大鼠胰腺促性腺激素释放激素受体mRNA的原位杂交

目的 研究大鼠胰腺促性腺激素释放激素 (Gn RH)受体 m RNA的存在及细胞定位 .方法 采用原位杂交组织化学法 .结果 胰脏的外分泌部腺上皮细胞、胰导管上皮细胞及内分泌部胰岛细胞内均可检测到较强的 Gn RH受体m RNA杂交信号 .杂交阳性信号物质均分布在胞质内 ,胞核呈阴性 .结论 大鼠胰脏内、外分泌部均能合成 Gn RH受体 .Gn RH也是一种消化激素 ,它由胰脏自身合成 ,又作用于胰脏 ,可能参与胰脏内。

人胎盘蜕膜细胞5-羟色胺及其受体的免疫组织化学及原位杂交研究

目的 观察 5 -羟色胺 (5 - HT)及其受体在人胎盘的定位及其含量的周龄变化。 方法 采用免疫组织化学、原位杂交及图像分析技术。 结果 人胎盘蜕膜细胞呈 5 - HT及其受体免疫反应性 ,两种阳性反应物质均分布于胞质 ,胞核为阴性。蜕膜细胞同样含有 5 - HT1 A受体 m RNA杂交信号。蜕膜细胞 5 - HT及其受体免疫反应产物的相对含量随妊娠周龄的增加而增加。 结论 人胎盘蜕膜细胞既能产生 5 - HT,又能表达 5 - HT受体。说明 5 -HT对蜕膜细胞可能具有自调节作用。

人胎盘脱氢表雄酮的免疫组织化学研究

目的 观察脱氢表雄酮 (DHEA)在人胎盘的定位及其含量的周龄变化。 方法 用免疫组织化学及定量方法。 结果 人胎盘两层滋养层细胞和基质细胞均呈 DHEA免疫反应性 ,反应物质分布于胞质 ,胞核无免疫反应。在人胎盘绒毛的不同发育阶段中 ,DHEA的相对含量随周龄的增加而增加。 结论 DHEA对胚胎及胎盘的发育可能具有重要的调节功能。

大鼠消化道促性腺激素释放激素受体mRNA的原位杂交研究

目的 探讨大鼠消化道是否存在 Gn RH受体 m RNA及其定位。 方法 用原位杂交组织化学法。 结果 胃底腺壁细胞、胃小凹上皮细胞可检测到较强的 Gn RH受体 m RNA杂交信号。3段小肠绒毛上皮细胞、小肠腺细胞可检测到较强的 Gn RH受体 m RNA杂交信号。盲肠、结肠和直肠的粘膜上皮细胞、肠腺上皮细胞也能检测到 Gn RH受体 m RNA杂交信号。信号物质均分布在胞质内 ,胞核呈阴性。 结论 大鼠消化道能合成 Gn RH受体。Gn RH也是一种胃肠激素 ,它由消化系统自身合成 。

大鼠胃壁细胞的分离及培养

目的 完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法 制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果 获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论 此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .

GnRH类似物对培养的大鼠胃平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察促性腺激素释放激素 (gonadotropin releasinghormone,GnRH)类似物阿拉瑞林 (alarelin)对培养的大鼠胃平滑肌细胞增殖的影响。 方法 应用离体培养的SD大鼠胃平滑肌细胞 (gastricsmoothmusclecell,GSMC) ,采用四唑盐 (MTT)比色法实验 ,3H 胸腺嘧啶核苷酸 (3H TdR)参入、免疫荧光化学检测增殖细胞核抗原 (pro liferatingcellnuclearantigen ,PCNA)表达的平均荧光值和流式细胞仪技术 ,观察阿拉瑞林对GSMC的增殖、DNA合成和细胞周期的影响。 结果 当加入终浓度为 10 - 9、10 - 7、10 - 5mol L的阿拉瑞林 2 4h后 ,与未用药的对照组相比 ,发现其MTT吸光度 (A值 )逐渐降低 (P <0 0 5 ) ;PCNA表达的平均荧光值逐渐减弱 (P <0 0 5 ) ;GSMC的3H TdR参入量依次减少 (P <0 0 5 ) ,且药物浓度越大 ,此三者下降越明显。在细胞周期中 ,与对照组相比 ,G1 期细胞所占比例明显增加 (P <0 0 5 ) ;S期细胞所占比例明显减少 ,且随药物浓度的增加而逐渐减少 (P <0 0 5 )。 结论 GnRH类似物可明显抑制大鼠GSMC的增殖作用 。

培养的大鼠胃平滑肌细胞GnRH受体的免疫组织化学及原位杂交研究

目的 观察培养的大鼠胃平滑肌细胞中是否能表达GnRH受体 ,为进一步研究GnRH对胃平滑肌细胞的功能提供形态学依据。 方法 采用免疫组织化学SABC和原位杂交方法。 结果 培养的大鼠胃平滑肌细胞呈GnRH受体免疫反应阳性 ,阳性物质分布于细胞浆和细胞膜上 ,细胞核呈阴性反应。培养的胃平滑肌细胞同样含有GnRH受体mRNA杂交信号 ,信号物质亦分布于细胞浆内 ,细胞核呈阴性反应。 结论 胃平滑肌细胞能自身表达GnRH受体 。

5-HT受体亚型在大鼠颌下腺的免疫组织化学定位及5-HT的功能研究

目的 研究探讨了大鼠颌下腺中 5 羟色胺受体亚型的分布以及 5 HT功能。方法 免疫组织化学法和免疫酶联检测法。结果 大鼠颌下腺的浆液性腺泡上皮细胞、闰管、颗粒曲管、纹状管和排泄管的管壁上皮细胞均呈 5 HT1AR和 5 HT3 R免疫反应阳性 ,阳性物质位于胞质中 ,胞核为阴性。ELISA结果显示 ,在一定浓度范围内 ,外源 5 HT能刺激离体培养的颌下腺分泌神经生长因子 (NGF) ,但是 ,当外源 5 HT浓度大于 10 7时却抑制NGF的分泌。结论 提示 5 HT对颌下腺NGF的分泌可能起双向调节的作用。

大鼠胃壁细胞GnRH受体的定位及GnRH类似物对壁细胞内钙的影响

目的 观察促性腺激素释放激素 (gonadotropin releasinghormone,GnRH)受体在培养的大鼠胃粘膜壁细胞中的定位 ,并探讨GnRH类似物阿拉瑞林 (alarelin)对壁细胞内游离钙动员的机制。 方法 采用免疫组织化学和原位杂交技术 ;应用Ca2 + 指示剂Fluo 3 AM作为细胞内钙离子的荧光探针 ,对负载培养的胃壁细胞 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测单个细胞内钙荧光强度的变化。 结果 大鼠胃壁细胞呈GnRH受体免疫反应阳性 ,阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;同样壁细胞内可检测到GnRH受体mRNA杂交信号 ,阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;胞内Ca2 + 浓度变化为 :1 在Hank液中 ,GnRH类似物浓度为 10 - 8、10 - 7、10 - 6 mol L时 ,胃壁细胞内Ca2 + 浓度逐渐升高 ,其峰高 (峰值减去静息值 )分别为 7 1± 1 4、12 1± 1 7、16 8± 2 2。其达峰时间也逐渐增快 ,分别为 34 2± 6 4s、18 9± 1 2s、10 4± 2 3s。相邻两组间其峰高及达峰时间均存在显著性差异 (P <0 0 5 ) ,且呈明显剂量依赖性。 2 在D Hank液 (去除外钙 )中 ,阿拉瑞林可轻度短暂升高胞内Ca2 + ;用内罗啶孵育后再加入阿拉瑞林也可轻度短暂升高胞内Ca2 + ,二者无显著性差异。 3 当用拉西地平孵育后再加入阿拉瑞林 ,可明显抑制胞内Ca2 + 的增加?

5-羟色胺受体和P物质受体在培养的人胎盘滋养层细胞的定位研究

目的 :探讨培养的人胎盘绒毛滋养层细胞是否存在 5 羟色胺受体 (5 HTR)和P物质受体 (SPR)。方法 :采用细胞培养法和免疫细胞化学技术。结果 :培养的滋养层细胞为 5 HTR与SPR免疫阳性反应 ,免疫阳性物质位于胞浆内 ,胞核为阴性。结论 :人胎盘滋养层细胞自身含有 5 HTR和SPR ,为在离体培养条件下研究 5 HT和SP对胎盘激素的合成与分泌的调控作用提供了形态学依据。

大白鼠颌下腺促性腺激素释放激素受体(GnRHR)mRNA的RT-PCR和原位杂交的研究

本实验采用 RT- PCR法探讨大白鼠颌下腺是否存在 Gn RH受体 m RNA,并用原位杂交法对其细胞定位进行了研究。结果显示 RT- PCR可扩增出大白鼠颌下腺 Gn RH受体 m RNA的特异性片段 ,其碱基数与设计的一致。原位杂交发现颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、颗粒曲管、排泄管及分泌管上皮细胞内有 Gn RH受体 m RNA的杂交信号。信号物质分布于胞质内 ,胞核阴性。上述结果表明大白鼠颌下腺能合成 Gn RH受体 ,颌下腺产生的 Gn RH可作用于颌下腺的靶细胞 ,参与颌下腺生理功能的调节。

对罗格列酮联合胰岛素治疗2型糖尿病的评价

目的:观察罗格列酮对2型糖尿病(type 2diabetesmellitus ,T2DM)患者胰岛素治疗时的胰岛素用量,及其对血清尿酸水平、白细胞计数的影响。方法:磺脲类药物继发失效的T2DM患者80例,分为罗格列酮联合胰岛素治疗组(A组)和单纯胰岛素治疗组(B组)。观察两组治疗前后空腹血糖、餐后2h血糖、血尿酸水平、白细胞计数,及治疗12周后全天胰岛素用量。结果:A组和B组能同样有效地降低血糖,但A组胰岛素用量低于B组(2 2 .9±5 .3)U比(2 6 .4±6 .8)U ,P <0 .0 5 ,治疗后A组尿酸水平显著下降,由治疗前的(2 71.4±10 7.2 ) μmol/L降为(2 2 3.1±78.5 ) μmol/L ,P <0 .0 5 ,同时其白细胞计数的对数值亦显著降低(9.6 3±0 .0 9)比(9.72±0 .13) ,P <0 .0 1。结论:罗格列酮能减少T2DM患者胰岛素治疗时胰岛素用量,同时降低其血清尿酸水平和白细胞计数;提示罗格列酮在减少T2DM患者胰岛素使用量的同时,对体内炎性反应有一定的改善作用。

游离脂肪酸诱导的胰岛βTC3细胞缺陷与线粒体功能改变的相关性研究

目的通过研究游离脂肪酸(FFA)慢性作用对胰岛细胞解偶联蛋白2(UCP2)mRNA和蛋白表达以及线粒体膜电位的影响,探讨FFA损害胰岛功能的机制。方法将不同浓度油酸作用于胰岛βTC3细胞72h,分别分析基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌量(GSIS),线粒体膜电位,ATP敏感钾电流(IKATP)、UCP2mRNA和蛋白表达;再用油酸和PPARγ配体罗格列酮共同作用,观察UCP2mRNA和蛋白的表达。结果与对照组相比,油酸明显增加2·8mmol/L葡萄糖时的基础胰岛素分泌量,减少16·7mmol/L葡萄糖时的GSIS(P均<0·01),并且呈剂量依赖性。油酸可明显降低线粒体膜电位平均荧光强度(MIF)值,使IKATP外流增加,增加UCP2mRNA和蛋白表达(P均<0·01),呈剂量依赖性;与油酸组相比,油酸+罗格列酮组增加了UCP2mRNA和蛋白表达(P<0·01)。结论在胰岛βTC3细胞中,FFA对胰岛功能的损害与线粒体功能改变有关。FFA可能通过上调PPARγ增加UCP2表达,UCP2的表达与作用增加可导致线粒体膜电位降低,使线粒体功能下降,引起胰岛素分泌减少,产生对胰岛功能的损害作用。

促性腺激素释放激素对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响

目的：通过观察GnRH类似物（GnRHR激动剂和拮抗剂）对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响,了解cAMP在GnRHR介导的信号转导通路中的作用.方法：以不同浓度GnRH类似物对原代培养的大鼠胰腺细胞进行刺激,借助放免法测定观察在体外条件下GnRH类似物对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响.结果：在量效实验中,各浓度GnRHR激动剂均能使细胞内cAMP含量增加,其中10^-8～10^-5mol/L中4个浓度组最为明显,与对照组相比有非常显著差异（P〈0.01）.应用GnRHR拮抗剂（10^-6mol/L）后明显抑制了激动剂组增高cAMP含量的作用,其cAMP水平与对照组比较没有显著差异（P〉0.05）.在时效实验中,应用10^-7mol/LGn-RHR激动剂刺激细胞,从10min起细胞内cAMP含量即开始增多,到1h达到峰值,以后逐渐下降,8h后恢复到原水平.结论：由以上结果推测cAMP可能是GnRHR介导的信号转导通路中的信号分子之一.

GnRH类似物阿拉瑞林对培养的胃平滑肌细胞内钙离子浓度变化的影响

目的 研究ＧｎＲＨ类似物（阿拉瑞林）诱导胃平滑肌细胞内钙动员的机制。方法 采用共聚焦技术检测细胞内钙荧光强度的变化。结果 （１）在Ｈａｎｋｓ液中，ＧｎＲＨ类似物浓度为１０７、１０６、１０－５ｍｏｌ－Ｌ．－１时，胃平滑肌细胞内Ｃａ２＋逐渐升高，其峰高（ｐｅａｋ－ｒｅｓｔｉｎｇ）分别为 ６．００ ± ０．５０、９．２３± ０．６２、１８．９７± ２．４２，其达峰时间分别为 ４２．３７± １．６５、５４．９３± ３．２２、１０５．６３ ± ３．９２ｓ，井呈时间和剂量依赖性；（２）当阿拉瑞林浓度为１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１时，胞内Ｃａ２＋略有升高，与１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１相比（Ｐ＜０．０１）；（３）在有外钙和无外钙时，阿拉瑞林对胞内Ｃａ２＋的升高亦有显著差异（Ｐ＜０．０１）；（４）在无外钙并加入内罗陡孵育后，ＧｎＲＨ引起的胞内 Ｃａ２＋轻度升高，但与 Ｄ－Ｈａｎｋｓ组相比无显著性差异（Ｐ＜０．０５）；（５）在 Ｈａｎｋｓ液中，用拉西地平孵育后，再加入阿拉瑞林，其胞内Ｃａ２＋仍可升高，井有显著差异（Ｐ＜０．０１）。结论Ｃａ２＋参与了ＧｎＲＨ类似物阿拉瑞林对胃平滑肌细胞作用的细胞内分子转导过程。细胞内Ｃａ２＋的增加既源于内钙的释放又源于外?

油酸对βTC3细胞PTEN mRNA表达的影响

研究油酸慢性作用对βTC3细胞PTEN（phosphotase and tensin homology deleted on chromosme ten）mRNA表达的影响，结果显示油酸增加PTEN的表达，使ATP敏感性K^＋通道开放，这可能是高脂损害胰岛功能的机制之一。