制药机械设备节能减排技术探讨

目前我国制药行业的快速发展,能源耗费逐渐增多,制药机械生产的产品逐渐趋向于市场的饱和。因此,制药企业不得不寻求新的出路,面对能源短缺的危机,制药企业的出路必定是走向生态化的生产。在这种背景下,很有必要做好制药机械设备的节能减排工作。制药企业可以在节能降耗的基础上,促进节能减排技术的发展,从而改变产品生产技术的升级,实现制药企业的可持续发展。主要就制药企业生产产品过程中进行节能减排的应用进行分析,探讨如何实现生态化发展。

外源金属硫蛋白对奶牛抗热应激调控及SOD基因表达的影响

将28头泌乳奶牛随机分成A、B、C、D4组,分别按每头0(对照)、6.0、12.0和16.0mg剂量静脉注射经生理盐水溶解的Zn-MT,以探讨外源性金属硫蛋白(MT)对奶牛抗热应激的调控作用及其机理.结果表明:B、C和D组的脉搏、呼吸频率及血清MDA含量均显著(P<0.05或P<0.01)低于A组;4%标准乳产量、血液GSH-PX活性、红细胞SOD活性、血清MT含量、奶MT含量及SOD基因表达水平均显著(P<0.05或P<0.01)高于A组;C和D组的上述各项指标又优于(P<0.05或P>0.05)B组;外源性MT的调控效果以注射后第30天表达最佳.说明MT是一种能够有效调控奶牛热应激能力的生理活性物质,且在奶牛体内表现出一定的剂量效应和时间效应.

湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒的研究

为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据,从湖南沙子岭猪的保种群内随机采集31头个体的耳样组织,应用PCR和RT-PCR技术分别检测这些组织中内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)的前病毒DNA和mRNA,并对PCR扩增的灵敏性进行评估。多组织RT-PCR检测3头沙子岭猪肾、心、肝、肺、脾等组织中PERV的表达情况,了解其在各组织中的分布情况;最后,扩增、测序该猪种的env基因,结果用NCBI中的BLAST软件进行分析。PCR和RT-PCR结果表明,所检测的31头沙子岭猪均带有PERV前病毒DNA,耳样组织中均有PERV mRNA表达,其中有2头个体携带env-A、env-B、env-C3种囊膜蛋白基因,而其余的29头个体只带有env-Ae、nv-B两种囊膜蛋白基因,未检测到env-C基因。多组织RT-PCR扩增结果表明,3头沙子岭猪的肾、心、肝、肺、脾等组织中,pol、gage、nv-A、env-B基因均有表达,未检测到env-C基因表达。测序沙子岭猪的env基因,结果发现,沙子岭猪env-B和env-C基因与其他猪种序列比较分别存在2和10个碱基的差异,而env-A基因序列没有差异,说明不同的猪种之间env基因存在多态性。以上结果表明,沙子岭猪种群携带PERV,其亚型主要以PERV-A,B为主;PERV在该猪种肾、心、肝、肺、脾等多种组织中的分布没有明显组织特异性,且93.5%(29/31)个体表现为env-C基因缺失,提示沙子岭猪作为候选猪种可能在异种移植中具有较好的应用前景。

双拷贝抑制素基因免疫对肉牛卵泡和黄体的影响

【目的】探讨不同剂量的双拷贝抑制素pcISI基因免疫对肉牛生殖能力的影响。【方法】将58头同期发情肉牛随机分为6组,每组肉牛分别注射0.75(T1)、1.5(T2)、2.25(T3)、3.0mg/头(T4)pcISI质粒、3.0mg/头pcMV-S空质粒(C1)和3mL/头生理盐水(C2),初次免疫21d后进行加强免疫,以探讨抑制素pcISI基因疫苗对肉牛卵泡和黄体发育的影响。【结果】4个剂量组的大卵泡数均高于对照组,除了T1外,其它3个剂量组均与对照组差异显著(P<0.05);T3和T4的中卵泡数均高于对照组,且差异显著(P<0.05);T3和T4的小卵泡数均高于对照组,且差异显著(P<0.05)。无论左侧还是右侧,各剂量组成熟卵泡直径均高于对照组,除了T1外,其它3组两侧成熟卵泡均与对照组差异显著(P<0.05)。无论左侧还是右侧,4个剂量组黄体直径均高于对照组,且均与对照组差异显著(P<0.05);T3黄体最大,T1最小,且T3与T1差异显著(P<0.05)。加强免疫后10d(BM10)抑制素抗体与成熟卵泡大小相关显著(r=0.629,P<0.05),与黄体大小相关极显著(r=0.651,P<0.01)。【结论】双拷贝抑制素pcISI基因免疫可促进肉牛卵泡和黄体发育,2.25mg为最佳免疫剂量,抑制素抗体水平与卵泡和黄体发育有一定的相关性。

不同因素对抑制素基因免疫肉牛反应性的影响

为探讨佐剂、质粒纯度和免疫次数3种因素对抗抑制素抗体效价的影响,以分析抑制素基因免疫是否使肉牛产生免疫应答,利用已构建的抑制素真核融合表达质粒pCISI对肉牛进行了免疫试验.结果表明,抑制素pCISI基因免疫肉牛后佐剂处理组比无佐剂组免疫效果明显.对抗体P/N(待测血样的吸光值P与阴性血样吸光值N的比值)来说,普鲁卡因佐剂显著优于脂质体,但就抗体阳性率来说,普鲁卡因和脂质体差异不显著.无论是抗体P/N值还是抗体阳性率,高纯度组的效果略高于低纯度组,但差异不明显.随着免疫次数的增加抗体P/N值和抗体阳性率均升高,两者差异显著,说明了抑制素基因免疫肉牛可诱导产生抗抑制素抗体,纯度对抗体的产生和抗体阳性牛比例没有影响,但免疫佐剂与免疫次数有影响.

新生小鼠卵巢移植雄鼠肾囊下卵泡的生长发育

将1日龄小鼠卵巢移植入成年雄鼠肾囊下,分别于移植后18d、36d回收移植卵巢进行形态学、组织学观察,以评价卵巢移植体在成年雄性受体小鼠体内生长及卵泡发育潜能。结果表明:移植体生长增大,有各级生长卵泡发育;18日龄移植体平均直径为1881.1μm±204.7μm,与1日龄卵巢相比差异极显著(P<0.01),卵泡发育到有腔卵泡阶段;36日龄移植体平均直径达2575.3μm±466.4μm,显著大于18日龄移植体(P<0.01),有成熟卵泡出现,未观察到黄体;从移植体分离到GV期卵母细胞和卵丘卵母细胞复合体。研究表明1日龄小鼠卵巢移植体在雄性受体生理环境中具有正常生长发育和形成成熟卵泡的潜能。

湖南沙子岭猪SLA-DR基因克隆及生物信息学分析

为了克隆湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,分析SLA基因特性和抗原多态性,评价湖南沙子岭猪在异种移植中的应用前景奠定基础。应用RT-PCR分别扩增湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,鉴定后克隆到PUCm-T载体并进行测序,用NCBI中的BLAST和ExPASY中相关软件进行生物信息学分析。得到的湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因特异性基因片段,大小分别为1 177 bp和909 bp。生物信息学分析发现,所扩增的SLA-DRA和SLA-DRB基因片段均包含完整的开放阅读框,分别编码252和266个氨基酸残基。将湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因在GenBank登录,登录号分别为EF143987和EF143988。同源性分析发现,湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB与人类相应的DRA、DRB相比,核苷酸序列同源性分别为83%和83%,编码氨基酸同源性分别为83%和79%。与GenBank登录的其他猪种相比,SLA-DRA基因同源性最高可达100%,而SLA-DRB基因具有多态性。

抑制素pCIS基因免疫对黄牛卵泡发育和生殖激素的影响

分别用0(C)、0.75(T1)、1.50(T2)、2.25(T3)和3.0(T4)mg.头-1的抑制素pCIS基因疫苗免疫58头黄牛,以探讨抑制素pCIS基因免疫对卵泡发育和生殖激素的影响。结果表明,抑制素pCIS基因免疫组的大卵泡(d≥10 mm)数显著高于对照组(P<0.01),中卵泡(7 mm≤d<10 mm)数和小卵泡(4 mm≤d<7 mm)数与对照组均没有显著差异(P>0.05)。T1组左右两侧成熟卵泡大小与对照组差异不显著(P>0.05),其它3组两侧成熟卵泡均显著大于对照组(P<0.05)。抑制素pCIS基因免疫黄牛的促卵泡素(FSH)平均含量高于对照组,且在加强免疫阶段差异显著(P<0.05);加强免疫后雌二醇(E2)和孕酮(P4)含量均显著增加,且均与对照组差异显著(P<0.05)。这些结果表明,抑制素pCIS基因免疫可促进FSH分泌,进而影响黄牛卵泡发育和成熟。

RBP4基因的多态性及其与母猪窝产仔性状的相关性

基于生物信息学方法,发现并验证了与RBP4基因LS性状(litter size)候选分子标记MspⅠRFLP(SNP G1223C)临近的SNP A1027G(SNPs,single nucleotide polymorphisms),并对大白猪和湖南黑猪群体的RBP4多态性与母猪LS性状的相关性进行了研究。结果表明:RBP4基因SNP G1223C在2个群体中均与母猪LS性状显著相关(P<0.05);RBP4基因SNP A1027G在混合群体中与母猪LS性状显著相关(P<0.05);这2个多态性位点构建的单倍型也与母猪LS性状显著相关(P<0.05),其优势单倍型母畜的LS性状值明显优异于单个SNP位点优势基因型的LS性状值。在分子标记辅助育种中采用RBP4单倍型作为LS性状重要候选基因的分子标记比采用单个多态性位点更具价值。

湖南大围子猪内源性逆转录病毒的研究

目的:研究湖南大围子猪携带的内源性逆转录病毒(porcineendogenousretrovirus,PERV),为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据。方法:从湖南大围子猪的保种群内随机采集42头个体的耳样组织,应用PCR和RT-PCR技术分别检测这些组织中PERV前病毒DNA和mRNA,并对PCR扩增的灵敏性进行评估。扩增、测序大围子猪的PERVenv基因,结果用美国生物信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)的BLAST软件进行分析。结果:所检测的42头大围子猪均带有PERV前病毒DNA,耳样组织中均有PERVmRNA表达,所有个体携带env-A,env-B和env-C3种囊膜蛋白基因。测序结果表明,大围子猪env-A和env-C与GenBank登录其他猪种序列(AY288779,AY534304)相比分别存在1和8个碱基的差异,而env-B基因没有碱基差异。结论:大围子猪种群携带PERV,而且均具有转录活性,亚型主要为PERV-ABC;大围子猪的PERVenv-A,env-C存在基因多态性,从生物安全性方面考虑,该猪种不宜作为异种移植供体。

多糖对动物免疫调控的作用及其机理

综述了多糖对动物的细胞因子、补体系统、淋巴细胞、巨噬细胞、抗体生成和免疫器官的调控作用;从细胞表面多糖受体、基因表达、淋巴细胞信息传导等方面分析了多糖调控动物免疫的作用机理;并展望了多糖作为免疫增强剂和代谢调控剂在动物健康养殖和畜产品安全生产中的应用前景。

杜仲叶粉对鸡肉用性能影响的研究

为探明杜仲叶粉对鸡肉用性能的影响,在雪峰鸟骨鸡的基础日粮中按0.5％,1.0％,1.5％和2.0％的不同比例添加杜仲叶粉,并以不添加杜仲叶粉作为对照,经90 d饲养试验期,测定鸡的平均日增重、饲料报酬(料重比)、屠宰率、胴体品质(胸腿肌占全净膛的比率、腹脂肪占全净膛的比率)以及血液生化指标。结果表明:杜仲叶粉能显著提高饲料报酬(降低料重比)、胸腿肌占全净膛的比率、血清高密度脂蛋白及血清总蛋白含量;显著降低腹脂肪占全净膛的比率、血清甘油三酯及低密度脂蛋白含量;对鸡的平均日增重、半净膛率、全净膛率及血清胆固醇含量影响不显著。

移植时间对小鼠卵巢卵母细胞在雄性体内生长发育的影响

将1日龄小鼠卵巢移植入成年雄鼠肾囊下,分别于移植后21,28和35 d回收移植卵巢,对移植体的大小形态、回收率、回收卵母细胞数及其大小进行评价.结果表明:三时间段回收的移植体均生长增大,有腔卵泡明显,回收率达87.5%～92.9%,差异不显著;35 d移植体平均直径达(2 574.7±785.9)μm,显著大于21 d(2 075.3±329.8)μm和28 d(2 088.9±297.7)μm移植体(P<0.01);回收移植体均能分离到卵母细胞,随着移植时间的延长回收卵母细胞数下降,其中21 d移植体回收卵母细胞最多,为(40.5±29.8)个,与35 d移植体回收卵母细胞数(11.1±7.6)个相比差异极显著(P<0.01),28 d移植体回收卵母细胞数(28.4±21.1)个,与前二者差异均不显著;回收卵母细胞形态正常,达到GV期,平均直径达(74.2±2.1)～(75.0±5.9)μm,组间差异不显著;28 d移植体中回收到MⅡ期卵母细胞.随着移植时间的延长,移植体增大,回收卵母细胞数减少.说明在卵巢异位移植中要获得丰富而又充分生长的卵母细胞应根据卵巢卵泡发育规律选择合理的移植时间.

促性腺激素促进雄性小鼠体内卵巢移植体卵泡卵母细胞生长发育的研究

【目的】探索外源促性腺激素对卵巢在雄性受体内生长、卵泡发育和卵母细胞成熟与发育能力的影响。【方法】将1日龄小鼠卵巢移植到7～12周龄雄性小鼠肾囊下,回收前用促性腺激素对受体进行处理或不处理,同龄雌性小鼠用促性腺激素进行处理后作为对照。移植21d后回收移植卵巢,观测移植体的回收率及生长和卵泡发育;对卵母细胞进行体外成熟、体外受精,观察2-细胞胚和囊胚发育率。【结果】移植21d后,未处理组移植体回收率为85.4%,与处理组(90.7%)差异不显著(P>0.05)。未处理组移植体卵泡发育至成熟阶段,回收卵母细胞均处在GV期,平均每枚移植体回收卵母细胞数为(41.4±25.8)枚,2-细胞胚胎发育率为17.5%,未能发育至囊胚;处理组移植体有黄体形成,有的卵泡中有扩展的卵丘卵母细胞复合体,平均回收卵母细胞数为(33.4±20.1)枚,其中MⅡ期卵母细胞为(8.5±7.1)枚,GV期、MⅡ期卵母细胞受精后2-细胞胚胎的发育率分别为33.9%和44.3%,囊胚发育率分别为0.48%和6.3%;试验组间回收卵母细胞数差异不显著(P>0.05),2-细胞胚胎发育率、囊胚发育率差异极显著(P<0.01)。试验组卵母细胞2-细胞胚胎发育率显著低于对照组(P<0.01),处理组MⅡ期卵母细胞囊胚发育率与对照组差异不显著(P>0.05)。【结论】外源促性腺激素对雄性小鼠卵巢移植体具有促进卵泡发育、卵母细胞成熟和胚胎发育的作用,但不增加卵母细胞产量。

附植前后兔子宫和胚胎总蛋白含量的变化

附植前后哺乳动物子宫和胚胎能分泌多种妊娠相关蛋白 ,这些蛋白对妊娠的建立与维持十分重要 .为了从生化角度进一步研究胚泡附植的机理 ,从分析附植前后兔子宫和胚胎总蛋白含量着手 ,探讨了非妊娠和受孕不同时期的子宫和胚胎总蛋白含量的变化 .结果表明 ,非妊娠兔比妊娠兔子宫冲洗液总蛋白含量低 .妊娠组中 ,胚泡附植前后随着妊娠时间的延长 ,子宫冲洗液中蛋白质含量逐渐增加 ,妊娠前 4 d,增加幅度不大 ,从第 4 d到第 6 d增加幅度较大 ,从妊娠第 6 d到第 9d,蛋白质增加特别明显 .对于妊娠第 9d胚泡液 ,大胚泡 (直径 1cm左右 )中胚泡液总蛋白含量高于小胚泡 (直径 0 .5 cm左右 ) 。

基于热重法的干清猪粪直接燃烧特性分析

为了研究猪粪直接燃烧供能的可行性，该文测定了干清粪方式收集的玉米-豆粕日粮型猪粪的含水率、纤维素、半纤维素和木质素含量以及发热量；采用热重法测定了猪粪的热重曲线（thermogravimetric curves，TG curves）、微分热重曲线（diffenrential thermogravimetric curves，DTG curves），分析了猪粪的可燃性指数、燃烧稳定性指数、综合燃烧特性指数。结果表明：新鲜猪粪含水率在74.28%～76.75%；高位发热量为16.72～17.65 MJ/kg，低位发热量为14.24～15.34 MJ/kg；热重分析表明猪粪可燃性指数为（1.552～1.652）×215;10-5 mg/（min×183;℃2），燃烧稳定性指数为（1.393～1.466）×215;10-6 mg/（min×183;℃2），综合燃烧特性指数为（6.480～7.305）×215;10-9 mg2/（min2×183;℃3）。猪粪球能在锅炉内良好燃烧，呈现明显的挥发分燃烧状态。研究的结果为猪粪直接燃烧供能提供了依据和参考。

维生素E对附植前小鼠胚胎发育与一氧化氮生成的影响

为了探讨维生素E对一氧化氮(NO)的产生及其对早期胚胎发育的影响,用Griess试剂法检测了附植前小鼠胚胎中一氧化氮的生成情况.结果表明,附植前胚胎中有NO的产生,且从第1天到第3天有逐渐上升的趋势,第4天有所下降.用抗氧化剂维生素E处理后,NO的生成量下降,表明在附植前小鼠胚胎发育中维生素E对NO的产生可能起到一定的抑制作用.

鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库的构建

利用雄鼠脾细胞免疫6-7周龄C57BL/6雌鼠,加强免疫后取脾细胞,TRIZOL法提取细胞总RNA,并逆转录合成cDNA第一条链。以其为模板,利用特异性Ig基因的引物PCR扩增出重链Fd片段和κ链基因,并将扩增出基因重组到噬质粒载体pComb3中,重组噬质粒转化大肠杆菌XL1-Blue中,分别构建κ链基因库和抗体Fab段基因库。分别经蓝白斑筛选,计算转化效率,通过PCR反应和双酶切反应鉴定抗体库的重组率,轻链、重链Fd段基因的重组率均为80%。抗体Fab段基因库经过辅助噬菌体VCSM13超感染,成功构建了鼠源性噬菌体Fab抗体库,并测定噬菌体抗体库的库容和滴度,结果分别为1.5×10^7,3.2×10^11pfu/mL。对噬菌体抗体库的18个克隆进行ELISA分析,结果显示以雄鼠脾细胞作为抗原时,有9个克隆含有雄性特异性的噬菌体抗体,而以雄鼠睾丸细胞作为抗原时,有8个克隆与睾丸细胞呈现结合活性。噬菌体抗体库的构建为雄性特异性抗原的鼠源性噬菌体抗体Fab片段的筛选及其应用、雄性特异性抗原和抗体功能性分子基础的研究奠定了坚实基础。

哺乳动物卵泡卵母细胞的体外培养

综述国内外哺乳动物卵泡卵母细胞体外培养研究概况，着重论述了促性腺激素、嘌呤类、颗粒细胞、生长因子及Ｃａ２＋等对卵泡卵母细胞生长、成熟过程的影响及其作用机理．