枳葛口服液通过Syk/Ras/ERK信号通路防治酒精性肝损伤机制研究

目的:基于Syk/Ras/ERK信号通路观察枳葛口服液含药血清对酒精性肝损伤大鼠BRL3A肝细胞炎症反应的影响,探讨枳葛口服液防治酒精性肝损伤的相关机制。方法:将正常大鼠BRL3A肝细胞接种于6孔板,贴壁后分为正常对照组、模型组(2.5%乙醇处理)、阳性对照组(美他多辛含药血清加2.5%乙醇)和不同浓度枳葛口服液含药血清(2.5%、5%、10%枳葛口服液含药血清加2.5%乙醇)干预组,24h后酶标法检测各组细胞上清液中GGT(γ-谷氨酰转肽酶)、LDH(乳酸脱氢酶)含量;RT-PCR法测定各组细胞内Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA表达情况。结果:与正常对照组比较,模型组细胞上清液中GGT、LDH含量显著升高(P<0.01);Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各干预组以上指标均呈现不同程度的好转,其中10%枳葛口服液含药血清及阳性对照组作用最显著(P<0.01),二者之间未见明显差异(P>0.05)。结论:一定浓度的枳葛口服液含药血清对大鼠肝细胞酒精性肝损伤具有防治作用,其机制可能与抑制Syk/Ras/ERK信号通路活化,从而减轻肝脏炎症相关。

基于内质网应激PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路探讨枳葛口服液含药血清对乙醇诱导BRL-3A损伤的保护作用及机制研究

目的基于内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)信号通路PERK/eIF2α/ATF4/CHOP探讨枳葛口服液含药血清对BRL-3A大鼠肝细胞损伤的保护作用及机制。方法(1)制备含药血清:SD雄性大鼠随机分为3组:枳葛口服液组、美他多辛组、正常组,分别予以枳葛口服液、美他多辛及生理盐水灌胃,连续干预5天,腹主动脉取血制备含药血清。(2)培养正常BRL-3A大鼠肝细胞,用不同浓度乙醇(1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、5.0%、7.0%、10.0%)干预细胞24 h后用CCK-8法测定各组细胞存活率。(3)BRL-3A大鼠肝细胞分为正常组,模型组,美他多辛组,枳葛口服液低、中、高剂量组(后简称为低剂量组、中剂量组、高剂量组)。24 h后测定各组细胞上清液中γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,CCK-8检测BRL-3A细胞存活率,Real-time PCR及Western blot检测各组细胞内PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路相关mRNA及蛋白表达水平。结果(1)不同浓度乙醇(1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、5.0%、7.0%、10.0%)干预细胞24 h后,细胞存活率随着乙醇浓度的升高呈逐渐下降趋势,当乙醇浓度为5%时,细胞存活率明显下降(P<0.05),故选择乙醇浓度为1.0%、1.5%、2.0%、2.5.0%、3.0%、5.0%进行后续实验。(2)与正常组相比,模型组上清液中GGT、LDH含量显著升高(P<0.05),PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路相关因子mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.05),呈现明显肝损伤状态。(3)与模型组相比,枳葛口服液组及美他多辛组以上指标均呈现不同程度的降低,其中枳葛口服高剂量组效果最显著(P<0.05)。结论枳葛口服液含药血清能够改善乙醇诱导的BRL-3A大鼠肝细胞损伤,其机制可能与抑制内质网应激PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路有关。