盐藻提取物抗氧化作用的实验研究

盐藻提取物抗氧化作用的实验研究薛乐勋，沈天怀，马晓英，王建民，许培荣（河南医科大学医学实验中心郑州４５００５２）盐藻提取物（ＥｘｔｒａｃｔｓｏｆＤｕｎａｌｉｅｌｌａＳａｌｉｎａ，ＥＤＳ）是从海洋盐藻中提取的一种混合物，除含有大量类胡萝素外，还含有维生...

酸豆乳及酸牛乳对实验肿瘤生长和转移的影响

用含有咕热链球菌和咕酸乳酸杆菌(shahani株)的菌种发酵制备的酸豆乳和酸牛乳喂饲接仲肉瘤180、艾氏腹水癌和路易氏肺癌的小鼠。与对照组和单纯豆乳组比较,酸豆乳和酸牛乳对小鼠肉瘤180及艾氏腹水癌均有明显抑制作用(P<0.05)。但对路易氏肺癌自发性肺转移无影响。本研究的发现表明,这些发酵的豆或乳类制品含有某些抗肿瘤成分,也为推广食用酸豆乳和酸牛乳提供了实验依据。

钙和维生素D对高脂饮食诱发的小鼠乳腺上皮增生的影响

本研究目的是观察饮食中添加钙和维生素D对高脂饮食诱发的小鼠乳腺上皮细胞增生的影响。将四周龄小鼠随机分成三组，分别给予对照AIN－76A饲料，高脂低钙低维生素D饲料（试验饲料Ⅰ）和高脂加钙加维生素D饲料（试验饲料Ⅱ）。饲养九周后终止试验，小鼠植入渗透泵灌注溴脱氧尿苷（Brdu）72小时。结果显示试验饲料Ⅰ组的小鼠乳腺终末小导管上皮细胞Brdu标记指数与对照饲料组比较明显升高（P＜0．05）。而试验饲料Ⅱ组的BrdU标记指数与对照组相似（P＞0．05）。本实验研究发现进一步证明，高脂饮食能诱发小鼠乳腺小导管上皮细胞的增生，同时也提示饮食中添加钙和维生素D有助于预防高脂饮食的这种不良作用。

钙和维生素D抑制高脂饮食诱发的前列腺上皮细胞增生

本研究目的是观察饮食中添加钙和维生素D对小鼠前列腺上皮细胞增生的影响。将四周龄小鼠随机分成三组，分别给予对照AIN—76A饲料、高脂低钙低维生素D饲料（试验饲料Ⅰ）和高脂加钙和维生素D饲料（试验饲料Ⅱ）。饲养9周后终止试验，小鼠植入渗透泵，灌注溴脱氧尿苷（BrdU）72小时。结果显示，试验饲料Ⅰ组小鼠前列腺背叶上皮细胞BrdU标记指数与对照组比较明显升高（P＜0．05），而试验饲料Ⅱ组的BrdU标记指数与对照组相似（P＞0．05）。本实验研究发现证明，高脂低钙低维生素D饮食能诱发小鼠前列腺背叶上皮细胞增生，同时提示饮食中添加钙和维生素D有助于预防高脂低钙低维生素D饮食的这种不良作用。

盐藻提取物毒性作用的实验研究

盐藻是生长在海水中的一种微小藻,其细胞内β—胡萝卜素含量是胡萝卜细胞的数千倍。制盐所在我国首次从盐藻中提取出富含β—胡萝卜素的天然食用色素;该提取物系脂溶性混合物,统称为盐藻提取物(Ex-tracts of Dunaliella Salina,EDS)。

嗜酸性乳酸杆菌抗肿瘤作用的实验研究

接种肉瘤180,艾氏腹水癌和路易氏肺癌的小鼠,喂饲嗜酸性乳酸杆菌(Shahani 株)发酵乳后,小鼠肉瘤180和艾氏腹水癌生长受抑制。与对照组比较.差异明显(P<0.05).但它对路易氏肺癌自发性肺转移无影响。此外,发现 C_(57)BL/6小鼠喂饲该细菌发酵乳后,脾细胞和胸腺细胞对 ConA 刺激的增殖反应,腹腔巨噬细胞 C_(3b)受体活性以及脾细胞和腹腔渗出细胞所介导的对 L_979纤维母细胞瘤细胞的毒性作用都比对照组明显增强。

针刺足三里对家兔下食管括约肌的影响

下食管括约肌(LES)最重要的功能是阻止胃内容物反流入食管中。针刺足三里穴对人和动物的胃运动的调节作用已有报道,但针刺该穴对LES有无作用,未见文献报道。本工作观察针刺家兔足三里穴对LES的影响,为探讨针刺治疗反流性食管炎的原理,提供动物实验资料。

盐藻提取物对阿霉素诱发小鼠心脏毒性的影响

本文观察β-胡萝卜素和盐藻提取物对减轻阿霉素(ADM)诱发的小鼠心脏毒性的作用。ADM 为单次腹腔内注射,剂量为12mg/kg 或15mg/kg。β-胡萝卜素(0.6mg/kg)、盐藻提取物(0.75mg/kg)和溶剂(0.2ml/每只鼠)在注射 ADM 前24h 腹腔内注射。结果为光镜检查小鼠心肌组织发现,ADM 应用前预先腹腔注射盐藻提取物的小鼠心肌组织中的空泡和 PAS 阳性明显减少。ADM 注射后第4天或35天,单用 ADM 和 ADM 注射前腹腔注射过β-胡萝卜素及溶剂小鼠的心脏湿重均比 ADM 注射前预先腹腔注射盐藻提取物小鼠的明显减轻(P<0.05)。12mg/kg 的 ADM 单次注射以及在注射该量 ADM 前,经盐藻提取物和β-胡萝卜素预先处理小鼠的存活率。在 ADM 注射后的第35天分别是40%、100%和63%。ADM 剂量改为15mg/kg,在ADM 注射后14天.上述分组小鼠的存活率分别是0%、50%和12.5%。有无盐藻提取物预先处理的小鼠存活率之间的差异明显(P<0.05),而预先注射β-胡萝卜素和单用 ADM 小鼠存活率之间的差异无显著性(P>0.05)。这些结果提示,盐藻提取物在对抗 ADM 诱发的致死性心脏毒性上,具有保护作用,而β-胡萝卜素则缺乏保护作用。

盐藻提取物对阿霉素诱发小鼠心脏毒性的影响

本文观察β-胡萝卜素和盐藻提取物对减轻阿霉素(A D M)诱发小鼠心脏毒性的作用。结果为单用 ADM 和 ADM 注射前腹腔注射过β-胡萝卜素及溶剂小鼠的心脏湿重均比 ADM 注射前预先腹腔注射盐藻提取物小鼠的明显减轻(P<0.05)。12mg/kg 的 ADM 单次注射以及在注射 ADM前,经盐藻提取物和β-胡萝卜素预先处理小鼠的存活率,在第35天分别是40%、100%和63%。ADM 剂量改为15mg/kg,在 ADM 注射后14天,上述分组小鼠的存活率分别是0%、50%和12.5%。这些结果提示,盐藻提取物在对抗 ADM 诱发的致死性心脏毒性上,具有保护作用,而β-胡萝卜素则无。

胃泌素对家兔下食管括约肌及食管跨粘膜电位的影响

观察了静脉注射(ⅳ)不同剂量的五肽胃泌素(Pentagastrin,G5)对家兔下食管括约肌压力(Lower esophageal sphincter pressure,LESP)及食管跨粘膜电位(Transmucosal potential difference,PD)的影响。结果显示:ⅳGS(10μg/km)可引起LESP迅速升高和LES功能长度(Lower esophageal sphincter length,LESL)延长(P<0.01),10min左右恢复到基础水平。ⅳG5(5μg/kg)即可导致LES部位和食管中下段PD明显下降,但上段食管PD无变化。可见ⅳG5既能显著地影响食管的神经肌肉功能LESP,也能影响食管的粘膜功能PD。此外,大剂量阿托品(1mg/kg)不能完全阻断G5(20μg/kg)对LESP的影响(P<0.05),提示ⅳG5对LES的升压作用主要是它直接作用于LES的结果。

电化学治疗动物肿瘤的实验研究

应用电化学治疗(ECT)艾氏腹水癌、肉瘤S37和Lewis肺癌,结果显示,ECT对三种移植性肿瘤均有明显局部治疗作用,但对Lewis肺癌肺转移无明显影响。提示ECT是一种简单、安全、治疗时间短和比较有效的治疗肿瘤的方法。

姜黄素阻断NF-κB信号通路促进食管鳞癌细胞凋亡的体外研究

背景与目的:活化的核转录因子-kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。但在食管鳞癌中的作用尚不清楚。姜黄素具有抗感染、抗氧化等多种药理作用。本研究将探讨姜黄素是否能够通过阻断NF-κB信号通路对食管鳞癌细胞增殖、抗凋亡产生影响。方法:Western blot法检测EC9706和Eca109细胞中加入姜黄素(50μmol/L)培养不同时间后,pIκBα和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况。在EC9706和Eca109细胞中加入姜黄素培养72h,流式细胞仪检测凋亡细胞情况。MTT法检测姜黄素单独或与5-FU联合对细胞增殖的影响。结果:Western blot的结果显示,在姜黄素作用下EC9706和Eca109细胞中pIκBα和Bcl-2蛋白的表达水平随着时间的延长逐渐下降。在单独使用姜黄素后,就可促进EC9706和Eca109细胞的凋亡(P<0.05);当与5-FU联合使用时,可明显提高EC9706和Eca109细胞对化疗药物的敏感性,凋亡细胞显著增加(P<0.05)。姜黄素与5-FU联合应用48h和72h,可明显抑制EC9706和Eca109细胞的增殖,与单独使用姜黄素或5-FU组相比,细胞存活率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素可以通过抑制IκBα的磷酸化阻断NF-κB信号通路,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加细胞对5-FU的敏感性。

杜氏盐藻两种碳酸酐酶基因启动子的克隆和功能研究

将克隆得到的杜氏盐藻DCA1和CA基因的启动子区与bar基因和NOSpolyA终止子片段融合 ,分别构建成 pMDDC B和pMDC B转基因杜氏盐藻表达载体。用基因枪法将两种表达载体转化入杜氏盐藻细胞 ,通过除草剂草丁膦筛选培养获得转化藻株 ,对转化藻株进行分析。对转化杜氏盐藻藻株的筛选培养结果表明 :pMDDC B和pMDC B载体中的外源bar基因能在杜氏盐藻细胞中稳定或瞬时表达。同时在氦气压力为 6 90kPa条件下 ,微弹轰击 2次比微弹轰击 1次或 3次的效果更好。对 pMDDC B转化杜氏盐藻得到的稳定表达的转化藻株进行的PCR和Southern印迹分析的结果表明 :外源的bar基因确已整合到杜氏盐藻基因组中。Northern印迹分析表明 :DCA1基因启动子驱动bar基因在杜氏盐藻细胞中的表达效率受氯化钠浓度梯度调控。推测首次克隆得到的DCA1基因启动子可能是一种活性高、安全性好的高渗诱导性启动子 ;杜氏盐藻DCA1和CA基因启动子区的GT高度重复序列 。

核基质结合区对转基因表达的影响及其作用机制

核基质结合区(matrix attachment region,MAR)是一段在体外能与核基质结合的富含AT的DNA序列。研究发现MAR能使染色质形成环状结构;将其连到目的基因二侧构建载体并转至生物体中,发现它能增强基因转录表达水平及稳定性,在一定程度上降低转基因个体或细胞系之间转基因的表达水平的差异,这很可能是减低了基因沉默所致。现对MAR的序列特征、MAR对转基因表达的影响及对转基因效应的影响机制进行综述。

雷帕霉素对食管鳞癌裸鼠移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响

目的:探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对荷人食管鳞癌裸鼠移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响。方法:建立人食管鳞癌细胞株EC9706的裸鼠移植瘤模型,观察经RAPA和RAPA联合顺铂治疗后荷瘤裸鼠的肿瘤生长情况;应用TUNEL、RT-PCR及Western印迹法观察肿瘤组织中的细胞凋亡、mTOR和p70S6K mRNA以及mTOR、p70S6K和p-p70S6K的蛋白表达。结果:RAPA和顺铂均使肿瘤生长速度减慢(P<0.05),并且2者联合应用效果更好(P<0.01);TUNEL检测发现,RAPA在体内能引起EC9706细胞的凋亡(P<0.05);RT-PCR和Western印迹法检测结果表明,RAPA在体内降低了mTOR、p70S6K mRNA和mTOR、p-p70S6K的蛋白表达,但可提高p70S6K的蛋白表达水平。结论:RAPA在体内通过抑制mTOR/p70S6K信号通路的活性促进细胞凋亡,从而抑制人食管鳞癌细胞EC9706裸鼠移植瘤的生长。

人食管鳞癌及正常食管组织中Notch1基因的mRNA及蛋白的表达

采用RT-PCR方法,分别从人食管鳞癌及正常食管组织中扩增Notch1基因,结果表明Notch1基因在人食管鳞癌及正常食管组织中均有表达.此外,通过免疫组织化学方法检测不同病理特征的35例食管鳞癌、16例原位癌及35例癌周正常食管粘膜上皮组织Notch1蛋白表达的变化,结果显示:Notch1蛋白在正常食管粘膜上皮组织和原位癌中的阳性率分别为82.9%、68.7%,二者无显著性差异(P>0.05),但均显著高于食管鳞癌组织37.1%(P<0.05);食管鳞癌Notch1蛋白的低表达与肿瘤的直径、分期和发生部位无关(P>0.05),但与淋巴结转移有关(P<0.05).这表明在正常食管粘膜上皮组织中Notch1蛋白高表达,而在食管癌鳞中Notch1蛋白呈现低表达或不表达.该研究为进一步探明Notch1基因的表达对食管癌细胞的发生、发展的影响奠定了良好的基础.

河南省林州市2004与1980年食管癌前病变和食管癌患病率的比较研究

目的:评估河南省林州市当前食管癌的发病率。方法:按1980年普查的自然村分布,以及居民性别、年龄组的构成,选择其匹配的检查对象,进行内镜与活检组织学检查。结果:2004年普查958例,食管炎占43·53%(417/958),明显低于1980年的64·33%(339/527),差异有统计学意义,z=7·67,P<0·001;基底细胞增生占38·52%(369/958);非典型性增生占9·50%(91/958),与1980年的7·97%(42/527)相比差异无统计学意义,z=0·987,P>0·05;2004年食管癌占3·34%(32/958),与1980年的1·90%(10/527)相比差异无统计学意义,z=1·605,P>0·05。结论:2004年林州高危人群食管癌前病变与癌的患病率未见降低。

盐藻hsp70a cDNA片段的克隆与分析

根据衣藻、矮牵牛花、Pisumsativum等真核生物hsp70a氨基酸高度保守序列设计两对简并引物,以热休克盐藻cDNA为模板进行巢式PCR扩增,产物经T A克隆转化至JM109大肠杆菌中,经筛选后测序,将测序结果推导成氨基酸序列进行同源性分析,获得了盐藻热休克蛋白70acDNA片段。在盐藻中所获得的cDNA片段,核苷酸长度为372bp,编码126个氨基酸。推导的氨基酸序列与与下列物种的hsp70a比较:衣藻为96%,矮牵牛花为94%,Pisumsativum为86%,番茄为86%,人为85%,果蝇和酵母分别为84%和83%。所克隆的序列为盐藻hsp70acDNA片段。

Notch1信号途径在食管鳞癌细胞株EC9706的作用研究

目的:研究Notch1基因在食管癌细胞株中的表达及其对食管鳞癌细胞EC9706凋亡的影响。方法:通过免疫细胞化学检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达。通过RT-PCR扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1,转染EC9706细胞,利用Western blotting检测转染pcDNA3.1-Notch1载体12h,24h,48h,72h的食管癌细胞株与转染空载体食管癌细胞株中Notch1的表达,并观察每一时期食管癌细胞株的凋亡情况。结果:在食管癌细胞株中Notch1基因低表达,此外,转染Notch1后的细胞株Notch1表达量与转染空载体相比有明显差异(F=80.442,P<0.05)。经组间两两比较,实验组食管癌细胞株的Notch1的表达量在12h时比对照组食管癌细胞株的表达量显著增高(P<0.01),前者约为后者的4.6倍。但48h至72h时Notch1表达量实验组与对照组食管癌细胞株无显著性差异(P>0.05)。进一步通过倒置显微镜发现48h至72h细胞出现大量凋亡的现象。上述结果说明12hNotch1表达量的增加,使食管癌细胞EC9706中的Notch1信号途径得以激活,该途径激活后导致48h到72h时的细胞大量凋亡。结论:Notch1在食管癌细胞中的激活引起细胞大量凋亡,提示Notch1基因有可能成为治疗食管癌的新靶点。