复方雪莲烧伤膏促创面愈合、抗炎作用研究

本研究采用大鼠Ⅲ度感染性烫伤模型、小鼠深Ⅱ度烧伤模型及二甲苯致小鼠耳部炎性肿胀模型，评价了复方雪莲烧伤膏对大鼠Ⅲ度感染性烫伤创面、小鼠深Ⅱ度烧伤创面的促愈合及抗炎作用。结果显示：不同浓度的复方雪莲烧伤膏均能明显促进创面愈合（Ｐ＜０．００１），同时还能明显减轻二甲苯所致小鼠耳部肿胀，具有较强的抗炎作用（Ｐ＜０．００１）。

重组人β-防御素基因在COS-7细胞的转染表达

为探索建立持续稳定表达 h BD- 2的哺乳类动物型工程细胞的可能性 ,作者研究构建真核重组表达载体 p CMV.tag2 B/h BD- 2以进行 COS- 7细胞转染表达实验。将本室克隆获得的 h BD- 2全长 c DNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒 p CMV.tag2 B构建出 h BD- 2的重组表达载体 p CMV.tag2 B/h BD- 2 ,并经 DNA测序证明h BD- 2 c DNA片段的插入方向和其全长 c DNA的碱基组成顺序均准确无误。通过脂质体转染法将 p CMV.tag2 B/h BD- 2导入 COS- 7细胞。RT- PCR法和免疫印迹法分别从 m RNA水平和蛋白质水平检测到被转染的 COS- 7细胞系能有效表达 h BD- 2。

重组人β-防御素-2基因的植物表达载体的建立

目的 运用植物转基因技术 ,探索构建表达人类 β-防御素 - 2 ( h BD- 2 )的植物生物反应器的可能性及技术路线。方法 将 C端带 myc和 6x His双标记的重组 h BD- 2基因插入植物真核表达载体 p CAMBIA13 0 4中 ,构建 C端带 m yc和 6x His双标记的重组 h BD- 2植物真核表达载体 rp CAMBIA13 0 4/ h BD- 2 / His。利用此载体转化根癌农杆菌 L BA44 0 4,经卡那霉素进行抗性基因筛选和 PCR检测 ,确定根癌农杆菌的阳性克隆。重组 h BD- 2通过转化阳性的根癌农杆菌被导入小麦幼胚愈伤组织细胞 ,经潮霉素进行抗性基因筛选 ,获得抗性愈伤组织。结果 酶切分析、PCR验证和 DNA测序等证据表明 :C端带 m yc和 6x His双标记的重组 h BD- 2已被正确地插入 p CAMBI-A13 0 4载体中 ,并位于 Ca MV 3 5 S与 Nos终止子之间 ,提示重组 h BD- 2 / His基因的植物表达载体 rp CAMBI-A13 0 4/ h BD- 2 / His已被成功构建。卡那霉素抗性基因筛选和 PCR检测显示 :rp CAMBIA13 0 4/ h BD- 2 / His已成功转化根癌农杆菌 L BA44 0 4,阳性克隆菌株已获得。潮霉素抗性筛选结果提示 :h BD- 2基因被导入小麦幼胚愈伤组织细胞。结论 本研究为进一步培育 h BD-

植物生物反应器生产药用重组蛋白质的研究进展

利用转基因植物作为生物反应器规模化生产药用重组蛋白质是一个新兴的研究领域。本文就转基因植物生物反应器的优点、几种常用的植物表达系统、采用转基因植物生产药用重组蛋白质如疫苗、重组抗体和重组人类防御素等方面的研究进展作一综述。

复方雪莲烧伤膏抗菌活性的研究

通过研究复方雪莲烧伤膏的抗菌活性及对大鼠Ⅲ度烫伤创面接种金黄色葡萄球菌ATCC-25923的实验治疗模型创面菌落计数的影响，评价复方雪莲烧伤膏外用防治烧、烫伤创面感染的功效。结果显示复方雪莲烧伤膏（混悬液）在体外能抑制多种细菌生长，而金黄色葡萄菌尤为敏感;同时，大鼠感染性Ⅲ度烫伤创面抑菌实验发现，24、48h大鼠烫伤创面菌落计数也明显低于阴性对照组，具有统计学意义（P＜0.05）。

重组人β-防御素-2基因在昆虫细胞的转染表达

目的 探索杆状病毒表达系统 (BEVS)高效表达人 β-防御素 - 2 (h BD- 2 )的可行性及其技术路线。方法 利用特异性引物经 PCR扩增 ,从重组质粒 rpc DNA3.1/h BD- 2 /myc- His中扩增出完整重组 h BD- 2 /His基因片段。将此片段插入转移质粒 p Ac GHL T- A的多克隆位点中 ,构建成重组转移载体 rp Ac GHL T- A/h BD- 2 /His。用该重组转移载体和多角体病毒 Ac NPV DNA共转染草地夜蛾细胞 (Sf2 1) ,二者在细胞内经过同源重组形成重组病毒 r Ac NPV/h BD- 2 /His。用终点稀释分析法检测感染上清重组病毒的感染效率。采用 Western印迹法通过特异性抗 - His抗体检测细胞及上清 h BD- 2 /His的表达。结果 目的基因 h BD- 2 /His正确地插入 BEVS系统的转移载体。经 rp Ac GHL T- A/h BD- 2 /His和 Ac NPV DNA共转染的 Sf2 1细胞有较高滴度的重组病毒 r Ac NPVh BD- 2 /his存在。被共转染的 Sf2 1细胞的可溶性蛋白 ,在相对分子质量约 4 7.5× 10 3处有强反应条带显示 ,其大小与根据测序结果所推测的 h BD- 2融合肽相对分子质量接近。培养上清分别在相对分子质量约 4 0× 10 3和 30× 10 3处有强反应条带显示。结论 可利用 BEVS系统作为高效表达重组 h BD- 2的生物反应器。

克雷伯氏肺炎杆菌内毒素诱导小鼠β-防御素-4基因表达及其信号传递

目的 探讨用克雷伯氏肺炎杆菌内毒素 (L PS)对小鼠 β-防御素表达的影响及其相关的信号传导通路。方法 分别给予 C3H /He J和 C3H /He N小鼠腹腔注射 L PS (4mg/kg) ,于不同时间点采取气管、肺、肾等组织 ,提取总 RNA。用 RT- PCR检测各组织β-防御素 - 3和 /或β-防御素 - 4m RNA的表达 ,并对扩增出的 c DNA片段进行测序 ;同步用 Western blot法检测该两系小鼠肺脏 I-κBα磷酸化情况 (p- I-κBα)和 I-κBα的含量。结果 1经L PS处理 2 4小时后的 C3H/He N小鼠 ,其肺脏表达 β-防御素 - 4m RNA 而 C3H/He J小鼠未见表达 ;2与未给予L PS处理小鼠比较 ,经 L PS处理 4小时后 ,C3H/He N小鼠肺组织 p- I- κBα含量明显增高 ;L PS处理后 8小时 ,p- I-κBα以及 I- κBα含量均呈减少趋势 ;至第 2 4小时 ,p- I- κBα和 I- κBα含量均明显减少。而 C3H/He J小鼠肺组织 p- I-κBα及 I- κBα含量均未见相应变化。结论 克雷伯氏肺炎杆菌内毒素能诱导 C3H/He N小鼠肺 β-防御素 - 4的表达 ;其诱导表达作用与 Toll受体蛋白 - 4介导的

松萜宁胶囊的镇痛作用及对吗啡依赖性小鼠、大鼠催促戒断的治疗作用

用扭体法及热板法考察松萜宁胶囊的镇痛作用，求得松萜宁胶囊小鼠镇痛作用的ＥＤ５０。并进一步采用剂量递增方法形成吗啡依赖模型，用纳洛酮催促戒断，以评价松萜宁胶囊对吗啡依赖性小鼠、大鼠催促戒断的治疗作用。结果表明，松萜宁胶囊具有一定程度的镇痛作用，其ＥＤ５０为６１．２８ｍｇ／ｋｇ；其对吗啡依赖性小鼠催促戒断后出现的跳跃、体重减轻等有一定程度的抑制作用；能明显抑制吗啡依赖性大鼠异常姿势、激惹、咬牙、流泪、腹泻、流涎等催促戒断反应症状（评分值Ｐ＜０．０１～０．００１），且能抑制大鼠体重减轻（Ｐ＜０．００１）。

学制“三改二”后硕士生创新能力的培养

研究生教育的质量备受关注,创新能力的培养是其质量的重要保障然而,正在我国悄然兴起的硕士研究生"三改二"学制改革浪潮会不会使已备受批评的研究生教育"雪上加霜"?怎样确保在"三改二"学制下硕士生的培养质量?如何强化其创新能力?针对这些问题进行了讨论,并提出一些强化两年制硕士生创新能力培养。

重组人beta防御素基因在COS-7细胞的转染表达

为探索建立持续稳定表达hBD-2的哺乳类动物型工程细胞的可能性，本研究构建真核重组表达载体pCMv．tag2B／hBD-2以进行COS-7细胞转染表达实验。将本室克隆获得的hBD-2全长cDNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒pCMA．tag2B构建出hBD-2的重组表达裁体pCMV．tag2B／hBD-2，并经DNA顺序证明hBD-2eDNA片段的插入方向和其全长cDNA的硷基组成顺序均准确无误。

C端带多聚组氨酸标签的重组小鼠基质细胞衍生因子-1α原核系统的表达及分离纯化

在构建SDF-1原核表达系统的基础上,探索对其活性表达产物分离纯化的技术路线。将从小鼠骨髓组织克隆出的SDF-1α成熟肽基因插入原核表达质粒pET101/D-TOPO,用以转化大肠杆菌BL21Star^(TM)菌株,经IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western Blot检测证实:其表达产物在约11.6kD处有明显条带显示,其大小与预测的重组SDF-1α/His分子量一致。采用Ni^2+-Resin固相亲和层析法对由该系统表达的C端带6Xhis标签的重组SDF-1α/His进行分离纯化,纯度达92％。体外活性检测结果表明:重组小鼠SDF-1α/His对T细胞有明显趋化和促生存作用;能有效诱导Jurkat细胞ERK磷酸化。

克雷伯氏肺炎杆菌内毒素诱导小鼠β-防御素-4基因表达及其信号传递

目的：用克雷伯氏肺炎杆菌内毒素(LPS lipopolysaccharide)分别处理Toll受体蛋白-4基因发生点突变的小鼠C3H／HeJ及其野生型C3H／HeN，从整体水平考察其对小鼠β-防御素表达的影响及其相关的信号传导通路。方法：分别给予C3H/HeJ和C3}H／HeN腹腔注射LPS(4mg/kg)，于不同时间点采取气管、肺、肾等组织提取总RNA；

C端带cmyc和多聚组氨酸双标记的重组人β防御素-2真核表达载体的构建及其在COS-7细胞的转染表达

目的：人类β-防御素(β-defensins hBDs)是一类具广谱抗微生物活性的小分子阳离子多肽，在人体多种器官尤其是粘膜上皮细胞中广泛存在，起着重要的屏障防御作用。由于hBD-2在粘膜上皮组织受炎症刺激呈诱导性表达，提示其在机体粘膜防御中的作用更为突出。本研究旨在探索建立不仅能有效表达和分泌人类β-防御素-2而且其表达产物易于被检测和分离纯化的哺乳类动物型工程细胞的可能性及技术路线。

糖皮质激素受体的调节及其意义

受体调节是七十年代以来在受体研究领域里提出的新课题。同其它受体一样,糖皮质激素受体(GCR)在其数量及亲和力方面受各种因素影响而处于动态变化之中。这些调节因素是广泛的,包括各种不同生理状态,病理状态及一些外源性物质。

巴巴多斯芦荟多糖对内毒素化大鼠和正常高龄大鼠血清及肝组织过氧化脂质的影响

目的 研究巴巴多斯芦荟多糖 (AP)对内毒素化大鼠和正常高龄大鼠血清及肝组织高过氧化脂质 (LPO)水平的影响。方法 各试验组动物连续 30d灌胃 ,给予不同剂量AP ,于试验开始的第 2 0天起连续 10d腹腔注射K0 3肺炎杆菌内毒素 (LPS 5 0 μg·kg-1)诱发大鼠高过氧化脂质产生 ;对照组均采用生理盐水。测定各试验组动物血清及肝组织中LPO的体内代谢产物丙二醛 (MDA)水平 ,以血清及肝组织MDA水平为指标 ,评价口服AP预防脂质过氧化作用。结果 口服AP 10 μg·kg-1和 5 0 μg·kg-1均能显著降低内毒素化少龄大鼠和正常高龄大鼠血清及肝组织LPO的水平。结论 AP具有一定的抗脂质过氧化作用。

巴巴多斯芦荟多糖提取物对小鼠免疫功能的影响

研究了翠叶芦荟多糖提取物（ Ａ Ｐ）对免疫器官重量及非特异性免疫功能的影响。结果，翠叶芦荟多糖提取物可促进小鼠免疫器官脾脏、胸腺增长，可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分数和吞噬指数，具有增强免疫功能的作用。

SDF-1和及其受体CXCR4的结构与功能

近年基质细胞衍生因子 1(SDF 1)及其受体CXCR4的构效关系与相互作用机制研究进展很快 .研究证实 ,SDF 1N末端 (Nt)氨基酸残基是与CXCR4相互作用的关键区域 .SDF 1的 β链与蛋白聚糖 (GAG)作用而调节SDF 1的功能 ,C端α螺旋有助于维持SDF 1的活性构象 ;CXCR4Nt、ECL2和 (或 )ECL3对于SDF 1和HIVgp12 0对CXCR4的识别和激活都很重要 ,但在识别序列上存在部分交叉重叠 .SDF 1 CXCR4与肿瘤转移密切相关 ,本文还就SDF 1与CXCR4在肿瘤治疗方面的应用进行了讨论 .

非甾体类抗炎药抗肿瘤作用的分子机制

该文从非甾体类抗炎药(NSAIDs)的抗肿瘤作用入手,结合近年来的国外最新文献和我们的研究结果,概要介绍了NSAIDs抗肿瘤作用的可能分子基础。NSAIDs抗肿瘤作用机制因肿瘤的种类而有所不同,它可通过抑制在某些肿瘤发生过程中异常表达的环氧化酶2(COX2),减少前列腺素E2等的生物合成,通过调节相关下游基因蛋白的表达,抑制肿瘤新生血管生成、阻止肿瘤细胞增殖并促进其凋亡。它也可作为过氧化酶体增殖激动剂受体γ(PPARγ)的激动剂,诱导某些肿瘤细胞内COX2的表达,促进环戊烯酮前列腺素(cyPGs)的生物合成,通过后者介导PPARγ依赖性或PPARγ非依赖性的促进肿瘤细胞凋亡作用。由于NSAIDs对肿瘤细胞抗增殖、促凋亡的特殊作用机制,与其他抗肿瘤治疗可能产生明显的协同作用。

非促有丝分裂型人酸性成纤维细胞生长因子的受体结合特性及对MAPK信号通路的影响

目的:研究非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(non- mitogenetichumanacidicfibroblastgrowthfac tor,nm haFGF)促细胞增殖活性的变化及其作用机制。方法:采用MTT法测定人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)和nm- haFGF对NIH3T3细胞株的增殖活性;采用受体放射性配基结合法,测定haFGF和nm- haFGF与其受体结合的亲和力及受体总结合位点数RT ;利用Western印迹检测haFGF和nm- haFGF分别作用于NIH3T3细胞后MAPK信号通路中ERK信号分子的表达。结果:与haFGF比较,nm- haFGF对NIH3T3细胞的促增殖活性降低,nm -haFGF与NIH3T3细胞胞膜上aFGF受体结合的亲和力下降,但与受体结合的总位点数不变。Western半定量检测结果显示,nm -haFGF组信号蛋白ERK的表达水平明显低于haFGF组。结论:nm -haFGF与受体结合能力下降,下调MAPK信号通路是导致nm haFGF的促分裂活性降低的主要原因之一。

AP对正常和内毒素化大鼠脾细胞体外分泌细胞因子的影响

从分子免疫水平探讨了巴巴多斯芦荟多糖提取物（ＡＰ）对免疫系统的作用。结果表明巴巴多斯芦荟多糖提取物对体外正常大鼠脾细胞分泌ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦα等细胞因子均有一定的促进作用，而对内毒素诱导脾细胞分泌的细胞因子ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦα有显著抑制作用。对ＩＬ－２ 的分泌在以上两种情况下均表现促进作用。显示巴巴多斯芦荟多糖提取物对细胞因子的分泌可产生双向调控作用。