广东省巨蜥寄生虫感染状况的调查

对9条广东某野生动物急救中心死亡的巨蜥开展寄生虫调查,共发现4种线虫、1种蜱和1种绦虫。其中寄生于胃肠道的Kalicephalus schadi、K.guangdongens和Tanqua tiara的感染率分别为88.89%、55.56%和22.22%,感染强度分别为116(8～612)、23(8～49)和37(2～72);寄生于横膈膜、浆膜的双三齿丝虫(Diplotriana tricusp is)的感染率达66.67%,感染强度为7(2～11);外寄生虫巨蜥盲花蜱(Aponomma lucasi)的感染率为88.89%,感染强度为25(5～43);肠道绦虫(未定种)的感染率为55.56%,感染强度为88(1～260)。

玉屏风多糖对免疫抑制小鼠红细胞免疫功能的影响

为探讨玉屏风多糖(YPF-P)对环磷酰胺(Cy)致免疫低下小鼠红细胞免疫功能的影响,本试验将90只SPF小鼠随机分为空白对照组、免疫抑制组(Cy 80 mg/kg)、YPF-P不同剂量组(Cy 80 mg/kg+YPF-P 100、200、400 mg/kg)和阳性对照组(YPF-P 200 mg/kg),采用C3b受体花环法和免疫复合物花环法检测红细胞免疫黏附功能,测定血清IL-2和IFN-γ水平。结果发现,Cy可显著降低小鼠的红细胞免疫粘附功能、IL-2和IFN-γ水平,各剂量YPF-P均可较好调节和保护免疫抑制小鼠的红细胞免疫粘附功能,增高红细胞受体花环率和免疫复合物花环率,促进红细胞免疫功能的恢复,同时可显著提升IL-2和IFN-γ水平,调控T淋巴细胞活性。其作用以YPF-P 200mg/kg最为明显。

鹅源黄病毒的分离和初步鉴定

本试验从广东地区临床表现为体温升高、采食量减少、拉稀粪、站立不稳、运动障碍的幼龄病鹅群,无菌采集病料,进行病原的分离传代。研究结果表明,该病毒对番鸭胚的半数致死量(ELD50)为10-2.68/0.2mL,在pH 7.2的条件下不能凝集鸭、鸡、鹅、鸽的红细胞,人工感染15日龄健康幼鹅能复制出与自然病例相同的临床症状和病变。用BYD病毒E基因片段的特异性引物,对试验获得毒株进行RT-PCR扩增和序列分析,证明获得的序列与GenBank中收录的发现于中国引起鸭产蛋下降综合征的新型黄病毒—BYD病毒(登录号为JF312912)和中国江苏发现的鹅黄病毒JS804株(登录号为JF895923)的同源性最高(有2个碱基的差异),均达到了99%以上,对试验获得的毒株暂定为鹅源BYD病毒广东株1(简称为BYD-GD1)。

围产期母猪骨骼营养状况的研究

在广东某进出口公司猪场,随机选取体格健康、不同胎次的怀孕母猪10头,分别在产前30、20、10 d和分娩当天,以及产后5、10、20、30 d,清晨饲喂前从耳静脉采血10 mL,并迅速分离血清。测定血清中的碱性磷酸酶、羟脯氨酸、谷氨酸蛋白和钙、磷的含量,以研究该阶段母猪的骨营养状况。结果表明,整个围产期血清中碱性磷酸酶活性变化不大,且主要来源于肝脏;羟脯氨酸含量从产前30 d至产后5 d相对平稳,但产后5 d至产后20 d血清中的羟脯氨酸明显上升,产后30 d(断奶后)有所下降;血清中的谷氨酸蛋白含量在产前30 d至分娩当天,逐渐降低。只在分娩后5 d下降明显,此后血清中谷氨酸蛋白含量又逐渐升高;整个围产期血清钙含量水平基本平稳,只是在分娩当天有下降趋势,但差异不显著;而血清磷含量水平也呈平稳状态,只在产后10 d^20 d后下降明显,断奶后又恢复原来水平。

胞内劳森菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为建立猪胞内劳森菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法,针对胞内劳森菌的16SrDNA基因设计合成特异性的引物和TaqMan探针,经过优化各项反应条件,建立了TaqMan荧光定量PCR检测方法。该方法仅对胞内劳森菌靶基因有信号,其相关性方程为Ct=-3.318×log(conc)+38.840(R2=0.998),具有良好的线性关系,对标准质粒最低检出量为5.55copies·μL-1,组内样品的变异系数低于2%。表明该TaqMan荧光定量PCR方法的特异性强、敏感度高、重复性好,具有较好的实用性,能准确定量DNA样品中靶基因的拷贝数,适合于对临床样品中胞内劳森菌定性、定量检测和防治效果的评价。

串珠镰刀菌素对鸡血清白介素2含量的影响

从广东某饲料厂所用玉米中分离到串珠镰刀菌,并将该菌株接种玉米面进行产毒培养,培养物采用乙腈∶水(95∶5)提取串珠镰刀菌素(MON),用提取的MON对雏鸡进行毒性试验,固相夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)测定试验鸡血清中白介素2(IL-2)的含量。结果表明:MON对鸡有毒害作用,鸡血清中IL-2含量比对照组降低(P<0.01)。

猪增生性肠炎PCR诊断方法的建立及临床样品检测

为了掌握广东省猪增生性肠炎流行情况，采用试验建立的特异性PCR检测方法，对采集自广东不同地区、不同日龄的577份猪粪便样品进行猪增生性肠炎的流行状况调查。结果显示，广东省猪增生性肠炎的总体阳性率为16．29％（94／577），不同日龄猪的阳性率检测结果为0～28日龄8．6％（3／35），29日龄～60日龄为11．90％（20／168），61日龄～90日龄为25．48％，（53／208），91日龄～120日龄为10．57％（13／123），121日龄～150日龄为27．77％（5／18），151日龄～180日龄为阴性；不同地区猪群的阳性率为惠州20．95％（13／78），广州10．86％（5／46），清远17．24％（15／87），云浮18．68％（17／91），肇庆16．67％（13／78），佛山11．23％（10／89），江门14．81％（12／81）。结果证明，广东省各地猪场猪增生性肠炎带茵感染较为普遍，不同日龄猪的感染率存在一定差异，应加强对该病的防控工作。

猪鞭虫和斯氏鞭虫线粒体pnad4和pcox1基因的扩增与序列分析

以采自广东不同地区的猪鞭虫(Trichuris suis)和斯氏鞭虫(Trichuris skrjabini)为研究对象,扩增线粒体基因组的pnad4和pcox1基因,将扩增产物纯化后克隆至pMD18-T载体,对阳性菌落进行测序和序列分析。结果表明,来源于不同地区的鞭虫上述两个基因种内相对保守,差异性不大,但种间差异较大。猪鞭虫和斯氏鞭虫的pnad4长度均为468 bp,相互间有162个种间遗传标记位点;猪鞭虫和斯氏鞭虫的pcox1长度分别为600 bp与438 bp,相互间有156个种间遗传标记位点。两种鞭虫之间的pnad4基因差异率为45.1%-45.9%,pcox1基因差异率为44.1%-45.4%。上述线粒体两个基因均可作为区分两种线虫的种间遗传标记。

玉屏风复合多糖对免疫低下小鼠血清IL-2和IFN-γ含量的影响

[目的]探讨玉屏风复合多糖对免疫低下小鼠的调节和保护作用。[方法]以环磷酰胺80 mg/kg诱导的免疫低下小鼠为实验动物模型,研究不同剂量玉屏风复合多糖(100、200和400 mg/kg)对小鼠脾脏指数、血清IL-2和IFN-γ含量的影响。[结果]高剂量玉屏风多糖能提高免疫功能低下小鼠的脾脏指数(P<0.05)。玉屏风多糖能提高免疫抑制的小鼠血清的IL-2和IFN-γ含量,尤其以中、低剂量组效果较好。玉屏风多糖能明显提高正常小鼠血清的IL-2含量(P<0.01),但对正常小鼠的IFN-γ含量无显著影响。[结论]该研究可为玉屏风复合多糖的临床应用提供试验依据。

玉屏风复合多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用

为探讨玉屏风复合多糖对免疫功能损伤的调节和保护作用,以环磷酰胺80 mg/kg诱导的免疫低下小鼠为实验动物模型,通过检测小鼠的脾脏指数、脾淋巴细胞增殖能力、血清溶血素和血清中IL-2等指标,观察不同剂量玉屏风复合多糖(100,200,400 mg/kg)对小鼠脾脏指数、脾淋巴细胞增殖能力、血清溶血素和血清IL-2的影响。结果发现,玉屏风多糖能使免疫抑制小鼠的脾脏指数升高,促进脾淋巴细胞的增值;玉屏风多糖可促进正常小鼠血清溶血素抗体的生成,对抗环磷酰胺所致的小鼠血清溶血素抗体分泌减少;玉屏风复合多糖能提高正常小鼠和免疫抑制的小鼠血清的IL-2水平,尤其以中、低剂量组效果较好。结果证实,玉屏风多糖能对抗环磷酰胺诱导的小鼠免疫抑制,提高免疫功能,对小鼠的脾脏功能也有保护作用。

猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法的研究

以猪附红细胞体和多种血营养菌16S rRNA基因的保守区设计合成引物HM-f/HM-r,在反向引物的5′端用生物素标记,以猪附红细胞体广东株16S rRNA基因的可变区序列设计种特异性寡核苷酸探针,探针的5′端用地高辛标记,成功地建立了猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法。通过测定不同浓度PCR产物对应的微孔板杂交-酶反应显色OD值,用SPSS统计软件进行回归分析,得到回归方程为y=2.1012-0.4492×logx,其相关系数R为0.977,显示对未知样品可进行定量检测。该方法与猪的多种细菌性病原、猫血巴尔通氏体CA株和E.wenyonii无交叉反应,其敏感性比常规PCR琼脂糖电泳检测提高了近100倍。用建立的方法对38份临床样品进行检测,结果有12份检测结果为阳性。

霉玉米对小鼠体重和外周血淋巴细胞数量的影响

50只小鼠随机分为5组,每组10只,用于研究霉玉米对小鼠体重及外周血液淋巴细胞的影响。试验前将1组小鼠处死,采样作为对照,其余4组饲喂霉玉米饼,每周处死1组采样。结果表明,试验组小鼠的体重下降,但攻毒前后比较差异不显著(P>0.05);试验组小鼠的外周血中T淋巴细胞数量减少极显著(P<0.01)。表明霉玉米中毒影响小鼠的免疫功能,造成T、B淋巴细胞计数的改变。

鸽蛔虫ITS rDNA的克隆与序列分析

以采自广东省佛山市的鸽蛔虫(Ascaridia columbae)为研究对象,利用保守引物BD1和BD2扩增鸽蛔虫基因组DNA的ITS rDNA片段,对扩增产物进行克隆和序列测定。结果成功扩增出大小为1045bp的ITS rDNA序列。获得的鸽蛔虫的ITS rDNA序列(AC001、AC002)的5.8S rDNA与GenBank收录的鸡蛔虫5.8S rDNA序列(GenBank登录号为AJ001508)相似性分别为95.5%和94.3%,而与澳大利亚鸽蛔虫5.8 S rDNA序列(GenBank登录号为AJ001509)相似性分别为96.8%和95.5%。将获得的序列与蛔目不同科的代表性蛔虫的5.8SrDNA序列进行比对和系统进化分析,结果表明鸽蛔虫与鸡蛔虫处于同一进化分支上,也表明ITS rDNA是蛔虫分子鉴定的有效遗传标记,这对蛔虫分子分类学及分子流行病学的进一步研究打下了基础。

串珠镰刀菌素的培养提取及对鸡的免疫病理损伤

从广东某饲料厂所用玉米上分离到串珠镰刀菌,并将该菌株接种玉米面,在25℃培养10d,转4℃培养7d,再转25℃培养10d的条件下,进行产毒培养。培养物灭菌干燥后采用乙腈-水(95∶5)提取串珠镰刀菌素(MON),并用薄层色谱验证和高效液相色谱测定提取物MON含量;将提取的MON按照23mg/kg加入试验组雏鸡饲料中,进行毒性试验,测定试验鸡免疫器官胸腺、法氏囊、脾脏指数及血清中一氧化氮的含量。结果表明:试验组比对照组鸡的胸腺、法氏囊及胸腺指数显著降低(P<0.05),血清中NO含量极显著升高(P<0.01)。

犬泡状带绦虫线粒体cox1和nad1基因的扩增与种系发育分析

以采自广州和佛山的犬泡状带绦虫为研究对象,利用PCR技术扩增其线粒体基因组的细胞色素c氧化酶第亚基（cox1）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原酶第一亚基（nad1）序列,扩增产物经纯化、克隆和测序。结果扩增出泡状带绦虫线粒体cox1基因序列长度为444 bp,nad1基因序列长度为530 bp。将实验获得序列与GenBank收录的相关序列进行比对分析,发现采自不同国家和地区的泡状带绦虫cox1基因差异度较小（02.3%）,而nad1基因的差异度较大（0.214.2%）,对进一步研究泡状带绦虫的群体遗传结构奠定了基础。

霉玉米中毒对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

50只小白鼠随机分成5组,每组10只,用于测定腹腔巨噬细胞的吞噬功能。试验前处死1组,其结果作为对照;其他4组作为霉玉米中毒试验组,分别于饲喂霉玉米后第7、14、21、28天处死小鼠,测定腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果,霉玉米中毒试验组的小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能明显降低,表明霉玉米中毒可使腹腔巨噬细胞的吞噬功能下降。

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因克隆与序列分析

为了了解鸭肝炎病毒的遗传变异情况,试验采用RT-PCR方法对采自广东省各地12个DHV临床分离株的VP1基因进行了扩增、克隆、测序和序列分析.结果表明,12个DHV分离株的VP1基因序列长度均为714 bp,编码238个氨基酸,12个分离株与GenBank公布的参考株核苷酸同源性为91.7％～95.8％,氨基酸同源性为94.5％～98.3％,而12个分离株之间的核苷酸序列同源性达到99.2％～100％,氨基酸同源性为97.9％～100％.系统分析证明,12个DHV分离株均为DHV-Ⅰ型,不同分离株VP1基因无碱基插入和缺失,但存在点突变,各DHV分离株间亲缘关系较近,但存在一定的遗传差异.

猪附红细胞体形态特征的光镜和电镜观察

对猪附红细胞体（Eperythrozoon suis）临床疑似病例和阳性感染手术摘脾猪血样中的病原形态进行的光镜和电镜观察。结果表明E．suls的形态近球形，直径在0．3～1．5μm之间，姬姆萨染色为紫红色圆点状，调节微调后有时可看到周围有淡蓝色的环绕，形似环形。阳性感染猪在摘除脾脏后第5d出现明显的菌血症，红细胞的感染率18％～60％之间波动。临床疑似病例中只有部分血样为E．suis感染阳性，大部分为阴性；通过对E．suis外周血检查的不同方法进行比较，认为鲜血压片检查不适合作为E．suis感染的病原检查方法，采用血片的姬姆萨染色检查法时应以形态正常的红细胞上看到E．suis作为病原确诊的依据。

鸭黄病毒病的诊断和防制

从2010年4月起,广东多个地区的蛋鸭(种鸭)发生一种表现运动障碍,采食量和产蛋率迅速下降的急性传染病,根据流行病学、临床症状、病理剖检、细菌学检验、病毒的初步分离、动物回归实验、RT—PCR的检测等实验方法,证实是禽的黄病毒病。采取油乳剂灭活疫苗的预防接种,配合清瘟御毒素、本草甘露等中药的综合应用,以及加强饲养管理和环境卫生消毒等防制措施,有效地控制该病的发生和流行。