猪细小病毒VP2蛋白重组杆状病毒的构建表达与鉴定

为构建一种能够用于开发猪细小病毒病毒样颗粒疫苗的猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒。根据GeneBank数据库中的猪细小病毒全基因组序列设计并合成了1对能扩增VP2基因的引物,采用PCR扩增猪细小病毒BJ-2株的VP2基因,并将其克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,获得阳性质粒pFastBac-PPVVP2;测序后将该质粒转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,获得含有VP2基因的重组杆状病毒质粒Bacmid-PPVVP2;最后将获得的重组杆状病毒质粒Bacmid-PPVVP2转染Sf9昆虫细胞,并成功拯救了能稳定表达猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒Bacmid-PPV VP2。结果发现,该重组病毒可用于稳定表达猪细小病毒VP2蛋白,并且表达的VP2蛋白可在体外自我组装形成病毒样颗粒,电镜观测其颗粒大小与猪细小病毒全病毒大小类似,且形成的病毒样颗粒与全病毒一样具有豚鼠红细胞凝集作用,凝集效价可达1∶2048。故构建的表达猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒为研制猪细小病毒的基因工程亚单位疫苗奠定了基础。

高钙高蛋白日粮对海兰褐蛋鸡肝脏的影响

【目的】探讨高钙高蛋白日粮对海兰褐蛋鸡肝脏的影响。【方法】将80只40日龄海兰褐蛋鸡随机均分为4组,1组饲喂基础日粮(对照组),2、3和4组分别饲喂高钙、高蛋白和高钙+高蛋白饲料(试验组)。试验第95天,各组随机取6只鸡采集血清,检测生化指标,随后扑杀,采集肝脏组织检测黄嘌呤氧化酶活性(XOD)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),并将肝脏包埋切片进行HE和油红染色。【结果】各试验组与对照组相比,血清尿酸水平和肝中XOD活性升高;天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶升高,2、4组的总蛋白、白蛋白和球蛋白升高;总胆红素、直接胆红素和间接胆红素降低;高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和胆固醇降低,甘油三酯升高;肝中IL-1、IL-6和TNF-α升高,而高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、胆固醇、甘油三酯与对照组相近。显微镜下观察发现:肝内有坏死灶和炎性细胞浸润,肝细胞索排列紊乱,肝细胞空泡变性,少数鸡肝细胞内有脂肪滴。【结论】饲喂高钙和/或高蛋白饲料使鸡肝的结构和功能不同程度受损,高钙+高蛋白组受损更为严重。

鹅星状病毒重组Capsid蛋白亚单位疫苗的免疫效果

为了研究鹅星状病毒重组Capsid蛋白亚单位疫苗对种鹅的免疫效果,试验用鹅星状病毒重组Capsid蛋白亚单位疫苗对种鹅进行接种,并对种鹅所产蛋孵出的雏鹅进行攻毒,采用琼脂扩散试验法检测鹅血清中GoAs抗体的水平,记录雏鹅攻毒结果。结果显示:三批疫苗免疫28 d后试验组种鹅均有抗体产生;对照组种鹅的抗体均为阴性。试验组雏鹅攻毒后一切正常,存活率100%,无不良临床症状。对照组雏鹅攻毒后第3天精神沉郁、厌食、站立不稳、离群、排稀灰白色或黄绿色粪便,存活率50%,死亡鹅剖检可见关节肿大,关节内和内脏表面有石灰样尿酸盐沉积,肾脏肿大和充血,脾脏出血严重,有灰白色坏死灶。研究结果表明鹅星状病毒重组Capsid蛋白亚单位疫苗免疫效果良好,能有效预防鹅星状病毒的感染。

高蛋白饲粮致雏鹅痛风的临床病理学研究

【目的】研究高蛋白饲粮对1～14日龄雏鹅生长性能、血液生化指标及肝脏、肾脏组织的影响,并对其痛风致病机理进行初步探讨。【方法】选用体质量相近的1日龄雏雁鹅72只,随机分成3组:A、B和C组分别饲喂粗蛋白质量分数为16%、20%和24%的饲粮,每组3个重复,每个重复8只。【结果】A组鹅的生长性能高于B、C组;血清总蛋白、白蛋白和球蛋白的水平随着饲料蛋白水平增加而升高,但差异不显著;C组血清尿酸、丙氨酸氨基转移酶、尿素氮、乳酸脱氢酶的水平显著高于A、B组,而C组总胆红素水平显著低于A、B组。C组肝脏组织中的白细胞介素–1β、白细胞介素–8、黄嘌呤氧化酶活性和肾脏中肿瘤坏死因子–α活性显著高于A、B组。A组肝脏、肾脏组织正常;B组肝脏组织有轻微炎性细胞,肾脏组织正常;C组肝脏细胞出现坏死、水肿和炎性浸润,肾小管空泡变性,肾小球萎缩。C组鹅出现痛风症状。【结论】在饲养条件相同的情况下,饲喂粗蛋白质量分数为24%的饲粮影响雏鹅的生长性能和血清尿酸等部分血液生化指标,引起肝脏和肾脏组织一定程度的损伤以及输尿管有尿酸盐沉积等痛风变化。

16种中药水提物和醇提物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

为了筛选治疗禽痛风病的中药,试验对16种中药进行了水提和醇提,并检测提取物对黄嘌呤氧化酶(XOD)活性的体外抑制作用,采用紫外分光光度法确定反应体系的检测波长、酶浓度、检测时间,并检测同一水提和醇提条件下的16种中药提取物对XOD的抑制率,测定每种中药的半数抑制浓度(IC_(50))。结果表明:检测波长为292 nm,酶浓度为34.0μg/mL,检测时间为第1,2,3,4,5,6,7,8,9,10分钟;同一种中药的水提物和醇提物对XOD的抑制作用存在一定差异;中药水提物中抑制效果较好的有黄柏、土茯苓、槐花、高良姜、山慈菇,其IC_(50)分别为12.60,15.98,19.66,29.65,31.68 mg/mL;中药醇提物中抑制效果较好的有土茯苓、瞿麦、槐花、牛膝、山慈菇,其IC_(50)分别为14.89,16.99,23.44,29.48,29.61 mg/mL。说明同一种中药水提物和醇提物对XOD抑制作用存在一定差异。

重组鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白在多联疫苗中的免疫效果评价

旨在研究重组鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白在多联疫苗中的免疫效果。将50羽21日龄SPF鸡平均分为5组,分别用新流法(新城疫ND-禽流感H9-传染性法氏囊IBD)三联疫苗进行免疫,1组为非免疫对照组,2组免疫剂量0.05 mL,3组免疫剂量0.1 mL,4组免疫剂量0.2 mL,5组免疫剂量0.3。免疫后第21天采血,检测ND/H9血凝抑制抗体和IBD琼脂免疫扩散抗体。并用传染性法氏囊病毒强毒BC6/85株F 1代点眼攻毒,攻毒剂量为每只0.1 mL,观察96 h后剖检。结果表明,免疫后21 d,第5组血清中ND/H9 HI抗体分别为8.1log 2和9.0log 2,IBD抗体4个试验组均显著高于对照组(P<0.05),5组显著高于2组。1组攻毒鸡全部发病,法氏囊外观发黄,呈胶冻样,囊内剖开有黏液,部分肉眼可见出血。1组未攻毒对照和免疫组,均未见异常,免疫攻毒保护率为100%。结果表明,重组鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白在三联疫苗中免疫剂量为每只0.05 mL,具有良好的免疫保护力,且不影响疫苗中其他抗原的免疫效果。

猪细小病毒基因工程亚单位疫苗免疫程序制定

取实验室试制的安全性符合规定的3批次猪细小病毒杆状病毒载体灭活疫苗(rPP03株)分别免疫5~6月龄后备母猪、4~6月龄种公猪和经产母猪,免疫后不同时间采血,通过血凝抑制试验检测猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)血清抗体,观察抗体消长规律。根据试验结果确定该疫苗的免疫持续期和免疫程序:后备母猪5~6月龄免疫1次,2~3周后加强免疫一次;经产母猪于配种前1个月免疫一次;种公猪每6个月免疫一次,免疫持续期为6个月。

高钙高蛋白日粮对海兰褐蛋鸡肾脏结构与功能的影响

旨在探讨高钙高蛋白日粮对海兰褐蛋鸡肾脏结构和功能的影响。将80只40日龄海兰褐蛋鸡随机均分为4组,对照组(组1)饲喂基础日粮(钙1.0%、粗蛋白17.5%),组2饲喂高钙(钙4.5%),组3饲喂高蛋白(粗蛋白27.0%),组4饲喂高钙高蛋白(钙4.5%、粗蛋白27.0%)饲料,试验期95天。第95 d各组随机抽取6羽,采集血清用全自动生化分析仪检测血清尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(CR)。采血后扑杀,解剖并观察肾的病理变化及组织学变化,ELISA法检测肾脏中炎性因子白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果在试验第95天,组2和组3鸡的体重显著低于对照组(P<0.05),血清BUN值极显著高于对照组(P<0.01);组4鸡血清UA和BUN显著高于对照组(P<0.05),血清CR极显著高于对照组(P<0.01)。部分试验组鸡肾脏肿胀,内有白色糊状物。组织学观察发现肾小球炎性肿胀或萎缩,肾小管上皮细胞变性、坏死并脱离基底膜。3个试验组肾组织中的IL-1均极显著高于对照组(P<0.01)、IL-6显著高于对照组(P<0.05);组2、4肾组织中的TNF-α显著高于对照组(P<0.05),组3TNF-α极显著高于对照组(P<0.01)。结论:饲喂高钙高蛋白饲料会对鸡肾的结构和功能产生不同程度损伤。

一起皖西白鹅内脏型合并关节型痛风的病例报告

本文报道了一起雏鹅痛风病例。对患鹅进行发病情况调查、临床症状观察、病理解剖和实验室检查,并分析了饲料成分。结果发现,雏鹅共有2300只,5日龄起发病,死亡率19.6%。患鹅食欲下降或废绝,排白色稀便,跛行甚至腿瘫,跗关节肿大,严重者死亡。病理剖检发现患鹅关节腔、内脏表面、肾脏和输尿管内有白色尿酸盐沉积。饲料粗蛋白含量为20.5%。与同群未发生临床痛风鹅相比,患鹅血清尿酸、尿素氮和肌酐显著升高（P〈0.05）。患鹅肝组织有坏死灶和炎性浸润,肝细胞索紊乱,肝细胞脂肪变性;肾组织内可见许多结晶,肾小管上皮细胞坏死、空泡变性、脱落,肾小球萎缩;心肌结构紊乱、有炎性浸润,心肌纤维间距增大。未发生临床痛风鹅的内脏也发生较轻微的病变,血清尿酸值较高,处于亚临床状态。结合发病情况、临床症状、病理剖解和实验室检查,判断该起鹅痛风是由饲喂高蛋白饲料,同时缺乏青绿饲料引起的内脏型痛风合并关节型痛风。