不同产地五脉绿绒蒿HPLC指纹图谱建立及槲皮素含量测定

目的建立不同产地五脉绿绒蒿HPLC指纹图谱,并测定槲皮素含量。方法收集6个产地14批药材,采用聚类分析、主成分分析及正交偏最小二乘法分析进行考察。结果对照指纹图谱共标定了9个共有峰,相似度均为0.80以上。14批药材聚为2类,2个主成分累积方差贡献率为75.136%,峰8、7、1、4、6是区别不同产地药材的主要成分。槲皮素含量存在显著差异,拉萨产地最高,为0.1961%;那曲产地最低,为0.0075%。结论本实验建立了稳定性强的藏药五脉绿绒蒿HPLC指纹图谱及槲皮素含量测定方法,可定性定量评价药材质量。

白花蛇舌草的化学成分研究

为研究白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)的化学成分,采用硅胶柱色谱、制备HPLC色谱等方法,从白花蛇舌草全草的70%乙醇提取物中分离得到9个化合物。根据理化性质及其波谱或光谱数据,结构分别鉴定为:豆甾醇(1)、β-谷甾醇(2)、rubiadin(3)、2,6-二羟基-1-甲氧基蒽醌(4)、β-谷甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(5)、对香豆酸(6)、山奈酚(7)、槲皮素(8)和2-羟基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌(9)。化合物4为新化合物;氯仿提取部位的Fr.4、Fr.4-2及Fr.4-4流分具有较强体外抗人子宫内膜癌Ishikawa细胞活性,其IC50值分别为52.8、78.1和27.5μg/mL。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS结合诊断离子过滤技术快速分析石榴皮的鞣质类成分

目的应用UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS结合诊断离子过滤技术,对石榴皮鞣质类化学成分进行快速鉴定。方法色谱条件为Agilent ZORBAX SB-Aq C18色谱柱(3.0 mm×100 mm,1.8μm);以乙腈(A)-0.05%甲酸水(B)为流动相进行梯度洗脱(0~0.5 min,95%B;0.5~7 min,95%→75%B;7~15 min,75%B;15~30 min,75%→5%B;30~31 min,5%B;31~31.1 min,5%→95%B;31.1~35 min,95%B),流速0.3 mL·min-1,柱温30℃;质谱分析采用加热电喷雾离子源(H-ESI),正、负离子模式扫描,扫描模式为Full MS/dd-MS2,扫描范围m/z 100~1500,碰撞能20、40、60 eV。进而采用质谱数据采集-诊断离子过滤(DIF)-化合物推测及验证的研究流程对鞣质类化合物结构进行鉴定。结果石榴皮中共鉴定出61种鞣质类化合物,含鞣花酸鞣质类43种,没食子酸鞣质类10种,缩合鞣质类8种,其他鞣质类前体化合物8种。其中12种鞣质类成分首次在石榴皮中发现,包括二没食子酰葡萄糖苷及其同分异构体、三没食子酰葡萄糖苷及其同分异构体、(表)没食子儿茶素没食子酸酯、Methyl-3,4,5-trihydroxy-2-(2,3,7,8-tetrahydroxy-5,10-dioxo-5,10-dihydrochromeno[5,4,3-cde]chromen-1-yl)benzoat、(7S,8R,10R,11R,17R)-2,3,15,16,17-pentahydroxy-8-(hydroxymethyl)-5,13-dioxo-5,7,8,10,11,13-hexahydro-1,6,9,12-tetraoxa-7,11-methanocyclotrideca[def]fluoren-10-yl 3,4,5-trihydroxybenzoate、4-Rhamnopyranosyl-ellagic acid、四没食子酰葡萄糖苷及其同分异构体。结论该方法可系统、准确、快速地对石榴皮的鞣质类成分进行表征,为石榴皮药效物质研究和质量评价的进一步研究奠定基础。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS结合分子网络的炮制前后石榴皮化学成分分析

目的:分析生石榴皮、石榴皮炭化学成分及差异性成分。方法:采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)采集数据,借助GNPS平台分析并生成可视化分子网络图,根据高分辨质谱精确分子量及碎片信息、对照品、文献、在线数据库等鉴定化学成分,利用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)进行模式识别筛选差异性化学成分。结果:共鉴定出86种化合物,含鞣质类42种,黄酮类29种,酚酸类10种,其他类5种,其中13个化合物为首次在石榴皮中发现;PCA、OPLS-DA结果表明石榴皮炮制前后化学成分存在明显差异,共筛选出22个炮制前后差异性化学成分。结论:该研究建立了一种快速、全面表征石榴皮及其炮制品化学成分的方法,为探讨石榴皮炮制机制提供了基础。

基于高效液相色谱-飞行时间质谱技术的高血压病肝阳上亢证尿液代谢组学研究

目的研究高血压病肝阳上亢证患者的尿液代谢物变化,寻找其特征代谢物,探索高血压病肝阳上亢证的证候本质。方法选择高血压病肝阳上亢证患者10例为患者组,另设12名健康体检者为正常组,采用高效液相色谱-飞行时间质谱技术(HPLC-TOFMS)采集两组尿液代谢物谱,利用SIMCA-P软件进行主成分分析(principal component analysis,PCA)及偏最小二乘判别分析(partial least-square discriminant analysis,PLS-DA),寻找并鉴定尿液内差异代谢物,做出相关代谢途径的可能解释。结果 PCA方法处理患者组和正常组的尿液代谢物谱数据显示,两组HPLC-TOFMS谱数据可以明显分开。与正常组比较,患者组机体相关代谢发生显著变化。经PLS-DA确定与高血压病肝阳上亢证有关的代谢物,通过查询KEGG数据库共确定了15个化合物的结构及代谢途径,主要包括氨基酸、游离脂肪酸、神经鞘氨醇等。结论采用HPLC-TOFMS结合模式识别的代谢组学方法对高血压病肝阳上亢证患者尿液代谢物进行研究,从微观领域寻找小分子代谢标记物,有利于深入发现中医证候的生物学本质。

鬼针草化学成分的分离和鉴定

目的研究鬼针草的化学成分。方法采用乙醇提取,硅胶柱、聚酰胺柱层析分离纯化,波谱分析鉴定其结构。结果从鬼针草中得到5个化合物:异槲皮苷(Ⅰ),异奥卡宁-7-O-β-D-葡糖苷(Ⅱ),海生菊苷(Ⅲ),槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷(Ⅳ),D-甘露醇(Ⅴ)。结论5个化合物中的Ⅳ、Ⅴ是首次从本属植物中得到的。

大黄化学成分的液相色谱-质谱联用鉴别

目的建立快速、准确鉴别大黄化学成分的液相色谱-质谱方法。方法采用HPLC-MS技术,对大黄的主要化学成分进行分离、鉴别、结构分析。结果根据负离子模式下获得各色谱峰质谱数据,参照文献,对主要色谱峰进行指认,共鉴别了25个化合物,其主要化学成分是多酚、蒽醌及其苷类化合物。结论 HPLC-MS可提高中药化学成分的分析效率,有利于化合物结构鉴别,可作为中药大黄化学成分的鉴定方法。

气质联用技术检测高血压病肝阳上亢证患者与健康志愿者血清脂肪酸成分的差异

目的:研究高血压病肝阳上亢证血清脂肪酸化学组成,探讨脂肪酸代谢与中医证候肝阳上亢证关系。方法:根据临床高血压病肝阳上亢证的诊断标准,选择典型病例,采用气相色谱-质谱联用技术,分析血清脂肪酸的化学组成,使用PCA方法进行模式识别,寻找标记物并做出相关代谢途径解释。结果:检测发现高血压病肝阳上亢证患者6种脂肪酸,棕榈酸、亚油酸、反式油酸、硬脂酸、花生四烯酸、11,14,17-二十碳三烯酸,PCA方法处理高血压病肝阳上亢证患者和健康志愿者血清脂肪酸GC-MS数据显示,两组GC-MS数据可以在得分图实现分类,与健康志愿者作比较,患者机体脂肪酸代谢发生显著变化,体内油酸、亚油酸代谢明显异于健康志愿者。结论:GC-MS技术结合PCA模式识别的代谢组学方法具有研究复杂条件下机体病理生理变化的优势,为理解高血压病肝阳上亢证的证候本质和诊断该类病证提供了科学依据。

高血压病肝阳上亢证患者尿液样品的核磁共振谱代谢组学研究

[目的]寻找高血压病肝阳上亢证患者可能的生物标记物,揭示其证候本质。[方法]对2008年7月至2009年10月间山东省中医医院神经内科收治的9例高血压病肝阳上亢证患者与7例健康志愿者,用~1HNMR分析尿液成分,使用PCA方法进行模式识别,寻找标记物并做出相关代谢途径解释。[结果]两组~1HNMR谱数据可以在得分图实现分类;与健康志愿者作比较,高血压病肝阳上亢患者机体相关代谢发生显著变化,体内氨基酸、葡萄糖代谢明显异于健康志愿者。[结论]~1HNMR结合PCA模式识别的代谢组学方法具有研究复杂条件下机体病理生理变化的优势,为理解高血压病肝阳上亢证的证候本质和诊断提供了科学依据。

高血压病肝阳上亢证患者血清样品的核磁共振谱代谢组学研究

目的采用1HNMR结合主成分分析(PCA)方法研究高血压病肝阳上亢证患者和健康志愿者的血液成分谱差异,寻找可能的生物标记物,揭示高血压病肝阳上亢的证候本质。方法根据临床高血压病肝阳上亢证的诊断标准,选择典型病例,以1HNMR分析高血压病肝阳上亢证患者和健康志愿者的血液成分,使用PCA方法进行模式识别,寻找标记物并做出相关代谢途径的可能解释。结果PCA方法处理高血压病肝阳上亢证患者和健康志愿者的血清1HNMR谱数据显示,两组1HNMR谱数据可以在得分图实现分类,与健康志愿者作比较,患者机体相关代谢发生显著变化,体内部分氨基酸代谢和葡萄糖代谢明显异于健康志愿者。结论1HNMR结合PCA模式识别的代谢组学方法具有研究复杂条件下机体病理生理变化的优势,为理解高血压病肝阳上亢证的证侯本质和诊断该类病证提供了科学依据。

基于顶空进样气质联用技术的中药寒热药性的模式识别研究

目的建立以低温挥发性成分为基础的中药寒热药性表征体系,阐明低温挥发性成分与中药药性的关系,实现中药药性主观经验的客观表达。方法采用顶空静态进样气质联用技术,分析20味中药的挥发性成分,经模式识别方法(主成分分析、最小二乘判别分析),对寒热中药进行分类,探讨寒热中药药性表征方法。结果主成分分析显示寒热中药混在一起,表征样本的最大主成分对分类无显著意义,偏最小二乘判别分析通过提取寒热中药的差异主成分,分类得到改善,初步建立了中药寒热药性表征体系。结论模式识别方法结合HS-GC-MS技术,提供中药中低沸点挥发物的化学信息,表达中药直观气味,利于建立中药药性物质基础GC-MS表征体系。

参连降糖颗粒定性定量研究

目的建立参连降糖颗粒的质量标准。方法对参连降糖颗粒中主要药物黄连、地黄进行薄层色谱鉴别;采用高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1的含量。结果薄层色谱检出盐酸小檗碱、梓醇;人参皂苷Rg1在0.518～8.288μg线性关系良好,平均加样回收率为98.32%,RSD=0.75%(n=5)。结论方法灵敏、简便、重现性好,可作为参连降糖颗粒质量控制的标准。

黄芪甘温药性物质基础组分拆分的化学成分交叉验证方法学研究

目的:探索黄芪的拆分组分之间有无交叉,对组分拆分交叉验证的方法学进行研究,为黄芪甘温药性组分的判定提供研究基础。方法:采用水煎煮提取,不同溶剂萃取,分别以HPLC-UV和HPLC-ELSD数据作指纹图谱相似度评价以及主成分分析。结果:指纹图谱相似度评价和主成分分析的定性结果显示,黄酮组分与其余各组分之间相似度均小于0.31,皂苷组分与各组分之间相似度均小于0.34。结论:溶剂萃取法获得的拆分组分之间交叉较小,紫外和蒸发光散射两种数据获取方式相结合、相似度分析和主成分分析两种数据评价模式相结合的方法学能够有效的评价黄芪组分的交叉度,从而有利于黄芪甘温药性组分的判定。

高血压病肝阳上亢证代谢网络构建及特征分析

目的:以代谢标记物关联构建高血压病肝阳上亢证的代谢网络,从整体角度揭示高血压病的生物学本质。方法:根据临床高血压病肝阳上亢证的诊断标准,选择典型病例,以健康志愿者和高血压病阴阳两虚证为对照,采用代谢组学方法发现生物标记物,利用KEGG数据库发现标记物的代谢途径,关联代谢途径,形成代谢网络,根据代谢节点分析网络的关键靶点。结果:与健康志愿者比较,高血压肝阳上亢证病患者机体代谢网络发生显著变化,去甲肾上腺素、己糖和花生四烯酸为关键网络节点。结论:从代谢组学出发构建代谢网络的方法具有研究中医证候复杂体系变化的优势,为阐明高血压病肝阳上亢证的生物学本质提供科学依据。

高血压病肝阳上亢证血清代谢指纹图谱研究

根据临床高血压病肝阳上亢证的诊断标准,选择典型病例,以高效液相色谱-质谱联用技术分析高血压病肝阳上亢证患者和健康志愿者的血清成分,采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"对齐、匹配色谱峰,采用PCA方法进行模式识别,以MS检测标记物分子量。两组高效液相色谱数据可以在得分图实现分类,与健康志愿者作比较,患者机体相关代谢发生显著变化。高效液相色谱质谱联用结合PCA模式识别的代谢组学方法可用于研究复杂条件下机体病理的生理变化,为高血压病肝阳上亢证病证诊断提供科学依据。

鬼针草黄酮抗氧化研究

目的:测定鬼针草总黄酮及黄酮单体抗氧化活性。方法:采用DPPH法检测总黄酮及黄酮单体体外抗氧化活性。结果:鬼针草总黄酮及黄酮单体对DPPH自由基有较好的清除作用。结论:鬼针草黄酮抗氧化效果明显。

从“谱-组关系”探索方剂药效物质基础与作用靶点的研究思路

方剂配伍是中医临床用药的主要形式,方剂作用于机体,通过影响和参与机体代谢来发挥药效。影响和参与机体代谢的物质基础是方剂的化学成分,机体代谢水平表达的是其内源性代谢物质水平的变化,其药效体现为机体异常状态的改善。建立方剂化学成分差异与机体整体代谢组改变的相关性数学模型即"谱-组关系"表征体系,理解复杂体系间的相互作用,从系统论和还原论相结合的角度探索方剂化学成分谱与机体代谢组的宏观整体关联和微观成分关联,从而在方剂药效物质基础和作用靶点科学阐述及配伍意义的现代研究方面开辟新的思路。

野生丹参地上部分化学成分提取分离与鉴定

目的:研究野生丹参地上部分的化学成分。方法:采用乙醇提取,不同溶剂萃取,硅胶柱、聚酰胺柱层析分离纯化,波谱分析鉴定化合物的结构。结果:从中得到单体8个,利用化学和现代波谱技术鉴定了5个,分别为:豆甾醇(stigmasterol)、熊果酸(ursolic acid)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、胡萝卜苷(daucosterol)、黄芩苷(baicalin)。结论:化合物熊果酸为首次从本植物中得到。

钩藤总生物碱有效部位质量控制研究

目的:建立钩藤总生物碱有效部位质量控制方法。方法:采用酸性染料染色法测定钩藤总生物碱的含量,采用高效液相色谱法测定有效部位中钩藤碱的含量,采用高效液相色谱法建立钩藤总生物碱有效部位的指纹图谱。结果:钩藤总生物碱的含量均在50%以上,钩藤碱在5.75～92μg/mL之间线性关系良好,平均回收率为98.82%,通过指纹图谱相似度评价,不同批次的钩藤总生物碱有效部位的化学成分存在差异。结论:本研究建立的质量控制方法可有效控制钩藤总生物碱有效部位的质量。

药学仪器分析实验开放、互动、双语教学体系的研究

仪器分析实验作为药学专业的必修课程,是重要的专业基础课,本研究充分利用学校的大型仪器,强调实验预习,实行滚动式的实验安排,推行有限的双语教学,发展多元考核体系,以全面推进素质教育为根本目的,以培养学生创新精神为重点,实现创新人才的培养目标。