TLR4、p-Akt在哮喘大鼠气道平滑肌迁移的作用及小青龙汤对其影响

目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)及p-Akt在哮喘发病中的作用及小青龙汤对气道平滑肌迁移的影响。方法 SPF级♂大鼠40只随机分为:正常对照组(A)、哮喘4周组(B)、哮喘8周组(C)、小青龙汤4周组(D)和小青龙汤8周组(E),每组8只。以卵清白蛋白(OVA)致敏与激发建立哮喘大鼠气道重塑模型。测定气道阻力;观察气道壁嗜酸性粒细胞侵润情况;图像分析软件测定支气管管壁面积、平滑肌面积和平滑肌至上皮下基底膜距离;免疫组织化学方法检测TLR4、p-Akt蛋白表达。结果 B组、C组、D组和E组大鼠的WAt/Pi、WAm/Pi较正常对照组均增加(P<0.01),间距/Pi减小(P<0.01);B组和C组大鼠的WAt/Pi高于E组,间距/Pi则较两组明显缩短(P<0.05);TLR4在B组和C组气道平滑肌上呈阳性或强阳性表达,表达量高于A组(P<0.01),C组亦高于B组(P<0.05),E组的表达量亦低于C组和D组(P<0.01)。p-Akt在B组、C组及D组的表达均高于A组(P<0.01),D组亦高于B组(P<0.05),E组低于B组和D组,与D组相比亦降低(P<0.05)。结论 TLR4和p-Akt参与哮喘气道平滑肌的迁移,小青龙汤可能通过抑制TLR4和p-Akt的表达在哮喘气道重塑方面发挥一定的作用。

雷公藤对豚鼠哮喘模型核因子-κB表达的作用

目的 探讨雷公藤对核因子 κB(NF κB)在豚鼠哮喘模型中表达的影响。方法 豚鼠用 10 %卵白蛋白 (OA)溶液1ml腹腔注射致敏 ,2wk后用 1%OA溶液超声雾化吸入致其哮喘发作 ,每日 1次 ,共 1wk ;测定肺功能并观察气道壁嗜酸性粒细胞 (EOS)浸润情况 ;用免疫组织化学染色方法观察NF κB在豚鼠肺组织中的表达变化。结果 NF κB主要表达在气道壁内的细胞 ,对照组、模型组、雷公藤内酯醇 ( 10 0mg·kg-1ip)组的胞核阳性的细胞数占气道上皮细胞数百分比分别为 14 3 %± 2 6%、3 2 5 %± 5 8%和 19 7%±2 1%。结论 雷公藤内酯醇能显著抑制哮喘豚鼠气道壁内细胞NF κB的表达 ,可能是雷公藤治疗哮喘的作用机制之一。

脂多糖对哮喘大鼠气道炎症、气道重塑及TLR4表达的影响

目的:不同浓度脂多糖(LPS)干预哮喘大鼠,探讨其对气道炎症,气道重塑及Toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平的影响。方法:SPF级SD大鼠24只随机分为4组(n=6):正常对照组、低浓度LPS组、高浓度LPS组、哮喘组。以卵清蛋白(OVA)致敏与激发建立大鼠哮喘模型。HE染色观察肺组织病理改变;气道壁嗜酸性粒细胞(EOS)计数观察炎症细胞浸润情况;测定气道阻力;图像分析软件测定气道壁厚度;RT-PCR方法检测大鼠气道平滑肌TLR4mRNA表达水平。结果:哮喘组、低浓度LPS组及高浓度LPS组气道阻力、气道壁EOS计数及气道壁厚度均较正常对照组显著增加(P<0.01),其中高浓度LPS组上述指标较哮喘组及低浓度LPS组均显著降低(P<0.05);低浓度LPS组、高浓度LPS组大鼠气道平滑肌TLR4mRNA表达水平均显著高于哮喘组(P<0.01),其中高浓度LPS组表达水平亦明显高于低浓度LPS组(P<0.05)。结论:TLR4在哮喘气道炎症及气道重塑中起重要作用,LPS通过激活TLR4在哮喘气道炎症及气道重塑的发病过程中可能发挥双向调控作用。

黄芪对豚鼠哮喘模型血红素氧合酶-1表达的影响

用免疫组织化学染色方法观察血红素氧合酶 1(HO 1)在哮喘豚鼠肺组织中的表达变化 ,测定全血一氧化碳血红蛋白 (COHb)的百分比含量并观察气道壁嗜酸性粒细胞 (EOS)浸润情况 ,以探讨黄芪对哮喘豚鼠HO 1表达的影响。发现HO 1主要表达在气道上皮细胞 ,哮喘各组HO 1的表达水平均显著高于正常组 (P <0 0 1)。黄芪治疗后HO 1的表达水平显著低于哮喘各组 (P <0 0 1)。可见黄芪能显著抑制哮喘豚鼠气道上皮细胞HO 1的表达 ,提示黄芪抑制细胞HO 1的表达可能是黄芪治疗哮喘的作用机制之一。

Musashi2在肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨干细胞标志物Musashi2在肺癌中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR法检测Musashi2 mRNA在112例肺癌纤支镜活检组织和18例良性肺病变纤支镜活检组织中表达的差异;随后利用免疫组化法验证Musashi2蛋白在50例肺癌组织、32例良性病变肺组织和18例癌旁正常肺组织间表达的差异,并分析Musashi2 mRNA和蛋白表达与肺癌临床病理参数的关系。结果 RT-PCR法检测结果显示,Musashi2 mRNA在肺癌组织中的表达显著高于良性肺病变肺组织(P<0.05)。免疫组化法检测发现,Musashi2蛋白在肺癌组织中的表达显著高于良性病变肺组织和癌旁正常肺组织(P<0.05),与mRNA表达相一致。肺癌组织中Musashi2 mRNA和蛋白的表达与患者年龄、性别、淋巴结转移、TNM分期和肿瘤分化程度均无关。Musashi2 mRNA在肺癌中的表达与组织病理类型相关,小细胞肺癌Musashi2 mRNA的表达显著高于肺鳞癌(P<0.05)。结论Musashi2 mRNA和蛋白在肺癌中高表达,可能参与了肺癌的发生发展。

黄芪对过敏性哮喘豚鼠核因子-κB表达的影响

目的 :探讨黄芪对过敏性豚鼠哮喘模型中核因子 - κB(nuclear factor- kappa B,NF- κB)表达的影响。方法 :将 30只豚鼠随机分为 3组 (正常组、哮喘组、治疗组 ) ,每 10只。用 10 %卵清蛋白 (OVA)溶液 1ml腹腔注射致敏 ,2周后哮喘组及治疗组用 1% OVA溶液超声雾化吸入致其哮喘发作 ,1次 / d,共 2周 ;正常组则喷入生理盐水。治疗组每次诱喘后给予腹腔注射黄芪注射液 5 g/ kg,1次 / d,共 2周。然后分别测定 3组肺功能并观察气道壁嗜酸性粒细胞 (EOS)浸润情况 ;用免疫组织化学染色方法观察 NF- κB在豚鼠肺组织中的表达变化。结果 :NF- к B主要表达在气道壁内的细胞中 ,3组胞核阳性的细胞数占气道上皮细胞数百分比分别为 (14 .3± 2 .6 ) %、(32 .5± 5 .8) %和 (2 0 .4± 3.3) %。哮喘组 NF- к B胞核阳性的细胞比例显著高于正常组 (P <0 .0 1) ,治疗组 NF- к B胞核阳性的细胞比例显著低于哮喘组 (P <0 .0 1)。结论 :黄芪能显著抑制过敏性哮喘豚鼠气道壁内细胞 NF- κB的表达 ,提示黄芪抑制 NF-

Nanog和CD44蛋白在肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨Nanog和CD44蛋白在肺癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化检测50例肺癌组织、32例良性病变肺组织和18例癌旁正常肺组织中Nanog和CD44蛋白的表达,并分析二者与肺癌临床病理因素的关系。结果:Nanog在肺癌中的表达显著高于良性病变肺组织和正常肺组织(P<0.05);CD44在肺癌、良性病变肺组织和正常肺组织中的表达无统计学差异(P>0.05);Nanog和CD44在肺鳞癌中的表达显著高于肺腺癌和小细胞肺癌(P<0.05);Nanog和CD44在肺癌中的表达与淋巴结转移相关(P<0.05),与肺癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期和肿瘤分化无关(P>0.05)。Nanog和CD44在肺癌中的表达呈正相关(r=0.564,P<0.05)。结论:Nanog和CD44蛋白可能共同参与了肺癌的发生发展,Nanog蛋白是一潜在的肺癌诊断标志物及治疗靶点。

核因子-κB对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡及TGF-β_1表达的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、凋亡和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:体外培养ASMCs,以肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)作为工具药,将ASMCs分为对照组、TNF-α组和TNF-α+PDTC组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1mRNA表达,Westernblotting检测NF-κB、TGF-β1的表达,免疫细胞化学染色法检测PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位,四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定ASMCs增殖,AnnexinV/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡。结果:(1)TNF-α组ASMCs的NF-κB活性显著高于对照组(P<0.01),TNF-α+PDTC组NF-κB活性显著低于TNF-α组(P<0.01)。(2)TNF-α组ASMCs增殖显著高于对照组(P<0.01),TNF-α+PDTC组的增殖反应显著低于TNF-α组(P<0.01);TNF-α+PDTC组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P<0.01)。(3)TNF-α组ASMCs的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.01),TNF-α+PDTC组的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著低于TNF-α组(P<0.01)。(4)TNF-α组ASMCs的TGF-β1的mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α+PDTC组(P<0.01)。结论:NF-κB活化可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β的表达和分泌。

雷公藤对哮喘大鼠气道重构及磷脂酰肌醇3激酶表达的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇对哮喘气道重构及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)表达的影响。方法:将40只SD大鼠随机分为5组(n=8):A组(正常对照组);B组(哮喘4周组);C组(哮喘6周组);D组(给药4周组);E组(给药6周组)。测定气道反应性并观察气道壁嗜酸性粒细胞浸润;图像分析软件测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数量;免疫组织化学染色、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3K蛋白及mRNA表达。结果:①B组、C组PI3Kp85α的蛋白及mRNA表达水平显著高于A组(P均<0.01),E组上述指标较B组、C组、D组均显著降低(P<0.01、P<0.01、P<0.05);②B组及C组支气管壁厚度、支气管壁平滑肌厚度、支气管壁平滑肌细胞核数量均较A组明显增加(P均<0.01),而E组上述指标较B组、C组、D组均显著降低(P均<0.01);③B组、C组的气道反应性均高于A组(P均<0.01),E组较B组、C组、D组均显著降低(P<0.01、P<0.01、P<0.05)。结论:气道平滑肌增生是气道重构的一个显著特征,PI3K可能在此起促进作用。雷公藤内酯醇可能通过下调PI3K的表达而减轻哮喘气道高反应性及抑制气道平滑肌增生,对哮喘气道重构有一定治疗作用。

雾化吸入雷公藤内酯醇对哮喘大鼠气道平滑肌增生及NF-κB、Bcl-2表达的影响

目的：探讨雷公藤内酯醇对哮喘气道重构及核因子-kappaB（NF-κB）、Bcl-2表达的影响。方法：将40只SD大鼠随机分为5组（n=8）：正常对照组（A组）;哮喘4周组（B组）;哮喘6周组（C组）;治疗4周组（D组）;治疗6周组（E组）。测定气道反应性并观察气道壁嗜酸性粒细胞浸润;图像分析软件测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数量;免疫组织化学染色、Western印迹法检测PCNA、NF-κB、Bcl-2蛋白的表达,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测Bcl-2mRNA表达。结果：①B组、C组NF-κB的蛋白表达量显著高于A组（P均〈0.01）,E组上述指标较B组、C组、D组均显著降低（P〈0.01、P〈0.01、P〈0.05）;②B组、C组Bcl-2蛋白及mRNA表达水平显著高于A组（P〈0.01）;E组蛋白表达量较B组、C组、D周组均显著降低（依次为P〈0.05、P〈0.01、P〈0.01）,mRNA表达水平与上述各组比较亦均显著降低（P〈0.01）,E组蛋白及mRNA表达水平与A组相比仍较高（依次为P〈0.05、P〈0.01）;③B组、C组PCNA的蛋白表达量明显高于A组（P〈0.01）;④B组及C组支气管壁厚度、支气管壁平滑肌厚度、支气管壁平滑肌细胞核数量均较A组明显增加（P〈0.01）,而E组上述指标较B组、C组、D组均显著降低（P〈0.01）;⑤B组、C组的气道反应性均高于A组（P均〈0.01）,E组较B组、C组、D组均显著降低（P〈0.01、P〈0.01、P〈0.05）。结论：哮喘气道平滑肌增生与气道平滑肌细胞（ASMCs）凋亡不足相关。NF-κB可能通过抑制ASMCs凋亡,参与哮喘气道高反应性及气道重构过程。雷公藤内酯醇可能通过下调NF-κB而抑制Bcl-2的表达,从而促进ASMCs凋亡、抑制气道平滑肌增生。

氯离子通道阻断剂对大鼠低氧性肺动脉高压的影响

目的:探讨氯离子通道阻断剂三苯氧胺(tamoxifen,TAM)对大鼠低氧性肺动脉高压的治疗效果。方法:雄性Wistar大鼠96只,随机分为:(1)治疗组(缺氧+三苯氧胺,H/Q):大鼠在常压缺氧(10%,每日8 h)箱内饲养,缺氧前3 d开始灌胃三苯氧胺0.4 mg.kg-1.d-1,每日1次;(2)缺氧组(H组):每日给予相等量的生理盐水,余同治疗组;(3)正常对照组(C组)。测定各组大鼠d 4、7、14、21右心室/(左心室+室间隔)厚度,多导生理记录仪记录肺动脉平均压(mPAP),图像分析仪测定血管管壁面积占管总面积的百分比(WA/TA)和血管管腔面积占管总面积的百分比(VA/TA)。结果:缺氧组d 7mPAP开始升高,d 21达高峰,治疗组同时间点明显低于缺氧组;缺氧组RV/(LV+S)d 14开始上升,d 21达高峰,治疗组同时间点明显低于缺氧组;缺氧组d 21的血管管壁面积占管总面积的百分比(WA/TA)显著高于d 21治疗组(P<0.05)。而缺氧组d 21的血管管腔面积占管总面积的百分比(VA/TA)显著低于d 21治疗组(P<0.05)。结论:氯离子通道阻断剂三苯氧胺可降低缺氧所致大鼠肺动脉压升高、改善右心室肥厚及肺小动脉增厚,对低氧性肺动脉高压有一定的治疗作用。

豚鼠实验性支气管哮喘时支气管肺泡灌洗液及血浆中IL-8水平的检测

目的 :探讨IL - 8在哮喘气道炎症中的作用。方法 :将 2 0只豚鼠随机分为 2组 :①哮喘组 (n =10 ) :用卵蛋白雾化诱导哮喘模型 ;②正常对照组 (n =10 )。用酶联免疫吸附试验 (ELISA)测血浆和支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL - 8水平 ,用呼吸生理学方法观察豚鼠气道反应性。结果 :①哮喘组BALF中IL - 8水平显著高于正常对照组 (P <0 0 1) ;②哮喘组PC2 0 值显著低于正常对照组 (P <0 0 1) ;③BALF中IL - 8水平与中性粒细胞的百分比和嗜酸性粒细胞的百分比均呈显著正相关 (r =0 6 5、0 6 8,P <0 0 1) ,与PC2 0 值呈显著负相关 (r =- 0 4 8,P <0 0 1)。结论 :实验性哮喘时IL - 8水平增高 ,后者可能参与气道炎症及气道高反应性过程。

磷脂酰肌醇3激酶促进支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)在支气管哮喘大鼠气道重构中的作用。方法将24只SD大鼠随机分为3组:正常对照组,哮喘4周组和6周组,每组8只。测定气道反应性并观察气道壁嗜酸性粒细胞的浸润情况;图像分析软件测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数量;用免疫组织化学染色方法检测PI3K蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PI3KmRNA表达。结果PI3K P85α主要在气道上皮细胞、气道平滑肌细胞表达。哮喘4周和6周组PI3K P85α蛋白及mRNA表达显著高于对照组(P<0.01),且6周组高于4周组(P<0.05,P<0.01);哮喘4周和6周组支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度及平滑肌细胞核数量均较对照组明显增加(P<0.01),且6周组高于4周组(P<0.01);哮喘4周和6周组的气道反应性均高于对照组(P<0.01),且6周组高于4周组(P<0.05)。结论PI3K信号通路可能通过促进气道平滑肌细胞增殖参与哮喘气道高反应性及气道重构过程。

豚鼠哮喘模型血红素氧合酶-1表达的研究

探讨血红素氧合酶 - 1(HO- 1)在豚鼠哮喘模型中的表达特点。将 2 4只豚鼠随机分为 4组 ,每组 6只 :1正常对照组 (A组 ) ;2哮喘即刻激发组 (B组 ) ;3哮喘发作 1周组 (C组 ) ;4哮喘发作 2周组 (D组 )。测定全血一氧化碳血红蛋白 (COHb)的百分比含量并观察气道壁嗜酸性粒细胞 (EOS)浸润情况 ;用免疫组织化学染色方法观察 HO- 1在豚鼠哮喘模型肺组织中的表达特点。发现 HO- 1主要表达在气道上皮细胞 ,各组 HO- 1阳性表达的平均吸光度分别为 0 .0 32±0 .0 0 4、 0 .112± 0 .0 11、 0 .12 3± 0 .0 11和 0 .135± 0 .0 12。哮喘各组 (B、C、D组 ) HO- 1的表达水平均显著高于 A组 (P<0 .0 1)。HO- 1的表达水平与全血 COHb的百分比含量及气道壁 EOS计数均呈显著正相关 (分别为 r=0 .88,P<0 .0 0 1和 r=0 .86 ,P<0 .0 0 1)。结果表明哮喘豚鼠气道上皮细胞 HO- 1的表达水平显著增加 ,提示 HO-

哮喘患者外周血单核细胞血红素氧合酶-1表达水平的研究

目的 :探讨血红素氧合酶 1(HO 1)在哮喘患者外周血单核细胞 (PBMC)的表达及与肺通气功能的关系。方法 :应用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应技术分析 18例哮喘患者PBMC的HO 1蛋白及mRNA水平的表达 ,测定全血一氧化碳血红蛋白 (COHb)的百分比含量、血清总IgE含量、肺通气功能 ,并与 18名健康正常者的结果进行比较。结果 :哮喘组PBMC中HO 1表达阳性的细胞百分比 4 1.7%± 7.4 4 %与正常对照组 10 .5 %± 4 .36 %比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,哮喘组PBMCHO 1mRNA表达的平均吸光度值 (2 6 .0 5± 4 .14 )与正常对照组(10 .82± 4 .2 6 )比较 ,差异亦有显著性 (P <0 .0 1) ,HO 1染色阳性细胞的百分比与FEV1占预计值 %、PEFR和MEFR50 % 均呈显著负相关 (r值分别为 - 0 .89,- 0 .5 6 ,- 0 .5 1,均P <0 .0 1) ,与全血COHb的百分比含量及血清总IgE含量呈显著正相关 (r值分别为 0 .80 ,0 .4 8,均P <0 .0 5 )。HO 1mRNA的表达水平与 1s用力呼气容积(FEV1)占预计值 %、顶峰呼气流速 (PEFR)和 5 0 %肺活量时的最大呼气流速 (MEFR50 % )均呈显著负相关 (r值分别为 - 0 .89,- 0 .6 5 ,- 0 .6 7,均P <0 .0 1) ,与全血COHb的百分比含量和血清总IgE含量呈显著正相关 (r分别为0 .85和 0 .6 2 ,均P <0 .0 1)。结论 :?

雷公藤对豚鼠哮喘模型血红素氧合酶-1活性的作用研究

目的:探讨雷公藤对血红素氧合酶-1(HO-1)在豚鼠哮喘模型中表达的影响。方法:将18只豚鼠随机分为3组,每组6只:(1)正常组;(2)模型组:用10%卵清蛋白(()VA)溶液1 ml 腹腔注射致敏,2周后用1%OVA 溶液超声雾化吸入致其哮喘发作(简称诱喘),每日1次,共1周;(3)治疗组:诱喘同 B 组,每日1次,每次诱喘后给予腹腔注射雷公藤内酯醇100 μg/kg,共1周。测定全血一氧化碳血红蛋白(COHb)的百分比含量,并观察气道壁嗜酸性粒细胞(EOS)浸润情况;用免疫组织化学染色方法观察 HO-1在豚鼠肺组织中的表达变化。结果:HO-1主要表达在气道上皮细胞,3组(正常组、模型组和治疗组)HO-1阳性表达的平均吸光度(OD 值)分别为0.032±0.004、0.123±0.011和0.082±0.009。模型组 HO-1的表达水平显著高于正常组(P<0.01),治疗组 HO-1表达水平显著低于模型组(P<0.01)。结论:雷公藤内酯醇能显著抑制哮喘豚鼠气道上皮细胞 HO-1的表达,提示雷公藤抑制 HO-1的表达可能是雷公藤治疗哮喘的作用机制之一。

加强教学型医学院校学生科研创新能力培养的探索

21世纪是知识经济与信息的时代,更是科学技术快速发展和全面创新的时代。高等教育要承担起培养创新型人才的历史使命和社会责任,通过分析教学型医学院校对学生科研创新能力培养的现状,结合所在院校实际提出相应的措施及对策,经过一系列探索、实践与研究,将有利于促进学校教学体制、教学方法和教学制度的改革,并为同类医学院校提供可借鉴的参考模式。