BYHWD对脊髓损伤大鼠脊髓组织Bcl-2和Bax表达的影响

目的:观察补阳还五汤(buyanghuanwu decoction,BYHWD)对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)模型大鼠脊髓神经细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及其mRNA表达的影响,初步探讨BYHWD抑制脊髓神经细胞凋亡的作用机制。方法:Wistar大鼠40只,随机分为四组:正常对照组、SCI模型组、BYHWD组和甲基强的松龙(MP)注射组,每组10只大鼠;后三组动物先建立SCI损伤模型,然后分别给予BYHWD组和MP组BYHWD和MP治疗。四组动物分别于术后1、7、14、21 d和28 d对大鼠后肢神经功能的恢复情况进行BBB(Basso-Beattie-Bresnahan)功能评分。第28 d处死各组大鼠,采用Real-time PCR法检测脊髓组织Bcl-2和Bax mRNA的表达情况,Western Blot法检测脊髓组织Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果:大鼠麻醉清醒后,SCI组大鼠损伤平面以下完全瘫痪。BBB评分结果显示:术后第7 d^28 d,与正常对照组相比,SCI组BBB评分明显降低(P<0.05);与SCI组相比,BYHWD处理组和MP处理组大鼠BBB评分明显增高(P<0.05),但BYHWD处理组和MP处理组大鼠相比,BBB评分无明显差异(P>0.05)。Real-time PCR和Western Blot结果显示:与正常对照组相比,SCI组Bax蛋白及mRNA的表达明显升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白及mRNA的表达则明显有所降低(P<0.05)。与SCI组相比,BYHWD处理组和MP处理组大鼠脊髓组织Bax蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05),而Bcl-2蛋白及mRNA表达则明显有所升高(P<0.05)。但BYHWD处理组和MP处理组大鼠脊髓组织Bcl-2、Bax蛋白及mRNA表达之间无明显差异(P>0.05)。结论:BYHWD可以改善SCI大鼠后肢的运动功能,通过下调Bax的表达,上调Bcl-2的表达,从而抑制SCI大鼠脊髓神经细胞的凋亡,发挥其保护作用。

淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔采末病转基因动物模型的学习记忆能力及病理学影响

目的观察淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠的学习记忆能力及病理学影响。方法 6月龄♂APPswe/PS1ΔE9双转基小鼠20只,随机分为模型组和复方组。复方组灌胃给予淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方3个月,模型组给予等量生理盐水。6月龄♂C57BL/6J小鼠10只为阴性对照组。灌胃结束后,采用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力情况,并于水迷宫后灌注处死各组小鼠,采用改良Bielschowsky银染法以及尼氏染色法观察小鼠大脑组织病理学变化。结果水迷宫定位航行实验结果显示,APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠的逃避潜伏期与C57对照组小鼠相比明显延长(P<0.05),复方组小鼠的逃避潜伏期与模型组小鼠相比明显缩短(P<0.05);空间探索实验结果显示,APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠与C57对照组小鼠相比跨台次数减少(P<0.05),复方组小鼠跨台次数与模型组小鼠相比明显增多(P<0.05)。APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠的游泳速度与C57对照组小鼠相比增大(P<0.05),复方组小鼠的游泳速度与模型组小鼠相比差异无显著性(P>0.05)。改良Bielschowsky银染法结果显示,C57对照组小鼠大脑皮质未见明显改变,神经原纤维排列有序、稀疏。模型组小鼠大脑皮质神经原纤维增粗、肿胀,密集成宽带状,深染,神经纤维缠结明显,分布有大量老年斑,复方组小鼠大脑皮质神经纤维缠结情况减轻,可见少量老年斑。尼氏染色结果显示,C57对照组小鼠海马各区神经细胞排列整齐且密集,胞质中尼氏体丰富,大脑皮层尼氏小体呈深蓝色,细胞核淡蓝色,背景略呈浅蓝色;模型组小鼠神经元水肿,细胞数量减少,排列稀疏,细胞间隙增大,胞质内尼氏体减少,分界不清,染成淡蓝色;复方组小鼠较模型组小鼠神经元水肿减轻,细胞数量增多,排量相对整齐,分界清晰。结论APP/PS1双转基因AD小鼠能够较好地模拟AD患者的表现及病理过程,提供有效的实验动物模型。淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方可以有效地改善APP/PS1双转基因AD模型小鼠的学习记忆能力,减轻其大脑皮质神经纤维缠结、老年斑以及神经元水肿等改变。

淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默病转基因模型小鼠大脑皮质DMT1表达的影响

目的探讨淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默症(AD)APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠模型大脑皮质二价金属离子转运蛋白1(DMT1)表达的影响。方法将APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠60只,分为模型组、淫羊藿组、黄芪组、葛根组、复方组、去铁胺(DFO)组,C57BL/6J小鼠作为健康对照组。用药结束后,取各组小鼠脑组织,分别采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠大脑皮质DMT1的表达情况。结果免疫组织化学结果显示:阴性对照未见DMT1阳性细胞。与健康对照组相比,模型组DMT1的表达增高;与模型组相比,复方组和DFO组DMT1的表达降低(P<0.05);DFO组与复方组DMT1的表达无明显差异。RT-PCR结果、Western blot结果与免疫组织化学结果相一致。结论淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方可以下调AD模型小鼠大脑皮质DMT1的表达,从而抑制小鼠脑铁超载,缓解铁超载带来的中枢神经系统功能衰退。

补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓组织Caspase-3表达的影响

目的观察补阳还五汤对脊髓损伤（SCI）后大鼠脊髓神经细胞凋亡相关蛋白Caspase-3及m RNA表达的影响,初步探讨补阳还五汤抑制脊髓神经细胞凋亡的作用机制。方法 Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、SCI模型组、补阳还五汤组和阳性药物对照（MP）组,每组10只。各组分别于建立SCI模型后1、7、14、21、28d观察大鼠后肢运动功能恢复情况并进行BBB功能评分,观察大鼠SCI模型建立及恢复情况,并于第28天处死各组大鼠,采用real-time PCR法检测脊髓组织Caspase-3 mRNA的表达情况,Western blot法检测脊髓组织Caspase-3蛋白的表达情况。结果大鼠麻醉清醒后,SCI模型组大鼠损伤平面以下完全瘫痪。BBB评分结果显示：术后第1-28天,与正常对照组比较,SCI模型组BBB评分明显降低（P〈0.05）;术后第7-28天,与SCI模型组比较,补阳还五汤组和MP组大鼠BBB评分明显增高（P〈0.05）;补阳还五汤组和MP组大鼠BBB评分差异无统计学意义。Real-time PCR和Western blot结果显示：与正常对照组比较,SCI模型组Caspase-3蛋白及mRNA表达明显升高（P〈0.05）;与SCI模型组比较,补阳还五汤组和MP组大鼠脊髓组织Caspase-3蛋白及mRNA表达明显降低（P〈0.05）。补阳还五汤组和MP组大鼠脊髓Caspase-3蛋白及m RNA表达差异无统计学意义。结论补阳还五汤可改善SCI大鼠后肢运动功能,通过下调Caspase-3的表达,从而抑制SCI大鼠脊髓神经细胞的凋亡,对脊髓神经细胞有保护作用。

淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对AD模型小鼠大脑皮质FPN1表达的影响

目的观察淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)APPswe/PS1dE9双转基因小鼠模型大脑皮质FPN1表达的影响。方法 6月龄雄性APPswe/PS1dE9双转基因小鼠60只,随机分为6组,模型组、淫羊藿组、黄芪组、葛根组、复方组、去铁胺(DFO)组,6月龄雄性C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组。用药结束后,分别采用免疫组化、Real time PCR和Western blot方法检测各组小鼠大脑皮质FPN1的表达情况。结果阴性对照组均未见FPN1阳性细胞。与正常对照组比较,模型组FPN1的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,复方组和DFO组FPN1的mRNA和蛋白表达增高(P<0.05);与DFO组比较,复方组FPN1的mRNA和蛋白表达无统计学差异(P>0.05),淫羊藿组、黄芪组、葛根组FPN1的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。结论应用淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方可以上调AD模型小鼠大脑皮质FPN1的表达,从而抑制AD模型小鼠脑铁超载,缓解铁超载带来的中枢神经系统功能衰退。

三种中药有效成分复方对阿尔茨海默病转基因小鼠大脑皮质病理学及超微结构的影响

目的:观察淫羊藿、黄芪、葛根有效成分复方对阿尔茨海默病APP/PS1双转基因模型小鼠大脑皮质病理学及超微结构的影响。方法:9月龄雄性APP/PS1双转基小鼠36只,随机等分为模型组、淫羊藿组、黄芪组、葛根组、复方组和deferoxamine组(DFO组,为阳性对照组),9月龄雄性C57小鼠6只作为阴性对照组。淫羊藿组、黄芪组、葛根组、复方组灌胃分别给予120 mg/kg淫羊藿苷、80 mg/kg黄芪甲苷、80 mg/kg葛根素、120 mg/kg淫羊藿苷+80mg/kg黄芪甲苷+80 mg/kg葛根有效成分复方,DFO组肌肉注射给予30 mg/kg DFO,模型组和阴性对照组给予1 ml生理盐水,连续用药30 d。用药结束后,采用尼氏染色、Bielschowsky银染及透射电镜技术观察各组小鼠大脑皮质的病理学变化。结果:尼氏染色显示,淫羊藿组、黄芪组、葛根组小鼠较模型组神经元水肿有所减轻,细胞数量略有增加;复方组和DFO组小鼠皮质神经细胞排列整齐且密集,胞浆中尼氏体丰富,水肿明显改善,细胞数量明显增加。改良Bielschowsky银染显示,模型组小鼠皮质可见大量的老年斑,淫羊藿组、黄芪组和葛根组仍可见一定数量的老年斑,复方组小鼠及DFO组小鼠皮质与模型组、单方组相比老年斑数量减少。透射电镜显示,复方组和DFO组小鼠皮质神经元形态比模型组、淫羊藿组、黄芪组和葛根组整齐,胞浆内可见少量脂褐素。结论:淫羊藿、黄芪、葛根有效成分复方能减少APP/PS1转基因模型小鼠大脑皮质老年斑的沉积,降低神经元的损伤。

阿尔茨海默病转基因动物模型:如何更接近病理特征?

背景:目前阿尔茨海默病的病因、发病机制还不是十分清楚,很大程度上制约了阿尔茨海默病治疗药物的筛选,而主要障碍之一是缺少合适的动物模型。日趋成熟的转基因动物技术可以在活体上研究某一特定致病基因的作用,已成为阿尔茨海默病较为理想的动物模型。目的:综述近几年国内外阿尔茨海默病转基因动物模型的研究进展。方法:第一作者应用计算机检索2013年7月以前PubMed数据库、中国期刊全文数据库有关阿尔茨海默病转基因动物模型的文章,英文检索词为"Alzheimer’s disease,transgenic mouse,Animal model,dementia",中文检索词为"阿尔茨海默病,转基因动物,动物模型,痴呆"。最终选择41篇文献进行综述。结果与结论:阿尔茨海默病的病因是多元性的,遗传因素是其中的一个重要因素。现有的阿尔茨海默病转基因动物模型,包括单转基因模型、双转基因模型以及多重转基因模型。单转基因动物模型是通过重组DNA技术,将某一种突变的外源性基因片段整合到动物的基因组中,该模型只能研究阿尔茨海默病某一特定的病理变化;双转基因动物模型是通过重组DNA技术将两种外源性突变基因同时转染动物,相比单转基因模型,其病理变化与阿尔茨海默病更加吻合,但是仍然不能完全模拟疾病;多重转基因模型是利用不同的转基因鼠杂交或多个基因同时转入等方法,得到的多重转基因模型,该模型能更好的模拟临床阿尔茨海默病的发病过程和病理特征,但存在近亲衰退等缺点。各种动物模型都有其优点,但也存在着缺点,还需进一步建立更为完善的阿尔茨海默病转基因动物模型,更准确、完整地再现阿尔茨海默病的病理特征。

阿尔茨海默病发病机制研究进展

阿尔茨海默病(AD)又称老年性痴呆,是一种中枢神经系统退行性疾病,主要表现为记忆和认知功能障碍、行为及人格异常改变。目前,AD已成为威胁老年人生活质量并导致死亡的最严重疾病之一,患者通常在确诊后的10年内不治而亡,给患者家庭及社会带来了极大的痛苦和沉重的负担。因此,AD的研究日益受到世界各国政府和学者的高度重视。但目前为止,其发病机制仍不十分清楚,诊断手段严重滞后,特效的治疗方法更是无从谈起。

纳他霉素滴眼剂治疗兔眼真菌性角膜炎的药效研究

目的:探讨国产纳他霉素滴眼剂对真菌性角膜炎的治疗作用,为其临床应用提供实验基础。方法:成年健康新西兰白兔30只,随机分为6组,真菌性角膜炎(FK)模型组、生理盐水组、纳他霉素滴眼剂赋形剂组、Natacyn组、纳他霉素组和正常对照组,每组10只兔眼。除正常对照组外其余各组角膜基质注射法建立真菌性角膜炎模型。各组动物于造模后第4、10、15和21天于裂隙灯下观察兔眼溃疡情况并评分,第10和21天观察兔眼治愈情况,并记录各组角膜发生新生血管、虹膜炎、前房积脓、斑翳等发生情况。结果:(1)第10、15和21天Natacyn组和纳他霉素组兔眼溃疡评分低于FK模型组(均P<0.001);纳他霉素组和Natacyn组差别无统计学意义。(2)Natacyn组和纳他霉素组较FK模型组兔眼治愈率升高(均P<0.001),而前2组治愈率差别无统计学意义。(3)纳他霉素和Natacyn组较FK模型组兔眼真菌性炎症并发症发生率低(均P<0.001),而前2组真菌性炎症合并症发生率差别无统计学意义(P>0.05)。结论:纳他霉素滴眼剂可降低真菌性角膜炎兔眼溃疡评分、提高治愈率、有效预防并发症。

阿尔茨海默病转基因动物模型的学习记忆能力改变及病理学观察

目的观察APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠的学习记忆功能及其病理学改变。方法 9月龄雄性APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠和9月龄雄性C57BL/6J小鼠各10只,采用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力情况,并于水迷宫后灌注处死各组小鼠,采用改良Bielschowsky银染法以及尼氏染色法观察小鼠大脑组织病理学变化。结果水迷宫定位航行实验结果显示,APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠的逃避潜伏期与C57对照组小鼠相比明显延长(P<0.05);空间探索实验结果显示,APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠与C57对照组小鼠相比跨台次数减少(P<0.05)。改良Bielschowsky银染法结果显示,C57对照组小鼠大脑皮质未见明显改变,神经原纤维排列有序、稀疏。APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠大脑皮质神经原纤维肿胀,密集成宽带状,可见神经纤维缠结,有老年斑散在分布。尼氏染色结果显示,C57对照组小鼠海马各区神经细胞排列密集、整齐,胞浆中尼氏体丰富,大脑皮质尼氏小体呈深蓝色,细胞核淡蓝色,背景略呈浅蓝色;APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠神经元水肿,细胞数量减少,排列稀疏,细胞间隙增大,胞浆内尼氏体减少,分界不清,染成淡蓝色。结论 APPswe/PS1ΔE9双转基因AD小鼠能够较好的模拟AD患者的表现及病理过程,提供有效的实验动物模型。

兔眼真菌性角膜炎模型的病理学观察

目的观察兔眼真菌性角膜炎(FK)动物模型的病理学改变。方法新西兰白兔15只(30只眼),随机分为模型组、生理盐水组和正常对照组,每组10只兔眼。采用角膜基质注射法建立茄病镰刀菌性角膜炎模型,接种后2 d角膜刮片行真菌培养;接种后1、2、6、8、14、20 d和30 d,对兔眼溃疡评分;接种后3、8、15、30 d于裂隙灯下观察兔眼病理变化并拍照;接种后30 d处死家兔,取角膜,HE染色,光镜下观察组织病理学改变,PAS染色观察角膜基质层间的真菌菌丝,电镜观察角膜超微结构改变。结果模型组角膜刮片真菌培养均可见典型真菌菌落生长;与正常对照组相比,模型组在接种1、2、6、8、14、20 d和30 d后,角膜溃疡评分均有显著性差异(P<0.05)。模型组接种3、8、15、30 d后,分别可见角膜溃疡、穿孔、前房积脓、新生血管、角膜白斑等并发症。HE染色、PAS染色、电镜观察均显示模型组角膜感染样改变。生理盐水组和正常对照组未见明显病理改变。结论角膜基质注射法可以成功建立兔眼的真菌性角膜炎模型,出现典型的形态学改变。

温度对茄病镰刀菌生长情况及产孢量的影响

目的探讨不同孵育温度对茄病镰刀菌生长状态的影响,为获得大量孢子寻找较好方案。方法茄病镰刀菌按孵育温度不同分为6组,A组、B组、C组、D组、E组分别于20℃、25℃、30℃、35℃、37℃温箱黑暗孵育7 d,F组于35℃温箱黑暗孵育3 d再于25℃温箱黑暗孵育至7 d,各组在培养24 h、3 d、5 d、7 d时分别用游标卡尺测量各组菌落直径,在培养3d、5 d、7 d时用血平板计数器计数产孢量。结果在20～30℃范围内茄病镰刀菌菌落生长速度随温度升高而增快,在30～37℃范围内菌落生长速度随温度升高而减慢,F组产孢量较多(为1.025×108 CFU/mL),而菌丝相对较少。结论茄病镰刀菌在20～37℃范围内均可以生长,30℃较适合茄病镰刀菌菌落生长,35℃温箱孵育3 d再于25℃温箱孵育至7 d是获得大量孢子而非菌丝的较好方案。

脊髓损伤动物模型建立方法研究进展

脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）发病率逐年升高，治疗棘手，预后差，给社会和家庭带来重大的负担。有关脊髓损伤动物模型的研究也在不断发展。

纳他霉素毒性及生产研究进展

纳他霉素(Natamycin)是一种广谱的多烯大环内酯类抗真菌抗生素。由于它高效的抑菌效果而被广泛应用于食品防腐和真菌引起的疾病的治疗。对纳他霉素抗菌活性、作用机制、毒性、特别是当前纳他霉素的生产研究状况进行综述。

纳他霉素药理学研究进展及其应用

纳他霉素(natamycin)是一种广谱的多烯大环内酯类抗真菌抗生素。由于它高效的抑菌效果而被广泛应用于食品防腐和真菌引起的疾病治疗。本文对纳他霉素理化特性、抗菌活性、作用机制、药代动力学实验、毒性以及应用的历史和现状进行综述。

汪逢春活用左金丸经验

汪逢春用左金丸时灵活变化,表现在剂量、剂型、炮制等三个方面,在不同病症中的化裁皆得所宜,对暑湿泄泻、呃逆、便血、崩带、妊娠恶阻、虫积等多种疾病均有治疗作用。《泊庐医案》中有21个案例用到左金丸的剂量化裁应用,与左金丸原方的药物剂量配伍不同,汪老在左金丸原方的思想基础上,以左金丸顾护中焦思想为指导,改变吴茱萸、黄连配伍的剂量。《泊庐医案》中左金丸的炮制方法变化灵活:茱萸、黄连多同炒;所用的黄连多为炒品。汪老在运用左金丸时,根据病情的需要随时调整剂型。

补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓神经细胞凋亡的影响

目的:探讨补阳还五汤(BYHWD)对脊髓损伤(SCI)大鼠脊髓神经细胞凋亡的影响。方法:30只Wistar大鼠随机分为SCI模型组、假手术组和BYHWD组,每组10只大鼠。SCI模型组和BYHWD组建立大鼠SCI模型,BYHWD组大鼠给予BYHWD(20ml/kg)灌胃2周。用药结束后处死大鼠,采用TUNEL法检测脊髓神经细胞的凋亡情况。结果:与假手术组大鼠比较,模型组大鼠神经细胞凋亡指数明显升高(P<0.05);与模型组大鼠比较,BYHWD组大鼠神经细胞凋亡指数明显降低(P<0.05)。结论:BYHWD可通过抑制SCI大鼠脊髓神经细胞凋亡对SCI时脊髓损伤发挥保护作用。

自制击打器建立大鼠脊髓损伤模型

目的:建立一种实用、可靠的大鼠脊髓损伤(SCI)模型,为进一步研究SCI提供实验基础。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为SCI模型组、假手术组和正常对照组,每组10只。采用自制击打器击打T10对应的脊髓节段建立SCI模型。分别于术前1d,术后1d、7d、14d、21d和28d对大鼠进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分,观察大鼠SCI模型的建立情况。结果:大鼠麻醉清醒后,假手术组大鼠行走轻度异常,术后1d完全恢复正常;SCI模型组大鼠损伤平面以下完全瘫痪。术后第1d、7d、14d、21d、28d,SCI模型组大鼠的BBB评分均明显低于假手术组、正常组同时间点(P<0.05)。结论:本研究建立大鼠SCI模型的方法可靠,自制击打器操作简便,可用于SCI的相关研究。

真菌性角膜炎基础研究进展

真菌性角膜炎（fungal keratitis,FK）也叫角膜真菌病（Keratomycosis）,是由真菌感染引起的一种严重威胁视力的眼部化脓性疾病,常发生于植物性角膜外伤后.近年来,其发病率在我国明显升高,该病预后差,可引起角膜混浊、溶解甚至穿孔,不仅严重损害患者视力,还可导致眼球丧失[1].目前,我国对于真菌性角膜炎的基础研究相对较少,其发病机制仍不甚明确,目缺乏有效的治疗药物.所以真菌性角膜炎仍是目前眼科医师所面临的一大难题.

钱仁义教授从颤证论治肌张力障碍临证经验

文章总结钱仁义教授治疗肌张力障碍的辨病、辨证与治疗经验。钱仁义教授认为肌张力障碍属于中医颤证的范畴,风邪贯穿于该病的始终,其为本虚标实之证,以肝脾肾虚为本,风兼夹湿、火、痰、瘀为标。治疗时,主张虚实异治,其实者多为内风夹湿,法当祛风胜湿,方用自拟调肝汤;其虚者为肝肾亏虚,肝风内动,法当养阴熄风,方用加减二甲复脉汤。