Nestin和GFAP在缺氧大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达及高氧治疗的作用

目的:探讨巢蛋白(nestin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在缺氧大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达情况及高氧治疗对其表达的影响。方法:制作大鼠缺氧模型及缺氧后高氧治疗模型,行眼球矢状位切片及视网膜铺片,行GS/nestin、GS/GFAP、GFAP/nestin免疫荧光双标染色。结果:正常大鼠视网膜中几乎看不到nestin阳性染色,GFAP阳性染色仅位于星形胶质细胞上。缺氧后,在Müller细胞和星形胶质细胞上出现了nestin的表达,GFAP的表达没有明显变化。高氧治疗后,nestin在Müller细胞上的表达明显减弱,但在星形胶质细胞上仍有较强的表达。GFAP仍然只在星形胶质细胞上表达。结论:Müller细胞和星形胶质细胞针对缺氧损伤和高氧处理发生不同的细胞骨架蛋白重塑,这与它们和视网膜神经节细胞以及视网膜血管在解剖和功能关系上的差异有关。

胶质纤维酸性蛋白在青光眼大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达

目的:探讨胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在青光眼大鼠视网膜Müler细胞上的诱导表达情况及可能的意义。方法:采用烧灼涡静脉的方法制作大鼠青光眼模型,分别于术后2h;1,3d;1,2,3wk取材,制作视网膜矢状位冰冻切片和视网膜铺片,进行GS/GFAP免疫荧光双标。提取视网膜总蛋白行GFAP免疫印迹半定量分析。结果:视网膜矢状位切片可见,正常大鼠视网膜中,GFAP阳性染色只出现在神经节细胞层的星形胶质细胞上,而Müller细胞不表达GFAP。制作青光眼模型术后2h,Müller细胞上出现GFAP阳性染色,术后1,3d,GFAP的表达显著增加,到术后1wk,GFAP在Müller细胞上的表达量达到高峰,一直持续到术后3wk,免疫印迹半定量分析与以上结果吻合。术后1wk视网膜铺片中清晰可见Müller细胞足板出现GFAP的诱导表达。结论:高眼压时GFAP在Müller细胞上的诱导表达尤其在足板处的强烈表达是Müller细胞对眼压升高产生的一种反应,GFAP可能是一种潜在的有用的生物标记物。

视网膜冷冻联合球内注气术选择性治疗原发性孔源性视网膜脱离

目的：评估视网膜冷冻联合球内注气术对一组孔源性视网膜脱离患者的治疗效果以及初次手术失败原因分析。方法：对32例孔源性视网膜脱离患者行视网膜冷冻联合球内注气术病例行回顾性分析,患者术前均行最佳矫正视力、裂隙灯显微镜、间接检眼镜及三面镜检查确诊。所有患者均行经巩膜冷凝术联合球内注射膨胀气体,根据裂孔的位置选择恰当体位。术后随访6~24个月,观察视网膜是否复位、视力及并发症。对失败病例做具体分析。结果：经巩膜视网膜冷凝联合球内注气,一次手术术后视网膜复位26眼（81%）,4眼二次行巩膜外冷凝联合扣带术获得视网膜复位。2眼行玻璃体切割联合SF6填充获得视网膜复位,所有病例最终复位率达100%。术后视力较术前视力明显提高（P〈0.01）。结论：经巩膜视网膜冷凝联合球内注气术是治疗新鲜的孔源性视网膜脱离的一种有效的、简单的、损伤小、花费低的方法。

Nestin在视神经横断大鼠视网膜Müller细胞上的诱导表达

目的:探讨中间丝蛋白nestin在视神经横断大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达情况及可能的意义。方法:制作大鼠视神经横断模型,分别于术后1,3,7d取材,制作视网膜矢状位冰冻切片,进行GS/nestin,免疫荧光双标。提取视网膜总RNA行nestin Real-time PCR半定量分析。结果:正常大鼠视网膜中几乎看不到nestin阳性染色。术后1d,在Müller细胞上出现nestin的诱导表达,术后3d,nestin在Müller细胞上的表达进一步增强,术后1wk,nes-tin在Müller细胞上的表达保持在较高水平,Real-time PCR半定量分析与以上结果吻合。结论:视神经横断后nestin在Müller细胞上的诱导表达是Müller细胞对视网膜损伤产生的一种反应,Nestin的表达量在一定时间内与病程进展相一致。Nestin在Müller细胞上的诱导表达尤其在足板处的强烈表达可能对视网膜神经节细胞具有保护作用。

Nestin在高眼压大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达

目的探讨第六类中间丝蛋白nestin在高眼压大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达情况及意义。方法42只SD大鼠采用烧灼右眼涡静脉的方法制作高眼压模型为模型组,剪开左眼结膜作为假手术组。测量并记录眼压,计数术后不同时间点视网膜神经节细胞(RGCs)数。Western blot半定量分析术后视网膜内nestin蛋白含量。免疫电镜检测nestin在高眼压大鼠视网膜Müller细胞上的诱导表达。行nestin/谷氨酰胺合成酶(GS)或nestin/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光双标,共焦显微镜观察nestin/GFAP在Müller细胞上的表达情况。结果术后各时间点模型组与假手术组眼压的差异有统计学意义(P<0.05)。术后1～3周模型组RGCs数量显著减少,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光结果显示术后2h～3周,模型组nestin在Müller细胞上表达的荧光强度逐渐增强,与假手术组比较差异有统计学意义。Western blot半定量分析结果与免疫荧光染色结果一致。免疫电镜结果进一步证实眼压升高后Müller细胞上出现nestin的诱导表达。结论Nestin在Müller细胞上的诱导表达是Müller细胞对眼压升高产生的一种反应,nestin的表达量与病程进展相一致。眼压升高时,nestin在Müller细胞上诱导表达,尤其在足板处的强烈表达,可能对RGCs具有保护作用。Nestin有望成为一种新的研究视网膜损伤的生物标记物。

TERT、PCNA和Bcl-2在实验性外伤性PVR视网膜前膜形成中的动态变化及相关性研究

目的探讨与细胞增殖相关的端粒酶逆转录酶(TERT)、增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡抑制蛋白Bcl-2在外伤性增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)视网膜前膜形成中的动态变化及其相关性.方法用S-P法对外伤性PVR大鼠模型视网膜前膜做端粒酶逆转录酶(TERT)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2免疫组织化学染色和HE染色,染色结果行图象分析.结果伤后增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达阳性细胞率和平均光密度值出现先升高后降低的动态变化,14 d组阳性率最高,与7 d组和28 d组比较差异有统计学意义.伤后TERT蛋白和Bcl-2表达阳性细胞率和平均光密度值出现先升高后稍降低的动态变化,14 d组和21 d组阳性率最高,与7 d组比较有显著性差异,TERT、PCNA和Bcl-2蛋白表达之间有显著相关性.结论TERT、Bcl-2参与外伤性PVR视网膜前膜增殖细胞的生长调控,与细胞增殖的动态变化呈高度相关性,为反义核酸技术等基因手段预防或治疗PVR以及治疗时间的选择提供实验依据.

大鼠外伤性PVR视网膜前膜形成中TERT、PCNA和Bcl-2的变化(英文)

目的:探讨与细胞增殖相关的端粒酶逆转录酶TERT、增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡抑制蛋白Bcl-2在外伤性PVR视网膜前膜形成中的动态变化及其相关性。方法:S-P法对外伤性PVR大鼠模型视网膜前膜做TERT、PCNA、Bcl-2免疫组织化学染色和HE染色,染色结果行图像分析。结果:伤后PCNA蛋白表达阳性细胞率和平均光密度值出现先升高后降低的动态变化,14d组阳性率最高,与7d组和28d组比较有显著性差异。伤后TERT蛋白和Bcl-2表达阳性细胞率和平均光密度值出现先升高后稍降低的动态变化,14d组和21d组阳性率最高,与7d组比较有显著性差异,TERT、PCNA和Bcl-2蛋白表达之间有显著相关性(P ≤0.01)。结论:TERT、Bcl-2参与外伤性PVR视网膜前膜增殖细胞的生长调控,与细胞增殖的动态变化呈高度相关性。

巢蛋白——一种新的视网膜损伤生物标记物

目的探讨Mller细胞在视网膜损伤中的作用,探讨巢蛋白(nestin)是否是一个更有价值的评价视网膜损伤的生物标记物。方法33只健康成年SD大鼠,其中3只做为正常对照,于各模型制作之前取材;6只制作大鼠视网膜缺氧模型,先于体积分数9%氧浓度箱中2h,其中3只在体积分数80%氧浓度中治疗2h后,均置于正常环境24h后取材;15只右眼制作青光眼模型,左眼作假手术对照,分别于术后2h、1d、3d、1周、3周取材(每个时间点3只);9只右眼制作视神经横断模型,分别于术后1d、3d、1周取材;作眼球矢状位冰冻切片,行nestin及谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)或胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及GS免疫荧光双标记,共聚焦显微镜读片分析。结果健康成年SD大鼠视网膜Mller细胞不表达nestin和GFAP,视网膜损伤后(缺氧、青光眼、视神经横断),Mller细胞均出现nestin的诱导表达,青光眼模型中nes-tin在Mller细胞上的诱导表达随病程延长持续升高;视神经横断后1dMller细胞即出现nestin的诱导表达,3d时其表达进一步增强,1周时表达轻度减弱;在视网膜缺氧模型中Mller细胞有明显nestin的诱导表达,而给予高氧治疗后其表达明显减弱。青光眼和视神经横断后Mller细胞上出现GFAP的诱导表达,但在缺氧模型中未发现GFAP表达。结论nestin是一种新的、有价值的视网膜损伤生物标记物。视网膜损伤后nestin、GFAP、GS在Mller细胞足板处的聚集对维持视网膜结构完整性和促进功能恢复可能具有重要的意义。

MCP-1／CCR2通路参与骨髓基质细胞向脊髓全横断损伤区迁移的实验研究

【目的】探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及其受体CCR2在骨髓基质细胞(MSC)体内、外迁移中的作用。【方法】体外培养、纯化大鼠MSC,取第五代MSC行免疫荧光鉴定;免疫组化、RT-PCR检测纯化MSC表达CCR2情况;Boyden小室法检测趋化因子MCP-1(5～500ng/mL)对MSC的趋化迁移作用及其特异性。42只成年大鼠用于体内研究(脊髓全横断组24只,假手术组9只,正常大鼠9只),分别于术后1,3,7,14d取材,行免疫组化检测MCP-1表达,或行MCP-1的Real-timePCR定量分析,或颈内静脉注射荧光标记的MSC,观察MSC向脊髓迁移情况。【结果】第5代MSC都表达间充质干细胞标记物Vimentin、Laminin及Fibronectin;细胞免疫荧光、RT-PCR证实MSC表达趋化因子受体CCR2;MCP-1(5～500ng/mL)体外可趋化MSC迁移(P﹤0.05),抗MCP-1抗体可对抗其趋化迁移作用(P﹤0.05)。脊髓全横断组、对照组脊髓均表达MCP-1,但细胞分布、染色存在差异,影响MCP-1定量。脊髓损伤后趋化因子MCP-1RNA在1d、3d及7d较对正常对照组差异有统计学意义(P<0.05),术后14d时MCP-1RNA与正常对照相比差异无统计学意义(P>0.05),伴随其变化,脊髓损伤区迁移MSC较对照差异有统计学意义(P﹤0.05)。【结论】MCP-1体内、外可趋化MSC迁移,MCP-1/CCR2通路参与MSC向脊髓全横断损伤区的迁移。

曲安奈德玻璃体内注射联合23G微创玻璃体切割术治疗脉络膜脱离型视网膜脱离的疗效分析

目的探讨曲安奈德玻璃体内注射联合23G微创玻璃体切割术治疗脉络膜脱离型视网膜脱离的疗效。方法 2012年1月至2013年1月在我院就诊的28例脉络膜脱离型视网膜脱离患者,经过术前短期糖皮质激素治疗后,行23G微创玻璃体切割术治疗,术中联合玻璃体内注射曲安奈德4 mg,术后随访6~12个月,观察术后视力恢复、视网膜复位和并发症发生情况。结果一次手术视网膜解剖复位率为89.3%,再次术后视网膜解剖复位率100.0%。术前Log MAR视力为1.98±0.50,术后Log MAR视力为1.17±0.40,差异有统计学意义（t=8.371,P〈0.05）。末次随访眼压（16.2±3.7）mm Hg（1k Pa=7.5 mm Hg）,与术前眼压（6.4±2.3）mm Hg相比,差异有统计学意义（t=17.613,P〈0.05）。术后有15例出现一过性高眼压,3例白内障加重,1例发生后发性白内障,5例术后少量结膜下出血。结论 23G微创玻璃体切割术联合术中曲安奈德玻璃体内注射治疗脉络膜脱离型视网膜脱离是安全有效的。

玻璃体切除重硅油眼内充填治疗严重眼外伤21例分析

目的:探讨现代玻璃体切除手术联合眼内充填重硅油治疗严重眼外伤的疗效。方法:对2009/2010年我院收治的21例严重眼外伤患者应用现代玻璃体切除联合重硅油填充手术治疗,一期清创缝合联合玻璃体手术者7例,一期清创缝合二期行玻璃体手术者14例。术后随诊3～12(平均7.5)mo,观察术后效果。结果:术后17例眼球完全保留,4例眼球萎缩。10例视力较术前不同程度提高。结论:应用现代玻璃体切除重硅油填充术治疗严重眼外伤,不仅能保留眼球完整,也会提高部分视力。

骨髓基质细胞移植促进脊髓全横断损伤区神经元轴突的再生变化

背景:近年来,部分学者证明骨髓基质细胞移植可促进轴突再生,改善脊髓损伤引起的运动功能障碍,但目前关于移植骨髓基质细胞如何促进轴突再生,移植细胞与再生轴突的关系尚不清楚。目的:通过免疫荧光组织化学和免疫电镜的方法,探讨移植骨髓基质细胞促进脊髓全横断损伤区轴突再生的机制。设计、时间及地点:随机对照动物实验,细胞学体内观察,于2006-03/2007-06在新加坡国立大学解剖系完成。材料:清洁级Wistar新生大鼠1只,用于骨髓基质细胞培养。清洁级成年雌性Wistar大鼠36只,无菌条件下显露、切断脊髓T10,制备脊髓全横断损伤模型。方法:通过传代法培养、纯化骨髓基质细胞。36只成年Wistar雌性大鼠随机投币法分为移植组和对照组,每组18只。移植组大鼠脊髓全横断损伤9d后以1×1011L-1的密度移植骨髓基质细胞,缺损区5μL,损伤区上、下1mm处各2.5μL,对照组动物在相同部位注射等量DMEM完全培养基,注射速度1μL/min。主要观察指标:①移植骨髓基质细胞存活、分化情况。②轴突再生情况。③移植组和对照组宿主自身的nestin、NF200、GFAP和CNP阳性细胞在脊髓损伤区存活情况。④内源性CNP阳性细胞和再生纤维关系。结果:骨髓基质细胞移植2周时,脊髓损伤区可见大量CFDA-SE标记的移植细胞,随时间延长,存活的移植细胞数目逐渐降低,考虑脊髓损伤区内大量的OX42阳性吞噬细胞/激活小胶质细胞及空洞可能影响移植细胞的存活。虽然骨髓基质细胞数目逐渐降低,骨髓基质细胞移植可促进损伤区轴突的再生,而且还可促进宿主自身的nestin、NF200、GFAP和CNP阳性细胞在脊髓损伤区存活。宿主自身CNP和许旺细胞促进损伤轴突的再生和髓鞘形成。结论:移植骨髓基质细胞移植可促进宿主自身CNP和许旺细胞在脊髓损伤区存活,后者具有促进损伤轴突再生和髓鞘形成的作用。

大鼠外伤性视神经损伤模型的建立

目的建立大鼠定量视神经损伤模型,为研究视神经损伤的发病机制及治疗效果奠定基础。方法健康Sprague-Dawley大鼠27只,随机分为3组,分别为A组(损伤组)12只、B组(假损伤对照组)12只、C组(正常对照组)3只。A组暴露视神经,应用40g力的视神经夹在大鼠眼球后2mm处夹视神经30s,B组仅暴露视神经,C组不做任何处理。A、B组按损伤后不同时间分为3d组、7d组、14d组、28d组,采用双上丘注射50g.L-1荧光金标记双眼视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells RGCs)。视网膜铺片荧光照相,计算RGCs计数,RGCs标识率及RGCs丧失率。结果 C组与B组RGCs计数及RGCs标识率比较,无明显差异;A组与B组各时间点RGCs计数及RGCs标识率比较,均有明显差异;A组视神经损伤后不同时间RCCs计数逐渐下降(3d:152.26±25.12,7d:111.19±20.32,14d:101.23±17.19,28d:94.86±18.26),14d组与28d组比较无统计学意义,其他时间点比较有统计学意义,视神经损伤后RGCs标识率随时间延长渐进性降低(3d:79.35%±8.29%,7d:59.76%±7.79%,14d:53.26%±7.26%,28d:51.29%±3.26%),而RGCs丧失率随时间延长渐进性增加(3d:20.65%±3.15%,7d:40.24%±5.63%,14d:46.74%±4.37%,28d:48.71%±5.12%)。结论应用40g力视神经夹在大鼠眼球后2mm处夹视神经30s能成功建立定量视神经损伤动物模型。

23G微创玻璃体切除手术治疗球形视网膜脱离的疗效

目的：探讨23G微创玻璃体切除手术治疗球形视网膜脱离的疗效及其安全性。方法：2010年1月至2013年12月在我院就诊的36例（36眼）球形视网膜脱离病例,接受23G微创玻璃体切除手术,术后随访裂隙灯、眼压、最佳矫正视力、间接检眼镜检查和并发症发生情况。结果：随访时间9~18（12.7±2.1）个月,术后视网膜解剖复位率97.2%（35/36眼）,1眼在术后视网膜未完全复位,2周后下方发现新裂孔,行巩膜外扣带术后视网膜复位。末次随访最佳矫正视力显著高于术前,除术中手术切口渗漏缝合6眼（16.7%）,术后一过性眼压升高9眼（25.0%）,前房少量积血1眼（2.8%）,晶状体羽毛状混浊5眼（13.9%）外,未出现医源性裂孔、脉络膜脱离、眼内炎等严重并发症。结论：23G微创玻璃体切除术治疗球形视网膜脱离是安全有效的。

半剂量维替泊芬和半能量PDT治疗慢性中心性浆液性脉络膜视网膜病变

目的探讨使用半剂量维替泊芬和半能量激光的光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)治疗慢性中心性浆液性脉络膜视网膜病变(chronic central serous chorioretinopathy,CCSC)的疗效和安全性。方法分析2011年8月至2013年8月期间在我科就诊的CCSC患者25例(33眼),所有患者接受静脉注射剂量为3 mg·m-2体表面积的维替泊芬和能量为25 J·cm-2的PDT治疗,治疗后1个月、3个月、6个月和12个月复查,重复进行BCVA、裂隙灯、间接眼底镜和OCT检查,治疗后6个月复查眼底荧光血管造影检查。结果末次随访时视力改善者31眼、稳定者2眼,最佳矫正视力(0.15±0.09)LogM AR,与治疗前的(0.50±0.18)LogM AR相比差异有统计学意义(t=10.334,P<0.001);OCT检查示,显效率在治疗后1个月、3个月、6个月和末次随访时分别为48.5%、84.8%、93.9%和100.0%。CCSC眼治疗后1个月黄斑中心凹下脉络膜厚度为(391.53±101.18)μm,与治疗前的(483.21±89.13)μm相比明显降低(t=-3.902,P<0.001),黄斑中心凹下平均脉络膜厚度随时间推移不断下降。治疗后6个月FFA结果显示33眼渗漏病灶均完全消失。未观察到复发、视网膜色素上皮萎缩、脉络膜新生血管形成等并发症发生。结论使用半剂量维替泊芬和半能量PDT治疗对于单纯黄斑区神经上皮脱离的CCSC是有效和安全的。

早产儿视网膜病变危险因素研究进展

早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)是一种视网膜血管增生性疾病,近年来随着医疗水平的不断提高,其发病率也显著增高,该病已成为我国儿童致盲的主要原因之一。目前其发病机制尚不清楚,认为早产、低出生体质量和吸氧是该病的三大危险因素。本文就可能引发该病的多个因素进行综述,旨在扩充ROP的病因和发病机制,为该病的防治提供理论依据。

IOL-Master在Oxane HD填充眼眼轴测量中的应用

目的分析应用IOL-Master测量重硅油Oxane HD填充眼眼轴长度的效果。方法收集2011年5月至2013年5月在我院就诊的36例（36眼）重硅油Oxane HD填充眼患者,分别应用A超和IOL-Master进行眼轴测量,并进行人工晶状体度数测算,在重硅油取出联合超声乳化白内障摘出人工晶状体植入术后1个月应用A超和IOL-Master进行第二次眼轴测量,3个月时进行屈光检查,对两种检查的结果进行对比分析。结果术前眼轴长度A超测量为（26.3±3.6）mm,IOL-Master测量为（26.2±3.7）mm;术后1个月眼轴长度A超测量为（26.2±3.6）mm,IOL-Master测量为（26.2±3.7）mm。术前术后A超测量结果之间、IOL-Master测量结果之间,以及术前IOL-Master测量结果与术后A超测量结果之间差异均无统计学意义（均为P〉0.05）,而术前A超测量结果与术后IOL-Master测量结果差异有统计学意义（P=0.030）,A超测量结果较IOL-Master测量结果眼轴较长。术前IOL Master测量的人工晶状体度数预估术后屈光状态为-0.36～0.08（-0.11±0.13）D,术后3个月等效球镜度为-0.41～0.11（-0.11±0.14）D。用IOL-Master计算的预计术后屈光度与术后真实屈光度比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论对于重硅油Oxane HD填充眼的眼轴测量,应首选IOL-Master测量,对于屈光间质混浊、患者无法固视而不能进行IOL-Master检查的患者眼轴可采用A超测量。

重硅油Oxane HD填充治疗陈旧性视网膜脱离

第三代重硅油Oxane HD作为近年来出现的新型玻璃体填充物,用于治疗复杂性视网膜脱离,我院于2008年12月至2010年12月间运用Oxane HD治疗陈旧性视网膜脱离病例23例,并总结报道如下。1资料与方法1.1一般资料回顾性分析2008年12月至2010年12月我院眼科收治的陈旧性视网膜脱离病例23例（24眼）,诊断主要依据患者主诉和病史,

骨髓基质细胞移植治疗脊髓全横断损伤超微结构观察

目的观察骨髓基质细胞(MSCs)移植治疗脊髓全横断损伤(SCI)超微结构,探讨内源性细胞与再生轴突关系。方法通过全骨髓法培养、纯化MSCs,SCI 9 d后移植MSCs,通过免疫荧光组化观察细胞移植后损伤区轴突再生情况,免疫荧光双标、免疫电镜观察再生轴突与内源性细胞关系。结果移植8 w后实验组脊髓损伤区可见大量神经微丝蛋白200(NF200)阳性纤维,对照组脊髓损伤区未见明显的NF200阳性纤维。免疫荧光双标结果显示损伤区NF200阳性纤维和2',3'-环核苷酸磷酸而酯酶(CNP)阳性细胞之间存在密切的空间关系,免疫电镜显示CNP阳性细胞通过伸长丝状伪足形成再生轴突支架,内源性施万细胞参与再生轴突髓鞘形成。结论 MSCs移植可促进损伤区轴突再生,宿主自身CNP阳性细胞和施万细胞参与损伤轴突的再生和髓鞘形成。

基质细胞来源因子1及其受体CXCR4参与骨髓基质细胞向脊髓全横断损伤区的迁移

背景:骨髓基质细胞具有体内、外迁移特性,但目前关于其迁移的具体机制还不十分清楚。目的:探讨基质细胞来源因子1及其受体CXCR4在骨髓基质细胞体内、外迁移中的作用。设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2007-03/06在新加坡国立大学解剖系完成。材料:清洁级Wistar新生大鼠1只,用于骨髓基质细胞培养。清洁级成年Wistar大鼠40只,随机分为损伤模型组、假手术组,20只/组。方法:骨髓基质细胞体外趋化实验在48孔Boyden小室上进行,取25μL基质细胞来源因子1,分别以5,50,500μg/L质量浓度加到趋化板的下层,以8μm孔径的聚碳酸酯膜覆盖;并设立空白对照,单纯添加DMEM条件培养基。以含牛血清白蛋白的DMEM条件培养基调整细胞浓度至1.5×109L-1,50μL细胞悬液加到Boyden小室上层,37℃、CO2培养箱培养10h。损伤模型组大鼠制备脊髓全横断损伤,假手术组大鼠只打开椎板。脊髓全横断后1h,将5-(6-)羟基荧光素双乙酸琥珀酰亚胺酯荧光标记的骨髓基质细胞悬液1.0mL(1×109L-1)经颈内静脉注入体内。主要观察指标:免疫荧光组化染色观察骨髓基质细胞趋化因子受体CXCR4的表达,基质细胞来源因子1体外对骨髓基质细胞的趋化迁移作用,Real-timePCR定量检测脊髓损伤区基质细胞来源因子1RNA的表达,荧光显微镜下观察骨髓基质细胞向脊髓损伤区的体内迁移。结果:纯化的骨髓基质细胞呈CXCR4阳性。与空白对照比较,5,50,500μg/L基质细胞来源因子1均可明显促进骨髓基质细胞的体外趋化迁移(P<0.05),且质量浓度为50μg/L时趋化作用达峰值。与假手术组比较,损伤模型组造模后7d基质细胞来源因子1RNA的表达明显升高(P<0.05),14d时恢复至正常水平。细胞注射2周后与假手术组比较,损伤模型组损伤区迁移细胞数明显增加(P<0.05)。结论:基质细胞来源因子1体内、外可趋化骨髓基质细胞迁移,基质细胞来源因子1及其受体CXCR4参与骨髓基质细胞向脊髓全横断损伤区的迁移。