Bt Cry1Ac毒素筛选的粉纹夜蛾离体抗性细胞与敏感细胞蛋白质组的差异分析

采用双向电泳技术和肽质量指纹图谱技术分析了BtCry1Ac毒素筛选的粉纹夜蛾Trichoplusiani抗性BTI_Tn_5B1_4细胞与同源敏感细胞的蛋白质组的差异。用MelanieViewerⅡ软件在抗性细胞的双向电泳图谱上检测到的平均蛋白质点数为 70 7± 2 5个 (n =3) ,在敏感细胞的双向电泳图谱上检测到的平均蛋白质点数为 6 37± 19个 (n =3) ,其中分辨率高、重复性良好的显著差异点有 10余个。对其中的一个敏感细胞特有的显著差异斑点进行了肽质量指纹图谱分析 ,经数据库查询表明该蛋白质与胞质外周蛋白具有同源性。

粉纹夜蛾类Cry1Ac受体氨肽酶NcDNA片段的克隆与分析

设计简并引物 ,采用RT PCR方法对粉纹夜蛾Trichoplusiani(H櫣ｂｎｅｒ)细胞系BTI TN 5B1 4的氨肽酶N(aminopeptidaseN ,APN)基因cDNA片段进行了克隆和序列分析 ,通过两对引物扩增出了两种氨肽酶N基因的cDNA片段 ,大小分别为 188bp和5 6 4bp ,分别命名为AS188(GenBank登录号 :CD80 932 4 )和AS5 6 4 (GenBank登录号 :CD80 932 6 )。对这两个片段推导的氨基酸序列进行同源性分析 。

对Cry1 Ac毒素敏感性不同的三种BT1-Tn-5B1细胞品系基因组DNA的RAPD及SSR分析

用Operon公司W系列和F系的 40个随机引物列对BT1 Tn 5B1Cry1Ac敏感细胞、抗性细胞和抗性衰退细胞的基因组DNA进行PCR扩增。经琼脂糖凝胶电泳和EB显色总共扩增出了 2 5 9条清晰带 ,其中有 2 5 0条带为三种细胞所共有 ,有 9条为特异性扩增带。其中 3条特异性带为敏感细胞和抗性衰退细胞样品共有 ,3条特异性带为抗性细胞和抗性衰退细胞样品所特有 ,1条特异性带为抗性衰退细胞样品特有 ,2条特异性带为抗性细胞和敏感细胞样品共有 ,另外某些带在三种细胞之间还存在明显的强弱和宽窄差异。用三个微卫星引物序列分别对三种细胞的总DNA进行扩增 ,得到了 14条清晰的扩增带 ,发现它们在带形上并无太大差异 ,但有 1条带存在明显的强弱差异。这表明BT1 Tn 5B1细胞对Cry1Ac抗性的产生和衰退与基因组DNA的多态性有关。

昆虫离体细胞总膜蛋白的提取及双向电泳分析

探讨适用于双向电泳的昆虫离体细胞总膜蛋白提取技术及适于双向电泳染色的高灵敏度蛋白质银染技术。以粉纹夜蛾细胞系BT1-TN - 5B1- 4为材料 ,比较了传统的Kwa法和Sigma公司的ProteoPropTM MEMBRANEEXTRACTIONKIT提取BT1-TN - 5B1离体细胞总膜蛋白 ,SDS -PAGE及双向电泳结果表明Sigma公司试剂盒提取的总膜蛋白效果较好 ,并且适用于双向电泳分析 ;比较了两种蛋白银染方法 ,确定并优化了一种灵敏度较高适于双向电泳的银染方法 ,得到了理想的膜蛋白 2 -DE图谱。

赤霉素作用机理的分子基础与调控模式研究进展

赤霉素(gibberellins或gibberellicacid,GA)作为植物生长的必需激素之一,调控植物生长发育的各个方面,如:种子萌发,下胚轴的伸长,叶片的生长和植物开花时间等。近年来随着植物功能基因组学的进一步发展,有关赤霉素生物合成及其调控,赤霉素信号转导途径,以及赤霉素与其他激素和环境因子的互作等领域的研究取得了较大的进展。本文综述了赤霉素生物合成的生物学途径及其调控研究;GA信号转导通道的研究进展,特别是DELLA蛋白阻遏植物生长发育的分子机理和GA解除阻遏作用(derepress)的分子模型;GA受体研究的新进展;探讨GA与其它激素之间的相互作用,以及植物在应答环境过程中的作用。

粉纹夜蛾细胞中Bt Cry1Ac选择抗性的研究及离体品系与毒素结合的比较

采用BtCry1Ac活性毒素对粉纹夜蛾BTI Tn 5B1细胞进行 5 6代筛选后获得了抗性比为 1 2 80倍的抗性细胞。ELISA检测表明抗性细胞总蛋白和膜蛋白结合的Cry1Ac数量都少于敏感细胞。配体结合Western杂交实验显示 :抗性细胞和敏感细胞的膜蛋白与总蛋白都有 5条电泳迁移率相同的毒素结合多肽带 ,其分子量分别为 2 0 7,1 5 8 5 ,1 1 8 8,72 ,3 8 5kD ;抗性细胞的 1 1 8 8和 72kD的阳性带比敏感细胞的略弱 。

抗苏云金杆菌毒素Cry1Ac粉纹夜蛾细胞系的特性研究

为了从离体细胞水平探讨昆虫对苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的部分抗性机制,本文采用活化的Cry1Ac 毒素对粉纹夜蛾BTI-TN-581-4细胞连续筛选86代,获得了高水平抗性细胞,研究了其某些特性。它对Cry1c 产生了低水平的交互抗性,对低渗溶液的耐受性显著增强,双向电泳图谱表明抗性细胞膜蛋白组分发生了明显的变化。膜蛋白组分的变化可能导致了筛选细胞的耐低渗透压和抗Cry1C。

Bt Cry1Ac抗性粉纹夜蛾离体细胞与敏感细胞mRNA的差异显示

为了研究昆虫对Bt的抗性机制 ,以苏云金芽孢杆菌Cry1Ac活性毒素对粉纹夜蛾离体细胞连续筛选 80代 ,获得了高抗性细胞。采用DDRT PCR技术比较了该抗性细胞与非选择敏感细胞mRNA的差异 ,经反向RNA斑点印迹杂交确证了 5个片段为两种细胞的显著差异表达序列标签(ESTs)。序列分析结果表明 ,敏感细胞特有的三种ESTs都位于cDNA的非编码区 ,两种ESTs(GenBank注册号 :S1 ,CF32 2 4 1 5 ;S3,CF32 2 4 1 7)与数据库中EST没有显著同源性 ,另一种S2(GenBank注册号 :CF32 2 4 1 6)与已登录的某些昆虫的ESTs具有一定的同源性。从抗性细胞特有的R1 (GenBank注册号 :CF32 2 4 1 3)推导出的氨基酸序列与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶有 60 %～63%的同源性 ,从抗性细胞特有的R2 (GenBank注册号 :CF32 2 4 1 4)推导出的氨基酸序列与黏蛋白类有约 30 %的同源性。这些差异表达基因可能与抗性的形成相关。

RAPD技术用于昆虫离体细胞鉴定的初步探讨

探讨利用RAPD技术对昆虫离体培养进行快速鉴定的可能性。实验中所选用的细胞材料是美国棉铃虫 (HeliothisZea)细胞株Hz—AM3 (简称Hz)、粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)细胞株BTI—TN5B1- 4 (简称 5B1)、斜纹夜蛾 (Spodopteralitura)卵巢细胞株SL1,利用RAPD技术找出三种细胞的差异条带 。

利用杠杆原理巧用拖轮助操

此文借助杠杆原理,分析港内操纵船舶时的受力情况,探讨最佳操船方法。

浅谈以人为本的班级管理艺术

班主任是班集体的组织者和教育者。在班级管理中,倡导以人为本的管理艺术,应注重从制度管理到学生自主管理,注重以情育人,注重班级文化建设,营造温馨的育人氛围,让学生在温暖的班集体中健康成长。

玉米耐盐分子机制研究进展

玉米是我国总产量最大的农作物,它对盐胁迫耐受性较差。玉米主产区日益加剧的土壤盐渍化已成为导致玉米产量和品质下降的主要环境胁迫之一。因此,研究玉米的耐盐机制,改良玉米的耐盐性对保障我国乃至世界玉米生产的可持续发展有重要意义。土壤中盐浓度过高会导致玉米根系外围土壤溶液的水势降低,引起渗透胁迫,而盐离子(Na^(+)、Cl^(-)等)的过量积累会导致离子毒害。近年来,针对离子稳态维持、渗透压维持等关键生理过程,国内外学者通过GWAS、QTL等方法克隆了多个重要耐盐QTL基因,并对其作用机制进行了解析。本文综述了玉米耐盐领域的最新研究进展。

粉纹夜蛾离体细胞对Bt Cry1Ac毒素的抗性发展及其交互抗性

以Cry1Ac活性毒素逐代筛选抗性粉纹夜蛾离体细胞BTI-TN-581,抗性发展速度呈S形曲线,经56代选择后,抗性比上升至1280倍。在去除选择压力后,抗性比逐渐下降。低水平抗性细胞抗性衰退较快,而高水平抗性细胞抗性衰退较缓慢。抗性比衰退至1.5倍的细胞在复筛后抗性比恢复较快。抗性细胞对苏云金杆菌工程茵GC-91(Bt GC-91)、苏云金杆菌鲇泽亚种(B.t.awazai)和苏云金杆菌库斯塔克亚种(B.t.kurstaki)的复合毒素晶体的活性毒素都具有较高的交互抗性,但对农药无交互抗性,对杆状病毒的敏感性也没发生变化。

植物基因组与表观遗传学研究进展

DNA序列信息是基因功能研究的基础,近10年来随着测序技术的升级迭代,植物基因组学高速发展。不同倍性植物高质量参考基因组的解析,重要作物泛基因组的构建,以及大规模、群体水平的深度重测序等极大推动了作物起源、驯化、农艺性状形成的解析以及育种改良的进程。表观遗传修饰参与植物生长发育的全过程,调控了植物对环境信号如光、温度、养分、盐碱等的应答和适应性,介导了同代和代际之间的“胁迫记忆”。除了DNA甲基化、小分子RNA调控、组蛋白修饰,近几年RNA结构与修饰以及染色质的三维结构也得到越来越多的关注,逐渐成为表观遗传研究的热点。本文主要概述了近10年来植物基因组和表观遗传学研究的前沿进展,比较国内外研究的侧重点,并探讨后续的发展趋势,提出未来5~10年的研究目标和项目建议。

中国植物应答环境变化研究的过去与未来

中华人民共和国建国70周年,特别是改革开放40年以来,中国科技工作者在植物研究领域取得了举世瞩目的成绩.这篇综述简要地总结了中国植物学家以模式植物拟南芥,以及水稻、玉米、小麦和棉花等农作物为研究材料,在植物应答非生物逆境胁迫,包括干旱、高温、低温、盐碱、重金属、铝毒害和光胁迫等领域的基础研究和应用成果;同时也提出了植物非生物逆境研究领域亟待解决的重大问题、作物稳产分子设计的重大需求和创制耐受多种逆境环境的绿色新种质的可能性.