腔内超声、MSCT联合血清CA125对卵巢囊腺肿瘤的诊断价值探讨

目的探讨腔内超声、MSCT影像特征及CA125联合检查在卵巢囊腺肿瘤诊断的应用价值。方法回顾性分析116例女性(130个病灶)卵巢囊腺肿瘤患者超声、MSCT、CA125检查及病理资料,比较单独检查及联合检查在良、恶性囊腺肿瘤间诊断效能差异及影像学特征分析。结果病理结果显示囊腺瘤93个,囊腺癌37个;腔内超声图像特征如包膜、囊内回声、壁结节、腹腔积液、腹膜及淋巴结转移、血流显示在两组间均具有统计学差异(P<0.05);MSCT图像特征如CT值、边界、形态、腹盆腔积液、腹膜及淋巴结转移、强化程度在两组间均具有统计学差异(P<0.05);良性组患者CA125水平显著低于恶性组患者,具有统计学差异(P<0.05);腔内超声、MSCT、CA125联合检查对卵巢囊腺肿瘤的诊断效能均高于各项单独检查,具有统计学差异(P<0.05)。结论卵巢囊腺肿瘤的腔内超声、MSCT、CA125检查具有显著差异,联合检查对两者检出率均高于单独检查,对肿瘤性质判断具有更高的准确性,可为临床诊疗工作提供可靠依据。

二重荧光RT-LAMP方法鉴别检测口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒

口蹄疫和水泡性口炎是牛常见高度急性病毒传染病,在全球范围内广泛存在。本研究旨在建立一种可同时鉴别口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的二重荧光RT-LAMP检测方法。根据口蹄疫病毒(FMDV)3D基因和水泡性口炎病毒(VSV)N基因的保守序列,设计了2套特异性引物,在每条内引物的5′端标记荧光基团,通过扩增产物颜色判断检测结果。优化反应条件,建立了可同时检测口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的二重荧光RT-LAMP方法。结果显示,该方法灵敏性高,每个反应最低能够检测到100个拷贝混合模板;特异性好,能在同一个反应管里检测到两种病毒,对其他牛病原体无扩增;干扰性小,扩增效率不受模板浓度影响。本研究建立的口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒二重荧光RT-LAMP方法具有简便、快速、特异、敏感等优点,可用于FMDV和VSV的临床检测和流行病学调查。

牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）5′端非编码区核苷酸序列,设计引物和TaqMan荧光探针,建立了BVDV的实时荧光定量PCR检测方法。建立的方法只能检测到BVDV,而与CSFV、BRV、MT及IBRV没有交叉反应,具有高度的特异性,在1010~102模板范围内具有良好的线性关系,所制作的标准曲线相关系数为0.991,最低可检测到100个拷贝的阳性质粒。所建立的BVDV实时荧光定量PCR检测方法具有快速、特异、灵敏等特点。

查全率与查准率关系初探

查全率与查准率从被提出之日起就成为评价检索系统检索性能的重要指标 ,而且两个指标必须同时满足一定的标准时才能说检索效果令人满意。查全率与查准率之间往往体现出来的互逆性与人们期待的两者的互顺性的矛盾 ,导致了图书馆学和情报学工作者长期激烈地讨论。在此就目前一些新的研究成果提出作者的几点看法。

牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法的建立

用兔抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)多抗作为包被抗体,BVDV NS3单克隆抗体作为捕获抗体,建立了检测BVDV抗原的捕获ELISA方法,对各项反应条件进行优化,最终获得最佳工作条件为兔多抗1∶1 600稀释包被,NS3单抗1∶2 000稀释,酶标抗体工作浓度为1∶4 000稀释。特异性和敏感性试验结果表明,该方法对牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛分支杆菌无特异性交叉反应,其最低可检测7.9×103个TCID50的病毒量,与RT-PCR方法的相比较,符合率为100%。所建立的BVDV抗原捕获ELISA方法快速、特异、敏感,可用于BVDV抗原的检测。

牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒三重二温式PCR检测方法的建立及应用

为建立一种可同时检测牛支原体(MB)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性支气管炎病毒(IBRV)的三重二温式PCR检测方法。根据GenBank中MB、BVDV和IBRV的保守基因Uvrc基因、5′端非编码区(5′-UTR)和GB基因,分别设计了3对特异引物,将三温式PCR扩增程序简化为两个温度梯度,优化反应条件建立了用于同时检测MB、BVDV以及IBRV 3种常见牛呼吸道传染病病原的三重二温式PCR。结果显示,该方法特异性好,只对MB、BVDV和IBRV模板进行扩增,扩增的目的片段长度分别为412、170、727bp,对其他牛病原体无特异性扩增;灵敏度高,最低能同时检测到10 000拷贝的目的核酸;干扰性小,能同时检测3个不同浓度的模板。研究所建立的MB、BVDV和IBRV三重二温式PCR检测方法,具有特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有很高的临床应用价值。

牛轮状病毒TaqMan实时荧光RT-PCR快速检测方法的建立

本研究按照牛轮状病毒（BRV）结构蛋白VP6基因序列,设计合成引物和探针,经各反应条件的优化,建立了BRVTaqMan实时荧光定量RT-PCR技术。对BRV进行了特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,TaqMan实时荧光RT-PCR最低可检测到100个拷贝病毒RNA;与牛病毒性腹泻病毒（BVD）、猪瘟病毒（CSFV）、牛结核杆菌（MB）和牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）不发生交叉反应;所制作的标准曲线在102~109拷贝/μL浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0.997;与常规的RT-PCR相比,该方法具有快速、特异、敏感、重复性好、可同时检测大量样品等优点。可对样品中微量BRV进行准确检测,对BRV的诊断有重要意义。

小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒多重荧光RT-LAMP鉴别检测方法的建立及应用

旨在建立一种可视化多重荧光RT-LAMP方法用于检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒的核酸,并初步应用于小反刍兽疫和蓝舌病临床样品的检测。比对GenBank中小反刍兽疫N基因和蓝舌病NS3基因保守区域,设计2套LAMP引物,在每条内引物FIP的5′端标记荧光基团。对反应条件进行优化,验证方法的特异性、灵敏度和干扰性,同时应用该方法检测168份临床样品。结果表明,该方法对小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒高度特异,与口蹄疫病毒、鹿流行性出血热病毒、牛瘟病毒、山羊痘病毒等其他反刍动物病毒均无交叉反应,检测灵敏度为200 copies/μL,干扰性小,可同时检测两个不同浓度的模板。对168份样品的检测结果显示,小反刍兽疫病毒的感染率为3.6%,蓝舌病病毒的感染率为13.1%,无两种病毒混合感染;与荧光RT-PCR方法相比,此多重荧光RT-LAMP方法敏感性为91.7%~100%,特异性为100%。表明建立的多重荧光RT-LAMP可快速、准确地检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒,具有较好的临床应用价值。

赤羽病研究进展

赤羽病是由阿卡班病毒引起牛、羊等动物流产、死产、死胎、胎儿畸形、以及先天性关节弯曲-积水性无脑综合征的一种虫媒传染病。20世纪30年代该病在澳大利亚羊群中首次暴发。近年来,我国许多省也流行本病,给畜牧业带来巨大损失。文章对该病的病原、流行病学、发病机理、抗原、诊断进行综述,为有效防控赤羽病提供参考。

牛病毒性腹泻病毒RT-LAMP检测方法的建立

目的:建立牛病毒性腹泻病毒(BVDv)的环介导体外等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法:根据BVDv的5'端非编码区序列,在保守区的8个位点设计LAMP特异性引物(2对特异性引物和1对环引物),对反应条件和试剂浓度进行优化,建立恒温(63.5℃)、快速(65min)的检测方法。结果:建立的方法特异性好,检测其他对照病毒均为阴性;灵敏度高,最低可检测到1个拷贝的阳性质粒,可通过观察浑浊度或加入染料后直接判定扩增结果。结论:建立了用于检测BVDv的LAMP方法,该方法简便、快速、特异性好、灵敏度高,适合基层和现场检测。

牛病毒性腹泻病毒E2基因在昆虫细胞中的表达

为了获得具有良好抗原性的牛病毒性腹泻病毒E2囊膜蛋白,利用PCR方法扩增牛病毒性腹泻病毒E2基因,连接于昆虫杆状病毒表达载体中,构建pFastBacHTA-E2重组质粒。将该重组质粒转化入DH10BAC感受态细胞,经PCR鉴定获得转座杆粒Bacmid-E2。转座杆粒Bacmid-E2转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,感染细胞后,收获得到目的蛋白,用SDS-PAGE和Western blot对重组的表达蛋白进行分析。结果表明,重组E2蛋白大小为43.6ku,与预期值相符,该蛋白能与牛病毒性腹泻病毒阳性血清发生特异性反应,为进一步研发牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒奠定基础。

同时监测8种牛常见病原体的GeXP高通量快速检测技术

本研究旨在建立一种可同时检测8种常见牛传染病病原体(口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、水疱性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、产肠毒大肠杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒和小反刍兽疫病毒)的GeXP高通量快速检测方法。将多重PCR技术和毛细管电泳技术有效地结合,根据上述8种病原体的基因保守序列,设计并合成了8对特异性引物,在每对特异性引物的5′端加上一段通用引物,形成特异性嵌合引物。优化反应体系和反应条件,用单一病毒和混合病毒样品来验证所建立的GeXP方法的特异性,用克隆质粒稀释液来测试GeXP方法的灵敏度,检测305份临床样品,进一步验证该方法的可靠性。结果:优化后的GeXP检测体系,可扩增出各病原体对应的特异片段,能在100拷贝·μL^(-1)水平同时并特异地检测出8种牛病病原体核酸。305份临床样品的检测结果与荧光PCR检测结果一致,阳性样品测序结果表明无非特异性扩增的假阳性。结果显示,所建立的GeXP方法具有高通量、特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有较高的临床应用价值。

牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白的原核表达及鉴定

旨在制备高纯度的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NS3蛋白,为建立牛病毒性腹泻ELISA检测试剂盒奠定基础,用于区分疫苗免疫和野毒感染。根据GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3基因设计一对特异性引物,用PCR扩增1 206bp目的片段,克隆到pET-32a表达载体,成功构建重组质粒pET-32a-NS3。将重组质粒转化大肠埃希菌Transetta(DE3)用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE分析,结果表明重组NS3蛋白在体外得到较好表达,表达的融合蛋白分子质量为61ku。可溶性分析表明重组NS3蛋白以包涵体的形式存在,经镍柱His标签蛋白纯化后进行Western blot鉴定,结果表明表达的NS3重组蛋白能与BVDV的阳性血清反应。说明所制备的NS3蛋白反应性好,可用作ELISA的包被抗原。

牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3的表达及ELISA检测方法的建立

本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的间接ELISA方法。将BVDV的非结构蛋白NS3基因克隆到原核表达载体pET-32a中进行表达,将纯化后的蛋白作为包被抗原,优化ELISA条件,建立了BVDV抗体间接NS3-ELISA检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测,结果均较好。用所建立的NS3-ELISA方法检测从广西各牛场采集的475份牛血清样品,检出率为24.8%,与商品化试剂盒比较,符合率为97%。结果表明,本研究建立的NS3-ELISA方法简便、快捷,可大批量检测,适用于BVDV的诊断、抗体水平监测及流行病学调查。

牛轮状病毒三种核酸检测方法的比较

利用针对牛轮状病毒(BRV)的普通PCR、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和环介导等温扩增技术(LAMP)三种核酸检测方法对不同质粒浓度的样品和417份临床疑似样品进行检测,比较三种核酸检测方法的检出结果。三种核酸检测方法中LAMP最敏感敏感,能检测到1拷贝/μL,Real-time PCR能检测到100拷贝/μL,普通PCR只能检测到1×104拷贝/μL。但结合临床样品检测表明:常规PCR方法敏感度低会造成一部分漏检,LAMP灵敏度高又会造成错检。综合比较三种方法后,推荐用LAMP结合real-time PCR,不仅节约成本,且结果更为准确可靠,可提高牛轮状病毒的检出率。

BVDV与BRV二温式多重PCR检测方法的建立

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛轮状病毒(BRV)的保守基因设计了两对特异引物,并将三温式PCR扩增程序简化为2个温度梯度,建立了用于同时检测BVDV和BRV的二温式多重PCR方法,扩增长度分别为244和385 bp。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法只对BVDV和BRV模板进行扩增,而对其他对照病毒的检测均为阴性;检测灵敏度高,最低能检测到BVDV和RBV各1 pg病毒RNA。建立的BVDV和BRV二温式多重PCR方法,是一种快速、特异、敏感的检测方法。

牛轮状病毒二温式PCR检测方法的建立

根据牛轮状病毒(Bovine rotavrius,BRV)的群特异性基因VP6设计了1对特异引物,建立并优化了能够快速检测BRV的二温式PCR方法。特异性和敏感性试验结果表明,该二温式PCR只对BRV敏感,可扩增获得大小为385 bp的特异性条带,其敏感性为最低能检测到1 pg的BRV RNA;而对其他病毒不敏感。说明所建立的BRV二温式PCR方法是一种快速、特异、敏感的检测方法。

上海奉贤区老年护理病房常见皮肤病流行病学调查

目的了解上海奉贤区社区卫生服务中心老年护理病房常见皮肤病的患病情况并探讨其原因。方法采用整群抽样调查的方法,随机抽取奉贤区社区卫生服务中心老年护理病房的在住老年人作为调查对象,对其进行皮肤科检查,收集常见皮肤病的流行病学资料进行分析。结果本次调查人数共436例,4种皮肤退行性改变所致的皮肤病患病率从高到低依次为:脂溢性角化病(95.4%)、老年性血管瘤(48.2%)、老年性白斑(47.9%)、软纤维瘤(35.1%)。共发现老年护理病房常见皮肤病16类42种,患有各种皮肤病者297例(68.1%),排名前4位者从高到低分别为:甲真菌病(42.9%)、胼胝(38.5%)、手足癣(34.6%)和丘疹性荨麻疹(21.3%),糖尿病患者甲真菌病和手足癣患病率显著高于非糖尿病者。结论社区卫生服务中心老年护理病房皮肤病种类较多。应从皮肤病知识的普及开始,同时重视对老年人系统性疾病的积极治疗,并且根据老年皮肤病的患病率和不同病种对老年人生活质量的影响,有针对性的进行防治工作。

7.0 T MR扩散张量成像技术对大鼠肥厚心肌纤维特性的研究

目的采用7.0 T MR扩散张量成像(DT-MRI)技术从心肌纤维水分子扩散、心肌纤维微结构及心肌力学单元角度综合定量研究心肌肥厚模型大鼠的心肌纤维特性。材料与方法 20只健康雄性SD大鼠随机分为正常组(n=10)与心肌肥厚组(n=10),正常组大鼠离体心脏并固定,心肌肥厚组大鼠行胸主动脉缩窄手术12周后离体心脏并固定,采用扩散张量成像技术获取图像,并使用Diffusion Toolkit、Trackvis及Matlab软件进行图像后处理。观察两组大鼠心脏三维整体观、乳头肌层面心肌纤维和张量图以及心肌组织HE染色的特点,使用独立样本t检验统计分析两组大鼠左心室心肌纤维平均ADC值、FA值及螺旋角的差异。结果心脏三维整体观显示,两组大鼠心肌纤维由心外膜向心内膜均呈致密、规则的螺旋排布。乳头肌层面心肌纤维示踪图以及张量图显示正常组心肌纤维走行规则、排布均匀,心肌肥厚组左心室壁较正常组增厚,像素内的张量显示较正常组增加,心外膜向心内膜过渡的三层结构较正常组更明显;心肌肥厚组大鼠较正常组大鼠左心室心肌纤维平均ADC值下降(P<0.01),FA值上升(P<0.05),两组间均有统计学差异。心肌肥厚组大鼠左心室由心外膜至心内膜的平均螺旋角透壁范围较正常组增大(P<0.01),两组间均具有统计学差异。结论扩散张量成像及图像后处理技术可三维可视化定量综合评价大鼠心肌肥厚模型心肌纤维特性较正常大鼠的变化,为将来实现心肌纤维结构、力学、电生理特性的在体研究奠定基础。

牛病毒性腹泻二温式PCR检测方法的建立

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的5’端非编码区设计了1对可以扩增244bp BVDV某段基因序列的特异性引物,优化建立了BVD的二温式PCR快速检测方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法只对BVDV模板进行扩增,而对其他对照病毒的检测均为阴性;最低能检测到1pg牛病毒性腹泻病毒RNA。本研究所建立的BVD二温式PCR方法是一种快速、特异、敏感的检测方法。