冷冻切片流程的操作安全探讨

术中冷冻切片制片质量是快速病理诊断的基础。但是,冷冻切片制片的过程中安全隐患较易发生。其中生物安全的防护不充分、职业暴露后的处理不及时等属于院感防护方面的操作安全。术中冷冻切片病理诊断与常规石蜡切片病理诊断的不相符、肿瘤组织较小时(甲状腺微小癌、肺组织的原位腺癌及微小腺癌)、冷冻组织经过组织脱水后的肿瘤体积减小等对病理诊断造成影响是属于病理技术方面的安全问题。

组织固定对下游基因和蛋白分子检测的影响

甲醛固定石蜡包埋(formalin fixed and paraffin embedded,FFPE)组织是检测特异性生物标志物的主要标本来源之一。若未进行标准化的固定,用甲醛固定的组织作为下游检测的标本出现的问题较多,如会发生DNA碱基与附近组蛋白的交联、会引起组织中的DNA片段化等等。为全面了解FFPE标本对下游检测的影响,该文从其对蛋白质、DNA、RNA和miRNA等检测的影响作一综述,使病理工作者在今后的工作中,做好FFPE标本的固定处理,为下游的检测打好基础,让整个固定过程更加标准化,实现病理组织标本的精准固定。

T-bet在肺结核组织淋巴细胞中的表达特征及其临床意义

目的探讨肺结核组织中T-bet的表达与机体免疫和病理发展变化的关系。方法采用免疫组织化学双染法检测8例肺结核组织中T-bet和CD4+、CD20+的表达情况。结果在肺结核结节中,CD4+T细胞T-bet阳性率为70.1%,CD20+B细胞T-bet阳性率为18.2%。结论 T-bet在肺结核组织中高表达,T-bet在肺结核的机体免疫中可能发挥着重要的作用。

慢性乙型肝炎肝组织中T-bet的表达及临床病理意义

目的探讨慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者肝组织中T-bet的表达,并分析其与机体免疫和病理发展变化的关系。方法采用免疫组化法检测62例CHB组织中T-bet、CD4的表达,并分析两者表达的相关性。结果在CHB组织中,T-bet蛋白主要在汇管区内表达。肝汇管区T-bet表达与CHB炎症活动度呈正相关(r=0.869,P<0.01),与CHB纤维化程度呈正相关(r=0.423,P<0.01),与CD4细胞数呈正相关(r=0.938,P<0.01)。结论T-bet表达与CHB的发生、发展关系密切,可能在CHB机体免疫应答中发挥着重要作用。

Oct-2、Bob.1在肺结核组织B细胞中的表达及其意义

目的探讨肺结核组织B细胞中Oct-2、Bob.1的表达与机体免疫的关系。方法采用免疫组织化学检测20例肺结核组织B细胞中Oct-2、Bob.1的表达情况。结果 (1)在肺结核组织生发中心的B细胞中Oct-2和Bob.1主要表达在细胞核;在无形成生发中心聚集的B细胞中,细胞核和细胞浆均呈阳性;(2)肺结核组织B细胞中Oct-2阳性的细胞数明显少于Bob.1阳性的细胞数,Oct-2和Bob.1阳性率分别为:10.8%、65.6%;(3)形成生发中心的肺结核组织B细胞中Oct-2和Bob.1阳性的细胞数明显高于无生发中心形成的肺结核组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺结核组织B细胞Oct-2表达低下和/或Oct-2、Bob.1表达不一致可能导致B细胞在发育过程中未能形成生发中心。

乙型肝炎病毒对肝内TGF-β_1/Smads信号通路的作用

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)对肝内TGF-β1蛋白表达及Smads信号通路的作用,为制定慢性乙肝肝纤维化临床治疗策略提供理论依据。方法:(1)运用免疫组化PV-6000法检测对照组和慢性乙肝组肝组织中TGF-β1、HBsAg和HBcAg的表达,并采用荧光定量PCR法测定慢性乙肝患者血清HBV DNA含量。(2)应用体外细胞培养技术培养HBV刺激的人肝星状细胞系LX-2细胞,Western blotting方法测定其细胞内TGF-β1、Smad3和Smad7的蛋白表达。结果:(1)慢性乙肝组肝组织内TGF-β1的表达高于对照组(P<0.01);肝内TGF-β1表达水平与血清HBV DNA含量呈正相关(P<0.01),且HBcAg阳性肝组织水平较高(P<0.01)。(2)体外细胞学实验中,HBV刺激组LX-2细胞内TGF-β1和Smad3蛋白含量高于对照组和HBV+抗-TGF-β1组(P<0.01);Smad7蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)TGF-β1在慢性乙肝患者肝组织中的表达与血清HBV DNA含量及肝内HBcAg的表达有关。(2)在TGF-β1/Smads信号通路中,HBV致纤维化作用机制以Smad3的正性调控为主,Smad7的作用不明显。

乙型肝炎肝细胞内HBcAg表达模式与肝组织炎症及血清学指标的关系

目的探讨乙型肝炎患者肝细胞内乙型肝炎核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)表达模式与肝组织炎症分级、血清乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA含量以及ALT、AST酶活性的关系。方法收集乙型肝炎肝穿刺石蜡包埋组织标本89例,切片后分别行HE染色及免疫组化PV 6000法染色,并在光镜下观察、判定肝组织炎症分级和肝细胞内HBcAg的表达模式,同期应用荧光定量PCR法和速率法测定各患者的血清HBV DNA含量和ALT、AST酶活性。结果 (1)HBcAg浆型及浆型优势表达组的肝组织炎症程度高于核型及核型优势表达组(H=19.884,P=0.0002);(2)89例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量平均值依次为:肝细胞内HBcAg核型表达组为(16.63±3.39)IU/ml、核型优势表达组为(14.92±3.85)IU/ml、浆型优势表达组为(12.14±3.20)IU/ml和浆型组为(10.91±3.64)IU/ml,其中浆型、浆型优势表达组分别与核型、核型优势表达组相比,差异有统计学意义(F=12.66,P=0.000 1);(3)肝细胞内HBcAg浆型或浆型优势表达组的血清ALT、AST酶活性高于核型或核型优势表达组(ALT:F=8.73,P=0.000 1;AST:F=4.26,P=0.007 4)。结论肝细胞内HBcAg呈浆型或浆型优势表达的乙型肝炎患者,其肝组织炎症分级和血清ALT、AST酶活性均较高,但血清HBV DNA含量较低。

肝细胞癌合并乙型肝炎肝硬化患者癌组织中长链非编码RNA表达谱分析

目的:观察长链非编码RNA(LncRNA)在肝细胞癌及癌旁肝硬化组织中表达谱的差异。方法:运用LncRNA表达谱芯片检测3例肝细胞癌组织及配对癌旁肝硬化组织中的LncRNA,对芯片检测的原始数据进行均一化处理和统计分析,采用分层聚类分析将2组间差异表达的LncRNA进行分类。从差异表达的LncRNA中选取4个LncRNA在10例中进行q PCR验证,以判断芯片检测结果的可靠性。结果:肝细胞癌组与癌旁肝硬化组2倍以上差异表达的LncRNA共2 225条,其中表达上调的747条(33.6%),表达下调的1 478条(66.4%),5倍以上表达上调的123条,5倍以上表达下调的353条。q PCR检测结果与芯片检测结果一致。结论:与癌旁肝硬化组织比较,肝细胞癌组织中LncRNA的表达谱具有显著变化。

放射免疫法血清学指标对慢性乙肝患者肝纤维化诊断的评价

目的评价放射免疫法(RIA)检测血清层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)的诊断价值,为临床选择灵敏、特异的肝纤维化检测方法提供理论依据。方法应用放射免疫法检测119例慢性乙型肝炎患者血清中层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)的血清学含量;对肝穿刺活检标本进行病理组织学检查,包括HE染色、网状纤维染色及肝纤维化病理分期等;采用Spearman等级相关分析比较各血清指标检测结果与其相对应乙肝患者肝纤维化病理分期的关系。结果 LN、HA、PCⅢ、Ⅳ-C与肝组织纤维化病理分期的等级相关系数分别为0.073(P=0.390)、0.260(P=0.002)、0.138(P=0.104)、0.120(P=0.156)。结论血清肝纤维化放射免疫法的检测结果除HA外,LN、PCⅢ、Ⅳ-C的血清学水平与慢性乙肝患者肝纤维化的病理分期无相关性。

获得性免疫缺陷综合征合并慢性扁桃体炎患者Th1及Treg应答水平及意义

目的探讨获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodef iciency syndrome,AIDS)合并慢性扁桃体炎患者外周血和扁桃体组织中Th1/Treg应答情况。方法采用RT-PCR检测了外周血和扁桃体T-bet/Foxp3的表达;同时采用免疫组织化学法检测T-bet/Foxp3以及CD4/C D 8细胞的数量;采用全血胞内细胞因子染色方法,分析CD4+IFN-γ+T/CD4+CD25+Foxp3+细胞表达水平。结果FACS检测A IDS伴慢性扁桃体炎患者CD4+IF N-γ+T细胞表达(20.65±7.14)%显著低于健康对照(39.13±13.30)%和慢性扁桃体炎患者(36.89±10.05)%;CD4+CD25+Fo x p 3+细胞表达(7.38±2.6 3)%则明显高于健康对照(4.31±2.14)%和慢性扁桃体炎患者(4.79±2.23)%;CD4细胞计数(104.5±60.96)显著低于健康对照(663.9±170.3)和慢性扁桃体炎患者(546.4±151.9);CD8细胞计数(580.5±130.7)显著高于健康对照(364.7±69.85)和慢性扁桃体炎患者(443.0±150.5);RT-PCR检测AIDS伴慢性扁桃体炎患者T-bet表达(4.831±2.61)显著低于健康对照(20.12±11.31)和慢性扁桃体炎患者(9.83±3.54);Foxp3表达(102.5±47.42)显著高于健康对照(57.28±25.19);免疫组化检测AIDS伴慢性扁桃体炎患者扁桃体组织中T-bet表达(80.20±2.20)显著高于慢性扁桃体炎患者(31.9±2.82);Foxp3表达和慢性扁桃体炎患者差异无统计学意义;CD4细胞(42.09±4.09)显著低于慢性扁桃体炎患者(80.93±3.42);CD8细胞(80.45±2.81)显著高于慢性扁桃体炎患者(37.57±3.11)。结论患者外周血和扁桃体组织中存在明显不同的Th1/Treg免疫反应,Th1/Treg失衡在AIDS伴慢性扁桃体炎患者致病机制中起着重要作用。

多组织蜡块在常规HE染色中的质控作用

HE染色是病理组织染色的基础,覆盖了大部分的常规病理技术工作,病理医师可进行免疫组化、特殊染色、原位杂交等检查。HE染色切片质量直接影响病理医师的判断,因此技术人员常在HE染色前进行预染色保障质量。许多医院病理科会使用预留的组织白片或者每天切片时先切一些组织片用来预染色,较为消耗人力、浪费载玻片及染色液等资源;同时由于切片中的组织种类少,而不能全面反应染色情况。本科室为提高染色效率和质量,使用多组织蜡块的切片染色,观察其在HE染色中的质量控制作用。

Dubin-Johnson综合征2例报道并文献复习

Dubin-Johnson综合征（DJS）是肝细胞分泌入胆汁的双亲阴离子轭合物遗传缺陷的一种常染色体隐性遗传性疾病。DJS在1954年由Dubin和Johnson等先后报道,因临床较少见,且易与病毒性肝炎相混淆而被长期误诊。现将我院诊断的2例报告如下：

Gomori网染套染天狼猩红染色在肝活检中的应用

在肝活检中,需要应用大量的特殊染色来辅助诊断,如天狼猩红染色、Masson三色染色、网状纤维Gomori法染色(简称Gomori网染)、普鲁士蓝铁染色、胆色素染色、Schmorl脂褐素染色、红氨酸铜染色等;其中Gomori网染、Masson三色染色和天狼猩红染色是常用的纤维染色方法,且较难被免疫组化等新技术替代。肝纤维化是肝损伤因子如病毒、酒精、药物等致肝损伤的修复性反应,是慢性肝损伤发展为肝硬化等终末期肝病的共同途径。

44例甲胎蛋白低水平升高的慢性乙型肝炎患者肝组织病理特点

目的:探讨甲胎蛋白(AFP)低水平升高的慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织病理特点,为防治肝癌提供理论依据。方法:2018年11月至2019年12月深圳市第三人民医院肝病科收治CHB住院患者44例。44例患者血清AFP均大于正常值上限小于10倍正常上限(8.78~87.8 ng/ml),其中肝功能正常15例,轻度CHB 19例,中度CHB 5例,重度CHB 5例。彩超提示12例患者弥漫性肝损害,脾大;32例患者肝实质回声增粗或稍增粗,脾不大。所有患者均检测肝功能、HBV DNA定量、乙型肝炎标志物、AFP(化学发光法),行肝胆脾彩超。常规行肝穿刺,取肝组织行免疫组化、特殊染色、病理检查,观察肝组织炎症活动(G)分级和肝纤维化(S)分期情况。分析AFP水平与肝组织炎症活动、纤维化程度及HBV的关系。结果:44例患者肝组织均有不同程度炎症活动。肝组织炎症活动程度在G_(2)~G_(4)占70.4%,提示这类人群均有较明显的肝脏炎症损伤。肝组织炎症分级G_(2)~G_(4)组患者AFP值显著高于G 1组(P<0.05),AFP水平与肝组织炎症分级成正比。44例患者肝组织均有不同程度纤维化。肝组织纤维化程度S_(2)~S_(4)占84.1%,其中S_(4)(肝硬化)占38.6%,提示这类人群有较严重的肝纤维化。AFP水平与肝组织纤维化分期成正比,肝组织纤维化分期S_(2)~S_(4)组AFP值显著高于S 1组AFP值(P<0.05)。44例患者中乙型肝炎五项结果呈小三阳患者21例(47.7%),大三阳患者23例(52.3%),两组患者AFP值比较无显著差异。44例患者中HBV DNA<100 IU/ml有8例(18.2%),HBV DNA 100~2000 IU/ml有9例(20.4%),HBV DNA>2000 IU/ml有27例(61.4%),三组患者AFP值比较无显著差异。结论:AFP低水平升高CHB患者的肝组织均有显著的炎症和纤维化,AFP值与肝组织炎症分级和纤维化分期成正相关。AFP低水平升高慢性乙型肝炎患者的治疗,在积极抗病毒治疗的基础上,既要重视抗肝脏炎症,又要重视抗肝纤维化。

PASM-Masson套染在肾穿刺活检中的应用

肾穿刺活检组织病理诊断是肾脏疾病诊断以及鉴别的重要方法,包括常规HE染色、特殊染色、免疫荧光染色及电镜检查等。其中,特殊染色是肾穿刺活检组织的重要辅助检查方法,主要包括PAS染色、PASM染色、Masson染色以及刚果红染色等。在日常工作中,如果对穿刺肾组织分别进行染色,所需时间长,工作量大,不利于病理医师镜下观察免疫复合物沉积及其位置[1]。

慢性乙型肝炎患者肝组织病理阅片结果主观差异研究

目的通过分析不同阅片者对同一慢性乙型肝炎（CHB）患者肝组织病理切片结果诊断的主观性误差对比以了解肝组织病理这一金标准的可信程度。方法收集125例CHB患者肝组织活检术后病理切片（嗜银染色、HE染色、免疫组化）及病理学资料（炎症分级G、纤维化分期S、免疫组化HBcAg分布）。将病理切片交由另一位资深肝脏病理学家进行再次单盲阅片，统计阅片结果并与本院病理资料进行对比。结果收集两次阅片G分级123例，G0～4分级一致率分别为G016.67%、G125.8%、G221.05%、G353.85%、G425%，S分期125例，S0～4分期一致率分别为S072.7%、S117.4%、S265.5%、S354.84%、S445.16%，HBcAg不同分布117例，HBcAg分布呈阴性、浆型、核型、混合型的前后阅片一致率分别为77.42%、42.1%、75%、6.78%；对两次阅片G分期、S分期、HBcAg分布结果进行统计学分析，χ2=58.352、15.451、68.238；P=0.000、0.004、0.000。结论不同病理专家对相同的CHB患者肝组织病理切片的阅片结果存在较明显主观差异，尤其在判定G2/G3、S1/S2中。故临床应用肝脏病理结果这一“金标准”时仍需结合其他资料进行综合判断。

何首乌致药物性肝损伤的病理学特点

目的了解何首乌致药物性肝损伤(Polygonum multiflorum-associated drug induce liver injury,PM-DILI)的临床病理学特点。方法收集2019年3月1日至2021年3月1日深圳市第三人民医院收治的8例PM-DILI患者临床资料。肝穿组织进行苏木素-伊红染色、网状纤维染色、Masson三色染色、铁、铜特殊染色和免疫组织化学染色,显微镜下观察分析。结果8例PM-DILI患者男女比为1∶1,平均年龄43岁,其中6例为急性PM-DILI,2例慢性为PM-DILI。入院血清学检查异常主要包括转氨酶升高和淤胆均为7例。主要组织病理学改变为点灶状坏死8例、界面炎5例、融合坏死4例,融合坏死以肝腺泡3带为主,不伴或伴少数炎细胞浸润;胆汁淤积5例,为肝腺泡3带的肝细胞、毛细胆管内淤胆,不伴或伴少数炎细胞浸润;中央静脉炎3例;病程长者可发生肝纤维化,甚至肝硬化2例。结论肝腺泡3带为主的急性淤胆和肝细胞坏死是PM-DILI主要组织学表现,严重者可发生静脉炎等血管损伤。

艾滋病相关淋巴结病中浆细胞的变化与分析

目的探讨艾滋病相关淋巴结病中浆细胞的变化与艾滋病患者机体免疫和病理发展变化的关系。方法采用免疫组织化学法检测10例艾滋病相关淋巴结病患者淋巴结组织中CD138、CD21、Ki-67的表达情况。结果 (1)艾滋病相关淋巴结病中,CD138+浆细胞在淋巴结各区域广泛表达,HIV+组高于HIV-组(P<0.05)。(2)CD138+浆细胞在艾滋病相关淋巴结病各个时期呈倒"V"字形发展变化过程。(3)艾滋病相关淋巴结病中CD138+浆细胞数与CD4数呈显著负相关(r=-0.77,P=0.009)。(4)在艾滋病相关淋巴结病中有5%的CD138+浆细胞表达Ki-67。结论浆细胞与艾滋病相关淋巴结病的发生发展密切相关。

广东和云南部分地区艾滋病患者中隐孢子虫感染的调查分析

目的了解艾滋病患者中隐孢子虫的感染状况。方法收集广东和云南省部分地区艾滋病患者的粪便，采用改良的抗酸染色法和免疫荧光染色法检测隐孢子虫卵囊；并同时检测患者的CD4细胞计数。结果212例艾滋病患者粪便标本中9例标本为阳性，感染率为4．25％。广东和云南的艾滋病患者隐孢子虫感染率分别为4．00％（5／126）和4．65％（4／86），两地之间差异无统计学意义（P〉0．05）；稀便与软便中的隐孢子虫卵囊检出率分别为12．00％（3／25）和3．21％（6／187），其差异无统计学意义（校正Х^2=2．31，P〉0．05）；男性与女性艾滋病患者隐孢子虫感染率分别为5．07％（7／138）和2．70％（2／74），其差异无统计学意义（校正Х^2=0．21，P〉0．05）；50～59岁组隐孢子虫感染率高于30～39岁组的感染率（校正Х^2=7．15，P〈0．01）；接受抗病毒治疗组与未接受治疗组艾滋病患者隐孢子虫感染率分别为1．12％（2／179）和21．21％（7／33），两者差异有统计学意义（校正Х^2=18．54，P=0．0000）；艾滋病晚期，尤其是CD4细胞计数少于100个／μl的患者其发病率明显提高。结论我国南方艾滋病患者中存在着隐孢子虫感染，但发病率明显低于国外报道；艾滋病患者的便形、性别及所处地区不能预示隐孢子虫感染率；抗病毒治疗能降低隐孢子虫病感染率，艾滋病患者的隐孢子虫感染多发生在疾病的终末期。

CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞在小鼠肺结核发生中的作用

目的研究CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞（Treg）在小鼠肺结核发生中的作用。方法PC61处理组小鼠腹腔注射抗-CD25（PC61），50μg／只，消除体内的Treg，IgG对照组注射相同剂量的IgG同型对照抗体。3d后静脉注射H37Rv0．1mL（含1×10^6CFU活菌），攻击小鼠。流式细胞技术分析PC61对小鼠体内不同组织中Treg的消除效果，体外分析Treg消除对特异性细胞免疫、肺组织病理学和肺组织内结核分枝杆菌生长情况的影响。采用方差齐性F检验和非配对t检验比较实验数据。结果PC61处理组与IgG对照组小鼠脾细胞中Treg占CD4^＋T淋巴细胞比例在第10天分别为（21．13±3．58）％和（30．42±4．20）％（t=2．38，P〈0．05）；第30天为（16．12±1．26）％和（17．34±1．62）％（t=0．84，P〉0．05），Foxp3^＋＋占CD4^＋T淋巴细胞比例在第10天为（32．07±3．95）％和（60．55±5．48）％（t=5．96，P〈0．05）．外周血也有类似结果。在PC61处理组及IgG对照组，感染后第10、30和60天时体外培养小鼠脾细胞分泌的卡介苗特异性细胞因子IL-17（ng／L）分别为5．1±0．9比0、43．1±10．0比5．9±2．8、124．8±5．8比102．5±8．1（t=7．90，t=5．10，t=3．19；均P〈0．05）；IFN-γ（ng／L）分别为28．4±8．2比4．0±1．3、685．9±128．6比418．7±20．4、310．9±119．7比32．8±7．5（t=4．21，t=8．43，t=3．27；均P〈0．05）；TNF—α（ng／L）分别为38．6±5．0比16．34±0、112．9±12．3比71．5±12．6、86．2±8．2比0（t=4．95，t=3．33，t=14．8；均P〈0．05）。PC61处理小鼠在感染早期（第10天）肺内结核菌量低于IgG对照小鼠（t=4．63，P〈0．01），但后期比较差异无统计学意义。PC61处理小鼠感染后期（第120天）肺组织病理改变较IgG对照组为轻。结论结核菌感染后小鼠Treg显著增加；Treg能有效抑制结核菌特异性细胞免疫，进而影响小鼠肺内结核菌的清除和结核病的发生。