代谢功能障碍相关的脂肪性肝病治疗及热门靶点的药物研究进展

代谢功能障碍相关的脂肪性肝病发病率高、发病机制复杂性,与肥胖、代谢紊乱和心血管等疾病息息相关。随着生活水平的提高,这类疾病的患病率在我国呈逐年上升趋势,甚至超过全球平均值。治疗此类疾病的药物研发一直是各大药企和科研机构关注的热点。本文概述了现有的此类疾病的治疗方法,以及最热门靶点药物的最新研究进展。

巴马火麻仁油、蛋白粉和木脂素酰胺类提取物对老年小鼠的抗衰老作用研究

目的研究广西巴马产火麻仁油、火麻仁蛋白粉与火麻仁木脂素酰胺类提取物的抗衰老作用。方法采用自然衰老小鼠,每日不同浓度火麻仁油(2.5、5、10 mL.kg-1.d-1)、火麻仁蛋白粉(1.3、2.6 g.kg-1.d-1)与火麻仁木脂素酰胺类提取物(0.11、0.22 g.kg-1.d-1)灌胃,持续30 d,最后检测老年小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,脑组织与肝组织中SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、MDA含量,脑组织总抗氧化能力(T-AOC),肝脏中ATP酶活力以及皮肤中Hyp含量,取少量皮肤制备天狼星红切片。结果火麻仁油、火麻仁蛋白粉与火麻仁木脂素酰胺类提取物均能显著提高老年小鼠体内的SOD与GSH-Px活力,增强其总抗氧化能力,降低MDA含量,调节血脂,增强ATP酶活力,改善能量代谢,增加皮肤中羟脯氨酸的含量,皮肤天狼星红病理切片也显示胶原蛋白含量明显增加。结论火麻仁油、火麻仁蛋白粉与火麻仁木脂素酰胺类提取物均有较强的抗衰老作用,尤其是火麻仁木脂素酰胺类提取物,具有进一步的研究开发价值。

盆炎灵颗粒剂成型工艺及辅料筛选的研究

目的优选盆炎灵颗粒剂的最佳处方及成型工艺条件。方法采用正交试验与综合评分法优选盆炎灵颗粒成型工艺条件,并考察不同辅料对于颗粒的吸湿性、成型性、堆密度、休止角和溶化性的影响,优选出盆炎灵颗粒最佳辅料。结果最佳辅料为糊精,最佳制备工艺为浸膏干粉与糊精比例为1∶1,乙醇浓度60%,乙醇用量为0.2ml·g^(-1)。成品颗粒临界相对湿度为63.08%。结论该颗粒剂所选辅料合理,成形制备工艺可行,本研究为盆炎灵颗粒制备工艺条件的确定及生产环境的控制提供了科学的依据。

地肤子总黄酮对二硝基氯苯致大鼠接触性皮炎的抗炎作用

目的研究地肤子总黄酮(FFK)对二硝基氯苯(DNBC)致大鼠变态反应性接触性皮炎(ACD)的抗炎作用。方法SPF级SD大鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为五组,每组8只,即空白对照组、ACD模型组、阳性药对照组(醋酸泼尼松龙2.5mg/kg)、FFK低剂量组(75mg/kg)、FFK高剂量组(150mg/kg);以DNBC建立大鼠ACD模型后,予以FFK灌胃给药,连续10d。观察皮肤变态性反应和肿胀度,同时测定血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和γ干扰素(IFN-γ)表达水平,并通过免疫组化检测耳组织中核因子κBp65(NF-κBp65)表达水平。结果与空白对照组比较,ACD模型组大鼠皮肤肿胀度明显增高,血清中IL-6、IFN-γ含量与耳组织中NF-κBp65蛋白表达明显增高,而血清中IL-10含量明显降低(P<0.01);与ACD模型组比较,FFK低剂量组与FFK高剂量组大鼠的耳肿胀度、血清中IL-6、IFN-γ含量、耳组织中NF-κBp65蛋白表达水平显著降低(P<0.01),而血清中IL-10含量显著升高(P<0.01)。结论FFK对于DNBC致大鼠ACD具有抗炎作用,其机制可能是通过抑制NF-κBp65蛋白发挥作用。

火麻仁木脂素酰胺类提取物对D-半乳糖胺盐酸盐致小鼠肝损伤的保护作用

目的观察火麻仁木脂素酰胺类提取物对D-半乳糖胺盐酸盐致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 KM种小鼠60只,按体质量随机分为正常对照组、D-半乳糖胺盐酸盐模型组、联苯双酯(150mg·kg^(-1))组,火麻仁木脂素酰胺类提取物高、中、低剂量组(180、120、60mg·kg^(-1))。连续给药7d后,腹腔注射10%D-半乳糖胺盐酸盐生理氯化钠溶液(10ml·kg^(-1))建立小鼠急性肝损伤模型,16h后,处死鼠取材,分别检测小鼠血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性,肝脏组织中脂质过氧化物丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性,光学显微镜下观察肝组织病理学变化。结果 D-半乳糖胺盐酸盐模型组小鼠肝功能明显异常,血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性显著升高,肝脏组织变性、坏死严重。火麻仁木脂素酰胺类提取物各组血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性与模型组相比明显降低(P<0.01),肝组织匀浆检测发现超氧化物歧化酶活力增加,而脂质过氧化物丙二醛含量下降(P<0.01)。肝脏病理切片结果显示,火麻仁木脂素酰胺类提取物能明显改善受损组织的病理学变化。结论火麻仁木脂素酰胺类提取物对D-半乳糖胺盐酸盐致小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用,其抗氧化能力可能是其保肝降酶的作用机制之一。

Box-Behnken响应面法优化盆炎灵颗粒的醇沉工艺研究

目的优化盆炎灵颗粒的醇沉工艺。方法在单因素试验的基础上,以醇沉前液相对密度、乙醇终浓度与静置时间为考察因素,以绿原酸、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、去甲异波尔定、甘草苷、延胡索乙素、落新妇苷的转移率与固体去除率的综合评分值为考察指标,采用基于Box-Behnken设计的响应面法优化盆炎灵颗粒的醇沉工艺。色谱条件:色谱柱为Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流速1.0 mL/min,流动相A为乙腈,流动相B为0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱(0~10 min,2%A;10~40 min,2%~12%A;40~80 min,12%~18%A;80~110 min,18%~25%A;110~120 min,25%~50%A),柱温30℃,检测波长200~400 nm。结果最佳醇沉工艺条件为醇沉前液相对密度1.13,乙醇终浓度60%,静置时间21 h。验证试验结果显示,综合评分的预测值与实测值相对偏差为0.7%。结论优化的醇沉工艺方法简单、操作简便且结果准确稳定,可为盆炎灵颗粒的制剂生产提供可靠的理论依据。

HPLC法检测不同干燥方式与温度对盆炎灵颗粒主要有效成分的影响

目的:HPLC法分析干燥方式与温度对盆炎灵颗粒中主要有效成分含量的影响。方法:色谱柱为Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流速:1.0 mL/min;流动相A:乙腈,流动相B:0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,柱温:25℃。采用真空干燥(75℃)与冷冻干燥两种干燥方法进行对比,同时以真空干燥中的60℃、75℃、90℃干燥盆炎灵提取液,分析样品中8种主要有效成分的含量。结果:真空干燥(75℃)与冷冻干燥对盆炎灵颗粒中主要有效成分影响无明显差别。真空干燥的方式中60℃与75℃对盆炎灵颗粒中主要有效成分无明显影响,而90℃显著降低盆炎灵颗粒中阿魏酸、延胡索乙素与丹酚酸B含量。结论:在盆炎灵颗粒的生产工艺中须避免高温,最佳干燥方式为真空干燥,最适宜温度为75℃。

Lx2-32c对宫颈癌细胞Hela影响的体外研究

目的观察Lx2-32c对宫颈癌细胞Hela生长增殖、凋亡的影响。方法以不同浓度的Lx2-32c处理宫颈癌细胞Hela 24、48和72 h后,采用MTT法检测各浓度对细胞生存率的影响,计算细胞增殖活力,同时以Annexin V-FITC/PI双染法测定不同浓度的Lx2-32c诱导Hela细胞发生凋亡的情况,并检测Bcl-2与cleaved-caspase-3的表达。结果不同浓度的Lx2-32c能够有效的抑制Hela的生长增殖,随着时间延长,其抑制作用更加明显,呈时间依赖性与浓度依赖性,并能够有效的诱导Hela细胞发生凋亡。Western blot结果显示,Lx2-32c能够有效降低Hela细胞中Bcl-2表达,同时上调cleaved-caspase-3的表达。结论 Lx2-32c可能通过线粒体通路诱导宫颈癌细胞Hela发生凋亡和抑制生长增殖。

小叶黑柴胡茎叶总黄酮对ANIT所致肝内胆汁淤积大鼠的影响

目的观察小叶黑柴茎叶胡总黄酮(TFA)对ANIT所致肝内胆汁淤积大鼠的影响。方法采用化学物质α-萘异硫氰酸酯(α-naphthyl isothiocy,ANIT)复制肝内胆汁淤积大鼠模型,灌胃(ig)给药7d后,腹腔注射10%乌拉坦溶液麻醉大鼠,开腹分离总胆管,引流胆汁,记录每小时胆汁流量;观察TFA对大鼠肝内胆汁淤积时血清、肝组织指标变化的影响并与尤思弗胶囊作对照。结果与模型组相比,经TFA预防性治疗后,胆汁淤积大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、谷酰胺转肽酶(GGT)的活力明显降低(P<0.01),肝组织Na+,K+-ATP酶活性明显提高(P<0.01),TFA能明显提高胆汁淤积大鼠的胆汁流量(P<0.01);TFA高剂量在利胆、提高肝组织Na+,K+-ATP酶活性、降低血清TBIL、ALP活力方面优于尤思弗胶囊组。结论 TFA治疗胆汁淤积疗效确切,具有很好的临床应用前景,能开发成新一代治疗胆汁淤积的中成药。

小叶黑柴胡茎叶总黄酮对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的观察小叶黑柴胡茎叶总黄酮(TFA)对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法腹腔注射0.12%CCl4橄榄油溶液制备小鼠急性肝损伤模型,检测各组小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST);同时测定肝组织中丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。在光学显微镜下观察肝脏病理组织学变化。结果与CCl4模型组相比较,经TFA预防性治疗后,小鼠血清中ALT、AST的活性明显降低(P<0.01),同时肝组织中MDA的含量明显下降、SOD的活力明显增强(P<0.01)。形态学观察显示TFA能明显改变肝组织的病理变化。结论TFA对急性肝损伤小鼠具有保护作用。

小叶黑柴胡超高效液相色谱指纹图谱研究

目的建立小叶黑柴胡UPLC指纹图谱分析方法并进行聚类分析。方法采用Waters BEHTMC18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速:0.6 mL.min-1,检测波长:203 nm,柱温:30℃。结果通过检测10批小叶黑柴胡药材,建立其UPLC指纹图谱,共标定了28个共有指纹峰,根据聚类分析结果,可将药材质量分为2大类,8个相似度较高的药材分为一类,相异度高的2、5号药材分为另一类。结论所用方法稳定、重复性好,可用于小叶黑柴胡药材的质量控制。

基于闪式提取的藏药蕨麻中总酚酸含量测定方法研究

目的建立基于闪式提取的藏药蕨麻中总酚酸含量快速测定方法。方法采用闪式提取器提取,分光光度法测定其含量。结果闪式提取法所得蕨麻中总酚酸含量高于回流提取法与超声提取法所得总酚酸含量,藏药蕨麻中总酚酸含量为0.38%。结论该方法简便可行,可操作性强,灵敏度高,为藏药蕨麻中有效部位的进一步开发及质量控制提供了新的技术手段和科学依据。

HPLC法同时测定胎乐颗粒中5种成分含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定胎乐颗粒中5种成分(甘草苷、金丝桃苷、黄芩苷、黄芩素和五味子醇甲)的含量。方法梯度洗脱,乙腈-0.1%磷酸水溶液为洗脱体系,检测波长270 nm,总流速1.0 mL/min,进样量10 μL,柱温为30℃。结果甘草苷、金丝桃苷、黄芩苷、黄芩素和五味子醇甲分别在1.96~19.58 μg/mL(r = 0.9999)、1.65~16.52 μg/mL(r = 0.9998)、11.71~117.12 μg/mL(r = 0.9999)、1.63~16.26 μg/mL(r = 0.9999)和1.23~12.28 μg/mL(r = 0.9999)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率(RSD)分别为101.75%(0.98%)、102.32%(1.70%)、98.03%(1.35%)、99.52%(1.54%)和100.12%(1.27%)。结论该方法简单易行,可用于胎乐颗粒的质量控制。

地肤子总黄酮对对乙酰氨基酚所致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨地肤子总黄酮(FFK)对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法选取一月龄SPF级昆明种小鼠36只,体重(20±2)g,雌雄各半,按随机数字表法将其分为FFK低、中、高剂量组(75、150、300 mg/kg)和阳性药对照组(联苯双酯,150 mg/kg)、空白对照组(等量生理盐水)、对乙酰氨基酚模型组(等量生理盐水),每组6只。连续灌胃给药7 d后,空白对照组腹腔注射生理盐水(0.1 ml/10 g),其余各组腹腔注射对乙酰氨基酚(350 mg/kg)建立小鼠急性肝损伤模型。24 h后,检测各组血清中的谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)及肝脏组织中的脂质过氧化物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组肝脏组织病理学变化。结果对乙酰氨基酚模型组GPT、GOT、MDA高于空白对照组,SOD低于空白对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。FFK低剂量组各指标与对乙酰氨基酚模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。FFK中、高剂量组GPT、GOT、MDA低于对乙酰氨基酚模型组和FFK低剂量组,SOD高于对乙酰氨基酚模型组和FFK低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。病理切片的HE染色结果显示除空白对照组外,其他各组可见不同程度的肝损伤。结论一定剂量的FFK对于对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用,其增强肝脏组织SOD活性,减少MDA堆积的能力可能是保肝降酶的作用机制之一。

miR-127-5p下调PTEN的表达促进非小细胞肺癌细胞自我更新和侵袭

为探讨miR-127-5p对非小细胞肺癌球形成细胞自我更新和侵袭的影响及机制,通过miR-127-5p模拟物或抑制剂分别转染H358和A549细胞,采用球形成实验检测H358和A549细胞的自我更新能力,transwell小室侵袭实验检测H358和A549细胞的侵袭能力,蛋白质印记检测PTEN和PCNA的表达,荧光素酶报告基因实验验证miR-127-5p的靶点。结果发现H358和A549球形成细胞较亲本细胞高表达miR-127-5p;过表达miR-127-5p促进H358和A549细胞的球形成和侵袭能力,并促进其PCNA的表达;生物信息学分析显示miR-127-5p与PTEN有直接结合位点,包含野生型PTEN 3’-非编码区载体组的荧光素酶活性明显降低;过表达miR-127-5p可明显抑制A549细胞中PTEN的表达。综上,miR-127-5p促进非小细胞肺癌H358和A549细胞系球形成和侵袭能力,其机制可能涉及下调PTEN的表达。

巴马火麻仁总木脂素酰胺类提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究广西巴马产火麻仁中提取分离获得的火麻仁总木脂素酰胺类提取物(LFC)对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法昆明种小鼠,以LFC低、中、高(60、120、180 mg·kg-1)剂量连续给药7 d后,分别采用腹腔注射0.1%CCl4的橄榄油溶液(10 mL·kg-1)建立小鼠急性肝损伤模型,16 h后,杀鼠取材,分别检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,肝脏中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,光学显微镜下观察肝组织病理学变化。结果 CCl4模型组肝功能明显异常,ALT、AST显著升高,肝组织变性、坏死严重。经LFC预防性治疗后,血清中ALT、AST活性显著降低(P<0.01)、肝组织中MDA含量显著降低(P<0.01),SOD活力增加;肝脏组织学观察证实,LFC能明显改变受损组织的病理学变化。结论 LFC对CCl4致小鼠急性肝损伤均具有较好的保护作用。

miR-34a-5p下调Notch1表达增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对紫杉醇的敏感性

目的:本研究旨在阐明miR-34a-5p是否通过下调Notch1表达,进而增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对紫杉醇的化疗敏感性。方法:qRT-PCR测定MCF-10A细胞与MDA-MB-231细胞miR-34a-5p的表达水平;以miR-34a mimic瞬时转染MDA-MB-231细胞,qRT-PCR与western blot分析Notch1表达情况,最后CCK-8试剂盒测定紫杉醇对于不同Notch1表达水平MDA-MB-231细胞的细胞毒作用。结果:miR-34a-5p在正常乳腺MCF-10A细胞高表达,而在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞低表达;转染miR-34a mimic使MDA-MB-231细胞中Notch1表达降低,敲低MDA-MB-231细胞Notch1表达降低紫杉醇抑制细胞存活力作用的IC;。结论:miR-34a-5p通过下调Notch1表达,进而增强紫杉醇抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞存活力作用。

木犀草素对MHCC97H源性肝癌干样细胞HADC1活性和自我更新的影响

目的:本研究旨在阐明木犀草素(LUT)是否通过抑制组蛋白脱乙酰基酶-1(HADC1)活性和表达从而抑制肝细胞癌MHCC97H细胞源性干样细胞(LCSLCs)自我更新能力。方法:LUT(10μM)和HADC1抑制剂曲古抑菌素A(TSA,10μM)单独或联合处理MHCC97H源性LCSLCs。采用比色法测定HADC1活性;实时荧光定量PCR分析HADC1 mRNA表达;蛋白质印记分析HADC1蛋白表达水平;球形成培养法检测肿瘤球形成能力。结果:LUT抑制MHCC97H源性LCSLCs HADC1活性,下调HADC1表达,并抑制其自我更新。与LUT或TSA单独处理组相比,LUT与TSA联合处理协作性下调MHCC97H源性LCSLCs HADC1表达和活性;并显著抑制MHCC97H源性LCSLC球形成。结论:LUT部分地通过下调HADC1活性和表达抑制MHCC97H源性LCSLC自我更新。