基于UFLC-QTrap-MS/MS结合多元统计分析的不同产地、不同部位乌药中核苷和氨基酸类成分分析

本研究建立了一种超快速液相色谱-三重四极杆/线性离子阱-串联质谱(UFLC-QTrap-MS/MS)同时测定乌药中11种核苷类和14种氨基酸类成分的分析方法,并结合多元统计分析比较不同产地、不同部位乌药的质量。采用Waters XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm×3.5μm),以0.2%甲酸水溶液(A)-0.2%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱;在电喷雾正离子模式下,以多反应监测(MRM)进行质谱检测;基于各成分的质量浓度,用方差分析(ANOVA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)、层次聚类分析(HCA)、逼近理想解排序法(TOPSIS)以及灰色关联度分析(GRA),对不同产地、不同部位乌药样品进行综合评价。结果表明,所测成分在一定浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数均大于0.9924;精密度、重复性、稳定性良好,平均加样回收率为94.86%~106.47%,相对标准偏差(RSD)均小于4.55%。不同产地、不同部位乌药样品间存在一定的差异,HCA和PCA 2种方法均将样品分为3类。OPLS-DA模型分析通过VIP值共筛选得到6个差异性化合物,分别为尿苷、丙氨酸、胞嘧啶、黄嘌呤、腺嘌呤、鸟嘌呤。该方法简便、灵敏度高、重现性好,可用于乌药中核苷和氨基酸类成分的同时测定,为药材质量评价和综合利用提供方法参考。

鱼腥草化学成分、生物活性及临床应用研究进展

鱼腥草为药食两用常用中药,为治疗肺痈之要药,是鱼腥草注射液等数十种中成药的原料药。其主要含有挥发油、黄酮、生物碱等成分,具有抗病毒、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性,临床应用广泛,然而,其药效物质基础及作用机制尚不明确,2015年版《中国药典》尚无含有量测定项。本文对鱼腥草的化学成分、生物活性及临床应用研究进展进行综述,以期为其进一步研究、开发利用奠定基础。

黄蜀葵花中5种黄酮类化合物对肠道L细胞AGEs/RAGE/p38MAPK/NF-κB信号通路的调节作用

目的探讨黄蜀葵花中5种黄酮类化合物对肠道L细胞AGEs/RAGE/p38MAPK/NF-κB信号通路的调节作用。方法200 mg·L^(-1)AGEs作用肠道于L细胞株GLUTag细胞,Western blot检测细胞中RAGE、p22^(Phox)、p47^(Phox)、p53、Bax蛋白的相对表达量,ELISA法检测TNF-α、IL-1、IL-6、caspase-3、caspase-9的含量。实验分为7组:空白对照组(NG)、模型组(AGEs)、槲皮素组(QT)、异槲皮苷组(IQT)、金丝桃苷组(HY)、槲皮素-3'-O-葡萄糖苷组(QG)、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷组(GG)。NG细胞培养于DMEM低糖培养基中;AGEs细胞培养于含200 mg·L^(-1)AGEs的DMEM低糖培养基中;给药组细胞分别培养于含50μmol·L^(-1)各黄酮单体及含200 mg·L^(-1)AGEs的DMEM低糖培养基中。各组细胞经药物干预24 h后,Western blot检测细胞中RAGE、p22^(Phox)、p47^(Phox)、p53、Bax、p-p38MAPK、NF-κB蛋白的相对表达量,ELISA法检测TNF-α、IL-1、IL-6的含量及caspase-3、caspase-9的活性。结果模型组细胞中RAGE、p22^(Phox)、p47^(Phox)、Bax、caspase-3、caspase-9、Phospho-p38MAPK、NF-κB相对表达量及细胞上清液中TNF-α、IL-1、IL-6的分泌量明显上调(P<0.01),p53相对表达量明显下调(P<0.01)。50μmol·L^(-1)槲皮素、异槲皮苷、金丝桃苷、槲皮素-3'-O-葡萄糖苷、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷分别给药后,各蛋白的相对表达量及炎症因子的分泌量接近正常组。结论黄属葵花中5种黄酮类化合物能明显抑制肠道L细胞AGEs/RAGE/p38MAPK/NF-κB信号通路。

中医病证相符的大鼠疮疡模型的建立及其血浆、尿液代谢组学研究

目的:观察胶带表皮剥脱加金葡菌菌液注射方法致大鼠背部疮疡模型的造模效果。方法:20只SD大鼠分为正常组和模型组各10只,模型组麻醉后背部脱毛,以胶带粘扯背部软毛脱表皮,滴注菌液待其自然苏醒,以后连续3d于其皮下注射菌液,正常组以生理盐水代替菌液。至第4天取局部组织进行HE染色和革兰氏染色,收集血浆及尿液备检测。通过观察正常组大鼠与模型组大鼠全身及局部疮面情况、病理标本,判断大鼠疮疡模型建模成功。利用代谢组学分析方法,对正常组与模型组大鼠的血浆与尿液进行代谢轮廓分析。结果:模型大鼠表现出阳证疮疡中期成脓的证候特点,病理切片观察显示造模成功,代谢组学检测显示实验模型大鼠血浆、尿液的图谱与正常组大鼠的图谱存在一定的差异,PCA图可以看出正常组与模型组大鼠血浆、尿液代谢谱分为两类,两者明显区分。OPLS-DA图可以看出正常与模型大鼠的血浆、尿液生物样品呈现聚拢状态,且区分明显。结论:模型大鼠表现出中医"阳证"证型特点,胶带表皮剥脱菌液滴注加皮下菌液注射造模方法可制作出符合实验需要的体表感染疮疡模型(中期)。

大鼠灌胃缩泉方制剂后尿、粪中的益智活性成分及代谢物的测定

目的研究大鼠灌胃缩泉胶囊和缩泉丸后,诺卡酮、益智黄酮(杨芽黄素、伊砂黄素、白杨素、山奈素和芹菜素-4',7-二甲氧醚)和益智中二芳基庚烷类成分(益智酮甲、益智酮乙、益智醇)在尿和粪中的物质形式。方法雄性Sprague Dawley经灌胃给予缩泉胶囊(3.54 g/kg)和缩泉丸(3.77 g/kg)后置于代谢鼠笼中,收集12 h的尿液和粪球。粪球称重后加入9倍体积的去离子水,高速匀浆。分别取100μl尿液和粪球匀浆液于离心管中,加入300μl甲醇,漩涡振摇5 min,13 000次/min下离心10 min,取上清液,在N2下吹干,残渣用50μl甲醇复溶,再次振摇和离心,取上清液40μl,利用液相色谱-串联质谱联用仪(LC-MS/MS)进行分析。结果根据上述对照品在生物样品中的LC-MS/MS出峰情况,通过比较空白尿、粪样品与给药后相应的尿粪样品,研究发现,大鼠灌胃后,在尿液和粪便中主要检测到原形物质形式,未检测到葡萄糖醛酸结合物等二相代谢产物。结论大鼠尿液中检测到的诺卡酮、益智酮甲以及杨芽黄素等成分,可能是直接作用于膀胱而发挥调节膀胱功能的活性成分。

中药炮制技术课程线上线下新型混合教学模式探析

混合式教学模式是随着教育信息化的深入,将传统教学方法与"互联网+"时代下的教学方法进行整合的一种教学模式,是现阶段高等院校教育教学改革的重要方向之一。此论文以混合式教学理论与翻转课堂教学方式为基础,依托中药炮制技术课程网络教学资源库,构建了"任务发布—课前自学—在线答疑—课堂实施—课后反思"线上线下混合教学模式,为中药炮制技术课程教学方式的进一步探索与改革提供一定的参考。

天台乌药不同部位挥发性成分的GC-MS分析

目的:比较天台乌药块根和叶中挥发性成分的差异。方法:采用水蒸气蒸馏法提取天台乌药块根和叶中挥发油成分,对其挥发油的化学成分进行GC-MS分析,并用面积归一化法获得各化合物的相对含量。结果:从乌药块根中共鉴定了54个化合物,占挥发油总量的89.91%;从乌药叶中共鉴定了61个化合物,占挥发油总量的90.03%。结论:乌药块根和乌药叶中所含挥发性成分有差异,该结果为探讨乌药块根和乌药叶的品质形成机制提供了基础资料。

SPE-HPLC法测定益智果实中3种化合物的含量

目的：探索益智中不同类别指标性成分的含量测定方法,并测定不同种植基地圆柚酮、杨芽黄素和益智酮甲的含量。方法：采用固相萃取和高效液相色谱法测定益智果实中圆柚酮、杨芽黄素和益智酮甲的含量。色谱柱为菲罗门C6苯基柱（250×4.6mm,5μm）,以乙腈和水为流动相,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长240nm。结果：该方法线性,精密度,稳定性均良好,圆柚酮、杨芽黄素和益智酮甲的平均回收率为98.61%-99.98%。不同种植基地中圆柚酮的含量比较接近,但是杨芽黄素和益智酮甲的含量差异较大。广西和广东产的益智中杨芽黄素含量较低,益智酮甲含量较高。海南产益智中杨芽黄素含量较高,益智酮甲含量较低。结论：该方法准确可靠,可用于益智药材及相关产品中圆柚酮、杨芽黄素和益智酮甲多指标成分的含量测定,为完善益智药材的质量标准提供参考。

基于混合教学模式高职院校中药炮制技术课程的应用与分析

中药炮制技术是高职院校中药专业实践性较强的专业课程,本文基于教学工作中存在的多方面问题,比如学习热情不高、课程教学内容多、教学时间短等,通过培养学生兴趣、应用多种教学模式开展理论和实践教学,指导学生参加竞赛及参与实验室的建设,从而提高中药炮制技术的教学质量,以期为高等职业院校的中药炮制技术教学改革提供新的视角和参考。

三白草地上部分化学成分研究

目的研究三白草Saururuschinensis地上部分的化学成分。方法采用超临界CO_(2)萃取,硅胶、ODS、MCIGel柱色谱和半制备高效液相色谱等色谱技术进行系统的分离纯化,根据光谱数据和理化性质进行化合物的结构鉴定。结果从三白草地上部分的超临界CO_(2)萃取物中分离得到15个化合物,分别鉴定为2,3-二甲基-1,4-二(3,4,5-三甲氧基苯基)-1,4-丁二酮(1)、asperphenamate(2)、rel-(7S,8S,7’R,8’R)-3,3’,4,4’,5,5’-六甲氧基-7-O-7’,8.8’-木脂素(3)、常春藤皂苷元(4)、schisandlignans C(5)、樟叶素(6)、4-羟基-5-甲基己烷-5-内酯(7)、异黑麦草内酯(8)、perseal B(9)、myrisfragransin(10)、heteroplexisolide E(11)、curcasinlignan C(12)、去氢催吐萝芙木醇(13)、黑麦草内酯(14)和三白草二萜E(15)。结论化合物15为新化合物,化合物1为新的天然产物;除化合物3、6、13外均为首次从该植物中分离得到。

乳香属药用植物中乳香酸类化学成分、生物活性及其作用机制研究进展

乳香为橄榄科植物乳香树或同属植物的胶状树脂,在我国具有悠久的药用历史。研究表明,药用乳香效应成分主要为乳香酸类成分,具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等药理活性。在广泛的文献检索基础上,对乳香属药用植物中乳香酸类成分的种类、提取方法、生物活性、作用机制及其代谢转化研究进行较为系统地整理分析与归纳总结,为其进一步深入研究和开发利用提供科学依据。

黄蜀葵花中黄酮类成分对前脂肪细胞增殖、分化及胰岛素抵抗的影响

黄蜀葵花中富含黄酮类成分,具有保护心血管、改善肾功能等作用。该文采用3T3-L1前脂肪细胞诱导分化的成熟脂肪细胞,建立胰岛素抵抗模型,分为正常组,模型组,异槲皮苷(HY)、金丝桃苷(JY)、槲皮素(QT)、槲皮素-3'-O-葡萄糖苷(QG)、棉皮素-8-O-β-葡萄糖醛酸(GG)给药组,BCA法检测细胞培养液中葡萄糖的含量,荧光定量q PCR检测PPARγ,C/EBPα,SREBP-1,脂联素,内酯素,抵抗素基因mRNA的表达水平。结果显示,5种黄酮类化合物5μmol·L-1浓度时可促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖,浓度为100μmol·L-1时可抑制前脂肪细胞的增殖;与正常组比较,模型组细胞对葡萄糖摄取量降低(P<0.01);与模型组相比,5种黄酮类化合物100μmol·L-1给药组细胞葡萄糖消耗量显著上升(P<0.01),PPARγ,C/EBPα,脂联素表达明显增加(P<0.01),SREBP-1,抵抗素,内酯素的表达明显降低(P<0.01),促使脂肪细胞分化。研究表明,HY,JY,QT,QG,GG能调控前脂肪细胞增殖,促进脂肪细胞分化及糖脂代谢相关因子PPARγ,C/EBPα,SREBP-1,脂联素,内酯素,抵抗素的表达,促进前脂肪细胞分化,增加葡萄糖利用,从而改善胰岛素抵抗。

丹参对糖尿病肾损伤大鼠肠道菌群多样性的影响

该研究旨在评价丹参根与根茎和茎叶对糖尿病肾损伤大鼠肠道菌群多样性的影响。采用高糖高脂饲料、5%葡萄糖水、30 mg·kg-1链脲佐菌素(streptozocin,STZ)腹腔注射建立糖尿病肾损伤模型,随机分组:正常组,模型组,厄贝沙坦对照组,黄葵胶囊对照组,丹参根与根茎及丹参茎叶低、中、高剂量给药组。给药2周后,收集各组大鼠粪便,采用16S rRNA技术分析粪便中肠道菌群的多样性。结果发现,模型组肾小管上皮空泡变性、肾间质大量炎细胞浸润,各给药组可见少量炎细胞浸润,厄贝沙坦组、黄葵胶囊组、丹参根与根茎水提物高剂量组及丹参根与根茎醇提物高剂量组大鼠肾脏结构接近正常组。模型组肠道菌群多样性及结构与正常组存在显著差异,各组药物能在一定程度上改善糖尿病肾损伤大鼠粪便菌群多样性,以丹参根与根茎水提物高剂量组最为明显。糖尿病肾损伤模型组大鼠粪便中纲、目、科、属分类水平上均发现差异菌群。在科及属分类的菌群中,双歧杆菌属、Turicibacter、消化链球菌科、脱硫弧菌属、SMB53在糖尿病肾损伤模型组呈现上调趋势,乳酸杆菌属、梭菌属、理研菌科、瘤胃菌科在模型组呈现下调趋势。各组药物能不同程度地改善以上肠道菌群在模型组中的相对丰度。该实验研究结果为丹参的资源化利用及进一步开发提供了有利的依据。

黄蜀葵花中黄酮类化合物抗抑郁活性及其上调大鼠海马组织中BDNF的作用机制研究

黄蜀葵花为中国民间草药,是锦葵科秋葵属黄蜀葵[Abelmoschus manihot(L.)Medic.]的干燥花冠,已报道其具有抗抑郁活性。本文从黄蜀葵花中分离纯化得到主要黄酮类化合物,并探索其中5种化合物抗抑郁活性及其作用机制。采用D101大孔树脂柱、聚酰胺柱和Sephadex LH-20柱对黄酮类成分进行分离与纯化,经UHPLC与NMR等技术鉴定,得到8个黄酮类化合物,为杨梅素-3-O-β-D-葡糖苷(1)、棉皮素-8-O-β-D-葡糖苷酸(2,G-8-G)、棉皮素-3'-O-β-D-葡糖苷(3)、槲皮素-3'-葡糖苷(4,Q-3-G)、异槲皮苷(5,IQT)、金丝桃苷(6,HY)、杨梅黄酮(7)和槲皮素(8,QT)。采用小鼠分别灌胃化合物2、4、5、6和8(15、30、60 mg·kg^(-1))24 h后,观察悬尾实验(tail suspension test,TST)和强迫游泳实验(forced swimming test,FST),并采用Western blot技术检测小鼠海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸受体激酶B(Trk B)和磷酸化的真核延伸因子2(p-e EF2)的表达。结果表明,化合物2和4能够显著缩短小鼠在FST和TST中的不动时间,显著增加BDNF和Trk B的表达,减少p-e EF2的表达。可见,化合物2和4可上调BDNF表达而发挥其抗抑郁活性。

透脓散组方对大鼠疮疡模型干预作用及其机制的血浆代谢组学研究

目的运用血浆代谢组学方法评价透脓散、穿山甲配伍皂角刺、当归配伍川芎、生黄芪对疮疡大鼠的代谢物及代谢通路的调节作用与机制。方法采用透脓散、穿山甲配伍皂角刺、当归配伍川芎、生黄芪分别干预疮疡模型大鼠,应用液相色谱与四级杆飞行时间质谱联用技术(LC-QTOF-MS)检测各组大鼠血浆代谢指纹图谱,应用主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)和单变量统计分析方法探讨血浆中差异代谢物的变化。结果代谢组学分析发现,与正常对照相比,大鼠疮疡模型血浆中11个内源性差异代谢物的代谢被干扰(P<0. 05或P<0. 01或P<0. 001),主要涉及花生四烯酸代谢及磷脂代谢通路。与疮疡炎症模型组相比,透脓散、穿山甲配伍皂角刺、当归配伍川芎、生黄芪均能不同程度回调代谢物水平,透脓散组、生黄芪组对异常代谢的调控作用显著,且优于其他药物组。结论该研究为透脓散治疗体表感染性疾病及中医外科学内治法中"补益托毒"的治疗原理提供了一定的科学依据,该治法可拓展应用于炎症相关性疾病的治疗。

地黄叶对糖尿病肾病大鼠肠道菌群的调节作用

研究地黄叶总苷提取物及地黄叶总苷胶囊对糖尿病肾病大鼠肠道菌群的调节作用。将48只大鼠随机分为正常组(C)、模型组(M)、黄葵胶囊组(0.75 g·kg^(-1)·d^(-1),HK)、厄贝沙坦组(27 mg·kg^(-1)·d^(-1),YX)、地黄叶总苷提取物低剂量组(4.3 g·kg^(-1)·d^(-1),DHYL)、地黄叶总苷提取物高剂量组(7.2 g·kg^(-1)·d^(-1),DHYH)、地黄叶总苷胶囊低剂量组(216 mg·kg^(-1)·d^(-1),JNL)和地黄叶总苷胶囊高剂量组(360 mg·kg^(-1)·d^(-1),JNH),每组6只。除正常组外,其余各组采用高糖高脂饲料+5%葡萄糖饮水+注射链脲佐菌素(45 mg·kg^(-1),STZ)的方法复制糖尿病肾病模型。造模成功后,各组药物给药2周,通过16S rDNA测序的方法研究地黄叶总苷提取物和地黄叶总苷胶囊对糖尿病肾病大鼠肠道菌群的调节作用。结果表明,与正常组相比,糖尿病肾病模型组大鼠肠道内菌群从门水平到属水平均发生了显著变化;且模型组大鼠肠道菌中乳酸杆菌属比例显著降低;给药后乳酸杆菌属比例有所回升,尤其是厄贝沙坦组、地黄叶总苷提取物低剂量组和地黄叶总苷胶囊低剂量组调节作用较为显著。可见,地黄叶总苷具有改善STZ诱导的糖尿病肾病大鼠肠道菌群失调的作用。

基于16S rDNA测序技术分析不同龄期蚕沙中菌群多样性

该文对不同龄期烘干前后蚕沙中菌群多样性进行分析与评价,以期明确其菌群组成及其丰富度差异,阐明烘干处理对中药材蚕沙中菌群的影响,为其功效科学内涵的揭示提供依据和参考。应用高通量测序技术测定蚕沙细菌的16S rDNA-V4变异区序列,应用Qiime,Mothur,PICRUSt等软件整理和统计样品序列数目和操作分类单元(OTUs)数量,分析蚕沙样品中菌群的组成、丰度、分布、Alpha多样性、Beta多样性,菌群差异性及对群落的代谢功能等进行预测。该研究获得用于分析的有效序列数为259 250;稀疏曲线表明测序深度充分,OTU的数量接近于饱和。蚕沙菌群主要由变形菌门(Proteobacteria,89.3%)、放线菌门(Actinobacteria,5.0%)、厚壁菌门(Firmicutes,4.4%)、拟杆菌门(Bacteroidetes,1.1%)、蓝细菌(Cyanobacteria,0.2%)组成,其优势菌门为变形菌门。烘干后蚕沙的菌群多样性及丰富度降低,五龄蚕沙尤为明显。PICRUSt分析蚕沙菌群对应的基因功能发现膜转运、碳水化合物代谢、氨基酸代谢、脂质代谢、核苷酸代谢,细胞过程与信号传导等基因功能丰度较高。烘干处理可显著降低蚕沙中致病菌的种类和数目,有利于药材药用品质,相比于低龄期蚕沙,五龄蚕沙更适宜入药。Illumina Mi Seq高通量测序技术为蚕沙菌群的研究提供了更加准确、科学的数据资源。

基于QTRAP UPLC-MS/MS的乌药不同部位中生物碱、内酯类和黄酮类成分分析

目的建立超高效液相色谱-串联四级杆/线性离子阱质谱(QTRAP UPLC-MS/MS)同时测定乌药中生物碱(去甲异波尔定、波尔定碱)、内酯类(乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯、乌药醇、去氢木香内酯)和黄酮类(儿茶素、表儿茶素、异槲皮苷)成分的方法,比较乌药不同部位中各成分的含量差异。方法样品经甲醇超声辅助提取,稀释后采用ACQUITY UPLCRHSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm),保护柱:Cartridge Guarde Colume E Inertsil ODS-SP(4.0 mm×10 mm,5μm);以水(含0.1%甲酸,A相)-乙腈(B相)为流动相;梯度洗脱,柱温35℃,流速0.2 mL·min^(-1),进样量5μL。采用电喷雾离子源(ESI),多反应离子监测(MRM)扫描方式进行检测。结果10种目标化合物在一定浓度范围内均呈良好的线性关系,相关系数大于0.9916,精密度、重复性和稳定性良好;加样回收率在99.13%~103.07%,RSD值均小于5%。结论所建立的方法简便、灵敏度高、重现性好,可用于乌药中多元功效物质的同时测定,为乌药药材内在质量的综合评价和综合利用提供新的方法参考。