合试验和质粒复制子分型检测接合子的质粒类型。结果显示,共分离获得150株大肠杆菌,其中粪便源大肠杆菌耐药情况最严重,污水源大肠杆菌次之,土壤源大肠杆菌最低;污水源大肠杆菌耐药基因检出种类最多,粪便源大肠杆菌次之,土壤源大肠杆菌最少。10株携带黏菌素耐药基因mcr-1大肠杆菌和18株携带替加环素耐药基因tet(X4)大肠杆菌分离自粪便和污水样本,且多重耐药情况较为严重。10株携带mcr-1大肠杆菌经PFGE分为9种脉冲场图谱,其中9株与大肠杆菌C600接合成功,接合子中有IncFIA、IncW、IncFIB、IncI2和IncP五种质粒类型;18株携带tet(X4)大肠杆菌经PFGE分为15种脉冲场图谱,其中16株与大肠杆菌C600接合成功,接合子中有IncFIB、IncFrepB和IncHI1三种质粒类型。结果表明,必需持续监测猪场环境中的临床重要耐药基因,特别需要关注mcr-1和tet(X4)基因的流行情况,并且在养殖中合理使用黏菌素和四环素类抗生素。

氟苯尼考与多西环素联合对鸡大肠杆菌病的治疗效果

研究了氟苯尼考单药及与多西环素联合对鸡大肠杆菌的抗菌活性、抗菌后效应(PAE)及对试验性鸡大肠杆菌病的治疗效果.结果表明:氟苯尼考对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)为1 6mg·L-1,与氯霉素相同,是甲砜霉素的2 5%;氟苯尼考对鸡大肠杆菌的PAE(1 45～2 07h)显著长于甲砜霉素(P<0 05),呈浓度依赖性.棋盘法测得氟苯尼考与多西环素联合对鸡大肠杆菌呈无关作用,部分抑菌浓度(FIC)指数值为1 5,联合时的氟苯尼考MIC值是其单独时50%.氟苯尼考以1∶2(质量比)与多西环素联合时,对鸡大肠杆菌的PAE与单药PAE的较大值相近,与相应浓度的单药相比均表现为无相关作用.氟苯尼考3种剂量(10mg·kg-1和20mg·kg-1(肌注)、30mg·kg-1(口服))、或联合用药(氟苯尼考10mg·kg-1+多西环素20mg·kg-1、氟苯尼考20mg·kg-1+多西环素40mg·kg-1(口服))5种治疗方案,对鸡大肠杆菌病的治愈率分别为73 3%,76 7%,73 3%,76 7%,80 0%,感染对照组的死亡率为80 0%.

30株鸡大肠杆菌ESBLs基因型检测及耐药性分析

采用2倍稀释法检测30株鸡大肠杆菌对常见药物耐药性,用表型筛选和确证试验检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况,并分别用TEM、SHV和CTX-M等3种通用引物进行PCR扩增以确定其基因型。结果显示23株大肠杆菌为产ESBLs株,占76.7%。PCR扩增表明TEM、CTX-M、SHV阳性率分别为73.9%、43.5%和0%,有7株同时检测出TEM和CTX-M基因(占30.4%),3株未检测出TEM、CTX-M和SHV 3种基因(占13.0%)。药敏试验结果显示产ESBLs大肠杆菌对药物的多重耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重,产酶菌对氨苄西林和头孢噻呋的耐药率最高,为95.7%,对氨基糖苷类、恩诺沙星和复方新诺明的耐药率均高于78%,氨苄西林和三代头孢与酶抑制剂联用或2种不同种类的药物联用均能明显增强抗菌活性。以上结果表明河南省76.7%的临床分离鸡大肠杆菌为产ESBLs株,其基因型主要是TEM和CTX-M,尚无SHV型,β-内酰胺类与酶抑制剂联用或不同种类药物联用是防治鸡产酶大肠杆菌感染的有效措施之一。

鸡大肠杆菌TEM和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因分型研究

【目的】检测鸡大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型和基因亚型,了解河南省产酶鸡大肠杆菌ESBLs基因型分布。【方法】对河南省7个地区不同鸡场临床分离28株产ESBLs鸡大肠杆菌分别用TEM、SHV和CTX-M等3种通用引物进行PCR扩增及测序分析,确定其基因型和基因亚型。【结果】21株鸡大肠杆菌检出TEM型基因,2株检出CTX-M型基因,5株检出TEM型和CTX-M型两种基因,未检出SHV型。TEM基因亚型以TEM-1变异型为主,与AY293072(TEM-1)相比同源性为98%—99%,核苷酸序列除发生18T→C沉默突变外,尚有3株分别有另一处碱基发生变化:783G→A(C3菌,序列号为FJ405207)、21T→A(X2菌,序列号为FJ405208)和269G→A(F4菌,序列号为FJ405211),其中前两处为沉默突变,F4菌的碱基突变引起92甘氨酸变为天冬氨酸,为TEM-57型。CTX-M基因亚型包括两种:CTX-M-65亚型4株(C2、C3、C4和K1,序列号分别为FJ405191,FJ405192,FJ405212和FJ405214)和CTX-M-14亚型3株(F2、X3和B5,其中F2菌的相关序列已上传至GenBank,获序列号为FJ405213)。【结论】目前河南省产ESBL鸡大肠杆菌基因亚型以TEM-1变异型为主,CTX-M-65和CTX-M-14型次之。

固体酸催化大豆油与乙醇酯交换制备生物柴油

利用淀粉和对甲基苯磺酸合成了新型碳基固体酸催化剂,并将它应用于大豆油与乙醇的酯交换反应制备生物柴油。考察了反应时间、反应温度、醇油摩尔比、催化剂用量及使用次数等因素对生物柴油收率的影响。结果表明,新型碳基固体酸催化剂对大豆油与乙醇酯交换反应有很高的催化活性,易于分离,具有良好的稳定性。最佳反应条件为:醇油摩尔比为8∶1,催化剂质量分数为7.0%,反应时间8 h,反应温度为80℃,该条件下生物柴油的质量收率可达67.4%。

河南省鸡源大肠杆菌耐药性检测

用微量肉汤稀释法检测51株河南省鸡源大肠杆菌对B-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类、氟喹诺酮类和磺胺等6类共14个药物的耐药性.结果表明细菌的多重耐药现象已十分严重,四耐及以上的菌株占总受试菌的96%,76.5%菌株耐6～10种药物,河南省养鸡场最常见的耐药谱为氨苄西林+头孢噻呋+庆大霉素+磺胺甲噁唑/甲氧苄啶+恩诺沙星.

反相高效液相色谱测定动物源食品中大观霉素残留

目的建立反相高效液相色谱法配合电化学检测器测定动物源食品中大观霉素残留。方法用三氯乙酸匀浆抽提以脱去试样中的蛋白，然后用二氯甲烷去除试样中的脂溶性物质，再经LC-SCX阳离子固相萃取小柱净化处理，产物进行检测。流动相为离子对缓冲体系（0.02mol／L柠檬酸：0．004mol／L庚烷磺酸钠，50％NaOH调pH至6．10）：乙腈（体积比为92．5：7．5），流速0.6ml／min，工作电极电压1．0V，柱温35℃，检测波长254nm。结果大观霉素在0．01-10．0μg／ml范围内线性关系良好，相关系数尺=0．99998。结论该法简便、直接、准确。

固体酸催化酯交换制备生物柴油的研究进展

制备生物柴油最常用的方法是植物油和动物脂肪的均相碱或酸催化酯交换。与石油基柴油相比,从植物油和动物脂肪生产生物柴油的主要瓶颈是生产价格,特别是原料价格。为降低生物柴油成本,应利用廉价原料(如废油脂)、采用连续酯交换工艺并从生物柴油副产品(甘油)中回收高纯度甘油。均相酸催化剂虽反应产率高,但废催化剂会带来环境问题,故固体酸催化剂已成为目前研究热点。简述了固体酸催化酯交换制备生物柴油的研究进展和发展趋势,最后提出了一些建议。

1株鹑鸡肠球菌产ESBLs和AmpC酶的基因型鉴定

为检测1株临床分离的七彩鸟鹑鸡肠球菌的ESBLs和AmpC酶的基因型,探讨其耐药基因的进化机制;采用两倍稀释法测定此菌株对18种常用药物的敏感性,并用9对特异性引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鹑鸡肠球菌ESBLs和AmpC酶的基因型及基因亚型。结果表明,鹑鸡肠球菌为产ESBLs和AmpC酶菌,除对3代、4代头孢,碳青霉烯类和磷霉素体外敏感外,对其他常用药物均呈现耐药,具有多重耐药特性;该菌所产ES-BLs的TEM序列与AJ847364(TEM-116)序列相比发生了2处碱基突变,即512T→A和695A→C,引起了相应氨基酸的突变171Ile→Lys、232Lys→Thr,是一种新的TEM亚型,GenBank注册号DQ849329;AmpC酶与序列EF078894(ACT-like型)有97%的同源性,GenBank登录号是DQ849330。这表明该株鹑鸡肠球菌ESBLs为一种新TEM亚型,来源于同时分离的鹑鸡克雷伯菌TEM型的ESBLs;ACT型AmpC酶的存在可能与七彩鸟鹑鸡接触过β-内酰胺类药物有关。

49株鸡大肠杆菌OXA型β-内酰胺酶的检测

为了解河南省部分地区临床分离鸡大肠杆菌中OXA型β-内酰胺酶的分布情况,用OXA-1、OXA-2、OXA-1 0等3对特异性引物对临床分离的4 9株鸡大肠杆菌进行PCR检测。结果显示4 9株中共2 1株检出OXA基因,检出率为42.86%,其中5株产OXA-1,9株产OXA-10,5株同时产OXA-1和OXA-10,1株同时产OXA-2和OXA-10,1株同时产OXA-1、OXA-2和OXA-10。

鸡白痢沙门氏菌超广谱β-内酰胺酶基因亚型分析

为研究鸡白痢沙门氏菌的耐药表型及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因亚型,分别采用微量稀释法及PCR扩增、测序比对法对8株分离自河南的鸡白痢沙门氏菌进行耐药表型检测及ESBLs基因亚型分析。结果显示,8株鸡白痢沙门氏菌对氨苄西林、三代头孢、氟苯尼考、恩诺沙星等耐药较为严重,仅对头孢噻呋/舒巴坦(2∶1)、头孢哌酮/他唑巴坦(4∶1)和头孢吡肟高度敏感。PCR检测表明8株受试菌共检出TEM-1(6株)、CTX-M-65(3株)、CTX-M-90(1株)、OXA-1(2株)和OXA-10(1株)5种基因亚型,其中CTX-M-90为国内外首次检出并命名。CTX-M-90的氨基酸序列与CTX-M-14和CTX-M-65相比均仅发生了1处氨基酸变异(80Ala→Val或275Arg→Ser),故CTX-M-90亚型属于CTX-M-9亚群。结果提示8株鸡白痢沙门氏菌不仅多重耐药严重,而且携带的ESBL基因型复杂。

祛痰药药效学实验方法研究

采用紫外分光光度法和目视比色法进行氯化铵药效学试验,比较两种方法作为祛痰药药效学试验方法的可行性。结果表明两种试验方法之间无显著性差异,但紫外分光光度法具有精确性高和简便快速等特点。

十一种中草药对常见病原菌的体外抑菌试验

用试管两倍稀释法对4种畜禽常见病原菌测定了黄芩、大黄、蒲公英、连翘等11种中草药的体外抑菌试验，结果表明，上述11种药物对禽大肠杆菌O、金黄色葡萄球菌、猪大肠杆菌O、猪链球菌均具有一定的抗菌作用，其中黄芩、大黄、蒲公英抗菌活性较强，干蟾抗菌活性较弱。

冷家油田储采比与递减率关系及合理性研究

开发实践一致认为,储采比与递减率紧密相关。为了研究二者的相关程度,从储采比和递减率定义入手,详细研究并推导了具有代表性的6种产量变化规律储采比与递减率的理论关系式及确定合理储采比界限方法,并尝试性地应用于冷家油田不同油品油藏中,效果较好。储采比是影响递减率的一项重要指标,该油田递减率随储采比的降低而不断增大,且围绕理论曲线上下波动,对其他油田研究储采比与递减率关系有一定借鉴价值,并将合理储采比计算值与其实际相结合,参考有关文献,给出了该油田不同油品油藏合理储采比下限值,最后对其稳产趋势进行分析,为油田稳产形势的评价及规划提供了可靠的理论基础。

头孢噻呋与恩诺沙星联用体外抗菌活性研究

采用两倍稀释法、棋盘法测定头孢噻呋、恩诺沙星以及两者联用对鸡大肠杆菌标准株、临床分离株和鸡链球菌标准株、临床分离株的最小抑菌浓度(MIC)值。结果显示:单方头孢噻呋对五菌株的MIC值介于1～32μg/ml之间,恩诺沙星的MIC值介于0.5～64μg/ml之间,且两药对临床分离株的抗菌活性均明显较标准株低。两药联用对鸡大肠杆菌标准株和临床分离不产酶株、鸡链球菌标准株的部分抑菌浓度(FIC)指数均为0.75,呈现相加作用;对鸡大肠杆菌临床分离产酶株和鸡链球菌临床分离株的FIC指数为1.5,呈现无关作用,但头孢噻呋联用MIC值仅为单方的1/2。