猪伪狂犬病毒Jiangxi-FZ株的分离鉴定及其重要毒力基因分子特征

目的研究伪狂犬病病毒(PRV)新流行毒株重要毒力基因的分子特征。方法本研究从江西省某规模化猪场疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织中分离到1株病毒,通过PCR鉴定、病毒分离培养、细胞免疫荧光及易感动物试验证实该病毒为PRV野毒株并命名为PRV Jiangxi-FZ株。并对其重要毒力基因TK、gB、gC、gD及gE的分子特征和遗传进化关系进行分析。结果 Jiangxi-FZ株与其他PRV参考毒株的TK、gB、gC、gD及gE基因在核苷酸和氨基酸水平均具有很高的保守性,尤其是与2012年分离的2株PRV变异株的同源性较高。但在高度保守的基础上,仍存在一些差异,且部分差异具有特征性。遗传进化树分析结果显示,PRV Jiangxi-FZ株与2012年国内不同省份分离的PRV变异株亲缘关系较近,而与Becker等欧美洲毒株亲缘关系相对较远。结论 Jiangxi-FZ株具有当前PRV流行毒株的代表性,属近年来流行的PRV变异毒株。

华南虎源禽致病性大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性研究

【目的】对福建梅花山华南虎繁育研究所一例华南虎幼虎急性死亡病例的致病菌进行分离鉴定及生物学特性研究,为圈养华南虎疫病防控提供科学依据。【方法】无菌采取死亡幼虎的肺、肝、脾、肠道等组织病料,进行细菌分离培养,根据形态特征、培养特性、生化试验、16SrRNA PCR扩增结果进行病菌鉴定;并对该分离菌进行16S rRNA系统进化分析、禽致病性大肠杆菌PCR鉴定、药敏试验、动物致病性试验和毒力基因检测。【结果】从幼虎肝脏及肠道组织中分离得到1株大肠杆菌(E.coli),命名为FJ/Tiger2016。16SrRNA系统进化分析显示,该分离菌与大肠杆菌人源分离株(NZCP016497)、鼠源分离株(NZMBNX01000003)、鸭源分离株(EF620926)及禽源分离株(AB272358)的遗传距离较近,形成一个相对独立的小遗传分支,其中与禽源分离株(AB272358)的同源性高达99.7%。PCR鉴定及药敏试验结果表明,该分离菌为禽致病性大肠杆菌(APEC),对选用的15种抗菌药均表现敏感。动物致病性试验结果显示,经腹腔接种时该菌株对试验小鼠具有较强的致病力,小鼠攻毒后5h内全部死亡。病理剖检及组织病理切片观察结果表明,该菌株对死亡小鼠的心脏、肝脏和脾脏等多个重要组织器官均造成了较为严重的病理损伤,而经灌胃接种时试验小鼠均未出现明显的临床症状。毒力基因检测结果显示,该菌株含有10种毒力基因,暗示其可能具有很强的致病性。【结论】从死亡幼虎肝脏及肠道组织中分离到1株具有较强致病力、肠道外致病的禽致病性大肠杆菌,表明禽致病性大肠杆菌已对我国圈养华南虎造成了一定威胁,应引起重视。

闽西地区猪伪狂犬病病毒变异株gC基因克隆与序列分析

为了解闽西地区2013年以来猪伪狂犬病病毒（PRV）流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律，收集了闽西不同地区的14株PRV分离株，并对其gc基因进行遗传变异分析。结果表明，14株PRV分离株与2012年以来国内不同省份分离的PRV变异株的核苷酸序列同源性为98．8％～99．7％，而与Bartha疫苗株核苷酸序列同源性为93．6％～93．8％。氨基酸多序列比对发现，14株PRV分离株和近年来国内分离的PRV毒株gC基因氨基酸序列同源性较高，有很多相同的特征性氨基酸替换，其中最有特征性的是aa52-aa61，aa63-aa69位和aal86-aal94位氨基酸的替换和插入。遗传进化树分析表明，14株PRV分离株与2012年以来国内不同省份分离的PRV株位于一个相对独立的大分支中，且形成了一个独立的亚分支，而与Bartha疫苗株存在很大差异，亲缘关系较远。抗原表位预测分析表明，PRV闽西分离株与Bartha疫苗株相比发生了抗原漂移，该差异是否预示闽西地区流行株正在向远离疫苗株的方向变异尚有待进一步研究。

猪伪狂犬病毒野毒感染的PCR检测方法建立及应用

根据猪伪狂犬病病毒(PRV)gE、gB基因序列,设计并合成了2对特异性引物,以PRV容A株细胞培养毒为模板,通过对PCR扩增条件的优化,建立了区分PRV野毒株和疫苗毒株的双重PCR方法。该方法能从野毒株基因组中同时扩增出2条大小分别为400bp(gE基因)、582bp(gB基因)的特异性片段,从疫苗毒DNA中仅扩增出1条大小为582bp的片段。试验证明所建立的方法具有良好的特异性和敏感性,对临床上20份PRV感染疑似病料进行检测,双重PCR检测的结果与单重PCR检测结果总体符合率为100%,表明所建立的双重PCR检测方法可用于猪伪狂犬病野毒感染的快速诊断和流行病学调查。

新型兽医人才培养模式的探究与实践

针对动物医学专业人才培养中存在的问题,龙岩学院立足专业特点,提出应与企业深度紧密合作培养新型兽医人才,校企双方共同制订人才培养方案,实行"双导师制",构建教学、科研、生产、培训为一体的"3+1"复合型、应用型人才培养模式。实践证明,学生的学习积极性明显增强,实践能力、就业能力和综合素质明显提高,社会认可度不断提升,同时,还促进了"双师型"教师的培养,实现了学校、学生和企业的共赢。

H5N1亚型禽流感病毒RNA聚合酶PB1_P亚基片段的表达、纯化和结晶

根据GenBank中H5N1亚型禽流感病毒RNA聚合酶PB1基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒的PB1_P基因,克隆到原核表达载体pET-28a载体中,经PCR、酶切和测序分析后,鉴定出阳性重组子。将阳性质粒pET-28a/PB1_P转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.5mol/L IPTG,在37℃诱导表达4h,经SDS-PAGE和Western-blot检测,获得重组蛋白PB1_P表达。并经Ni-NTA柱亲和层析与柱层析纯化表达蛋白,采用悬滴气相扩散法对纯化蛋白进行结晶。结果成功构建pET-28a/PB1_P重组质粒,SDS-PAGE结果显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,Western-blot证明表达的融合蛋白具有良好的免疫原性,经蛋白纯化、初筛结晶,得到PB1_P重组蛋白初筛晶体,为深入研究流感病毒聚合酶的生物学功能、开发新型H5N1亚型禽流感病毒检测试剂盒奠定了良好的基础。

闭合复位交锁髓内钉治疗多段胫腓骨骨折远期疗效分析

目的探讨胫腓骨骨折闭合复位并行交锁髓内钉固定治疗的可能性。方法通过对2002年6月～2004年10月对42例多段胫骨或胫腓骨骨折病人行闭合复位并交锁髓内钉固定治疗并进行随访。结果所有病人均骨性愈合,无感染及骨不连情况发生。结论此种方法疗效可靠,简单易行。

闽西南地区部分规模化猪场猪伪狂犬野毒感染的血清流行病学调查

为了掌握闽西南地区规模化猪场猪伪狂犬野毒感染状况和流行趋势,应用ELISA方法对2012-2014年闽西南地区的859个规模化猪场22324份血清进行PR野毒感染血清学调查。调查结果显示被调查的猪场血清样品总阳性率为21.8%,场阳性率为57.0%;母猪、公猪、哺乳小猪、保育猪、育肥猪及后备猪的血清样品总阳性率分别为22.0%、23.7%、16.7%、15.6%、19.2%和27.2%,不同阶段的猪群PRVgE抗体阳性率差异显著(P<0.01)。2012年-2014年猪场阳性率分别为46.7%、45.4%和57.0%,血清样品阳性率分别为20.5%、18.4%和25.4%;血清样品阳性率在30%以上的猪场比例逐年上升,分别为14.8%、19.9%和32.2%;不同地区猪场PR野毒感染情况不同。结果表明近年闽西南规模化猪场猪伪狂犬病野毒感染压力依然很大,猪伪狂犬病的控制与净化形势严峻。

关节软骨病损的磁共振成像及其与大体标本的对照研究

目的: 探讨MR对关节软骨各期病变的敏感成像序列并评价MR对早期软骨病变的诊断价值。方法: 通过1例新鲜截肢患者和4例正常猪膝关节的T2WI、PDWI、GE、STIR、3DFS—FSPGR等序列的成像研究, 选定最佳的序列用于6例猪骨性关节炎(OA) 模型膝关节扫描, 图像与大体标本对照以评价MR对关节软骨的诊断价值。结果: 5种序列的组织分辨力、病变检出率以3DFS—FSPGR序列最高分别达67. 9%和93. 7%, OA模型3DFS—FSPGR图像与大体标本对照Pearson列联系数P=0. 88。结论: 在5种序列中, 3DFS—FSPGR是理想的关节软骨成像序列; MR不仅对中晚期软骨病变有良好显示, 对早期软骨病变也能做出正确诊断。

超高效液相色谱-串联质谱联用法对水产品中亚甲基蓝及其代谢物残留的检测

建立了超高效液相色谱-串联质谱同时检测水产品中亚甲基蓝及其代谢物天青A、天青B、天青C残留的方法。试样中的残留药物采用离子对试剂提取,正己烷脱脂净化,超高效液相色谱-串联质谱法测定。对前处理及液相色谱分离条件进行了探讨与优化。4种分析物在0.25～50μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,方法定量下限可达0.5μg/kg。在0.5、1.0、5.0μg/kg范围内,平均加标回收率为80%～91%;相对标准偏差为6.38%～9.41%。方法灵敏、稳定,可满足水产品中亚甲基蓝及其代谢物残留的检测与确证及对药物动力学研究的需要。

关节软骨病损的磁共振成像与关节镜检查的比较

[目的]对照膝关节软骨病损的MRI和关节镜表现,评价MRI对早期软骨病变诊断的临床价值。[方法]对临床上拟行膝关节镜检查的膝关节疼痛患者共26人27例膝关节,术前常规行T1加权快速自旋回波(FSET1WI)和质子密度加权快速自旋回波(FSE PDWI)2种MRI序列扫描,其中10例加做三维脂肪抑制扰相梯度回波(3D FS-FSPGR)序列。MRI分级结果并与关节镜下分级诊断结果比较。[结果]以关节镜诊断为标准,3D FS-FSPGR序列敏感度最高,可达96.5%,准确率达95.0%。在敏感度和准确度上3D FS-FSPGR>FSE FDWI>FSET1WI,与关节镜诊断的一致性上,3D FS-FSPGR的Kappa值达到0.776,一致性极佳,均明显优于FSE PDWI和FSET1WI(P值均<0.01)。[结论]3D FS-FSPGR序列能够准确反映软骨病变,并且对于早期的软骨病变亦能较真实体现,与关节镜诊断结果具有良好的一致性,而且通过三维重建对软骨病变进行立体定位诊断,应用前景广阔。

液相色谱法检测水产品中亚甲蓝及其代谢物残留

建立了液相色谱同时检测水产品中亚甲基蓝及其代谢物天青A、天青B、天青C残留的方法并用于样品检测。试样中残留的药物以含离子对试剂对甲苯磺酸的乙酸铵缓冲液-乙腈提取,二氯甲烷反萃,MCAX固相萃取小柱净化,液相色谱测定。对提取、净化及仪器分离分析条件进行了探讨,对亚甲基蓝在分析过程的稳定性进行了研究。水产品中4种化合物在0.005～0.50mg/kg范围内线性关系良好,相关系数为0.9946～0.9978。在0.005～0.5mg/kg浓度范围内,平均加标回收率为75.9%～93.2%;相对标准偏差为3.3%～11.9%;AZA、AZB、AZC、MB的检出限分别为1.27、0.98、1.48和1.33μg/kg。方法稳定可靠,可满足水产品中亚甲基蓝及其代谢物的检测需要。

福建地区猪源葡萄球菌耐药性分析及耐药基因检测

目的对福建地区分离的猪源葡萄球菌进行耐药性分析以及耐药基因分布特征研究。方法采用琼脂稀释法测定196株菌对18种抗菌药物的敏感性,并用PCR方法检测10种葡萄球菌重要耐药基因的携带情况。结果所有菌株对万古霉素最为敏感,对利奈唑胺和利福平的敏感性下降。对青霉素、四环素、红霉素、氨苄西林、泰乐菌素、阿奇霉素、苯唑西林和克林霉素表现为高水平耐药,耐药率依次是83.2%、75.5%、74.5%、74.0%、68.9%、67.3%、54.1%和52.6%。对替米考星、恩诺沙星、氟苯尼考、泰妙菌素、庆大霉素、环丙沙星和氯霉素表现出中等水平耐药,耐药率分别是48.5%、41.8%、36.2%、32.1%、30.1%、27.6%和25.5%。在196株菌中,187(95.4%)株菌携带有耐药基因,共检出9种重要耐药基因,其中mecA(46.9%)检出率最高,cfr检出率最低(3.1%),其他耐压基因检出率依次为ermC(44.9%)、ermB(38.3%)、tetK(32.1%)、fexA(25.5%)、tetM(23.0%)、tetL(21.9%)和ermA(11.7%)。结论福建地区猪源葡萄球菌对β-内酰胺类、四环素类和大环内酯类均表现出较强的耐药性,并且介导这3类药物耐药基因的携带率较高,因此,在选择抗菌药治疗该病时应尽量避免使用以上药物。

华南虎疑似感染猫细小病毒的PCR鉴定与病理组织学检查

对1例疑似感染猫细小病毒的死亡华南虎幼虎进行病理剖检、病原PCR检测和病理组织切片观察。结果表明,死亡幼虎的肠道组织中能检测出猫细小病毒核酸;病理组织切片镜检结果显示,死亡幼虎胃、肠粘膜出血,大量粘膜上皮细胞坏死、脱落,严重部位粘膜层基本消失,并伴有大量炎性细胞浸润;心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑等组织也均有较为严重的病理损伤。以上结果提示,该死亡幼虎感染了猫细小病毒,且该病毒对幼虎多种主要器官造成了严重的损伤。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的治疗研究进展

随着耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的感染率不断增加,并成为全球院内感染的首要致病菌。因其高感染率、高致死率以及多重耐药株的出现,使临床治疗面临极大的挑战。本文将从药物治疗、噬菌体疗法和免疫防治等方法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的治疗进行综述,以期对该病原菌临床治疗提供一定的参考。

比较教学法在动物生物化学教学改革中的应用

动物生物化学是动物医学专业重要基础课程。为了提高该课程的教学质量,文章从概念,化学结构,反应过程和反应场所等方面举例分析了比较教学法在动物生物化学教学改革中的应用。比较教学法不仅丰富教学形式,增强学生的学习积极性,还培养学生自己独立思考和分析能力,经过多年的实践,收到了良好的效果。

骶管注射治疗腰腿痛

骶管注射治疗腰腿痛刘春河，赵平厚，左燕青，郭钦佩，范克伟，徐安山１９８３年１０月至１９９３年８月，我们应用骶管注射治疗腰腿痛２０００余例，收到满意效果，现将资料较齐全的１６９例报告如下：１临床资料本组男１０１例，女６８例，平均年龄４９．５岁（２１～８...

鸡源新城疫病毒人工感染鸭的病理组织学研究

本研究取120只20日龄健康非免疫建湖鸭,随机分为2组,每组60只,研究鸡源新城疫病毒人工感染鸭的病理组织学变化及其病理演变过程。试验组皮下接种1∶5稀释的鸡源新城疫病毒分离株(WF00G株)SPF鸡胚绒尿液毒0.5mL/只,对照组皮下注射等量灭菌生理盐水,隔离饲养,临床观察20d。于攻毒后第4d、8d、12d、16d、20d每组各取鸭4只,颈动脉放血致死,解剖观察心脏、肝、脾、肺、肾等器官的病变,取材制作石蜡切片及超薄切片,观察病理组织学变化。结果显示:试验鸭胸腺点状出血;心脏体积增大、心肌柔软、心包积液;肝脏肿大,质地变脆;肺脏出血;肾脏明显肿大。病理组织学变化主要为肝、脾、肺及肾等器官出血,细胞变性、坏死,细胞器溶解等。研究结果表明鸡源新城疫病毒WF00G株人工感染鸭可致鸭发病,临床症状较轻微,剖检病变和组织学病变明显。