植物病毒的分类与命名现状

1993年以前,植物病毒与动物病毒的分类系统不同,前者分为组(group)、亚组(subgroup)、成员(member),而后者分为科(family)、属(genus)、种(species)[1,2].

警惕番茄褪绿病毒在我国的传播和危害

番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)侵染番茄引起番茄褪绿病毒病。发病植株下部叶片黄化、脉间褪绿、边缘轻微卷曲,叶片光合作用显著降低,果实变小,产量和品质明显下降。该病毒最早于1998年在美国佛罗里达州发现,随后在世界多地陆续报道。我国首先于2004年在台湾报道,2013年又在北京和山东发现并鉴定了该病毒,同时在辣椒上检测到该病毒。ToCV属于长线形病毒科(Closteroviridae)毛形病毒属(Crinivirus)成员,基因组为二分体正义单链RNA,由粉虱传播。经初步调查和检测,ToCV在我国北京、山东、河北、天津等省市相继发生,给当地番茄生产造成了严重危害。ToCV传播迅速,成为我国番茄生产中又一重要病毒,防控形势严峻。基于以上原因,建议有关部门立即采取相应预防和防治措施,组织开展相关研究和攻关,控制该病毒在我国的传播和危害。

我国北方部分苹果主产区病毒病的发生与检测

苹果病毒病在我国广泛发生,已成为限制我国苹果优质高产的关键因素。20世纪80年代曾对其做过详细的调查和研究,但近年来由于各地农业产业结构调整等因素,苹果病毒病的发生特点有了不同程度的变化。为了解目前我国苹果病毒病的发生情况,在我国北方苹果主产区山东、陕西、山西、辽宁、北京和黑龙江6个省市的部分地区采集苹果样品共计267份,经RT-PCR检测和扩增产物的克隆与测序分析表明在上述地区采集的样品中,苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）、苹果茎沟病毒（ASGV）、苹果茎痘病毒（ASPV）、苹果锈果类病毒（ASSVd）的发生率分别为66.7%~100.0%、38.1%~94.1%、4.8%~85.7%和4.8%~48.6%;苹果凹果类病毒（ADFVd）仅在山东的两个果园零星发生;6个省市样品中病毒复合侵染率分别为67.1%、92.1%、75.0%、88.2%、94.1%和76.2%。

小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因的克隆及序列分析

以小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)的中国分离物(CH-87)接种发病的叶片中提取的总RNA为模板,经RT-PCR扩增获得ZYMV CP基因,将其克隆到pUCm-T质粒上进行序列分析。结果表明该CP基因由837个核苷酸组成,编码279个氨基酸。与已发表序列相比较,该CP基因与国际上已报道的4个基因型不同,应属于新的基因型,暂命名为基因型Ⅴ。

烟草花叶病毒丁香分离物的分离与鉴定

从表现花叶症状的丁香病株上获得一病毒分离物 ,其在电镜下为约 3 0 0 nm× 1 8nm的杆状粒子 ;电泳分析表明感病组织中 ds RNA大约为 6.4kbp,而其外壳蛋白分子量约为 1 7.6k Da。以上实验结果初步将该病毒分离物鉴定为烟草花叶病毒属 ( Tobamovirus)。根据该属病毒复制酶基因序列设计通用引物 ,进行 RT-PCR检测 ,扩增出约 1 0 0 0 bp的预期特异片段( Gen Bank AY5 6670 3 )。将 PCR产物克隆后测序 ,序列分析表明 ,与从蚕豆中分离的 TMV-B株系序列 ( Gen Bank AJ0 1 1 93 3 .1 )同源性为 99.90 %。根据烟草花叶病毒 ( Tobacco mosaicvirus,TMV)的 RNA CP基因序列设计引物 ,进行 RT-PCR,扩增出约 80 0 bp的预期特异片段 ( Gen Bank AY5 6670 2 ) ,序列分析表明 ,与 TMV-B株系序列 ( Gen Bank AJ0 1 1 93 3 .1 )同源性达99% ,上述实验结果表明 ,该病毒分离物为 TMV。由于该分离物与 TMV-B在指示植物上的症状存在明显差异 ,所以 ,作者把该分离物暂命名为 TMV-S。

侵染甜椒的番茄褪绿病毒的分子鉴定

番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)是一种由粉虱传播的RNA病毒,可以侵染番茄和辣椒等常见蔬菜,已在世界多地造成严重危害。2012年在北京市大兴区调查蔬菜病毒病时发现保护地栽培的甜椒植株表现脉间褪绿症状,且植株上烟粉虱数量多,初步推测为ToCV危害。通过提取显症样品总RNA,利用ToCV特异性引物进行反转录PCR,扩增得到463bp的目标条带。通过测序和核苷酸序列比对分析,表明该序列与国外已报道的ToCV HSP70h(the heat shock protein 70homolog,热激蛋白70家族)基因序列相似性为99%。这是对ToCV在我国侵染甜椒的首次报道。

潍坊萝卜红心病病原鉴定

本文用生物学、血清学和分子生物学证据证明,引起潍坊萝卜红心病的病原为芜菁花叶病毒 (Turnipmosaicvirus,TuMV)。该病毒可系统侵染曼陀罗、油菜、咸阳黄瓜、丝瓜、大白菜和普通烟,局部侵染苋色藜和假酸浆,不侵染豌豆。病毒粒体弯曲线状,长约 700nm,可由蚜虫传播,在红心病组织内形成风轮状和片层凝集状内含体,它在SDS 琼脂糖凝胶免疫双扩散试验中可与TuMV的抗血清形成明显的沉淀线。该病毒的CP基因共 867个核苷酸,编码 288个氨基酸,分子量为32 98kD。该序列与国内外 20个TuMV分离物的CP氨基酸序列比较结果表明,这些分离物可以分为 5组,其中引起萝卜红心病的病毒与日本的H1J、KYD81J、意大利的ITA7同属一组。

玉米矮花叶病毒HC-Pro在蚜虫传毒过程中的作用机制

本文用亲合印迹法测定了玉米矮花叶病毒 ( MDMV)与 MDMV HC- Pro,及二者与蚜虫蛋白之间的互作。结果表明 ,MDMV HC- Pro可以与 MDMV结合 ,也可以直接与 MDMV的介体——麦二叉蚜 ( Schizaphis graminum)中分子量约为 56k D的可溶性蛋白结合 ,而 MDMV不能与麦二叉蚜的可溶性蛋白直接结合。无论是 MDMV HC- Pro,还是 MDMV,都不能结合非介体灰飞虱 ( Laodelphaxstriatellus)的可溶性蛋白。酶联板模型的结果与此一致。上述结果说明 ,病毒不能直接与蚜虫口针中的病毒附着位点 ( VAS)结合 ;HC- Pro一端连接病毒 ,一端连接 VAS,在蚜虫传播 MDMV的过程中起桥梁作用。这是关于病毒 HC-

玉米矮花叶病毒HC-Pro的纯化及抗血清制备

本实验提纯了玉米矮花叶病毒 ( MDMV)的辅助成份—蛋白酶 ( HC- Pro) ,并制备了其抗血清。MDMV HC- Pro的分子量约为 57k D,提纯产量为 0 .3mg/ 10 0 g病叶。琼脂免疫双扩散测定证明MDMV HC- Pro抗血清的效价为 1∶ 16;微量免疫沉淀法测定时其效价为 1∶ 10 2 4。该抗血清只与MDMV HC- Pro有明显的反应 ,与健康玉米汁液和 MDMV无反应。MDMV HC- Pro抗血清可以专化性地抑制 HC- Pro的蚜传活性。

云南省玉溪市玉米致死性坏死病毒原的分子鉴定

玉米致死性坏死病是由玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus,MCMV)和一种或多种马铃薯Y病毒科病毒复合侵染引起的。2014年1月在对云南省玉溪市玉米病毒病害的调查中发现了一些表现严重花叶、矮化叶片甚至整个植株坏死症状的玉米。对采集样品进行RT-PCR检测,所有样品中都同时检测到了MCMV和甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV),在一个样品中同时检测到了MCMV、SCMV和南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus)。

寡糖在植物防卫反应中的作用及其信号传导

寡糖是动植物生长发育过程中一类重要的信号，可以调节多种反应。寡糖可以影响豌豆茎切段的伸长及烟草外植体的形态发生，还可诱导乙烯产生和果实成熟。在植物抗病防卫反应中，寡糖可以诱导植保素的合成及蛋白酶抑制剂的合成，并可诱导对病毒的抗性。植物和真菌细胞壁降解时产生的寡糖片断均可作为信号诱导植物的抗病防卫反应。庚－β－葡聚糖和寡聚几丁质的结合蛋白已经得到鉴定。寡糖信号转导过程中有磷酸化和去磷酸化的发生，膜的过氧化，并涉及到离子流和活性氧的产生等。

MDMV HC-Pro在玉米叶片中的积累及免疫定位

本文以感病自交系 Mo17、掖 10 7和抗病自交系黄早四为材料 ,研究了玉米矮花叶病毒(MDMV)和 MDMV辅助成份—蛋白酶 (HC- Pro)在叶片中的积累动态和细胞内定位。结果表明 ,在接种后 3d,MDMV就在掖 10 7和 Mo17接种叶的上位叶积累到了相当高的程度 ,6d后达到高峰 ;而MDMV在黄早四中的浓度一直低于在掖 10 7和 Mo17中的浓度。在接种掖 10 7和 Mo176d后 ,MDMV HC- Pro在上位叶中的积累到达高峰 ,而在黄早四植株中 MDMV HC- Pro直到第 9d才到最高 ,而且浓度一直低于感病自交系掖 10 7和 Mo17。麦二叉蚜从发病植株上获毒后的传毒效率变化与MDMV、MDMV HC- Pro在叶片中的积累动态一致。通过胶体金标记对 MDMV HC- Pro进行免疫定位 ,发现在细胞质中、与质膜相联系的风轮状内含体、片层凝集状内含体、细胞质高密度物质和病毒粒子周围有金标记 ,说明在这些部位有 MDMV HC- Pro的存在。

侵染扶桑的烟草花叶病毒分离物鉴定

从表现叶斑驳症状的扶桑病株上获得一病毒分离物,电镜下可见约300 nm×18 nm的杆状粒子,其与烟草花叶病毒抗血清呈明显的阳性反应,dsRNA约为6.4 kbp。根据烟草花叶病毒(tobacco.mosaic virus,TMV)的RNA序列设计引物,进行RT-PCR检测,扩增出约800 bp的预期特异片段。将PCR产物连接pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,得到了含有目的片段的重组子。序列分析表明,与周雪平等报道的序列(GenBank AJ011933.1)同源性达99％。通过生物学、病毒粒子观察、血清学以及分子生物学实验结果,确定该病毒分离物为TMV。

新疆杨胰蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达

杨树受损伤后能诱导一些基因的表达,其编码的蛋白质可能在杨树的防卫反应中起一定作用。用PCR方法从新疆杨叶片中克隆出一个损伤诱导型Kun itz胰蛋白酶抑制剂基因PaTI1。序列分析表明:此基因不含内含子,其翻译起点上游具有‘TATA’和‘CCAAT’等转录控制元件,包含的阅读框架能编码一个长为213个氨基酸的多肽。此多肽与克隆自美洲山杨的PtTI2和PtTI1氨基酸序列同源性最高,分别为95%和80%,其N端存在一长度为27个氨基酸的信号肽。将此基因以融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达,纯化后的融合蛋白对胰蛋白酶的活性有抑制作用,每8.5μg融合蛋白可完全抑制1μg牛胰蛋白酶的活性。W estern b lot分析表明融合蛋白与PtTI2特异的抗体之间有明显的血清学反应。

北京地区番茄黄化曲叶病毒病的鉴定及防治对策

番茄黄化曲叶病毒病是一种由烟粉虱传播的病毒病,给番茄生产造成严重威胁。2009年在北京郊区调查时发现部分保护地种植的番茄植株表现典型黄化曲叶症状。通过提取典型症状样品总DNA利用粉虱传双生病毒检测简并引物PA/PB,进行PCR扩增到541bp的特异条带。通过测序和核苷酸序列比对表明该序列与番茄黄化曲叶病毒序列相似性最高为99%。分子检测结果表明北京郊区部分保护地种植的番茄已被烟粉虱传播的番茄黄化曲叶病毒侵染危害。

侵染小苹果的苹果锈果类病毒的检测和全序列分析

小苹果是抗寒海棠类与大苹果的杂交后代,因耐寒能力强,口感好,被广泛用于嫁接与育种材料,是我国寒凉苹果产区宝贵的种质资源。苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)侵染苹果后引起果实表面产生锈状斑、花脸、畸形等症状,严重降低果实品质和市场价值。2013年在调查苹果病毒病时发现北京市延庆县种植的小苹果表现出典型畸形症状,应用RT-PCR方法对其进行检测后经测序和序列分析表明,小苹果被苹果锈果类病毒侵染。克隆此分离物(ASSVd-YQ)全基因组序列,分析后得到其基因组全长为329个核苷酸,系统发育分析表明该分离物与来自不同国家和地区的ASSVd分离物间的进化关系极近。二级结构预测表明,该分离物的中央保守区与末端保守区与ASSVd参考序列相同。这是对侵染小苹果的ASSVd的首次检测和鉴定。

甘蔗花叶病毒CP基因的高效表达和抗血清制备

将甘蔗花叶病毒的CP基因克隆到表达载体pET22b(+),并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,表达蛋白约占总蛋白的15%。用此蛋白制备了效价高专化性强的抗体。此方法可以解决制备马铃薯Y病毒属病毒的血清时遇到的病毒提纯产量低和寄主蛋白影响等问题。

玉米矮花叶病毒北京分离物复制酶基因的克隆及序列分析

以 MDMV北京分离物 RNA为模板 ,采用 RT- PCR方法扩增了含复制酶 (NIb)基因的 DNA片段 ,将其克隆到 p UC18载体上并进行序列分析。结果表明 :NIb基因由 15 6 3个碱基组成 ,编码 5 2 1个氨基酸并含有高度保守基序 GDD。NIa/ NIb和 NIb/ CP交界处的蛋白酶切割位点分别为 Q/ C和Q/ S。 NIb基因 (北京分离物 )在碱基数目上与保加利亚分离物完全一致 ,二者的核苷酸及氨基酸序列同源性分别为 70 .6 %和 76 .6 % ,而与 SCMV- SC的核苷酸及氨基酸序列同源性则高达 81.3%和92 .1%。