Ras信号通路在HIV-1 Tat诱导ZO-1及脑啡肽酶破坏的作用

目的探讨Ras信号传导通路在人类免疫缺陷病毒-1型反式转录激活因子(HIV-1 transactivator of transcription,HIV-1 Tat)诱导血脑屏障(BBB)中紧密连接蛋白Zonula Occludens(ZO)-1及脑啡肽酶(Neprilysin,NEP)破坏的作用。方法以不同浓度Ras信号传导通路抑制剂法尼基硫代水杨酸(farnesylthiosalicylic acid,FTS)刺激培养好的人脑微血管内皮细胞(human cerebral microvascular endothelium cells,HBEC-5i),并设立对照组,观察其对细胞活力的影响。分别予以HIV-1 Tat、FTS刺激细胞,以蛋白免疫印迹法及实时反转录聚合酶链式反应(realtime reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测HIV-1 Tat诱导的紧密连接蛋白ZO-1及NEP(脑内降解β淀粉样蛋白Amyloid-beta,Aβ的限速酶)的蛋白和mRNA表达的变化。结果 FTS在20μmol/L(0.35±0.06)以下时对HBEC-5i活力无明显影响(P>0.05),HIV-1 Tat能抑制HBEC-5i的ZO-1、NEP蛋白(0.53±0.07,P<0.01;0.40±0.04,P<0.05)与mRNA(0.42±0.10,P<0.05;0.31±0.09,P<0.05)的表达。用FTS阻断Ras信号通路后可显著增加ZO-1、NEP蛋白(1.20±0.22,P<0.01;0.58±0.03,P<0.05)及mRNA(1.10±0.19,P<0.05;0.97±0.38,P<0.05)的表达。结论 HIV-1 Tat可促进紧密连接蛋白ZO-1蛋白和mRNA下调而导致血脑屏障破坏,同时诱导脑内脑啡肽酶NEP蛋白和mRNA下调,可能导致Aβ在脑内沉积增加。阻断Ras信号传导通路可抑制HIV-1 Tat诱导的ZO-1和NEP破坏,可能减少Aβ在脑内的沉积。

Rho/ROCK信号通路在HIV-1 Tat诱导血脑屏障破坏及β淀粉样蛋白沉积中的作用

目的探讨Rho/ROCK信号传导通路在人类免疫缺陷病毒-1型反式转录激活因子(HIV-1 transactivator of transcription,HIV-1 Tat)诱导血脑屏障破坏及对β淀粉样蛋白(Amyloid-beta,Aβ)沉积中的作用。方法将培养的人脑微血管内皮细胞(human cerebral microvascular endothelial cells,h CMEC/D3)予以不同浓度的Rho/ROCK信号传导通路抑制剂盐酸法舒地尔(Hydroxyfasudil,HF)刺激细胞,并设立对照组,观察其对细胞活力的影响,分别予以HIV-1 Tat、HF刺激细胞,以蛋白免疫印迹法和实时反转录聚合酶链式反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测h CMEC/D3中紧密连接蛋白Occludin、晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE,转移血液Aβ到脑组织)的蛋白和mRNA表达的变化。结果 HF在30μmol/L(0.17±0.02)以下时对h CMEC/D3活力无明显影响(P>0.05)。HIV-1 Tat能抑制h CMEC/D3的Occludin蛋白(0.71±0.03、P<0.001)与mRNA(0.41±0.05、P<0.05)表达,同时上调RAGE蛋白(0.83±0.01、P<0.001)和mRNA(1.93±0.66、P<0.05)表达。HF预处理细胞2 h后与HIV-1 Tat共培养可以显著增加Occludin蛋白与mRNA的表达(0.93±0.03、P<0.001;1.04±0.45、P<0.05),同时可以明显减少RAGE蛋白与mRNA的表达(0.54±0.01、P<0.001,1.08±0.43、P<0.05)。结论 HIV-1 Tat可使紧密连接蛋白Occludin蛋白和mRNA表达下调导致血脑屏障破坏,诱导Aβ转运受体RAGE的蛋白和mRNA过度表达,从而可能导致Aβ在脑内沉积增加;阻断Rho/ROCK信号传导通路可抑制HIV-1 Tat诱导血脑屏障破坏作用,阻止RAGE蛋白和mRNA的过度表达。

关于上市公司财务危机预警的再思考

在竞争激烈的市场经济条件下,由于各方面的原因,财务风险是不可避免的,甚至一些规模很大的上市公司也存在着财务风险。利用财务危机预警的基本理论及模型分析,研究上市公司财务危机识别方法,建立上市公司财务危机预警机制,达到有效财务危机预警。

Rho/ROCK信号通路对重症肌无力患者外周血单核细胞IL-17A和IL-23的作用

目的:探讨Rho/ROCK信号转导通路在重症肌无力(MG)患者中的作用。方法:收集34例MG患者和25例健康正常人外周血标本,获取人外周血单个核细胞(PBMCs)进行体外培养。以不同浓度ROCK抑制剂盐酸法舒地尔(HF)处理MG患者PBMCs,并观察其对细胞活力的影响。蛋白免疫印迹(Western bloting)法检测ROCK-2的蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测白细胞介素(IL)-17A、IL-23、IL-22在PBMCs中mRNA和细胞上清液中的蛋白表达。结果:与健康对照组相比,MG患者的ROCK-2蛋白表达升高(P<0.01),PBMCs中IL-17A mRNA、IL-23 mRNA水平和蛋白水平均升高(P<0.05,P<0.01)。使用HF阻断Rho/ROCK信号通路后显著下调MG患者PBMCs的IL-17A mRNA、IL-23 mRNA表达(P<0.05,P<0.05)以及蛋白水平(P<0.05,P<0.01)。IL-22 mRNA水平及蛋白表达水平未见明显改变(P>0.05)。结论:MG患者外周血单个核细胞中ROCK-2、IL-17A、IL-23表达增高,阻断Rho/ROCK通路可抑制MG患者中IL-17A mRNA、IL-23 mRNA和蛋白水平表达。