白及提取物对炎症因子抑制活性的谱效关系分析

目的:建立白及提取物HPLC指纹图谱,以LPS诱导RAW264.7巨噬细胞为炎症模型,考察各提取物对IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子抑制活性,分析其谱效关系。方法:采用聚酰胺柱色谱和系统溶剂萃取等方法制备系列白及提取物,并建立其HPLC指纹图谱。以LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞为炎症模型,采用CBA法及流式细胞术测定各提取物对炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的抑制作用;通过灰色关联度分析法研究其谱效关系。结果:白及各提取物F1～F8,除了F5抗炎活性较差外,其余各部位均具有一定抗炎活性,其中F7和F3具有显著抗炎活性。白及醇提物18个特征峰中,对IL-1β、IL-6、TNF-α抑制活性关联度大于0.8的峰分别有7、7、4个,其中9号峰对各炎症因子抑制活性均表现出较强活性;通过制备、鉴定该峰对应化合物为贝母兰宁,并进一步确证了其抗炎活性。结论:本研究构建了白及抗炎谱效关系,并鉴定了其抗炎活性较强的药效成分,确证贝母兰宁为白及发挥抗炎活性的主要药效成分之一,这为进一步科学合理开发利用白及奠定了良好基础。

枳砧“红美人”杂柑在浙南不同海拔山区的引种表现

2017年春引进枳砧“红美人”杂柑在浙南泰顺县不同海拔(165 m低海拔和507 m中高海拔)山区进行试种,定植行株距4 m×2 m,每667 m~2种植83株,对其生长结果习性、物候期、生长适应性及果实品质等进行了观测与分析。结果表明,该品种在浙南山区表现出适应性强、早结丰产、综合性状好等优点,成熟期在11月中旬(低海拔)到11月底(中高海拔)。低海拔和中高海拔定植后4年生果园,单位面积产量分别为1 231.72和760.28 kg/667 m~2,平均单果质量分别为187.22和174.52 g,可溶性固形物含量分别为12.86%和13.68%,可滴定酸含量分别为0.71%和0.86%,果肉质地细嫩,极化渣,有果冻感,风味浓,汁多有香气,品质优。在栽培上,需加强土肥水管理,合理修剪,注重疏花疏果,控制结果量,防止早衰,注意柑桔溃疡病、柑桔黑点病、吸果夜蛾、柑桔全爪螨(红蜘蛛)等病虫害的防控,中高海拔山区注意防冻害,低海拔山区注意防日灼,最好采用大棚设施栽培。

聚乙二醇前药的研究进展

目的综述近年聚乙二醇前药研究进展。方法查阅近十年来国内外有关聚乙二醇前药文献,对以聚乙二醇为载体的前药种类、前药组成及其存在的相关问题等方面进行了综述。结果与结论聚乙二醇由于其独特物理学和生物学特性,因而在前药合成领域得到广泛应用。相对原游离药物,聚乙二醇前药可以显著优化原游离药物的药动学和药效学性质,但存在诸多不足;并且国内在这一领域起步较晚,相关研究报道也很少,有待进一步深入研究。

白及抗炎药效部位在骨关节炎治疗中的作用及机制研究

目的探究白及抗炎药效部位(EFBS)对骨关节炎的潜在治疗作用及其可能分子机理。方法通过UPLC-QTF-MS技术对EFBS主要化学组成进行鉴定;采用IL-1β诱导的软骨组织炎症模型和ADTC5软骨细胞炎症模型,通过测定炎症因子水平,胶原基质降解情况和Ⅱ型胶原蛋白α1(COL2A1)和基质金属蛋白酶13(MMP13)基因表达水平,综合分析EFBS对骨关节炎防治作用和机制。结果共鉴定了EFBS中12个主要峰,其中菲类和联苄类各6个。EFBS可剂量依赖性抑制IL-1β诱导的软骨组织IL-6、MCP-1升高和胶原基质降解(P<0.05),其中40μg/mL处理时对IL-6和MCP-1的抑制率分别达88.736%±19.305%和69.189%±26.366%。同样,EFBS也可浓度依赖性抑制IL-1β诱导的ADTC5软骨细胞胶原基质降解(P<0.05),其可能与促进COL2A1基因表达和抑制MMP13基因表达有关。结论EFBS主要由菲类和联苄类组成,其对IL-1β诱导软骨和软骨细胞炎症反应和基质降解具有较好抑制作用,展现出潜在的防治骨关节炎作用,值得进一步深入研究。

乌梢蛇水提物对大鼠佐剂性关节炎作用的实验研究

目的:研究乌梢蛇水提物对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:用弗氏完全佐剂诱导大鼠AA模型,实验设正常对照组,模型对照组,乌梢蛇水提物高、中、低剂量组及阳性对照组(塞来昔布),分组给药20天。采用足容积法测量关节肿胀度,并进行关节炎指数评分,用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)的含量。结果:乌梢蛇水提液能明显减轻AA大鼠的关节肿胀度,明显降低关节炎指数评分,降低AA大鼠血清中炎性因子TNF-α、IL-1、IL-6水平。结论:乌梢蛇水提液对AA大鼠关节炎症有一定的治疗作用,其治疗作用可能是通过抑制炎性细胞因子实现的。

蕲蛇提取物抗炎镇痛药理作用的研究

目的研究蕲蛇提取物的抗炎及镇痛作用,为蕲蛇的临床应用提供科学依据。方法采用热板法、冰醋酸刺激致痛法研究蕲蛇提取物对小鼠痛阈的影响,利用二甲苯致小鼠耳廓炎症模型和腹腔染料渗出法测定蕲蛇提取物的抗炎作用。结果蕲蛇提取物醇溶性和水溶性部位对小鼠热板及冰醋酸致痛反应有明显镇痛作用,对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、冰醋酸致腹腔毛细血管通透性增高均有明显的抑制作用。结论蕲蛇提取物醇溶性和水溶性部位有一定的抗炎及镇痛作用,并且水溶性部位较醇溶性部位的药效好,可为蕲蛇的临床应用提供指导作用。

发酵床养蛇初探

目的探讨发酵床模式养殖尖吻蝮、舟山眼镜蛇和王锦蛇的可行性。方法分别选取3种健康驯饲好的4月龄蛇苗,各分成2组,一组采用传统沙床饲养模式,另一组采用发酵床饲养模式,饲养8个月后,通过比较蛇的体重、料肉比及环境氨气浓度变化,分析发酵床养殖模式优劣。结果就尖吻蝮养殖效果而言,采用两种养殖模式无显著性差异;但采用发酵床模式对眼镜蛇和王锦蛇饲养相比沙床模式具有明显优势,表现为增重更快、料肉比更小,且氨气浓度显著降低;氨气浓度及体重变化分析结果表明,5ppm以上浓度对王锦蛇生长有一定影响,10ppm以上浓度对眼镜蛇生长有一定影响。结论发酵床技术可用于蛇类养殖,而且总体上优于传统沙床模式;此外,发酵床模式尤其适宜如眼镜蛇和王锦蛇等活动较多、进食量较大、排便量大的蛇类养殖。

新型阳离子脂质体制备及其体外转基因特征

背景:阳离子脂质体及胶束、纳米粒等转基因载体是目前非病毒转基因载体领域研究热点;而目前市售转基因试剂盒价格昂贵,并且基本上都是进口商品,如果能够开发一种价廉,转基因效率高,具有自主知识产权的转基因试剂盒将展现广阔市场前景。目的:合成一种新型阳离子脂质复合物,并制备相应阳离子脂质体,对其体外转基因效率进行考察。方法:以1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺、胆固醇、丁二酸酐为原料合成阳离子脂质复合物,采用薄层色谱、红外光谱等方法对产物进行结构表征。然后用薄膜分散法,将适当比例的二油酰磷脂酰乙醇胺和阳离子脂质复合物混合制备成阳离子脂质体,并用其包封含绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFPC1,对人宫颈癌Hela细胞株进行体外转染。结果与结论:通过两步法合成了一种全新的阳离子脂质复合物——胆固醇-丁二酸酯-1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺,薄层色谱及红外光谱结果表明合成了预期产物。薄膜分散法制得阳离子脂质体,其中以这种阳离子脂质复合物和二油酰磷脂酰乙醇胺摩尔比为1:1左右所制备的脂质体颗粒较为均匀、细小,形态基本呈圆形。体外对质粒包裹实验结果表明,阳离子脂质体与质粒比为5:3,可完全包封质粒。用该阳离子脂质体对Hela细胞进行转染,24h后,瞬时转染效率达35.6%。从初步实验结果看,所合成的阳离子脂质复合物结构总体与市售阳性成分结构类似,合成方法简单、廉价,体外对质粒DNA有很好包裹性能,细胞毒性低,然而体外对Hela细胞的转染效率还明显偏低。

白及多糖抗矽肺大鼠肺纤维化活性研究

目的:研究白及多糖抗二氧化硅诱导的实验性矽肺大鼠肺纤维化活性及其可能的分子机理。方法:水提醇沉、Sevage法除蛋白制备白及多糖;二氧化硅气管滴注法建立大鼠矽肺模型;通过检测大鼠肺指数及组织病理学变化,结合血清SOD、MDA、NF-κB、IL-1β、PDGF、TGF-β1、TNF-α、HYP含量变化,流式细胞术检测CD3^+、CD4^+、CD8^+T细胞百分含量及CD4^+/CD8^+比值,分析白及多糖药效及作用机理。结果:与模型组比较,白及多糖低(100mg/kg)、高(400 mg/kg)剂量组血清SOD活性显著升高,MDA、NO含量显著降低,CD4^+/CD8^+比值逆转(P<0.01)。除白及多糖高剂量能显著降低血清TNF-α含量外,白及多糖对矽肺大鼠血清炎症细胞因子及HYP水平均无明显影响。组织病理学检查显示,白及多糖未能有效改善肺组织纤维化程度。结论:白及多糖对矽肺大鼠机体抗氧化系统和免疫系统具有良好的调节作用,但不能有效抑制肺纤维化,白及中有效抑制肺纤维化活性组分有待进一步研究确证。

龟鹿二仙胶抵抗化疗小鼠脾T淋巴细胞凋亡的实验研究

目的探讨龟鹿二仙胶对化疗小鼠的抗凋亡作用及作用机理。方法将荷瘤昆明种小鼠72只随机分为环磷酰胺(CTX)加龟鹿二仙胶高、中、低3个剂量组,CTX组,单纯中药组,生理盐水组6组。给药9天后处死小鼠取脾组织,采用流式细胞仪检测T淋巴细胞凋亡;RT-PCR法检测bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达。结果CTX组荧光素标记的膜联蛋白阳性(FITC+AnnexinV)/碘化丙啶(PI)染色阴性比例(FITC+/PI-)T细胞较生理盐水组增高,差异有统计学意义(P<0·05);CTX加用龟鹿二仙胶的3个剂量组FITC+/PI-T细胞比例较CTX组明显降低(P<0·05)。CTX组bcl-2 mRNA表达量较生理盐水组减少(P<0·05);CTX加用龟鹿二仙胶的3个剂量组其表达量较CTX组明显升高(P<0·05)。Caspase-3 mRNA表达量CTX组升高(P<0·05);CTX加用龟鹿二仙胶的3个剂量组表达量较CTX组明显减少。结论龟鹿二仙胶能有效抑制化疗小鼠淋巴细胞凋亡。上调bcl-2 mRNA表达、下调Caspase-3 mRNA表达可能是其作用机理之一。

白及愈伤组织总酚含量测定及抗氧化作用研究

目的:诱导出白及愈伤组织,对其中的总酚含量和抗氧化活性进行测定,并与白及块茎进行对比分析。方法:以白及种子为材料,诱导白及愈伤组织,采用Folin-酚比色法测定愈伤组织和白及块茎中的总酚含量;采用清除二苯代苦味酰基(DPPH.)自由基、铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定法考察白及块茎和愈伤组织的抗氧化活性。结果:白及种子可以在白及愈伤组织诱导培养基中长出愈伤组织,白及块茎对DPPH.清除能力的IC50为6.92 mg/mL,愈伤组织对DPPH.清除能力的IC50为0.99 mg/mL,铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定中,白及块茎与愈伤组织均具有较好的还原能力,且愈伤组织的还原能力优于块茎。白及愈伤组织中的总酚含量为0.702%,块茎中的总酚含量为0.394%。结论:白及块茎和愈伤组织均具有较强的清除DPPH.自由基和还原Fe3+的能力,白及愈伤组织中总酚含量比块茎中的总酚含量要高近1倍左右,表明愈伤组织抗氧化效果强于块茎。

白及组培快繁的实验研究

目的:探索白及组培快繁的最适培养基和培养条件,为进一步完整建立白及快繁体系奠定基础。方法:以白及成熟蒴果为材料,在不同培养基上进行无菌播种,种子萌发后利用组织培养方法进行无性系繁殖。结果:白及种子萌发的最佳培养基为1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L;白及丛生芽增殖最佳培养基MS+1.0mg/L BA+0.1mg/L NAA,1/2MS+1.0 mg/L NAA+7.5%香蕉汁有利于白及生根,MS+0.1mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+7.5%香蕉汁既可以促进白及球茎的生长,在一定程度上又可以促进白及的生根。结论:激素于白及组培快繁有显著影响,通过激素适当配比得到白及快繁的最佳培养体系,对白及资源的利用和保护有重要意义。

土牛膝多糖抗炎镇痛作用的研究

目的:研究土牛膝多糖的抗炎镇痛作用。方法:采用热板法、醋酸扭体法研究土牛膝多糖的镇痛作用,采用小鼠耳廓肿胀法、腹腔毛细血管通透性试验研究土牛膝多糖的抗炎作用。结果:土牛膝多糖对热刺激和醋酸所导致的小鼠疼痛具有显著的抑制作用,对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀法和醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加也具有显著的抑制作用,与空白对照组相比均有显著性差异。结论:土牛膝多糖具有显著的抗炎镇痛作用。

铁皮石斛的SCAR标记研究

目的:建立快速准确的铁皮石斛DNA分子鉴定方法。方法:采用RAPD方法对11种石斛进行多态性分析,获得铁皮石斛特异的RAPD分子标记片段;经克隆、测序,重新设计一对特异性引物转化成稳定的SCAR标记。结果:获得了1条稳定扩增的铁皮石斛特异的片段DS-302,序列测定结果表明,全长302 bp,通过BLAST搜索、同源性比较,结果表明该段序列与已知数据库中的所有序列无显著同源性。根据该序列设计1对特异引物,对11种石斛进行扩增,可在铁皮石斛中扩增获得约300 bp的片段,而石斛属其他种未出现该条带。结论:DS-302成功转化为SCAR分子标记,可对铁皮石斛进行快速有效的鉴定。

白芨组培快速繁殖体系研究

[目的]建立白芨液体快速繁殖体系，并通过诱导愈伤组织建立白芨再生体系。[方法]以白芨种子为材料，在不同液体培养基中进行无菌播种，通过调节光照时长和pH来筛选白芨种子萌发的最佳条件。利用组织培养方法对白芨进行愈伤组织诱导，并对愈伤组织进行抗褐化和再分化研究。[结果]白芨最佳液体快速繁殖条件为MS液体培养基，12h光照时长，pH值5．8～6．5；诱导培养基为MS＋1．0 mg·L－16－BA＋1．5 mg＆#183;L－12．4－D，增殖培养基为MS＋1．0 mg＆#183;L－16－BA＋1．5 mg＆#183;L－12．4－D＋15 mg＆#183;L－1抗坏血酸，分化培养基为MS＋0．1 mg＆#183;L－1 NAA＋0．5 mg＆#183;L－16－BA，生根培养基为MS＋0．8 mg＆#183;L－1 NAA＋1．0 mg＆#183;L－16－BA，有机添加物对白芨有促进作用。[结论]白芨快速繁殖体系能高效快速繁殖白芨,为白芨产业化发展提供技术支持。本研究对白芨的利用和保护具有重要意义，值得进一步研究开发。

白及产业现状及可持续发展的探讨

简述白及产业发展现状与特点,为产业的可持续发展提供依据。查阅相关文献,实地调研考察,分析白及产业存在的主要问题,提出可持续发展的建议。资源短缺,种苗质量标准缺乏、栽培方式粗放、品种与质量控制技术研发应用滞后是目前制约白及产业可持续发展的关键问题。因此,加强白及优良品种选育与繁殖方面的研究,有效解决白及的资源问题并提高白及质量标准控制的技术,是推动白及产业可持续发展的强大动力。

三叶青黄酮对H-22荷瘤小鼠瘤体的抑制作用及其机理研究

[目的]观察三叶青总黄酮对H-22荷瘤小鼠瘤体的抑制作用,探讨其作用机理。[方法]小鼠肝癌H-22细胞右前肢腋窝皮下接种造膜,观察低、中、高剂量三叶青黄酮对荷瘤小鼠抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数的影响,并通过定量RT-PCR检测小鼠皮下移植瘤Fasp-3、CytC的表达情况。[结果]低、中、高剂量三叶青黄酮对H-22荷瘤小鼠的瘤重抑制率分别为34.28%、32.56%和29.24%;皮下移植瘤Fasp-3、CytC mRNA的表达低剂量组明显高于空白组(P<0.05)。[结论]三叶青黄酮可显著抑制肿瘤细胞,这一作用与其能促进肿瘤细胞的促凋亡基因Fasp-3、CytC的表达相关。

山核桃叶总黄酮制备

目的:对山核桃叶总黄酮的制备工艺进行了系统考察,为后继药效学研究奠定基础。方法:通过正交实验对黄酮提取工艺进行优化,以D101大孔树脂为吸附材料,对其静态吸附容量及黄酮洗脱富集条件进行考察,确定山核桃叶总黄酮制备工艺。结果:山核桃叶总黄酮的最佳提取工艺为:60%乙醇提取2次;提取时间分别为80 min、60 min;溶媒倍数分别为10倍、8倍。D101型树脂对山核桃叶总黄酮的静态吸附容量为(36.78±2.5)mg/g,洗脱次序为20%乙醇洗脱后收集40%乙醇洗脱部分即为山核桃叶总黄酮,其总黄酮得率为(74.93±2.10)%,纯度达(74.07±2.61)%。结论:所确立的山核桃叶总黄酮提取、纯化工艺合理、稳定,黄酮得率及纯度较高,为深入研究山核桃叶总黄酮奠定了良好基础。

槲寄生内生真菌在槲寄生寄生过程中的作用

目的:研究槲寄生内生真菌在槲寄生寄生过程中的作用。方法:将槲寄生8个不同部位的组织进行外植体培养,分离纯化其内生真菌,利用CMC平板培养和DNS法筛选出具有较高纤维素酶活性的菌株;将槲寄生寄生的膨大部位进行组织切片,染色观察其内生真菌的组织分布。结果:槲寄生体内分布着丰富的真菌菌丝;从槲寄生各组织部位共分离出83株内生真菌;初步筛选得到38株可降解纤维素的菌株,19株降解纤维素能力较强,其中10株分离自槲寄生寄生的膨大部位。结论:内生真菌分泌纤维素酶可降解枫杨树的细胞壁及细胞间隙组织,协助槲寄生的吸器穿透枫杨树组织,帮助槲寄生在枫杨树上寄生。

雷丸菌核与发酵菌丝蛋白体外抑瘤对比分析

研究雷丸发酵菌丝与菌核蛋白体外对肿瘤细胞HepG2的抑制作用。方法:分别提取雷丸菌核与发酵菌丝蛋白,进行体外抑瘤试验,记录细胞形态变化,计算抑瘤率,分析两者在抑瘤效果上的差异。结果:两种提取蛋白在体外对HepG2肿瘤细胞的抑制作用相近,最高可达80%左右。结论:发酵菌丝蛋白具有显著抑瘤作用,在深入研究药理毒理的基础上可替代菌核入药。