新医科背景下的本科基础医学创新人才培养模式的研究与实践

目的探讨新医科背景下的基础医学创新人才培养模式。方法学校通过开设新医科本科新专业等方面优化专业结构,通过新增新医科特色课程、创新创业类课程教学内容以及运用互联网新型教学工具等途径改进课程设置,通过“做中学(Learning by Doing)”、科教融合、教赛融合等方式创新教学方法,从而对本科基础医学创新人才培养模式的深入研究与实践。结果基础医学创新人才培养模式的实践成效显著,学生创新能力素质明显提高。结论培养“医学+”基础医学创新人才符合新时代医学人才培养的需求,对推动人类卫生健康事业发展具有重要的意义。

G418抗性筛选标记在板栗疫病菌中的应用

板栗疫病菌-低毒病毒系统,是一个优良的研究植物病原真菌致病和病毒-宿主相互作用分子机制的模型。随着研究的深入,原有的苯菌灵和潮霉素两个遗传转化筛选标记已不能满足研究需要。文章报道构建一个由构巢曲霉trpC启动子驱动的G418抗性Neo基因盒,并成功应用于板栗疫病菌的遗传转化研究。

板栗疫病菌低毒力遗传转化株LC的构建

低毒病毒—板栗疫病菌组合是研究病毒—宿主相互作用的模式系统之一。通过构建含板栗疫病菌低毒病毒CHV1-EP713的全长cDNA和苯菌灵抗性基因的表达质粒pXB3F2,并用于转化野生型无毒株EP155,获得了以苯菌灵抗性为筛选标记、具有dsRNA病毒再生能力的低毒力遗传转化株LC,为深入研究病毒—真核宿主相互作用的分子机制提供了新的研究材料。

同源片段大小对板栗疫病菌同源重组频率的影响

低毒病毒／板栗疫病菌系统是一个具有独特优点的、崭新的研究病毒与宿主相互作用的模型系统。以同源重组为基础的基因打靶是研究基因功能和病毒与宿主相互作用分子机制的重要手段。为了研究在板栗疫病菌同源重组遗传操作中同源片段大小对同源重组频率的影响，利用一段5．4kb板栗疫病菌染色体DNA序列，构建了以潮霉素抗性基因为遗传转化筛选标记的3个同源双交换片段以及3个同源单交换质粒，分别转化板栗疫病菌EPl55原生质体，检测筛选同源重组转化子并计算发生同源重组频率。结果表明，在板栗疫病菌中3个同源双交换片段FHA1（1．7～2.0kb）、FHA2（1.0～1.2kb）和FHA3（0.5kb）的同源重组频率分别为3．73％、2。06％和0；3个同源单交换质粒pFHl（1．76kb）、pFH2（1．23kb）和pFH3（O．54kb）的同源重组频率分别为0.95％、0和0。这些结果为板栗疫病菌同源重组遗传操作中同源片段大小的设计提供了依据。

三七鲨烯合酶基因在三七根、茎、芦头中的转录表达与三萜皂苷合成

三萜皂苷是三七、人参等重要药用植物的主要有效成分.采用改进的异硫氰酸胍法提取到三七RNA,经RT-PCR克隆技术获得三七三萜合成通路关键酶之一鲨烯合酶(squalene synthase,SS)cDNA,长1270 bp,读码框架编码415个氨基酸.比对分析表明,推衍的三七SS氨基酸序列与人参、积雪草、青蒿、拟南芥和水稻SS的一致性分别为98%、89%、81%、78%和71%.利用实时荧光定量RT-PCR技术对三七根、茎、芦头的SS转录表达研究发现,一年生三七根SS基因转录表达量最高,高于茎和芦头的表达;但总皂苷含量是:芦头>叶>根>茎.可能与SS之后其它三萜合成关键酶的活性差异或/和三萜合成后的定向输送及累积有关.

野生型p53基因与双脱水二乙酰卫矛醇联合诱导肝癌HLE细胞凋亡的研究

背景和目的:p53基因是抑癌基因,研究发现在人类肿瘤中p53基因常发生突变。实验证明野生型p53基因不但抑制肿瘤细胞增殖,而且诱导肿瘤细胞凋亡。但是,单独应用野生型p53基因诱导肿瘤细胞凋亡的作用不很明显。因此,野生型p53基因与药物的联合作用来提高肿瘤细胞凋亡率是目前对肿瘤研究的一新领域。本实验通过转染野生型p53基因联合双脱水二乙酰卫矛醇(1,2:5,6-dianhydro-3,4-diacetylgalactitol,DADAG)作用于肝癌细胞株HLE,研究联合诱导肿瘤细胞的凋亡作用。方法:野生型p53基因通过脂质体Lipofectamine介导转染人肝癌细胞株HLE,同时加入DADAG。96h后,用流式细胞仪、DNA电泳方法进行细胞凋亡分析。结果:流式细胞仪分析细胞凋亡结果:阴性对照组为1.4%、转染pUHD10-3组为3.5%、DADAG处理组为32.6%、转染pUHD10-3-p53组为43.4%、转染p53基因及DADAG处理组为74.6%。DNA电泳发现,转染p53基因及DADAG处理组有到DNA梯形条带。结论:野生型p53基因与DADAG均可诱导人肝癌细胞HLE发生凋亡,转染野生型p53基因与DADAG联合作用,有促进肝癌细胞凋亡的作用。

三七法呢基焦磷酸合酶的基因克隆及序列分析

目的对三七法呢基焦磷酸合酶(FPS)进行基因克隆及序列分析。方法采用cDNA末端快速扩增法,以三七根总RNA为模板扩增出三七FPS基因。结果序列分析表明,所克隆的cDNA序列全长1 409 bp,开放阅读框共编码343个氨基酸残基,推测的氨基酸序列与积雪草、灰白银胶菊、黄花蒿的FPS的氨基酸序列同源性最高,分别达95%、87%、86%。结论首次分离并报道了三七FPS cDNA克隆,为进一步研究三萜皂苷生物合成机制及其在提高植物药用价值方面的应用奠定基础。

绞股蓝的RAPD指纹图谱鉴定及其特异DNA片段克隆、序列分析

目的：在DNA分子水平上鉴定绞股蓝及其伪品乌蔹莓。方法：用筛选出的两条随机引物（WGS001，WGS004）对不同采集地绞股蓝及乌蔹莓基因组DNA进行PCR扩增，将引物WGS004扩增7份绞股蓝样品中的具有相同迁移率的1条500bp左右的DNA片段进行克隆、测序、一致性分析，并在NCBI上作Blastn比对检索。结果：以上两条引物能分别扩增得到绞股蓝与乌蔹莓样品基因组的差异性DNA片段，这些片段可以明确区别绞股蓝与乌蔹莓。经克隆获得的7条绞股蓝DNA序列问的一致性在45．7％～94．5％之间，在NCBI上检索后未见相似序列的报道，为新序列。结论：RAPD技术可有效地鉴别绞股蓝和乌蔹莓，本研究克隆得到一段绞股蓝DNA序列，为绞股蓝的品种鉴定、辅助选择育种等研究奠定了基础。

RAPD技术在药用植物绞股蓝鉴别中的初步研究

运用RAPD技术对绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)及其伪品进行DNA指纹图谱的鉴别研究。采用改进的CTAB法提取七叶绞股蓝、五叶绞股蓝、乌蔹莓(Cayratia japonica)3种植物的总DNA,主要以七叶绞股蓝DNA为模板,采用随机引物WGS001进行PCR扩增,对反应体系包括模板、Mg2+、Taq酶、牛血清白蛋白(BSA)、退火温度进行优化。优化的反应体系总体积25μL,含MgCl22 mmol/L、dNTP 0.2 mmol/L、引物0.4μmol/L、模板60 ng、Taq酶1 U、BSA2μg/μL,退火温度58℃。用10条含20个碱基的随机引物对以上3种植物总DNA作PCR扩增,进行引物筛选。筛选得到的两条随机引物(WGS001、WGS004)可扩增得到识别这些物种基因组DNA的多态性片段。这些片段可以有效地鉴别绞股蓝和乌蔹莓。

三七总RNA提取方法的对比研究

比较利用改进的异硫氰酸胍一步法、异硫氰酸胍高盐法、CTAB法和Thomas'RNA提取法等4种方法提取三七根茎2个部位总RNA的可行性。结果表明,改进的异硫氰酸胍一步法和异硫氰酸胍高盐法能有效地抑制酚类物质、多糖及皂苷等次级代谢产物对总RNA的影响,可从三七根茎中获得质量高、完整性好的总RNA。RT-PCR分析显示提取的总RNA具有反转录活性。这2种方法具有快速、简单、有效的特点。

MAGE-D4a融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的:构建肿瘤相关抗原MAGE-D4a的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:PCR法从胶质瘤组织cDNA中扩增MAGE-D4a基因全长编码区,连接入原核表达载体pMAL-c2,筛选、鉴定阳性克隆并测序。将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达,表达产物经AmyloseResin亲和层析分离纯化,并且对纯化的融合蛋白进行质谱鉴定。结果:成功扩增了MAGE-D4a基因;重组质粒在Rosetta大肠杆菌中诱导表达出MBP/MAGE-D4a融合蛋白;优化了MAGE-D4a原核表达体系的最适条件;蛋白质谱分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符。结论:获得了高效表达、可溶性的MAGE-D4a重组蛋白,为抗体的制备及血清学分析奠定了基础。

二乙酰去水卫矛醇联合p53基因转染对肝癌细胞生长的影响

目的 :观察野生型p5 3基因转染联合二乙酰去水卫矛醇 (1,2∶5 ,6 dianhydro 3,4 diacetylgalactitol,DADAG)对肝癌细胞生长的影响。方法 :将克隆有野生型p5 3基因的pUHD10 3质粒 ,通过脂质体 (lipofectamine)介导转染人肝癌细胞 ,同时 ,在培养液中加入DADAG ,用四甲基偶氮唑 (MTT)法分析细胞的生长情况。结果 :人肝癌细胞HLE转染野生型p5 3基因后 ,其生长作用明显受到抑制 ,细胞生长抑制率在第 4天可达 6 7.6 8%。如果HLE细胞中只加入含DADAG的培养液后 ,其细胞生长也受到一定的抑制 ,生长抑制率最高可达到 5 3.0 9%。肝癌细胞HLE转染野生型p5 3基因后联合应用DADAG时 ,细胞的生长抑制率在第 4天可达到 85 .37% ,实验结果显示DADAG联合野生型p5 3基因增强对肝癌细胞的生长抑制作用。结论 :DADAG能加强野生型p5 3基因对肝癌细胞的生长抑制作用。

Seminar教学模式在生物化学研究生教学中的初探

在2006级、2007级医学研究生的生物化学教学中引入Seminar教学模式,总结教学实施方法和体会,为Seminar教学模式在生物化学教学中的应用提供参考。

眼镜蛇神经毒素低分子量水解物的镇痛研究

眼镜蛇神经毒素（αｃｏｂｒｏｔｏｘｉｎ 或 Ｎ Ｔ） 经胃液水解后超滤得分子量＜ ３ ０００ ｕ 低分子量αｃｏｂｒｏｔｏｘｉｎ 胃液水解物 （αｃｏｂｒｏｔｏｘｉｎ ｆｒａｇｍ ｅｎｔ， Ｎ Ｔ Ｆ）。该低分子量产物在小鼠热板及大鼠电尾嘶叫测痛实验， 都显示出明显的镇痛作用，并有剂量—效应关系。 Ｎ Ｔ Ｆ毒性比 Ｎ Ｔ 明显降低， Ｎ Ｔ Ｆ的镇痛显效时间比 Ｎ Ｔ 提前， 维持时间长，不产生耐受现象。

眼镜蛇神经毒素中枢性镇痛作用脑内受体的研究

目的 :探讨纯化的眼镜蛇神经毒素 (α- Cobrotoxin,α- CBT)中枢性镇痛作用的有关受体 ,为研究α- CBT的中枢镇痛作用机理提供依据。方法 :给大鼠腹腔注射阿托品 1m g.kg- 1或纳洛酮 3m g.kg- 1后 ,再向大鼠中脑导水管周围灰质 ( PeriaqueductalGray,PAG)微量注射 2 g/ L的α- CBT生理盐水溶液 0 .5μl (相当于 5μg.kg- 1 ) ,用光辐射甩尾法观察大鼠的痛阈变化。结果 :阿托品能明显拮抗 α- CBT的中枢镇痛作用 ,其痛阈提高抑制率为 91%。纳洛酮仅能轻度降低 α- CBT的中枢镇痛作用 ,痛阈提高抑制率为 18%。结论 :α- CBT的中枢性镇痛作用与中枢乙酰胆碱能系统密切相关 。

三七与其它植物FPS序列的比较分析

三萜皂甙是中药三七(Panax notoginseng)的主要有效成分,为阐明三七三萜皂甙合成途径中法呢基焦磷酸合酶(FPS)的结构特征,采用RT-PCR及3-'RACE和5′-末端分析法,对三七FPS进行克隆,获得三七FPS cDNA全长,已提交GenBank,登录号为DQ059550;结合生物信息数据库及相关分析软件,对三七根FPS进行性质预测,并与GenBank中记载的植物FPS进行比对分析,构建了植物FPS系统进化树,进行聚类关系分析,根据FPS聚类关系将这些植物异戊二烯类物质合成途径的产物分组.结果表明,植物FPS有2个保守核心区,分别为DDIMD和QVQDDYLD;比对分析及构建的系统进化树表明,三七与人参、积雪草的FPS序列一致性分别为99%、95%,其三萜物质结构也相似.

分子医学教学实验室开放管理模式的实践与探索

实验室的开放是实验室管理发展的必然趋势,开放管理模式的建设是实验开放良好运转的基础。文章以广西医科大学基础医学院分子医学教学实验室开放管理模式的建设实践出发,从开放内容、实验室管理规章制度、具有实时监控功能的实验室管理系统平台和实验队伍四个方面探讨实验室的开放管理模式的构建。