CA_(125)时间分辨荧光免疫分析

以CA12 5单克隆抗体固相包被 ,用平衡饱和法与CA12 5、Eu3+标异硫氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸 -CA12 5单抗形成三层夹心 ,以 β -二酮体为增强液 ,建立CA12 5的时间分辨荧光免疫分析法。数据采用Logit-Log函数和四参数Logistic函数数据处理程序处理。方法的批内和批间CV分别为 4 .5%和 4 .0 % ,平均回收率 96.7% ,灵敏度 3.3μg L ,可测范围为 16— 2 0 62 μg L。本法与CEA无交叉 ,与AFP有 4 .6%交叉 ,与 β -HCG有 12 .4 %交叉。测定结果与进口IRMA试剂盒相比较 ,相关系数为 0 .999,结果呈高度相关。

Micro-PET在膈下逐瘀汤抑制肝细胞癌研究中的应用

目的采用micro-PET显像技术评判中药复方膈下逐淤汤对荷肝细胞癌裸鼠的抑制作用。方法 20周龄健康裸鼠12只,随机分为给药组与对照组(n=6),皮下接种人肝癌细胞Bel7402建立荷瘤模型。接种1周后每日灌胃膈下逐淤汤0.3 ml,对照组给予等体积生理盐水,连续给药60 d。待肿瘤长至约5 mm时测量肿瘤体积,每周2次,计算瘤体积大小和抑瘤率并绘制肿瘤生长曲线。给药24、60 d后分别行^(18)F-FDG、^(18)F-RGD micro-PET扫描各一次,测定肿瘤组织摄取量、标准摄取值(SUV)及肿瘤/肌肉靶本比(T/NT)。结果接种24 d后,肿瘤生长至5 mm,给药组瘤体积(74.8 mm^3)小于对照组(78.3mm^3)。^(18)F-FDG micro-PET扫描给药组的肿瘤组织摄取量、SUV_(mean)和T/NT分别为(5.54±1.59)%ID/g、0.93±0.20和8.20±2.52,略小于对照组(5.92±1.23)%ID/g、1.00±0.19和8.71±2.36(P>0.05)。^(18)F-RGD micro-PET扫描给药组的肿瘤组织摄取量、SUV和T/NT分别为(4.08±0.64)%ID/g、0.75±0.08和6.91±0.72,略小于对照组(4.61±1.08)%ID/g、0.87±0.16和7.00±1.40(P>0.05)。接种60 d后,给药组和对照组的肿瘤体积分别增长至1854.4 mm^3和1462.9 mm^3。^(18)F-FDG micro-PET扫描给药组的肿瘤组织摄取量、SUV和T/NT分别为(3.56±0.54)%ID/g、0.70±0.09和4.91±0.92(n=5),大于对照组的3.28%ID/g、0.60和3.98(n=1)。^(18)F-RGD micro-PET扫描给药组的肿瘤组织摄取量、SUV和T/NT分别为(2.19±0.16)%ID/g、0.51±0.04和4.15±0.57(n=4)。给药组和对照组的肿瘤重量分别为(1.93±0.95)g(n=5)和1.69 g(n=1),抑瘤率为-14.76%。给药组的中位生存时间为60 d,长于对照组的40.5 d,差异有统计学意义(P<0.05)。结论膈下逐淤汤可能通过抑制葡萄糖的吸收和新生血管的生成来延长荷肝细胞癌裸鼠的生存时间。Micro-PET能动态地定量分析活体动物模型的生理、生化变化,可用于评价抗肿瘤药物的体内疗效。

肝ASGP受体功能显像剂的制备及显像研究

采用ＦＰＬＣ快速纯化人血清白蛋白，利用双功能试剂２－亚胺基－２－甲氧基乙基－１－疏代－ 半乳糖甙与伯胺基的成脒反应，将硫代半乳糖残基引入人血清白蛋白分子，得到平均糖密度为 ３０的新半乳糖人血清白蛋白（ＮＧＡ）；用直接法制备９９ｍＴｃ－ＮＧＡ，其放化纯大于９０％，且室温下 可稳定６ｈ以上，符合显像要求。９９ｍＴｃ－ＮＧＡ小鼠体内分布实验及大鼠、兔和狗的显像研究均 表明９９ｍＴｃ－ＮＧＡ能够被肝脏特异摄取，且具有饱和性，主要通过胆道、肠道排泄，是一种较 好的肝ＡＳＧＰ受体功能显像剂。

干扰素α-2b对HepG 2.2.15细胞增殖、凋亡及HBsAg与HBeAg表达的影响

目的:探讨干扰素α-2b(IFN α-2b)对HepG 2.2.15细胞增殖、凋亡及HBsAg与HBeAg表达的影响。方法:应用SRB法检测IFNα-2b作用3、6d后对HepG 2.2.15细胞增殖的影响,ELISA法检测IFN α-2b对HBsAg与HBeAg表达的影响。Hochest 33342、PI双染观察细胞凋亡情况。结果:IFN α-2b作用3、6d后细胞增殖均有所抑制,3d后上清中HBsAg、HBeAg表达就受到抑制,并呈剂量依赖性,6d后HBsAg表达明显受抑,而HBeAg表达与3d后的结果相似。Hochest33342、PI双染显示IFNα-2b可引起细胞凋亡,随药物浓度增加,凋亡细胞也逐渐增加,并且有少量细胞开始死亡。结论:IFNα-2b体外可抑制HBsAg、HBeAg表达,且对细胞增殖也有所抑制,并可引起细胞的凋亡和死亡。

去势骨质疏松症大鼠模型防治效果的参数比较

目的 评价防治骨质疏松症大鼠模型药物疗效的各项指标。方法 采用卵巢切除术建立骨质疏松症预防和治疗大鼠模型 ,分别灌喂阿仑膦酸钠和埃本膦酸钠 ,持续处理 6个月。以骨密度、骨生化标志物、骨矿含量、骨生物力学和骨组织形态学方面的参数为指标 ,评价它们的价值。结果 两组大鼠模型用药后 ,各部位的骨密度明显升高。评价药物疗效时 ,敏感度、特异度、准确度最高的是全身骨密度和骨小梁面积。用药大鼠的股骨最大弯曲载荷、骨挠度、股骨干重、灰重、骨钙含量虽有不同程度的增高 ,血清骨钙素有一定程度的下降 ,但与对照组相比基本均无统计学意义。结论 全身骨密度是评价防治骨质疏松症药物疗效的最佳指标 ,骨切片计算骨小梁面积也是评价防治骨质疏松症药物疗效的敏感指标。

病毒性肝炎治疗药物干扰素的研究进展

目的:了解病毒性肝炎治疗药物干扰素的进展状况,为制备新型干扰素提供依据。方法:查阅国内外近年有关文献资料加以分析、归纳、总结并提出新的观点。结果:聚乙二醇(PEG)化的方法用来延长干扰素的半衰期,已经取得了很好的效果,并且有些药物已经上市。血清白蛋白融合干扰素在延长干扰素的半衰期效果上比PEG修饰更有效,值得关注和深入研究。结论:由于干扰素半衰期短,靶向性不足,所以半乳糖基化白蛋白融合干扰素(GHSA-IFNα-2b)不仅长效且靶向性好,有望成为治疗病毒性肝炎的新一代药物。

23-羟基桦木酸体外抑制血管生成的实验研究

目的探讨23-羟基桦木酸(23-HBA)对体外血管生成的抑制作用。方法采用磺酰罗丹明B(SRB)法测定23-HBA对人毛细血管内皮细胞(HMEC)增殖、迁移和小管形成的影响;用免疫组化染色法检测HMEC中CD31表达的变化。结果23-HBA体外可明显抑制HMEC增殖(IC50为40.44mg/L)、迁移和小管的形成,且呈明显的剂量依赖性。23-HBA的浓度为10mg/L时,HMEC中CD31的表达明显降低。结论23-HBA体外具有明显抑制血管生成的作用,有可能成为有效的血管生成抑制剂。

血清胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ与胃泌素联合检测对胃癌诊断的临床意义

探索血清PGⅠ、PGⅡ及GAS的联合检测对胃癌诊断的意义。采用RIA方法测定了 190名正常人和 12 9例胃病患者的血清PGⅠ、PGⅡ和GAS水平 ,其中 6 8例为胃癌患者。结果表明 ,胃癌患者血清PGⅠ水平和PGⅠ /PGⅡ比值明显低于对照组 ,但GAS水平却明显升高。PGⅠ、PGⅡ和GAS联合检测 ,对胃癌诊断的灵敏度可达 94 .2 % ,特异性达到 73.4 %。提示血清PGⅠ、PGⅡ和GAS的检测可作为胃癌的初步筛查手段 ,提高了胃癌的检出率。

应用^(99m)Tc-NGA进行肝ASGP受体显像的实验研究

新半乳糖人血清白蛋白（ＮＧＡ）是肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体（ＡＳＧＰＲ）的特异性配基。根据受体与配基结合的原理，报道了以９９ｍＴｃ标记的ＮＧＡ与人血清白蛋白（ＨＳＡ）在正常兔中显像行为的对比。结果表明９９ｍＴｃ－ＨＳＡ呈现血池显像剂的行为，而９９ｍＴｃ－ＮＧＡ则呈现肝脏受体显像剂的行为，并且若兔事先用１００倍量未标记的ＮＧＡ将肝脏受体饱和后，再用９９ｍＴｃ－ＮＧＡ显像则呈现与９９ｍＴｃ－ＨＳＡ相似的显像结果。以异硫氰酸荧光素标记的ＮＧＡ（ＦＩＴＣ－ＮＧＡ）进行流式细胞分析（ＦＣＭ）也表明，ＡＳＧＰＲ具有明显可饱和性。由此进一步表明９９ｍＴｃ－ＮＧＡ是ＡＳＧＰ受体显像，而非胶体显像；且具有饱和性．

CA19-9时间分辨荧光免疫分析方法的建立及应用

以CA19- 9单抗 192 # 包被板条 ,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3 + 及标记 2 41# 单抗 ,发光增强系统为以 β -二酮体为主的增强液 ,采用平衡饱和法建立了CA19- 9时间分辨荧光免疫分析。采用Log -Logit函数和四参数Logistic函数两种程序处理数据。结果表明方法的批内和批间CV分别为 3.2 6 %和5 .74% ,平均回收率为 99.6 1% ,灵敏度为 1.6 6U/mL ,可测范围为 18.6 9- 96 7U/mL ,ED2 0 、ED50 和ED80 分别为40 .5 5U/mL、114.2U/mL和 396 .9U/mL。本方法与CEA有 6 %交叉反应 ,与CA12 5、CA15 3和AFP均无交叉反应。Eu3 + 标记抗体于 - 30℃ ,保存六个月免疫反应性基本无损失 ,连续 5个月应用同批试剂 ,分析结果稳定。 78份血清样品的检测结果与化学发光法吻合。本文提示 ,采用CA19- 9时间分辨荧光免疫分析 ,可以高效灵敏地检测出血清中的CA19- 9含量 ,值得临床推广。

血栓动物模型的^(99)Tc^m-重组水蛭素显像研究

目的 探讨以凝血酶为靶，重组水蛭素（ｒＨ）为配基进行血栓显像的潜在价值。方法 氯胺Ｔ法制备１２５ＩｒＨ，采用体外放射配体结合法分析ｒＨ对凝血酶纤维蛋白复合物的亲和、定量关系和时间反应动力学。亚氨基噻吩盐酸盐修饰法制备９９ＴｃｍｒＨ，进行小鼠体内分布测定及犬动、静脉血栓模型显像。结果 ｒＨ 不能直接与纤维蛋白原结合，当凝血酶与纤维蛋白形成复合物后才能与其形成三元复合物，且这种结合呈高亲和、特异和可逆性。９９ＴｃｍｒＨ 在小鼠心、脑、肝、脾、肺摄取低，肾摄取高，１５ ｍｉｎ 达（６４－７２４±５－０４２） ％ＩＤ／ｏｒｇａｎ，血清除迅速。犬股动脉血栓于４５ ｍｉｎ 可清晰显影，靶／ 本底（Ｔ／Ｂ） 比值为１－４７。静脉血栓于注药后３０ ｍｉｎ 就出现浓聚，并随时间延长血栓显影更清晰，１ ｈ Ｔ／Ｂ比值为１－５３。结论 ９９ＴｃｍｒＨ 有望成为１

丙型肝炎病毒抗体时间分辨免疫荧光分析及应用评价

为建立抗 -HCV的时间分辨免疫荧光分析法 (IFMA) ,以HCV抗原包被微孔板 ,样品中的抗 -HCV、Eu3 + 标记羊抗人IgG形成夹心 ,以β -二酮体为增强液 ,数据采用Log -Logit函数和四参数Logistc函数数据处理程序处理。结果表明 ,方法的批内和批间CV分别为 3.6 4 %和 4 .39% ,平均回收率 10 5 .5 8% ,可测范围为 1.0 1— 17.34NCU/mL ,灵敏度为 0 .0 3NCU/mL。本法与HB sAg有 0 .2 3%的交叉 ,与HBeAg有 0 .0 4 %的交叉。 2 78例正常对照组血清抗 -HCV浓度均小于1NCU/mL。结果提示 ,高度灵敏、稳定的抗

^(18)F-FLT的制备及其microPET显像

以3-N-t-叔丁氧羰基-1-[5’-O-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧-3’-O-(4-硝基苯磺酰基-β-1)-苏戊呋喃糖]胸腺嘧啶脱氧核苷(N-BOC-FLT)为标记前体进行氟代亲核置换反应,制得18F-FLT,HPLC法检测其放化纯度,并进行稳定性研究。考察了18F-FLT在正常小鼠体内的分布并采用18F-FLT为显像剂对肿瘤模型鼠进行了microPET显像。研究结果显示,18F-FLT的放化纯度>95%,6h内体外稳定,正常小鼠体内分布结果显示,在60min时,肾、脾、肠摄取较多,心、肝、肺、膀胱摄取次之。初步显像结果提示,以18F-FLT为显像剂对肿瘤模型鼠进行microPET显像能够清晰地观察到接种部位的放射性浓聚。

中药逆转乳腺癌细胞多药耐药性的实验研究

目的:从单味中药中筛选具有逆转乳腺癌细胞耐药性的逆转剂。方法:建立乳腺癌耐药细胞的细胞模型,采用SRB法测定单味中药及其对应血清的细胞毒性作用及其逆转作用。结果:理气类中药中延胡索具有对MCF-7/VCR耐药性的逆转作用,而且它的细胞毒作用很小;1.667g/L的延胡索可使MCF-7/VCR的耐药性逆转3.27倍。结论:延胡索能够有效地逆转乳腺癌细胞MCF-7/VCR的耐药性。

HBeAg时间分辨荧光免疫分析法的建立

采用平衡饱和法建立了乙型肝炎病毒e抗原 (HBeAg)时间分辨荧光免疫分析法。以针对HBeAg的单克隆抗体G8包被板 ,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3 + 及标记C4单抗 ,发光增强系统为以β -二酮体为主的增强液。数据采用Log -Logit法函数和四参数Logitc函数数据处理程序处理。结果表明方法的批内和批间CV分别为 2 .39%和 5 .2 8% ,平均回收率为 97.6 2 % ,灵敏度为 0 .5 8NCU/mL ,可测范围为 12 .0 1- 5 2 9.84NCU/mL ,ED2 0 、ED50 和ED80 分别为 6 .36NCU/mL、2 6 .85NCU/mL和 136 .7NCU/mL。本方法与HBsAg有 13.1%的交叉反应。Eu3 + 标记抗体 - 30℃保存 6个月免疫反应性基本无损失 ,同批试剂连续 5个月应用分析结果稳定。HBeAg时间分辨荧光免疫分析的质量参数优于EIA和IRMA。

全反式维甲酸对甲状腺癌细胞NIS基因表达及摄碘水平的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对甲状腺癌细胞株钠碘同向转运体(NIS)基因表达及摄碘水平的影响。方法以不同浓度ATRA作用于3株甲状腺癌细胞(FTC133、K1、8505C),利用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测NISmRNA表达,并测定细胞摄碘水平。结果ATRA在10-7～10-4molL范围内可剂量依赖性上调FTC133细胞NISmRNA的表达,增强FTC133细胞的摄碘能力;ATRA在10-6～10-4molL范围内可上调K1细胞NISmRNA的表达,并增加其摄碘水平;不同浓度组均未见8505C细胞NISmRNA的表达和摄碘水平增加。结论ATRA可上调FTC133、K1细胞NIS基因表达,提高其摄碘能力,这为ATRA用于分化型甲状腺癌的131I治疗提供了实验依据。

从包涵体中制备重组人血管抑素

目的:研究从包涵体中制备重组人血管抑素的可行工艺。方法:采用发酵法制备表达重组 人血管抑素的大肠杆菌,经离心、破碎、洗涤后得到包涵体,以盐酸胍作为变性液溶解包涵体,经 稀释透析法复性重组人血管抑素,以SDS-PAGE及Wetern-blot鉴定纯度,T法鉴定其生物活性 MT。结果从6．88g包涵体中得到了322．5mg的重组人血管抑素,得率4．7％。电泳鉴定为单一条 带,在浓度0．1mg/ml时,对内皮细胞(HEMC-1)最高抑制率可达33％。结论:得到了一条可行的 血管抑素的制备工艺。

正常和肝损害模型ASGP受体实验研究

目的 通过对肝细胞去唾液酸糖蛋白受体 (ASGPR)功能的体内外分析来区别正常肼脏与慢性肝脏损害。方法 采用吸入CCl4 法建立慢性肝损害大鼠模型 ,用流式细胞仪 (FCM)技术异硫氰酸荧光素 新半乳糖人血清白蛋白 (FITC NGA)进行体外受体分析。SnCl2 还原法制备99Tcm NGA ,进行小鼠体内分布和正常及慢性肝损害模型大鼠ASGP受体显像研究。结果 FITC NGA结合的荧光道数值随肝损害程度的增加而降低。99Tcm NGA能迅速被肝脏摄取 ,其它脏器摄取均较低 ,肠道放射性随时间增加而增加。99Tcm NGA受体动态显像结果表明正常大鼠血本底清除快 ,注射 5min后肝脏显影清晰 ,而肝损害模型大鼠血本底清除较慢 ,注射 5min后 ,心、肺影仍存在 ,肝脏轮廓不清晰。简单动态分析显示 ,正常及肝损害模型大鼠心脏及肝脏的时间 放射性曲线差别较明显。“清除指数”HH15分别为 0 6 75± 0 10 6和 0 6 96± 0 10 3:“受体指数”LHL15分别为 0 980± 0 0 10和 0 949±0 0 2 5。结论 体外FCM分析可从细胞水平反映正常及损伤肝细胞ASGPR数量的变化。99Tcm NGA肝受体动态显像可反映肝细胞受体功能 ,而LHL15可较好反映肝细胞受体数量。