抗人白介素6受体单抗的制备和鉴定

利用重组人可溶性ＩＬ－６受体免疫小鼠后，制备了两株抗人ＩＬ－６Ｒ的单克隆抗体１７６／Ｂ６和１５１／Ｈ１２。两者分别识别ＩＬ－６Ｒ胞外肽段的近膜区和远膜区。免疫印迹分析表明，两株单抗均能够特异地结合天然的膜ＩＬ－６Ｒ蛋白，然而都不能阻断ＩＬ－６Ｒ的生物功能。

界面电泳法测胶体电动电势实验改进

分析了界面电泳法测量氢氧化铁胶体电动电势实验中胶体溶液电导率和电位梯度对实验的影响,给出了优化的实验条件。讨论了采用硫酸纸作为胶体溶液渗析用半透膜的可行性和优化的渗析方法。通过上述改进,实现了在一个实验课时内可以完成该实验并获得很好的实验结果和教学效果。

人白介素6受体基因在痘苗病毒载体系统中的表达

人ＩＬ－６受体是一个在各种细胞上广泛表达的跨膜糖蛋白分子，是ＩＬ－６发挥细胞效应所必需的。本文通过将ＩＬ－６ＲｃＤＮＡ重组到痘苗病毒的ＴＫ基因中构建成重组痘苗病毒ＶＩＬ６Ｒ。细胞原位杂交和ＡＰＡＡＰ染色结果表明，感染ＶＩＬ６Ｒ后的Ｖｅｒｏ细胞中，ＩＬ－６Ｒ在ｍＲＮＡ和蛋白水平上均呈现较强的表达。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析所表达的分子量为８０ｋＤ，表明所表达的产物是糖基化的。ＩＬ－６结合试验表明，表达的膜ＩＬ－６Ｒ能够结合ｒＩＬ－６，说明它是有功能的。利用ＶＩＬ６Ｒ免疫小鼠后，能够刺激较强的抗体产生。从而为进一步研究ＩＬ－６Ｒ的信号传导和构效关系提供了基础。

人可溶性IL－6受体在大肠杆菌中的克隆与表达

根据ｓＩＬ－６Ｒ的结构特点及其功能分析，利用ＰＣＲ技术选择性地扩增两个不同长度的ＩＬ－６ＲｃＤＮＡ胞外片段。经ＤＮＡ测序和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实后，定向插入原核表达载体ｐＥＴ－３ａ中，获得了中、高效表达。

IL－6受体与恶性肿瘤

ＩＬ－６的多种生物效应都是通过靶细胞膜上的ＩＬ－６受体来介导的。临床上的多种疾病不仅与ＩＬ－６分泌异常有关，而且也与ＩＬ－６受体的异常表达有关。ＩＬ－６／ＩＬ－６Ｒ形成的自泌作用机制对于多发性骨髓瘤细胞的产生和增殖起着主要的作用，而对于急、慢性白血病细胞则表现出明显的抗增殖、促分化的作用。随着可溶性ＩＬ－６以及ＩＬ－６Ｒ阻断剂研究的不断深入，对于探讨某些疾病的发病机理和寻找新的治疗途径将是十分有意义的。

利用15肽随机肽库确定抗TNF单抗表位的研究

利用抗ＴＮＦ的Ｔ５单抗作为筛选配基，对经ＤＮＡ碱基组成分析证明具有良好随机性的１５肽库进行亲和筛选．经过三轮筛选后，以硝酸纤维素膜斑点印迹法观察到良好的富集效果．由第三轮挑选出的３１个克隆进行ＤＮＡ测序，结果推出的优势克隆的短肽为ＣＹＲＲＰＡＧＧＬＰＧＩＣＳＡ等，竞争性ＥＬＩＳＡ实验证明带有以上短肽的噬菌体与ＴＮＦ能竞争性地与Ｔ５单抗结合．

间接ELISA法用于细胞抗原特异的单克隆抗体筛选

在单克隆抗体（ｍＡｂ）制备过程中，间接ＥＬＩＳＡ方法用于可溶性蛋白为抗原的ｍＡｂ筛选。当得不到可溶性抗原的情况下，用细胞膜抗原或克隆抗原分子，再以痘苗病毒为载体转入真核细胞制备ｍＡｂ，可以用间接免疫荧光法进行筛选。由于此种方法费时，所需细胞数量大，影...

E－选择素cDNA克隆和表达

从内皮细胞总ＲＮＡ中用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出Ｅ－选择素ｃＤＮＡ全长编码区，并将其克隆到ｐＵＣ１８载体中，构建了重组质粒ｐＵＣ１８／Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ，对此质粒进行了酶切及ＤＮＡ序列分析鉴定。将Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎｃＤＮＡ插入到天坛株痘苗病毒载体ＳｍａＩ位点，构建了表达质粒ｐＪＳＡ１１７５／Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ。采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法，ｐＪＳＡ１１７５／Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ转染ＴＫ－１４３细胞，用ＢｕｄＲ和ＬａｃＺ双筛选，获得带有人Ｅ－选择素ｃＤＮＡ的重组痘苗病毒。经活细胞荧光染色和ＡＰＡＭ检测，重组痘苗病毒能有效地表达人Ｅ－选择素ｃＤＮＡ。

肿瘤细胞系IL-6Rα/IL-6Rβ基因表达的生物学效应

应用非同位素原位杂交技术及反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ），检测了１１种肿瘤细胞系上ＩＬ－６Ｒα／ＩＬ－６ＲβｍＲＮＡ的表达情况，同时应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测了ＩＬ－６Ｒα／ＩＬ－６Ｒβ蛋白的表达。结果表明，１１种细胞系中有６种细胞系检测到ＩＬ－６ＲαｍＲＮＡ的表达，有５种细胞系有ＩＬ－６ＲβｍＲ－ＮＡ的表达，有两种细胞系中均没有表达，在蛋白检测中得到同样的结果。生物学活性检测发现，在细胞系中只有当ＩＬ－６Ｒα／ＩＬ－６Ｒβ亚基同时在细胞中表达，而且表达量具有一定合适比例时，才能对一定浓度的ＩＬ－６刺激产生明显的生物学效应。

稀土配合物[Pr(C_3H_7NO_2)_2(C_3H_4N_2)(H_2O)](ClO_4)_3的标准生成焓及热分解动力学研究

合成了高氯酸镨和咪唑(C3H4N2),DL-α-丙氨酸(C3H7NO2)混配配合物晶体.经傅立叶变换红外光谱、化学分析和元素分析确定其组成为[Pr(C3H7NO2)2(C3H4N2)(H2O)](ClO4)3.使用具有恒温环境的溶解-反应量热计,以2.0mol?L-1HCl为量热溶剂,在T=(298.150±0.001)K时测定出化学反应PrCl3?6H2O(s)+2C3H7NO2(s)+C3H4N2(s)+3NaClO4(s)=[Pr(C3H7NO2)2(C3H4N2)(H2O)](ClO4)3(s)+3NaCl(s)+5H2O(1)的标准摩尔反应焓为?rHm=(39.26±0.11)kJ?mol-1.根据盖!斯定律,计算出配合物的标准摩尔生成焓为?fHm{[Pr(C3H7NO2)2(C3H4N2)(H2O)](ClO4)3(s),298.150K}=(-2424.2±!3.3)kJ?mol-1.采用TG-DTG技术研究了配合物在流动高纯氮气(99.99%)气氛中的非等温热分解动力学,运用微分法(Achar-Brindley-sharp和Kissinger法)和积分法(Satava-Sestak和Coats-Redfern法)对非等温动力学数据进行分析,求得分解反应的表观活化能E=108.9kJ?mol-1,动力学方程式为dα/dt=2(5.90×108/3)(1-α)[-ln(1-α)]-1exp(-108.9×103/RT).

从噬菌体随机肽库中筛选IL-6抗体的识别表位

目的 :从噬菌体随机 6肽文库中筛选IL 6抗体的识别表位。方法 :利用具有IL 6中和活性的单抗C2 2 0筛选呈现于丝状噬菌体表面P3蛋白的随机 6肽文库。结果 :从噬菌体随机 6肽文库中筛选出 36株可与单抗特异结合的噬菌体克隆 ,其中多数克隆呈现核心序列SWLR ,该序列与IL 6的序列具有一定同源性。竞争结合实验和Western印迹分析 ,带有SWFNLR和HSWLRY小肽的 2株噬菌体克隆可与IL 6竞争结合单抗C2 2 0。结论 :SWFNLR和HSWLRY是IL 6单抗C2 2 0特异识别的表位。

合成多肽为半抗原制备抗SCF受体单克隆抗体

本文成功地建立了以合成的小分子肽与蛋白质交联的偶联物为免疫原，制备单克隆抗体（ｍＡｂ）的技术路线。选定ＳＣＦ受体特异性肽段进行人工合成，将其偶联于ＢＳＡ免疫动物，应用细胞融合技术制备了抗两肽段的杂交瘤细胞７株。ＥＬＩＳＡ法和免疫印迹结果显示，其分泌的ｍＡｂ特异性强，与偶联载体及多种多肽生长因子均无交叉反应。经ＡＰＡＡＰ法鉴定，抗胞内羧基端肽的ｍＡｂＳＢ３０４与ＳＣＦ受体表达细胞系ＨＥＬ有弱的阳性反应；免疫组化测定与胎儿皮肤基底层色素细胞及胃粘膜上皮细胞呈阳性反应，提示ｍＡｂＳＢ３０４可识别天然状态的ＳＣＦ受体。

铒离子及其阳离子卟啉配合物对金黄色葡萄球菌生长的抑制和刺激作用

用微量热法研究了Er3+、TMP｛TMP=5,10,15,20-四(4-甲氧基苯基)卟啉｝及其阳离子铒卟啉配合物[Er(TMP)(H2O)3]Cl对金黄色葡萄球菌生长作用的生物热动力学特征,求算了在Er3+、TMP和[Er(TMP)(H2O)3]Cl作用下,金黄色葡萄球菌生长的热动力学参数。实验结果表明:TMP对金黄色葡萄球菌生长的作用表现为单向的抑制作用,而Er3+和[Er(TMP)(H2O)3]Cl对金黄色葡萄球菌的生长有双向调节作用。在低浓度下,Er3+对金黄色葡萄球菌生长的刺激作用强于[Er(TMP)(H2O)3]Cl;在较高浓度下,[Er(TMP)(H2O)3]Cl对金黄色葡萄球菌生长的抑制作用显著强于Er3+。对金黄色葡萄球菌的抗菌活性为:[Er(TMP)(H2O)3]Cl"TMP>Er3+。对相互作用机理做了初步探讨。

CD34基因克隆和表达

ＣＤ３４分子是高度糖基化的Ⅰ型跨膜蛋白，主要表达于多功能造血干细胞、祖细胞表面，在成熟血细胞表面无ＣＤ３４抗原表达，提示ＣＤ３４分子在早期造血调控方面起着重要的作用。本文采用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从高表达人ＣＤ３４抗原的ＫＧ－１ａ细胞系中成功地克隆出人ＣＤ３４抗原全长ｃＤＮＡ，并将此基因插入克隆“载体ｐＵＣ１８ＨｉｎｃＩＩ酶切位点，构建了重组质粒ｐＵＣ１８－３４。用双酶切ｐＵＣ１８－３４质粒，将分离得到的基因片段插入痘苗病毒载体的ＳｍａⅠ位点，构建了重组质粒ＰＪＳＡ１１７５－３４。采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法，ＰＪＳＡ１１７５－３４转染已被野生痘苗病毒感染的ＴＫ￣－１４３细胞，用ＢｕｄＲ和ＬａｃＺ双筛选，获得带有人ＣＤ３４抗原全长ｃＤＮＡ的重组痘苗病毒。经活细胞荧光染色和ＡＰＡＡＰ检测，表明重组痘苗病毒能特异地表达人ＣＤ３４抗原。人ＣＤ３４抗原ｃＤＮＡ克隆和表达，为进一步研究其结构和功能的关系以及研究造血调控机理奠定了基础。

噬菌体显示技术用于抗体表位的筛选

利用噬菌体随机肽库筛选抗ＴＮＦ单抗表位的研究中，就抗体的选择、肽库富集的检测、筛选得到的表位多肽的验证及如何提高筛选的成功率等，进行了一些初步探索．实验结果表明，由识别线性抗原位点的抗体较容易筛选到噬菌体呈现表位，具有较强中和活性的抗体，因多识别空间构型抗原位点而增加筛选难度．ＮＣ膜斑点印迹、ＥＬＩＳＡ及ＤＮＡ测序均可作为筛选富集的检测方法．用与天然抗原同源比较的方法及竞争性ＥＬＩＳＡ分析。

热分析法在药物研究中应用的新进展

综述了热分析方法在药物研究中应用的一些新进展.它主要包括热机械方法和微区热分析法.热机械法是在程序控温下测量物质的机械性能的一种热分析方法,讨论了它在药用材料、药物的机械性能和药物控制释放等研究中的一些应用.微区热分析法是一种将扫描探针显微镜成像技术和热分析技术结合起来的新兴的热分析方法,讨论了它在药用高分子材料、多组分分析、多晶现象、药物剂型和药物控制释放等研究中的应用.

抗人gp130分子单克隆抗体的制备和鉴定

目的 gp130(亦称CD130)可与许多细胞因子受体(IL 6R,IL 11R,OSMR,LIFR,CNTFR和CT 1R)组成受体复合物,并在这类细胞因子的信号转导中起着重要的作用。方法以痘苗病毒为载体构建获得的可溶性CD130(sCD130)为免疫原 ,通过细胞融合的方法 ,得到4株稳定分泌抗CD130单克隆抗体(mAb) (L2,L4a,L4b和L5)的杂交瘤细胞株。结果本组mAb对靶细胞具有识别特异性 ,不但可识别相对分子质量 (Mr)为98000的sCD130分子,也可识别Mr为130000的膜表达型CD130分子(mCD130)。另外 ,mAb还可与CD130分子形成免疫复合物 ,用于免疫沉淀CD130分子 ,但这组抗体中仅mAbL2可部分组断IL 6对靶细胞的增殖作用。结论成功地研制了抗人gp130分子mAb。

ASP.NET与MATLAB混合编程在物理化学实验中的应用

ASP.NET与MATLAB程序设计语言各有自己的优势,研究两者的混合编程具有现实意义。本文以物理化学实验"旋光法测定蔗糖转化反应的速率常数"为例,结合ASP.NET和MATLAB两种软件各自的特长优点,在ASP.NET开发的Web应用程序中调用MATLAB生成的COM组件,通过IE浏览器录入实验数据,快速实现了远程实验数据计算和绘图的即时传递。

Matlab在微分法求反应级数和速率常数中的应用

Matlab是Mathworks公司推出的适用于科学和工程计算的数学软件系统,可高效地解决数值线性代数、微分方程数值解、最优化等科学和工程问题,以Matlab语言编写程序,用于确定物理化学实验乙酸乙酯皀化反应级数和速率常数,与传统手工作图相比,可避免人为因素的误差,简便快捷,计算结果和所作的图形均符合实验要求。

小型培养基制备与分装装置的研制

为克服生化实验室中制备和分装少量培养基过程中操作复杂,效率低,准确性差,温度不可控,劳动强度大的弊端,研制了一套小型培养基制备与分装装置。该装置可整体放入普通灭菌锅中灭菌,也可以置于磁力搅拌器上进行搅拌和恒温。能一次制备几百毫升至几升培养基,满足多数实验室的需求。蠕动泵自动控制分装过程,分装均匀,速度快。特制的分装头在分装时培养基不会沾在试管口部。该装置提高了实验的效率和实验结果的准确性。