双歧杆菌的完整肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞细胞骨架的影响

目的探讨双歧双歧杆菌的完整肽聚糖(WPG)对巨噬细胞细胞骨架的影响。方法首先分离培养昆明小鼠腹腔巨噬细胞,然后以WPG刺激巨噬细胞后,用荧光标记的鬼笔环肽染液染色,最后采用激光共聚焦显微镜技术检测巨噬细胞的细胞骨架。结果和对照组相比,WPG刺激巨噬细胞后,其胞内肌动蛋白减少且排列更加紊乱,同时胞膜荧光强度减弱,胞外放射状荧光物质减少,甚至消失。结论双歧双歧杆菌的WPG在激活巨噬细胞的过程中可影响其细胞骨架。

布地奈德/福莫特罗干粉剂联合孟鲁司特治疗咳嗽变异性哮喘的效果

目的观察布地奈德/福莫特罗干粉剂联合孟鲁司特治疗咳嗽变异性哮喘的临床疗效。方法选取哮喘门诊就诊的咳嗽变异性哮喘患者80例,分为单药组40例:布地奈德/福莫特罗干粉剂治疗,联合组40例:布地奈德/福莫特罗干粉剂联合孟鲁司特治疗,分别进行咳嗽症状、ACT、LCQ、临床疗效评估,检测血清IgE水平,并对结果进行分析。结果两组无脱漏者,治疗后与治疗前咳嗽症状、LCQ评分、IgE水平比较差异有统计学意义(P<0.05),但联合组治疗的缓解率较单药组提高(P<0.05)。分别与单药组治疗1、2个月后比较,联合组治疗相应时间后咳嗽症状、LCQ、IgE水平改变有显著差异(P<0.05)。同组治疗2个月与治疗1个月的改善率无明显差异,单药治疗1个月可获益最大。结论两药联合对改善患者症状效果更佳,从经济成本与治疗效益角度看,首先考虑单药吸入,当效果不佳时,可考虑加用孟鲁司特,经济条件良好者,可首先考虑两药联合。

双歧杆菌的完整肽聚糖对大鼠腹腔巨噬细胞ERK的影响

目的探索分叉双歧杆菌的完整肽聚糖(WPG)对大鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2的调控作用。方法以WPG刺激大鼠腹腔巨噬细胞或以PKC抑制剂Chelerythrine预先孵育巨噬细胞,再用WPG刺激巨噬细胞,最后用Western blot检测巨噬细胞ERK1/2的表达水平。结果未受WPG刺激的正常大鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2处于低活性状态,给予WPG刺激巨噬细胞,其磷酸化ERK1/2的蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01)。但经Chelerythrine预先孵育巨噬细胞后,其磷酸化ERK1/2的蛋白表达水平明显低于WPG刺激组(P<0.01)。结论分叉双歧杆菌的WPG可通过PKC激活巨噬细胞的ERK1/2。

双歧杆菌的完整肽聚糖对巨噬细胞AP-1的影响

目的探索信号途径ERK→AP-1在双歧杆菌的完整肽聚糖(WPG)激活巨噬细胞中的作用。方法以WPG刺激SD大鼠腹腔巨噬细胞,采用凝胶电泳迁移分析技术检测巨噬细胞AP-1的活性。结果WPG刺激组巨噬细胞AP-1的活性明显高于对照组(P<0.01);巨噬细胞经ERK抑制剂PD98059预孵后,其AP-1的活性显著低于WPG刺激组(P<0.01)。结论双歧杆菌的WPG可通过ERK→AP-1这一信号途径来活化巨噬细胞。

T-spot.TB在克罗恩病和肠结核鉴别诊断中的价值

目的探讨结核杆菌T细胞斑点试验(T-spot.TB)在克罗恩病和肠结核鉴别诊断中的价值。方法对北京大学深圳医院2010年1月至2012年8月收治的35例克罗恩病和37例肠结核患者进行T-spot.TB、糖类抗原125(CA125)测定,比较两种检测方法检测克罗恩病和肠结核的阳性率,并比较T-spot.TB和血CA125对克罗恩病和肠结核的鉴别诊断价值。结果肠结核组T-spot.TB、血CA125检测阳性率分别为91.9%(34/37)和78.4%(29/38),均显著高于克罗恩病组的8.6%(3/37)和21.6%(9/38)(P<0.05),T-spot.TB鉴别克罗恩病和肠结核的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值分别为9.19%、91.4%、91.7%、91.9%和91.4%,均高于血CA125检测。结论 T-spot.TB方便快捷,敏感性和特异性高,在克罗恩病和肠结核的鉴别诊断中具有重要价值。

FPTⅢ对哮喘大鼠气道平滑肌细胞分泌IL-6及Rantes的影响

目的观察FPTⅢ对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)分泌IL-6及Rantes的影响。方法建立大鼠哮喘模型,采用酶消化法培养ASMCs,并经免疫组织化学、免疫荧光鉴定。取第3代ASMCs,设哮喘组、对照组,各分成5个亚组:对照空白组(不加任何干预剂)、对照PBS组(加入PBS)、对照诱导组(加入10ng/ml IL-1β、TNF-α、IFN-γ混合液)、对照干预A组(加入10μM的FPTⅢ)、对照干预B组(加入混合物刺激物24h,再加入10μM的FPTⅢ);哮喘空白组、哮喘PBS组、哮喘诱导组、哮喘干预A组、哮喘干预B组,干预方式与对照组相同。采用ELISA法检测各组ASMCs分泌IL-6及Ra nte s水平。结果α-Ac tin经荧光染色后呈绿色荧光,哮喘空白组较对照空白组荧光强度减弱。哮喘干预A、B组ASMCs分泌IL-6、Rantes水平均明显低于哮喘空白组(均P<0.05),且抑制效应呈时间依赖性。FPTⅢ浓度达5~10μM时,抑制作用达到最大。结论 FPTⅢ干预可以使哮喘大鼠ASMCs分泌IL-6及Ra nte s减少,伴随细胞内α-Ac tin的变化,进一步导致细胞表型发生变化,为哮喘治疗提供新思路。

白藜芦醇对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜细胞因子表达的影响

目的探讨白藜芦醇(Resveratro)l对溃疡性结肠炎(UC)治疗的可能机制。方法采用葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate Sodium,DSS)制作UC小鼠模型,小鼠随机分4成组:正常对照(NC)组、模型(MD)组、低剂量(RLD)、高剂量(RHD)白藜芦醇治疗组。造模7d同时给予干预治疗,停用造模药物并后续治疗7d。记录分析疾病活动指数(DAI),14d后处死小鼠,取结肠行HE染色;利用实时荧光定量RT-PCR法检测IL-10、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表达,ELISA法测小鼠肠黏膜IL-10、TNF-α、IL-6和IL-1β蛋白水平。结果低、高剂量白藜芦醇治疗组小鼠第5～14天DAI明显低于模型组(P<0.05);模型组IL-10表达明显低于正常组(P<0.05),其TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA和蛋白表达则高于正常组(P<0.05);低、高剂量白藜芦醇治疗组结肠IL-10mR-NA表达和蛋白水平明显高于模型组(P<0.05),其TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA和蛋白水平则低于模型组(P<0.05);高剂量白藜芦醇治疗组IL-10mRNA表达和蛋白水平明显高于低剂量组(P<0.05),其TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA和蛋白水平则低于低剂量组(P<0.05)。结论白藜芦醇可以提高抗炎细胞因子IL-10的水平并降低致炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平,通过抗炎和降低肠道过度的免疫反应,对UC发挥治疗作用。

双歧杆菌抑制溃疡性结肠炎小鼠结肠氧化应激和NADPH氧化酶表达

目的:观察溃疡性结肠炎(UC)氧化应激及NADPH氧化酶表达的变化特点,探讨双歧杆菌对UC治疗的可能机制。方法:采用葡聚糖硫酸钠(DSS)制作UC小鼠模型,小鼠随机分成3组:正常对照(NC)组、模型(MD)组、双歧杆菌治疗(BT)组。造模同时给予干预治疗7d,停用造模药物后续治疗7d后处死小鼠,结肠组织HE染色;化学比色法测结肠SOD,GPH-Px,MPO和MDA;qRT-PCR测NADPH氧化酶p22phox和gp91phox亚单位mRNA的表达,westonblotting检测其蛋白水平表达并进行统计学分析。结果:MD组结肠SOD,GPH-Px明显低于NC组(P<0.05);MDA、MPO明显高于NC组(P<0.05);BT组结肠SOD,GPH-Px明显高于MD组(P<0.05);MDA、MPO明显低于MD组(P<0.05);MD组结肠组织p22phox和gp91phoxmRNA与蛋白表达明显高于NC组(P<0.05),BT组明显低于MD组(P<0.05)。结论:双歧杆菌抑制UC结肠的氧化应激水平并抑制NADPH氧化酶的表达,减轻了肠道炎症,延缓UC病情的发展、预防复发。

双歧杆菌的完整肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞缝隙链接的影响

目的探讨双歧杆菌的完整肽聚糖(WPG)对巨噬细胞缝隙连接介导的细胞间通讯(GJIC)的影响。方法首先分离培养昆明小鼠腹腔巨噬细胞,然后以WPG刺激巨噬细胞,再用脂荧光探针标记细胞,最后采用激光共聚焦显微镜结合激光漂白后荧光恢复技术检测反映GJIC变化的荧光恢复程度。结果和对照组相比,以WPG刺激巨噬细胞后,其GJIC的平均荧光恢复率明显增加(P<0.01)。结论双歧杆菌的WPG可提高巨噬细胞的缝隙连接介导的细胞间通讯。

双歧杆菌的完整肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞膜脂流动性的影响

目的探讨分叉双歧杆菌的完整肽聚糖(WPG)对巨噬细胞膜脂流动性的影响。方法首先分离培养昆明小鼠腹腔巨噬细胞,然后以WPG刺激巨噬细胞,再用细胞膜磷脂荧光探针标记细胞,最后采用激光共聚焦显微镜结合激光漂白后荧光恢复技术检测巨噬细胞的膜脂流动性。结果WPG刺激组反映小鼠腹腔巨噬细胞膜脂流动性的平均荧光恢复率明显高于对照组(P<0.01)。结论分叉双歧杆菌的完整肽聚糖可提高巨噬细胞膜脂流动性。

双歧杆菌感受态细胞的制备和电转化条件的研究

介绍目前常用的双歧杆菌感受态细胞制备方法，并系统研究影响双歧杆菌电转化效率的关键因素。通过研究，菌体在4oo为0.3-0. 5时收集以制备感受态细胞，制备好的感受态细胞应尽早用于电转化;最佳电场强度为12.5 kV/cm;转化后的细胞复苏培养2 h为佳。感受态细胞的转化效率可达103 CFU/μg DNA。

长双歧杆菌分泌型表达载体的构建及Tum-5基因的表达

目的构建能在双歧杆菌内稳定存在并高效分泌表达外源基因的长双歧杆菌质粒表达载体。方法以质粒p BAD/glll为基础,以双歧杆菌内源性阿拉伯糖苷酶的分泌性信号肽取代质粒原有的分泌性信号肽,并将双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因克隆入载体中,构建表达载体p BBADs。将人Tum-5基因克隆入载体中,构建质粒p BBADs-Tum-5,电转化长双歧杆菌NCC2705,L-阿拉伯糖诱导表达后,Western Blot鉴定基因表达。结果成功地构建了长双歧杆菌分泌型质粒表达载体,Tum-5基因在双歧杆菌内可以表达。结论构建的表达载体为双歧杆菌用于肿瘤靶向基因治疗奠定了基础。

双歧杆菌质粒聚合酶基因对质粒载体稳定性的影响

目的探讨双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因(Bifidobacterium plasmid polymerase,BPP)对人工构建的大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭质粒载体(shuttle vector)在长双歧杆菌中稳定性的影响。方法首先电转化质粒pBADs-A和pBADs-BPP至长双歧杆菌,培养鉴定后,接种含质粒pBADs-A和pBADs-BPP的双歧杆菌于AMP-和AMP+的MRS培养液中。厌氧培养后,将样品涂布于AMP+的MRS固体培养板上计数菌落数。结果相同条件下质粒pBADs-BPP组菌落数高于质粒pBADs-A组(P<0.05)。结论BPP可以增加质粒载体的稳定性。

携带hIL-12基因的长双歧杆菌的构建及对血管生成的影响

目的构建携带人白细胞介素12(h IL-12)基因的长双歧杆菌(Bifidobacterium longum,B.longum),观察其表达产物对鸡胚尿囊膜(Chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)血管生成的影响。方法以前期构建的表达载体p BBADs为基础,将h IL-12基因克隆入载体中,构建质粒p BBADs-h IL-12,电转化长双歧杆菌NCC2705,L-阿拉伯糖诱导表达后,ELISA法鉴定基因表达。原位摄影后分析照片,田氏法计数血管条数,运用IPP软件计算所选区域血管面积。各组数值经检验服从正态分布,采用单因素方差分析(Bonferroni法)检验。结果成功构建携带h IL-12基因的长双歧杆菌(BL-h IL-12),经过诱导后检测到目的蛋白的表达,诱导24h h IL-12表达水平最高(P<0.05),为最佳诱导时间。BL-h IL-12诱导组与其它组比较,血管数量及面积均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。BL-h IL-12未诱导组、普通双歧杆菌组、生理盐水组两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论携带h IL-12的转基因双歧杆菌其诱导表达产物对鸡胚尿囊膜新生血管数目有一定抑制作用。

淋巴细胞趋化因子在慢性阻塞性肺疾病患者外周血中的表达及其对CD4^＋CD8^＋T细胞亚群的影响

目的 探讨淋巴细胞趋化因子（lymphotactin,XCL1）对COPD患者外周血CD4^＋ T、CD8^＋T细胞亚群及有关炎症因子的影响及机制。方法 随机选取13例COPD 患者（急性加重期和稳定期）和13名健康人,分离外周血T淋巴细胞进行培养,经淋巴细胞趋化因子干预后,用流式细胞仪分别检测外周血中CD4^＋T、CD8^＋ T 细胞亚群变化及其表面Fas、FasL 表达,并用酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）分别检测血清及细胞培养上清液中的XCL1、IL-2表达水平。结果 AECOPD及稳定期患者外周血中的XCL1的表达均高于健康对照组（P 〈0.05）,AECOPD组又高于稳定期组患者（P 〈0.05）。COPD患者（包括急性发作期与稳定期）T细胞培养液中,XCL1干预组与未干预组相比,XCL1、CD4^＋-Fas、CD4^＋-FasL、CD8^＋-Fas、CD8^＋-FasL 表达增高（P 〈0.05）,CD4^＋/CD8^＋ 降低（P 〈0.05）,而IL-2 表达减少（P 〈0.05）。且XCL1 的表达与CD4^＋-Fas、CD4^＋-FasL、CD8^＋-Fas、CD8^＋-FasL的表达呈正相关,与IL-2的表达及CD4^＋/CD8^＋ 呈负相关。结论 XCL1参与了COPD的炎症过程,其参与炎症反应的机制可能是通过促进Fas、FasL的表达,导致CD4^＋T、CD8^＋ T细胞的凋亡增加,CD4^＋T/CD8^＋T比值下降,造成CD4^＋/CD8^＋ 比例失衡,XCL1还可引起IL-2水平降低,间接导致机体免疫功能紊乱或低下,可能是导致COPD炎症持续存在的重要机制。

双歧杆菌的完整肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞线粒体膜电位的影响

为探讨双歧杆菌的完整肽聚糖(WPG)对小鼠腹腔巨噬细胞线粒体膜电位的影响,首先分离培养昆明小鼠腹腔巨噬细胞,然后以WPG刺激巨噬细胞,用四甲基罗丹明乙酯(TMRE)标记线粒体膜电位,最后用激光共聚焦显微镜检测巨噬细胞内荧光强度的变化。和对照组相比,WPG刺激巨噬细胞后,巨噬细胞内反映线粒体膜电位的荧光强度明显增强。双歧杆菌的WPG在激活巨噬细胞的过程中可提高其线粒体膜电位。

双歧杆菌的完整肽聚糖对大鼠腹腔巨噬细胞NF—κB的调控

双歧杆菌定植于人体肠道内，难维持肠道的微生态平衡和人体的健康起重要作用。完整肽聚糖（whole peptidoglycan,WPG）是双歧杆菌细胞壁中的多糖，能激活巨噬细胞，增强其吞噬能力，提高其能量代谢水平以及细胞毒功能。此外，WPG也能促使巨噬细胞分泌多量的IL-1、