九孔鲍养殖水体及消化道细菌学的研究

2002年对汕尾健生鲍鱼养殖场养殖水体和鲍消化道中异养细菌及弧菌的数量和类群组成进行了研究。研究结果表明:养殖水体中异养细菌数量的四季变化从2 4×104～1 3×105cfu ml,平均为7 6×104cfu ml;消化道中异养细菌数量四季变化则从1 6×107～5 4×107cfu g(湿重),平均为3 3×107cfu g。水体中弧菌数量四季变化从1 2×104～5 1×104cfu ml,平均为2 5×104cfu ml;而消化道中弧菌数量四季变化则从2 8×105～3 8×105cfu g,平均为3 2×105cfu g。水体中细菌类群由Sphingomonas,Vibrio,Pasteurella,Moraxella,Pseudomonas,Aeromonas,Flavobacterium,Klebsiella,Weeksella和Alcall组成,消化道中细菌类群由Sphingomonas,Vibrio,Aeromonas,Flavobacterium,Shewanella,Sphingobacterium,Pseudomonas组成,水体和消化道弧菌种类主要为Vibriofluvialis,Vibrioparahaemolyticus,Vibriovulnificus,Vibriocholerae,Vibriominicus,Vibrioalginolyticus。并对不同养殖场水源弧菌数量也进行了比较。

红鱼寄生虫病并发感染细菌研究

2002年10月,在对大亚湾网箱养殖红鱼寄生虫病研究中,从病鱼和死鱼溃烂处共分离到7株细菌,经鉴定,为副溶血弧菌、溶藻弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、紫色色杆菌和温和气单胞菌。药敏试验结果表明:复方新诺明、多黏霉素B、氯霉素、链霉素、呋喃妥因对分离菌株具有显著的抑制作用;分离菌株对四环素等12种药物有抗药性。

海洋沉积物中特有细菌类群的初步探讨

通过构建 16SrRNA基因文库对中国南海南沙海区沉积物中细菌多样性进行分析 ,并将获得的16SrRNA基因序列与国际基因数据库GenBank进行相似性比较及聚类分析 ,结果发现来自海洋沉积物的未能培养的微生物往往组成一簇 ,并与现已获培养并鉴定的微生物自然分开 ,这一现象表明 。

大亚湾海洋细菌Pseudomonas sp.中的红色素

海洋细菌Pseudomonassp .,采集于大亚湾 ,从该菌的菌体提取物分离得到 2个红色素 :灵菌红素A和新的衍生物二甲基灵菌红素B。它们的结构通过NMR ,LC_MS等确定 ,并得出灵菌红素是具有强烈抗微生物和细胞毒性的化合物 ,同时研究了它的培养条件。

中国南海南沙海区沉积物中细菌16S rDNA多样性的初步研究

通过构建并分析中国南海南沙海区沉积物中细菌16S rRNA基因文库,对其遗传多样性进行了研究.发现沉积物中细菌16S rRNA基因主要来自变形细菌(Proteobacteria)的δ-,γ-,α-亚族和浮霉状菌目(Planctomycetales)等类群,所获的16S rRNA基因的序列与GenBank中已知的细菌16S rDNA序列差异较大,这一结果表明在中国南沙海区沉积物中存在丰富的微生物多样性,并潜藏着特有的微生物资源.

海洋细菌对柠檬烯的生物转化及萜类产物鉴定

从南海大亚湾的海洋微生物中筛选出3株对单萜D-柠檬烯有显著生物催化转化作用的海洋细菌(Vibrio cholerae、Listonella dam sela和Vibrio alginolyticus)。以2216E为培养基,添加200mg/L的柠檬烯,在28℃,以120 r/m in摇瓶培养5 d,用乙酸乙酯提取培养液,经GC-MS分析其转化产物,结果显示,这些细菌能在柠檬烯的不同位置进行羟基化、羰基化等,并伴随有还原、水解、酯化、开环等反应,但转化能力和转化程度不同;在产物中,还检测到系列结构不同的其它萜类:包括倍半萜、二萜以及三萜等,这些萜类化合物的产生跟柠檬烯的加入有关,说明柠檬烯能影响细菌代谢产物的产生。单萜微生物转化反应操作简单、条件温和、高效率和高选择性、无毒、环境友好,能够分离发现系列新的在医药、有机合成、精细化工等领域有用的化合物,为丰富的天然单萜资源的开发与利用提供新的途径和方法。

南沙群岛微型与超微型真核藻类遗传多样性的初步研究

用分子生物学方法建立了南沙海域5号采样点附近海域的微型、超微型真核藻类185rDNA文库,采用RFLP和基因测序的手段对其遗传多样性进行了初步探讨。研究表明南沙海域的微型、超微型藻类的遗传多样性十分丰富,而且尚有大量未获培养的、分类位置未知的物种有待研究。

大亚湾网箱养殖区异养细菌和弧菌的数量动态

研究了大亚湾网箱养殖水体中细菌的数量动态,以探讨其变化规律与鱼病的关系。结果表明:总细菌、弧菌的数量变化各异,网箱内、网箱外和对照海区细菌数量分布与变化不同。养殖区异养细菌丰值期在4-5月份,5月份最高;网箱水体弧菌的丰值期在6-11月,最高在8月;网箱外丰值期在7-9月,最高在8月,对照海区最高值在9月,其他时间变化不大。无论是异养菌还是弧菌,细菌值大小顺序为网箱内、网箱外、对照海区。弧菌数量与部分环境因子相关性较为密切,但相关程度随不同空间而不同,可能受其他环境条件影响。弧菌的高值期与弧菌病的流行期相吻合,鱼体受伤或其他原因引起细菌感染也会使水体中细菌数量升高。

大亚湾网箱养殖水体弧菌种类组成及变化

研究了海水网箱养殖海域弧菌数量变化、种类组成及其相关因素．探讨弧菌数量的变化与鱼病的关系。结果表明：网箱内水体弧菌数量为390-230mL^-1．平均为20．6×10^2mL^-1,网箱外水体为130～1450mL^-1，平均为530mL^-1．非养殖对照海区为10-390mL^-1．平均为190mL^-1。养殖海区弧菌数量呈现明显的季节性变化．尤其是网箱水体．对照海区只在9月数量较高．其他时间变化不大。平均数量网箱内大于网箱外．网箱外大于对照海区。水体中出现的弧菌种类有河流弧菌Vibrio fluvialis．创伤弧菌Vibrio vulnif gicus．霍乱弧菌Vibrio cholerae．副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus．溶藻弧菌Vibrio alginolyticus．美人鱼弧菌Vibrio damsela．拟态弧菌Vibrio mimicus和好利斯弧菌Vibrio hollisae，美人鱼弧菌、溶藻弧菌和霍乱弧菌占有较大优势。弧种数量与海水温度、盐度及营养盐有相关性．但其相关性因不同种和不同点而不同。检测期间．网箱养殖鱼类无明显流行病发生．但弧菌的高峰期明显与报道的鱼病高峰期相吻合。

一株新海洋细菌生物学特性及其色素性质的研究

目的研究一株产灵菌红素海洋细菌的生物学特性及其色素的性质。方法描述该菌的形态特征、培养特征、生理生化特征和拮抗性。结果该菌次级代谢产物灵菌红素,随着pH的变化色素颜色会随之变化,在pH3. 0左右稳定性最好;且在该pH值条件下,紫外线对色素的稳定性影响较小。结论色素的热稳定性高;部分金属离子对该色素影响较小;作为天然色素及药物资源具有开发和应用价值。摘 要 目的研究一株产灵菌红素海洋细菌的生物学特性及其色素的性质。方法描述该菌的形态特征、培养特征、生理生化特征和拮抗性。结果该菌次级代谢产物灵菌红素,随着pH的变化色素颜色会随之变化,在pH3. 0左右稳定性最好;且在该pH值条件下,紫外线对色素的稳定性影响较小。结论色素的热稳定性高;部分金属离子对该色素影响较小;作为天然色素及药物资源具有开发和应用价值。

海洋细菌Aeromonas hydrophila和Vibrio vulnificus对单萜柠檬烯的生物转化产物分析

研究了南海海洋细菌嗜水性气单胞菌Aerom onas hydrophila(5-213)和创伤弧菌Vibrio vulnificus(13-203)在培养基中添加单萜(D)-柠檬烯后提取产物的组成变化情况。经GC-MS分析发现该两细菌对(D)-柠檬烯有显著的生物催化转化作用,能对底物进行不同程度的氧化、还原、水解、酯化、开环等反应,并产生丰富的系列结构不同的其它萜类化合物:包括单萜、倍半萜、二萜、以及三萜等。通过单萜微生物转化和生物合成必将获得新的活性萜类产品,也为丰富的天然单萜资源的开发与利用提供新的途径和方法。

红海杆菌属海洋细菌产物Blue-Ⅰ对人胃腺癌细胞生长的影响

目的研究一种新的红海杆菌属(Rhodomari-nobacter)海洋细菌所产生的次级代谢产物Blue-Ⅰ是否抑制胃腺癌细胞生长。方法用MTT法测得Blue-Ⅰ对人胃腺癌细胞MCG803的IC50;单细胞凝胶电泳观察MCG803细胞是否发生DNA损伤;用Hoechest33258染色法和流式细胞仪检测MCG803细胞凋亡及细胞周期的改变。结果Blue-Ⅰ抑制MCG803细胞的生长,IC50为(4.6±1.1)mg·L-1;Blue-Ⅰ引起MCG803细胞基因组的降解,2.5,5和10mg·L-1Blue-Ⅰ处理后MCG803细胞彗星实验的拖尾率由对照组(4.2±1.2)%上升到(23.2±4.9)%,(51.4±6.9)%和(68.7±6.5)%,拖尾细胞的平均尾长随着处理浓度的升高而显著升高;用Hoechest33258染色,观察到Blue-Ⅰ引起MCG803细胞核呈典型的凋亡形态;经流式细胞仪分析,2.5,5和10mg·L-1的Blue-Ⅰ处理24h,凋亡细胞率分别由对照组的(3.5±0.6)%上升为(11.4±3.5)%,(32.4±4.9)%和(50.7±6.6)%。Blue-Ⅰ还能导致MCG803周期细胞比例发生改变。结论Blue-Ⅰ具有抑制胃腺癌细胞增殖的作用,其机制可能主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡。

九孔鲍养殖水体及其肠道不同菌群抗药性研究

为更好地防治鲍鱼病害的发生和流行 ,对分离自广东汕尾健生鲍鱼养殖场九孔鲍养殖环境及其肠道中不同细菌菌群的耐药性进行了研究。结果表明 ,四环素、青霉素G、卡那霉素、丁胺卡那霉素和新生霉素均对绝大多数异养菌和弧菌菌株都不敏感或无作用 ;相反 ,氟哌酸、红霉素、氯霉素以及环丙沙星等则均对它们比较敏感 ;复方新诺明、链霉素和多粘霉素B对弧菌菌株均有作用 。

海洋新细菌Zooshikella sp.SY01的培养条件研究

从海南三亚海域表面海水分离得到一株能产具有强效生理活性的灵菌红素类化合物的海洋新细菌Zooshikella sp.SY01,对这株细菌的培养条件进行了研究。在2216E培养基中分别加入色氨酸、组氨酸、内酯酸、樟脑、柠檬烯、干酪素、二苯胍、香豆素、间二硝基苯等9种不同物质,培养5d后,利用(+)ESI-MS技术测定了不同培养条件下代谢产物的产生情况。研究结果表明,加入色氨酸、组氨酸、干酪酸,不影响细菌灵菌红素的生物合成;加入内酯酸、樟脑、柠檬烯、二苯胍、香豆素对细菌生长或者灵菌红素的生物合成具有一定的抑制作用,能明显延迟培养液变红的时间;而加入间二硝基苯则能完全抑制细菌产灵菌红素类化合物。(+)ESI-MS对细菌Zooshikella sp.代谢产物相对分子质量检测的结果也表明,在不同培养条件下能够产生化学结构多样的代谢产物,尤其是在柠檬烯组,检测到系列相对含量高的较大相对分子质量的化合物,表明该菌具有丰富的生物合成潜力。深入研究并优化该菌的培养条件,有望从该菌的代谢产物中发现更多新的灵菌红素类化合物和其它新结构的活性先导化合物。

间苯二甲酸二甲酯的好氧微生物降解及其生化途径

从红树林污泥中通过富集培养分离到4株细菌,鉴定结果是多杀巴斯德菌(PasteurellamultocidaSa)、产酸克雷伯菌(KlebsiellaoxytocaSc)、少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspauci mobilisSy)和嗜中温甲基杆菌(MethylobacteriummesophilicumSr)。在纯培养降解间苯二甲酸二甲酯(DMI)时发现,单一纯菌株不能完全矿化间苯二甲酸二甲酯,而2种或3种纯菌株组成的混合菌可以将220mg·L-1的底物在12d内完全矿化。主要的中间产物有间苯二甲酸一甲酯(MMI)和间苯二甲酸(IA)。根据鉴定出的中间产物,DMI的生化降解途径为:DMI→MMI→IA→CO2+H2O。研究结果表明,DMI的2个酯基的水解是决定DMI能否完全矿化的重要步骤,但2个酯基的酶催化水解反应有差异,由不同的细菌分步来完成,说明是酯酶对不同底物的专性所致;第2个酯基的水解对整个降解过程有决定性作用。

东北季风期海南岛三亚湾初级生产力分布特征及其影响因素

根据2006年10月和2007年1月的监测资料,对三亚湾在东北季风初始期和盛行期初级生产力的分布特征及其受水体环境的影响因素进行了分析。三亚湾秋、冬季表层潜在初级生产力平均值分别为6.81mgC·m-3·h-1和7.47mgC·m-3·h-1;水柱初级生产力平均值分别为504.96mgC·m-2·d-1和495.33mgC·m-2·d-1。东北季风期间,三亚湾水体垂直混合作用加强,层化现象减弱,水动力过程和营养盐等环境因子是该海湾初级生产力分布特征和季节变化的重要调控因素;其中冬季较高的DIN分布对表层初级生产力有潜在促进作用,而水体扰动增强、真光层深度下降则导致水柱初级生产力低于秋季。三亚河口近岸水域秋、冬季均为营养盐、叶绿素a及初级生产力的高值区,其中表层潜在初级生产力在秋季和冬季分别达到了45.80mgC·m-3·h-1和39.27mgC·m-3·h-1,表明调查期间三亚河营养盐输入对近岸水体浮游植物初级生产过程的显著影响。

杂色鲍健康苗种与患病苗种异养细菌致病毒力因子的比较研究

2002年以来,南方杂色鲍苗出现大规模死亡的问题,严重影响到南方鲍产业的发展。为寻找病因,于2004年自广东深圳下沙鲍鱼场培苗过程中变白掉板的杂色鲍苗以及官湖养殖场健康鲍苗各分离到19株和15株异养细菌,在此基础上研究了它们蛋白酶、淀粉酶、明胶酶、磷脂酶的产酶能力及溶血现象,并对它们的产酶能力及溶血能力进行了比较分析。结果表明,虽然来自下沙病鲍苗的菌株比来自官湖的健康鲍苗的溶血能力差;但它们大多数具有较强的分泌蛋白酶、明胶酶、淀粉酶、磷脂酶的能力。考虑到胞外酶是细菌的毒力因子之一,据此推测,下沙鲍鱼场鲍苗发生脱板死亡的原因可能与这些菌株能分泌胞外酶有关。

南沙群岛海区沉积物中可培养的非嗜压好气性异养细菌的初步调查

采用16SrRNA基因序列分析,对南沙群岛海区沉积物中分离获得的细菌进行了种类鉴定及多样性初步研究。发现沉积物中可培养的非嗜压好气性异养细菌主要为革兰氏阳性细菌,其中海洋芽孢杆菌又是最常见的种;分离获得的菌株中存在部分细菌的16SrDNA序列与发表在国际基因数据库中的16SrDNA序列表现出较大的差异,但目前尚未能直接确定其属种,说明在南海海洋沉积物中存在着我们目前还不了解的细菌多样性,而且可以通过分离培养获得其中的部分新的菌株,提示该海区沉积物中蕴藏着丰富的细菌资源。

九孔鲍肠道及其养殖水体中异养细菌抗药性研究

为了解鲍鱼养殖环境中异养细菌的抗药性,对自广东汕尾粤顺鲍鱼养殖场九孔鲍养殖环境及其肠道中的异养细菌进行了分离鉴定,并对所分离鉴定的菌株进行了四环素等16种抗生素的抗药性试验。结果表明,鲍鱼养殖水体的异养细菌主要由鞘氨醇单胞Sphingomonaspaucimobilis、巴斯德氏菌属Pasteurellasp、莫拉氏菌属Moraxellasp、假单胞菌属Pseu-domonassp、弧菌属Vibriominicus等9种组成;鲍鱼消化道异养细菌类群菌株则由鞘氨醇单胞菌属Sphingomonassp、气单胞菌属Aeromonassp、黄杆菌属Flavobacteriumsp等7种组成。抗药性试验揭示,大多数异养菌菌株对四环素、青霉素G、卡那霉素、丁胺卡那霉素和新生霉素均产生了抗药性,而对氟哌酸、红霉素、氯霉素以及环丙沙星等的抗药性则相对较弱。

九孔鲍肠道及其养殖水体中弧菌抗药性的研究

为更好地防治鲍鱼病害的发生和流行,我们对分离自广东汕尾粤顺鲍鱼养殖场九孔鲍肠道及其养殖水体的弧菌菌株的耐药性进行了研究。对所分离鉴定的菌株进行了16种抗生素药物敏感性试验。结果表明,对绝大多数分离的菌株,四环素、青霉素G、卡那霉素、丁胺卡那霉素和新生霉素都不敏感或无作用,氟哌酸、红霉素、氯霉素以及环丙沙星等则均比较敏感;复方新诺明、链霉素和多粘霉素B对所有所实验的菌株均有作用。