鸭传染性浆膜炎灭活疫苗比较研究

将重庆地区分离鉴定的 2株鸭疫里氏杆菌培养、灭活 ,加入佐剂制成蜂胶、氢氧化铝和油乳剂灭活疫苗 ,分别免疫5日龄雏鸭。结果表明疫苗是安全的 ,经一次免疫后 10天的保护率分别是 70 %、5 0 %、75 % ,15天后的免疫保护率分别是80 %、75 %、10 0 % ;经 2次免疫后 7天的保护率分别是 10 0 %、10 0 %、89% ,10天后的保护率均达到 10 0 %。

鸭传染性浆膜炎蜂胶疫苗研制

从重庆病鸭中分离到 2株细菌 ,经细菌形态学、生理生化指标鉴定 ,证明为鸭疫里氏杆菌 (Riemerella anatipes-tifer,RA)。用改良的血清酵母肉汤进行增菌培养 ,将 2菌株菌液混合 (1∶ 1,体积比 ) ,经甲醛灭活后 ,加入蜂胶佐剂 ,制成蜂胶灭活疫苗。用其免疫 5～ 7日龄雏鸭 ,一免后 7、10、15 d皮下注射 RA混合菌液攻毒 (0 .2 m L /只 ) ,平均保护率达 6 6 .6 7% ;10 d后二免 ,二免后 7、10 d攻毒 (0 .2 m L/只 ) ,平均保护率达 94.47%

蛋鸡大肠杆菌诱发卵黄性腹膜炎的诊治

重庆潼南某场鸡群出现以蛋鸡腹部膨大为明显特征的死亡,取发病鸡群的典型病例经临床诊断、病理观察及实验室鉴别诊断,确诊为大肠杆菌病。分离出该鸡场的流行菌株制成油剂灭活苗,给鸡群按照0.3 mL/羽的量进行免疫,发病率迅速下降,控制了疫情,保护率可达95%。诊治结果还表明疫苗是安全的。

早期诊断心肌损伤肌球蛋白胶体金免疫层析法研究

目的建立一种简便、快速、准确检测人心肌损伤的胶体金免疫层析法(GICA)。方法制备胶体金标记抗Myosin多肽抗体,抗Myosin单克隆抗体,结合垫和样品垫的处理,组装免疫层析试纸条。检测患者血清中Myosin,进行敏感性和特异性评定。结果测试条灵敏度可达5ng/mL。检测30例急性心肌梗塞(AMI)患者血清Myosin水平,并与Roche肌钙蛋白胶体金免疫层析试剂条比较,符合率达84.2%。结论本方法特异性强、灵敏度高、简便快速、可用于急性心肌损伤的早期诊断。

噬菌体抗体库技术应用研究进展

噬菌体抗体库技术是近几年发展的一项分子生物学技术,是迄今发展最成熟、应用最广泛的制备抗体的技术。它是一种将PCR技术和噬菌体展示技术相结合,并在噬菌体表面表达、分泌,经过筛选后获得特异性抗体的技术。就噬菌体抗体库技术的原理、构建、筛选及其应用研究进展进行综述。

猪繁殖和呼吸综合征病毒基质膜蛋白和核衣壳蛋白基因的克隆与鉴定

猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）的基质膜（Ｍ）蛋白和核衣壳（Ｎ）蛋白是２种重要的结构蛋白。本试验根据ＰＲＲＳＶ美洲毒株的基因序列，设计了能够扩增Ｍ和Ｎ蛋白基因的１对引物，并在２个引物的两端分别加入ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶切位点，经ＲＴ－ＰＣＲ技术获得了一约９５０ｂｐ的目的基因片段，并将此基因克隆于ＰＢＶ２２０载体，构建了ＭＮ蛋白基因重组质粒ＰＢＶＭＮ，进一步由重组质粒回收ＭＮ基因片段亚克隆于ｐＳＫ＋（ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ＋）测序载体，构建了重组质粒ＰＢＳＭＮ，经部分序列分析鉴定，重组质粒含ＭＮ蛋白基因。此基因的克隆为进一步研究该病毒ＭＮ蛋白免疫学特性及其分子基础和基因诊断技术奠定了基础。

鸭疫里默氏杆菌培养特性的研究

鸭疫里默氏杆菌标准1型和2型与野毒株进行各种培养基培养特性的对比,并利用标准1型和2型菌株免疫的实验鸭鲜血制备成鸭疫里默氏杆菌鲜血平板,建立鸭疫里默氏杆菌鲜血平板实验室初步鉴别诊断法。结果表明:不同来源的鸭疫里默氏杆菌在显微形态、生化试验略有不同;不同培养基上鸭疫里默氏杆菌表现出不同的生长速度,不同来源的鸭疫里默氏杆菌在固体培养基上的菌落形态大小、显微形态略有不同;鸭疫里默氏杆菌鲜血平板能对标准1型、2型、鸭疫里默氏野毒株、大肠杆菌、巴氏杆菌及疑似里氏杆菌进行实验室的初步鉴别诊断。

电磁铁涡流制动分析与设计

介绍了电磁铁涡流制动的工作原理。通过建立二维电磁场分析模型,对涡流制动系统进行了电磁场数学分析,推导并求解出了制动力和运行速度之间的关系表达式。同时,利用ANSYS有限元分析软件建立了电磁铁分析模型,通过改变励磁电流、气隙厚度、导轨厚度来求得这些参数对制动力和吸引力的影响,从而为涡流制动系统设计提供了依据。

应用RTPCR检测流产胎儿组织中猪繁殖与呼吸综合征病毒

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)美洲型膜蛋白和核衣壳蛋白基因序列 ,设计了一对含有EcoRI和BamHI酶切位点的引物 ,用RT PCR对四个流产猪场的病料进行了检测 ,扩增出约 918bp的基因片段。通过病毒分离、酶切鉴定和序列分析证实为PRRSV感染。结果说明应用所设计的引物进行RT PCR快速检测PRRS是可行的 ,为我国快速特异诊断PRRS和PRRSV强毒株的深入研究奠定了基础。

抗禽流感病毒轻链抗体库的构建

目的: 构建抗禽流感病毒 (AIV)抗体Fab轻链库,以便进一步构建完整AIV噬菌体抗体库。方法: 采用RT PCR技术, 从经禽流感灭活油乳剂疫苗免疫的罗曼蛋鸡的外周血淋巴细胞中扩增抗AIV抗体轻链基因, 将扩增的抗体轻链基因与载体PComb3HSS连接后, 电转化入大肠杆菌XLI Blue, 克隆筛选重组抗体Fab轻链基因的质粒, 并进行酶切鉴定和序列分析。结果: 扩增的AIV抗体轻链基因片段的大小约为 617bp。经克隆筛选鉴定和序列分析证明, 获得抗AIV抗体轻链库, 该轻链库库容量为 2. 5×106, 轻链基因的重组率为 50%。结论: 构建了库容量为 2. 5×106 的抗AIV抗体轻链基因库, 为下一步构建鸡抗AIV噬菌体抗体库和筛选特异性的AIVFab抗体奠定基础。

鸭疫里氏杆菌和大肠杆菌二联灭活疫苗研究

将鸭疫里氏杆菌(RA)通过加有血清的改良肉汤培养,得菌数在520亿～2000亿/mL的菌液;鸭大肠杆菌(E.coli)通过普通肉汤培养,得菌数在1000亿～5000亿/mL的菌液,将两菌液甲醛灭活后以2.5∶1的比例混合,再与灭菌的油乳剂以2∶5的比例强力搅拌,制成二联油乳剂灭活疫苗,经无菌检验,安全检验合格后,做免疫保护试验,免疫6日龄雏鸭(0.5mL/只),于18天后攻毒(RA:0.2mL/只;E.coli:0.1mL/只),保护率分别为75%和50%;6日龄一免,14日龄二免(均0.5mL/只),于二免后11天攻毒,保护率分别为100%和80%。

间接血凝试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体

以猪繁殖与呼吸综合征 (PRRS)病毒致敏猪红细胞作诊断液 ,用间接血凝试验 (IHA)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体。检测了可疑猪场 80份血清样本 ,PRRS阳性 32份 ,阳性率 40 % ,与ELISA试验比较符合率 98%。用此方法检测PRRS疫苗免疫猪血清 ,发现其抗体水平在初免后 15天升高 ,二免后 15天达最高峰 ,二免后

重组猪α干扰素的体外活性测定和冻干保护剂的筛选

为了测定猪α干扰素的活性并选出合适的冻干保护剂,制备了重组猪α干扰素,利用细胞病变抑制法测定了干扰素在Marc-145细胞抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)时的活性,并筛选出效果较好的冻干保护剂。结果表明:制备的重组猪α干扰素活性达到了4.41×105U/mg。选择3%甘露醇作为保护剂,为进一步研究干扰素注射剂奠定了基础。

重组猪IFNα的构建及原核可溶性表达研究

使用原核表达系统可溶性表达猪α-干扰素,并进行纯化和鉴定。根据Gene Bank中报道的猪α-干扰素成熟肽基因序列设计引物,以猪肝脏细胞基因组DNA为模板,用PCR方法扩增猪α-干扰素成熟肽基因,并将其定向克隆到原核表达载体pET32a+中,转化大肠杆菌DH5a。阳性克隆经PCR鉴定、双酶切鉴定以及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21进行诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE分析、镍柱亲和层析纯化、Western-blot鉴定。结果表明:成功构建了猪α-干扰素原核表达载体pET32a+-poIFN-α;表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约3.8×104的位置出现了目的蛋白条带,与预期相符;Western-blot鉴定显示有特异性条带出现。实现了重组猪α-干扰素的可溶性表达,获得了纯度较高的重组猪α-干扰素,为进一步研究其药物作用奠定了基础。

一类新的T细胞亚群“Th9”与炎症相关因子IL-9之间关系的研究进展

辅助性T细胞从20年前的Th1和Th2报道至今,又增加了很多新成员,如Th17和Tregs等。这类辅助性T细胞是以分泌IL-9和IL-10为主。IL-9主要是与过敏性寄生虫感染、哮喘、遗传性过敏症和脑脊髓炎有关,因此,从细胞免疫学角度揭示了IL-9与Th9的关系,可以进一步达到治疗相关疾病的目的。就与之相关的研究进行了综述。

免疫鸡群感染新城疫的诊断及其对策

本文报道免疫鸡群感染新城疫后,产蛋下降24%和HI 抗体水平上升4倍以上,并继发感染大肠杆菌而死亡。对此鸡群进行接种NDI 系苗表明,接种组产蛋率很快由56%恢复到70%,而对照组无恢复现象,这为免疫水平不高(抗体效价<log_25),有感染和流行新城疫的产蛋鸡群制定合理的免疫程序提供了理论依据.

间充质干细胞治疗肝衰竭研究进展

论述了间充质干细胞移植治疗暴发性肝衰竭的可行性、细胞移植过程中所遇到的问题和细胞移植途径等,为干细胞移植治疗肝衰竭提供理论依据。

禽流感病毒M_(2e)基因与鸡IgG Fc基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化

将含禽流感病毒M2蛋白膜外区(M2e)且偶联了鸡IgG Fc片段的重组质粒pET32a(+)的大肠杆菌,用终浓度为0.5 mmol/LIPTG在37℃下诱导表达,获得了包涵体表达的目的蛋白。Western-blotting试验表明,M2e能与兔抗禽流感H5阳性血清发生反应,且在47kD处出现一条特异性条带,具有良好的免疫学活性.表达产物通过His-Ni2+柱亲和层析后,得到了较好的纯化效果。本实验为进一步研究M2蛋白的生物学活性、检测方法及通用疫苗的开发奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗弱毒株的克隆与鉴定

自美国和荷兰引进的猪繁殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）疫苗弱毒株，经ＭＡＲＣ－１４５细胞培养复壮，采取有限稀释法对疫苗株进行纯化克隆。克隆毒株在ＭＡＲＣ－１４５细胞上培养７２ｈ出现典型的细胞病变（ＣＰＥ）。取接种病毒后３６ｈ的ＭＡＲＣ－１４５细胞作超薄切片电镜观察，于感染细胞浆内及空泡化内质网内均有散在的病毒颗粒，大小约５０～６０ｎｍ。疫苗毒株经ＥＬＩＳＡ鉴定，并以ＭＡＲＣ－１４５细胞上的病毒培养物初步纯化作为抗原，检测了ＰＲＲＳ可疑猪场的血清８０份，其中阳性３４份，阳性率为４２．５％，并探讨了疫苗毒株作为抗原的可能性。

鸡新城疫超强病毒株的分离鉴定与免疫研究

从重庆市发病地区分离到一株鸡新城疫病毒 ,经流行病学调查、鸡胚接种、细胞培养、血凝与血凝抑制试验及动物实验鉴定 ,证明为一株超强新城疫病毒。病料接种鸡胚 2～ 3天死亡 ,接种的鸡胚成纤维细胞 ,48～ 72h出现细胞病变 ,分离的病毒能凝集鸡红细胞 ,HA效价 6～ 7log 2 ,该凝集特性被标准新城疫血清所抑制 ,动物实验接种的小鸡 2～ 6天死亡。流行地区鸡注射由分离病毒制备的油乳剂疫苗 ,不再表现临床症状 。