环境DNA的提取和纯化方法的研究

比较了从土壤中提取DNA的三种方法,结果发现TENS法对不同土壤都有较好的提取效果,提取的DNA片段长度均在23 kbp以上,并且无明显的降解现象,提取效果明显好于SDS高盐提取法和裂解酶法.在DNA纯化过程中,分别比较了试剂盒法、透析袋法和琼脂糖酶法等纯化方法,发现使用琼脂糖酶法纯化粗提的DNA时回收率最高,获得的DNA的质量也很高,纯化DNA可用于酶切等分子生物学操作.

纳他霉素处理对采后甜樱桃生理代谢及品质的影响

为了研究纳他霉素与维生素C(Vc)复配处理对采后甜樱桃果实生理代谢与品质的影响及其作用机理,该试验采用10 mg/L纳他霉素溶液、100 mg/L Vc溶液以及10 mg/L纳他霉素+100 mg/L Vc溶液中浸泡处理甜樱桃10 min,然后将果实置于5℃下贮藏,在贮藏期间,分析测定了呼吸速率以及与抗病性有关的多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)等酶活性,同时,测定了果实颜色、硬度、Vc含量、酚类物质含量以及腐烂率等品质指标。结果表明,单独的纳他霉素处理或与Vc复配处理均可有效延长贮藏期达10d以上,尤其是复配处理还可显著提高PPO、POD、PAL酶活性并使酚类物质含量增加,降低果实呼吸速率与腐烂率,保持较高的Vc含量和硬度,单独的纳他霉素处理也具有一定的调节生理代谢与防腐作用,而单独的Vc处理作用不明显。研究结果认为纳他霉素与Vc复配溶液可作为天然保鲜剂在采后甜樱桃果实的实际贮运中应用。

一株抗真菌解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件的初步研究

从堆肥中分离到一株对植物病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)具有强烈抗菌活性并具有较广抗菌谱的细菌Q-12菌株。通过形态观察、生理生化实验1、6S rDNA同源性序列分析以及部分特异性基因序列分析,鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌。该菌的最适培养基组成为:葡萄糖5g/L,NH4Cl 1g/L,牛肉膏0.8g/L,氯化镁5g/L。最适培养温度为33℃,最适培养pH为6.0,最适培养时间为40h。

乳酸菌素生产菌的分离与鉴定

对乳酸菌素产生菌进行分离,得到4株理想菌株。利用高效液相色谱检测其发酵液,初步确定4菌株均为乳酸菌,其中Ⅱ32菌株产乳酸最多,对各指示菌的抑制作用最显著,对该菌株作进一步的研究。Ⅱ32菌株在MRS培养基上可以生长,最适生长温度为28℃,革兰氏染色呈阳性,无芽孢。通过API生化反应实验、16SrDNA测序可进一步确定该菌株是L·paraplantarum或L·paraplantarum。最终通过对recA-gen的PCR产物检测,鉴定菌株Ⅱ32为Lactobacillusparaplantarum(类植物乳杆菌)。牛津杯抑菌试验显示,该菌株的发酵液不仅对多数G+细菌的生长有较强的抑制作用,而且对大肠杆菌、沙门氏菌等Gˉ细菌的生长也具有明显的抑制作用,但对真菌没有活性。

银杏叶多糖提取、纯化及其含量的测定

目的研究银杏叶多糖的提取纯化及含量测定。方法通过对不同的提取次数、固液比及提取时间等实验,以及对粗多糖纯化的研究,确立各因素条件,采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。结果各因素条件为浸提温度80℃,提取时间3h,固液比1∶30,提取2次,用活性炭纯化。由此得银杏叶中粗多糖的得率为12.2%,纯化后的多糖得率为9.8%。测定提取的粗多糖中多糖含量为35.7%,纯化后的多糖含量为43.3%,多糖含量测定相对标准偏差小于3.0%。结论该方法纯化效果好,测定重现性好,得出银杏叶中多糖含量为4.3%。

解淀粉芽孢杆菌抗菌活性物质的分离纯化及抑菌活性研究

植物真菌病害给农业生产带来了巨大损失,因此对生物农药的开发迫在眉睫。从堆肥中分离得到一株解淀粉芽孢杆菌,它具有强烈的抗真菌活性。其发酵液经硫酸胺沉淀得到粗提液,粗提液经Hiprep26/10Desalting,HiLoad26/10Q Sepharose和HPLC多步柱层析,分离纯化得到一种抗真菌活性物质。ESI-MS质谱法测得其分子量为1498Da。经活性检测发现,该纯物质对尖孢镰刀菌、草莓蛇病菌等植物病原真菌具有很强的抑制作用,对毛霉、黑曲霉等食品腐败菌也有抑制作用。经过显微镜观测,该物质可造成草莓蛇病菌菌丝生长异常,表现在菌丝弯曲,顶端膨大,分生孢子数量减少。

机械损伤对富士苹果酶促褐变的影响

研究了富士苹果机械损伤后在5℃和18℃贮藏条件下对生理变化及酶活性的影响。结果表明,机械损伤后的果实相对电导率急剧增大、L*值迅速下降、多酚含量逐渐降低、丙二醛(MDA)含量逐渐上升,果肉快速发生褐变。机械损伤提高了多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)的活性,抑制了超氧化物歧化酶(SOD)的活性。随着贮藏时间的延长,除了PPO外,其它指标都呈现了上升、下降的反复过程,说明组织自身的保护酶系统对伤胁迫具有生理防御作用,而且在低温贮藏时酶活性较强而能有效地延缓果实的衰老。

菠萝中维生素C的高效液相色谱分析

介绍了采用高效液相色谱法,通过低浓度的草酸流动相,测定菠萝中维生素C含量的方法.回收率为99.4%～103.6%,相对标准偏差小于5%.

酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷农药残留

利用酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷农药残留，以小麦为对照，比较了大豆、玉米、绿豆等10种植物中植物酯酶活性，优化了植物酯酶提取条件。同时系统地研究了酶促反应条件，建立了酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷农药残留的方法。研究结果表明，以绿豆中提取的粗酶酶活最高，提取条件为：以0．1mol／L pH值6．2的磷酸缓冲液为提取剂，按固液比1：5（W／V）加料，在40℃搅拌20min，过滤。最佳酶促反应条件为：反应体系0．1mol／LpH值6．0磷酸缓冲液、反应时间15min、反应温度40℃、显色时间10min、测定波长520nm处吸收峰值；样品提取用含10％乙醇的0．1mol／L pH值6．4的磷酸缓冲液超声波振荡10min；方法的回收率为86．7％-97．1％，最小检出限为0．13-0．24μg/ml.

NaOH预处理对玉米秸秆纤维结构特性和酶解效率的影响

为研究不同温度下Na OH预处理对玉米秸秆纤维结构特性和酶解得率的影响,为确定纤维原料碱法预处理的适宜条件提供理论依据,采用稀Na OH溶液对玉米秸秆分别在60、80、105℃下预处理,测定了预处理前后纤维原料的化学组成和酶解得率,并采用扫描电镜(SEM)、X射线衍射仪(XRD)和傅里叶变换红外光谱仪(IR)对预处理前后玉米秸秆的纤维结构进行了表征。结果表明:Na OH预处理能够有效脱除玉米秸秆中木质素,增加纤维素和半纤维素比例,提高纤维素结晶度,产生的润涨作用导致纤维束状结构疏松。Na OH 80℃预处理1 h后,玉米秸秆中纤维素结晶度达到63.7%,60 h的酶解得率达到71.4%;碱处理温度进一步升高则会充分暴露纤维表面纹孔,同时使纤维素分子内氢键重新形成,容易进一步损失半纤维素,降低纤维素的润涨程度,从而降低酶解效率。80℃条件下碱处理能够有效改善玉米秸秆纤维结构,提高其转化利用效率。

克雷伯氏菌微氧发酵生产1,3-丙二醇的研究

对克雷伯氏菌在厌氧和通 1 .2L/min空气的条件下间歇连续发酵生产 1 ,3 丙二醇进行了研究 ,在两种条件下 1 ,3 丙二醇的转化率接近。在通空气的条件下细胞能够正常代谢 ,并获得较高菌体密度 ,但有氧发酵的生产强度高于厌氧发酵 ;甘油处于限制状态、稀释率为 0 .1h- 1 的连续发酵中 ,有氧发酵 1 ,3 丙二醇的转化率和生产强度均高于厌氧发酵。

机械损伤对富士苹果生理生化变化的影响

研究了富士苹果受到机械损伤后在5℃和18℃2种贮藏温度下呼吸强度、可溶性固形物、乙烯释放量、果肉硬度、苯丙氨酸解氨酶活性和木质素含量的变化。结果表明:富士苹果受到机械损伤后,呼吸强度、乙烯释放量均明显提高,而且随着温度的升高而显著地升高;可溶性固形物含量和果肉硬度均快速下降;苯丙氨酸解氨酶活性略低于对照,但在贮藏初期也逐渐上升;木质素含量在贮藏前期快速下降,后期又逐渐上升。在贮藏过程中,除了木质素含量外,受伤果的其他各项指标都显示了上升、下降的反复趋势,说明受伤组织具有提高代谢水平,同时也促进了愈伤组织的形成,实现自我修复的功能。实验结果显示,低温贮藏有利于保持苹果的贮藏品质。

壳聚糖及其衍生物的抗氧化作用

采用邻二氮菲-Fe2+氧化法和DPPH法,研究5种壳聚糖及其衍生物——壳聚糖(chitosan)、壳寡糖(ol-igo-chitosan)、羧甲基壳聚糖(CM-chitosan)、N-乙酰氨基葡萄糖(GLcNAc)、氨基葡萄糖盐酸盐(GlcNH2.HCl)的体外清除羟自由基和DPPH.自由基的能力。结果表明:在实验设置的浓度范围内,对羟自由基的清除能力依次为oligo-chitosan>chitosan>GLcNAc>GlcNH2.HCl>CM-Chitosan,且其清除能力随着浓度的增加而增加。其中2 mg/mL的Oligo-chitosan对羟自由基的清除率最大达到97.81%,相当于4 mmol/L的VC对羟自由基的清除能力。对DPPH.的清除能力大小依次为oligo-chitosan>chitosan>GlcNH2.HCl≥GLcNAc>CM-chitosan,且其清除能力随着浓度的增加而增加。2 mg/mL oligo-chitosan的清除率为97.34%,大于6mmol/L VC的清除速率79.92%。2种方法测定的结果比较一致。

纳他霉素在草莓保鲜中应用的研究

用20mg/L的纳他霉素溶液对新鲜草莓果实进行浸泡和喷雾处理,探讨了不同处理方式和浸泡时间对新鲜草莓贮藏过程中生理和病理指标的影响。实验结果表明:纳他霉素处理可有效控制果实表面霉菌数量,并可降低果实呼吸强度及腐烂率上升的速度,减慢叶柄叶绿素含量下降的速率,提高果实花色素苷含量。浸泡5min和喷雾处理比浸泡10min处理显示了明显的防腐效果。

洋葱伯克霍尔德菌CF-66抗菌物质的分离纯化及性质的研究

洋葱伯克霍尔德菌CF-66能够抑制立枯丝核菌等若干植物病原菌和其它一些真菌的生长。CF-66菌发酵液的粗提液通过Sephadex-75pg、Sephacryl S-100柱层析分离纯化,获得抗菌物质CF66I。此抗菌物质耐热性强,耐碱,但在强酸性条件下不稳定。低浓度有机溶剂的存在有利于抑菌活性的提高。对其结构的研究表明CF66I是以(CH2CH2O)n为主要单元结构并带有酰氨键的化合物。

壳寡糖及其衍生物对CCl_4诱导的小鼠肝损伤的保护作用

研究壳寡糖(COS)、氨基葡萄糖(GlcNH2)和N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)对CCl4诱导的雄性昆明种小鼠肝毒性的保护作用,并探讨其可能机制.小鼠腹腔注射CCl4(20 mg/kg体重)24 h后,血清天门冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性明显提高,引起肝脏脂质过氧化反应,巯基含量降低,总抗氧化能力(T-AOC)减弱,诱发基因毒性.提前连续12天分别灌胃给予COS,GlcNH2和GlcNAc(1.5 g/kg体重)能够显著诱导金属硫蛋白(MT)的表达,体内的抗氧化防御系统随之增强以抵抗CCl4诱导的氧化损伤.血清AST和ALT活性明显降低,肝脏丙二醛(MDA)生成被抑制,巯基含量,T-AOC明显恢复.但是,从DNA电泳结果反应出的基因毒性并未减轻.实验结果证明,提前给予COS,GlcNH2和GlcNAc对CCl4诱导的小鼠肝损伤能够起到有效的保护作用,其中,GlcNH2的作用效果最显著.

不同温度热水处理对鲜切皇冠梨生理生化的影响

采用40、45、50℃三种不同温度热处理梨果实,然后进行切分,研究其在10℃贮藏过程中的生理生化变化。热处理明显抑制鲜切梨果实PPO、POD活性,降低呼吸强度和乙烯生成量,保持鲜切梨果实的颜色、硬度和较高的CAT活性,延缓其生理生化变化,保持鲜切梨果实的品质,延长其货架期。

机械伤害引起果蔬褐变机理的研究进展

综述了机械伤害引起果蔬酶促褐变的生化条件和机理,以及乙烯和呼吸速率增加、膜脂代谢加强、营养物质损失、愈伤组织和次生代谢物质生成几个方面的生理生化变化。

解淀粉芽孢杆菌Q-12抗真菌特性的研究

从土壤中分离到的解淀粉芽孢杆菌Q-12在生长过程中产生的抗菌活性物质,能够强烈抑制镰刀菌、曲霉、青霉、毛霉等能引起食品腐败的真菌。受到抑制的真菌菌丝生长速度明显变慢,并且菌丝的形态发生变化。Q-12的发酵液经过(NH4)2SO4沉淀得到的粗提产物对热稳定,121℃高压灭菌15 min仍能保持很高的活性,易溶于水及极性有机溶剂,经非极性有机溶剂萃取后,保留在水相的活性物质活性变化不大,在较宽的pH值范围内都具有很高的抗菌活性,并且对蛋白酶K、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶不敏感。

甲醛滴定法测定牛血清白蛋白的酶解度

针对作者前期提出的蛋白质酶解度定义,发展了一种利用甲醛滴定实验测定蛋白质酶解度的方法。分别利用甘氨酸与赖氨酸研究了α位游离氨基和ε位游离氨基在甲醛滴定实验中的测量状况,结果表明,甲醛滴定法测量结果比实际值偏低,进而利用修正系数对测定结果进行校正,确定甘氨酸、赖氨酸与牛血清白蛋白的修正系数分别为0.797,1.292和52.47,利用甲醛滴定法测定并计算出胰蛋白酶对底物牛血清白蛋白在本实验特定酶解条件下的酶解度为22.7。