CD46基因在家畜抗病育种中的应用研究进展

补体调节蛋白46(complement regulator protein, CD46)在大多数哺乳动物的细胞上广泛表达。除了具有补体失活、调节T细胞活化和生育能力等多种生理功能之外,CD46也可以作为多种细菌和病毒的受体,尤其对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)和经典猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)的附着起重要作用。利用基因编辑技术特异修饰CD46成功生产出抗BVDV活牛犊,证明该基因可以作为抗病育种的候选基因。本文主要对CD46蛋白在家畜病毒感染中的作用以及在抗病育种中的应用进行综述。

绵羊PLC-γ1基因shRNA慢病毒干扰载体的构建及鉴定

为了构建绵羊PLC-γ1基因shRNA慢病毒干扰载体,并在人胚肾细胞(HEK-293T细胞)中筛选及鉴定载体干扰效果,试验采用Invitrogen BLOCK-iTTM RNAi Designer在线软件设计PLC-γ1基因的4条shRNA干扰序列(PLC-γ1-shRNA-1~4)和1条阴性对照序列(PLC-γ1-shRNA-NC),将其分别克隆至慢病毒干扰载体pLentiLox3.7(pLL3.7)中构建PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体,用其转染HEK-293T细胞,48 h后通过倒置荧光显微镜观察荧光蛋白表达情况,并利用实时荧光定量PCR法和Western-blot检测HEK-293T细胞中PLC-γ1基因和蛋白质的表达情况,筛选出干扰效率最高的PLC-γ1-shRNA干扰序列并计算慢病毒含量。结果表明:试验成功设计出PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体,大小为120 bp。PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体均具有较高的干扰效率,在倒置荧光显微镜下均可观察到绿色荧光蛋白表达,其中PLC-γ1-shRNA-2序列的干扰效率最高,其PLC-γ1基因和蛋白质的相对表达量最低,极显著低于PLC-γ1-shRNA-NC的干扰(P<0.01),慢病毒含量为1.1×10^(7)IU/mL。说明针对PLC-γ1基因筛选出的PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体从基因和蛋白质水平上均能有效地抑制PLC-γ1的表达。

绵羊PLC-γ1基因真核表达载体的构建及鉴定

目的旨在构建携带红色荧光蛋白(RFP)报告基因的绵羊PLC-γ1非融合性真核表达载体。方法在原有PUC57-PLC-γ1克隆载体基础上,对目的片段N端前加入P2A序列和3个连续Flag序列后使用HindⅢ酶和SalⅠ酶双酶切获得P2A-3×Flag-PLC-γ1片段,将其连接至pDsRed2-C1载体获得重组质粒pDsRed2-C1-P2A-3×Flag-PLC-γ1;然后采用Lip 2000转染试剂将该重组质粒转染至HEK-293T细胞,最后利用荧光显微镜、qRT-PCR、Western blot、免疫共沉淀(IP)和免疫荧光(IF)法鉴定重组质粒pDsRed2-C1-P2A-3×Flag-PLC-γ1的表达及亚细胞定位情况。结果双酶切和测序结果显示质粒pDsRed2-C1-P2A-3×Flag-PLC-γ1构建成功,观察到红色荧光;免疫荧光的亚细胞定位检测出PLC-γ1蛋白在细胞质中表达;qRT-PCR和Western blotting法均能检测出PLC-γ1表达,与对照组有显著性差异(P>0.01);免疫共沉淀也纯化分离出含有Flag标签的PLC-γ1蛋白。结论本研究成功构建绵羊PLC-γ1基因的真核表达载体,在P2A肽作用下实现目的蛋白PLC-γ1与DsRed2的表达,构建的载体可用于研究PLC-γ1在早期胚胎发育中的作用。

PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达分析

为了探索PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达差异,试验随机选取6月龄健康的哈萨克绵羊雌雄各5只,进行屠宰,采集样本采用实时荧光定量PCR方法对PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官(脾脏、肺脏、胰腺、肾脏、心脏、肝脏、睾丸、卵巢、子宫)及淋巴组织(颈前淋巴、肩前淋巴、网胃淋巴、瓣胃淋巴、瘤胃淋巴、肠系淋巴、十二指肠淋巴、腹股沟淋巴、空肠淋巴和回盲淋巴)的表达规律进行研究。结果表明:哈萨克绵羊胰腺PLC-γ1基因的相对表达量极显著高于其他器官(P<0.01),卵巢PLC-γ1基因的相对表达量显著高于肾脏和子宫(P<0.05),其余器官PLC-γ1基因相对表达量均差异不显著(P>0.05);十二指肠淋巴PLC-γ1基因的相对表达量显著高于瓣胃淋巴(P<0.05),瓣胃淋巴PLC-γ1基因的相对表达量极显著高于其他淋巴组织(P<0.01)。说明PLC-γ1基因在哈萨克绵羊各系统器官和淋巴组织中均有表达,并且在胰腺、卵巢、十二指肠淋巴、瓣胃淋巴中的表达明显,对机体免疫、生殖和消化等方面具有重要作用。

PLCγ1对绵羊早期胚胎超微结构的影响

为了探究绵羊磷脂酶Cγ1(PLCγ1)基因对绵羊早期胚胎发育的影响,从微观角度解释胚胎的内部发育规律。卵母细胞分离培养至成熟,显微注射同等浓度的pcDNA3.1-EGFP-PLCγ1重组质粒后随机分成两组,PLCγ1处理组在注射后培养24 h、48 h;U73122处理组在显微注射后12 h向培养液中添加最优抑制PLCγ1的U73122浓度0.5μmol/L,两组分别在24 h、48 h固定胚胎做超薄切片,电镜观察透明带、脂滴、线粒体及胚胎发育情况。结果表明,显微注射重组质粒后能够促进胚胎发育,并且随着胚胎的发育,透明带呈不规则性疏松,PLCγ1处理组与U73122处理组的不同时间段以及相同时间段之间,透明带厚度均存在极显著差异(P<0.01)。线粒体在胞质内呈均匀分布,PLCγ1处理组线粒体横脊少且形状规则,成熟的线粒体含量较多;U73122处理组线粒体嵴深且长,出现空泡化异常形态,线粒体异常率(31.72%±3.316%)极显著高于PLCγ1处理组(22.01%±6.652%)。脂滴随机分布于各卵裂球中,U73122处理组脂滴形态出现异常,数量多于PLCγ1处理组。以上结果初步证明,绵羊早期胚胎发育过程中,PLCγ1基因可通过影响透明带厚度、线粒体及脂滴等改变细胞代谢水平从而调整胚胎发育。

木质纤维素生产生物乙醇的研究进展

目前最常用的可再生燃料是来自于粮食和甘蔗的乙醇，但其原料来源受到限制，广泛存在的木质纤维素生物质作为生产乙醇的原料便具有很大的优势。本文介绍了近年国内外用生物质生产生物乙醇的进展。

绵羊磷脂酶C-γ1基因克隆及生物信息学分析

本研究旨对绵羊磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)基因预测序列进行筛选鉴定,获取PLC-γ1基因序列并对其生物信息学进行分析。根据GeneBank(登录号:NC_040264.1)及Ensembl(登录号:ENSOARG00000001700.1)给出的绵羊PLC-γ1的4种不同预测的转录本的编码区(CDS)区进行BLAST对比,在非同源区内两端设计引物,从绵羊卵巢提取总RNA并转录成cDNA,运用RT-PCR方法扩增该特异性片段,胶回收后测序,经BLAST比对筛选出和与该片段一致基因序列。根据筛选序列的引物,运用LA Taq(GC Buffer)高保真酶对绵羊PLC-γ1基因进行PCR扩增,胶回收产物连接PUC57-T载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑选单克隆进行测序。利用生物信息学技术对该基因及编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,试验成功扩增出非同源片段330 bp,经BLAST对比分析,预测的转录本X3预测序列与其一致,连接PUC57-T载体,经测序成功扩增3870 bp的绵羊PLC-γ1基因。绵羊PLC-γ1基因与山羊关系紧密,与牛、马、猪等家畜具有较强的进化关系,蛋白分子式为C_(6582)H_(10160)N_(1812)O_(1962)S_(58)。理论分子质量为147.9 ku,存在于细胞质内,且不具备跨膜性,无信号肽,为亲水性弱酸不稳定蛋白。该基因N、C端GC含量偏高,分别达80%、70%以上,具备SH2、SH3、C2等高度保守结构域,二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角、无规则卷曲占比分别为36.46%、16.14%、5.04%和42.36%,磷酸化位点有112个,Y428、Y509和S514为关键磷酸化位点。本研究结果为绵羊PLC-γ1蛋白表达研究提供了理论依据,对研究新疆地方品种羊的胚胎发育、提高受精率等具有重要意义。

绵羊NYD-SP27基因的原核表达及生物信息学分析

本研究旨在对绵羊NYD-SP 27基因进行克隆和原核表达,并对其表达的蛋白进行生物信息学分析。根据GenBank中绵羊NYD-SP 27基因序列(登录号:KX905090)设计1对特异性引物,通过PCR方法扩增目的基因片段,构建pET-22b(+)-NYDSP27重组质粒并转化E.coli DH5α感受态细胞,提质粒进行双酶切鉴定,将鉴定正确的pET-22b(+)-NYDSP27重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,对融合蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定,并利用生物信息学方法对NYD-SP 27基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,试验成功扩增出大小为1617 bp的NYD-SP 27基因片段,并经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切获得大小为5400和1617 bp的两条片段,表明成功构建了pET-22b(+)-NYDSP27重组质粒,诱导表达重组蛋白大小约60 ku,主要以包涵体的形式存在。NYD-SP27蛋白分子式为C 2798 H 4319 N 737 O 819 S 19,原子总数为6892,理论等电点(pI)为6.16,为酸性蛋白,不稳定系数为46.96,属于不稳定蛋白,总平均亲水性为-0.403。该蛋白无跨膜结构,无信号肽,含有45个潜在的磷酸化位点和24个抗原表位;NYD-SP27蛋白二级结构中的α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲分别占26.21%、3.90%、18.03%和51.86%。本试验结果可为深入研究绵羊NYD-SP27蛋白的作用机理提供理论依据。

国内新戊二醇研究与产业化进展

新戊二醇(NPG)是一种重要的化工医药原料,在医药、化工、涂料、农药、塑料和石油等领域有着广泛的市场。介绍了国内新戊二醇研究与产业化开发情况及重要意义,重点介绍了经一步法改进的单套生产能力万吨级的新戊二醇生产工艺、产品用途和市场前景。

PLCγ1基因对绵羊早期胚胎体外发育的影响

旨在探究磷脂酶Cγ1(phospholipase Cgamma 1,PLCγ1)基因对绵羊早期胚胎体外发育的影响,为揭示PLCγ1基因在早期胚胎发育过程中的作用机制奠定基础。本研究选取包裹3层以上颗粒细胞的绵羊卵母细胞为试验材料,体外培养成熟后将其分为两组,利用显微注射技术将PLCγ1基因导入MⅡ期(减数第二次分裂中期)卵母细胞(n=127)中为试验组,以显微注射空载体pcDNA3.1-EGFP作为对照组(n=120),经48h后统计其卵裂率;并利用Ca^(2+)探针Rhod 2-AM监测MⅡ卵母细胞和显微注射后16、48、72、96、120h时各时期卵母细胞以及早期胚胎内Ca^(2+)波动。结果显示,PLCγ1基因显微注射后卵母细胞被激活,卵裂率为((19.67±0.2)%,P<0.01),桑椹胚发育率为((9.00±0.17)%,P<0.05);PLCγ1基因注射后,卵母细胞和早期胚胎不同发育时期有Ca^(2+)浓度变化,可观察发现Ca^(2+)主要分布在胞质中且注射48h时可达到峰值(P<0.01)。结果表明,PLCγ1基因可以引起绵羊卵母细胞发育过程中发生Ca^(2+)振荡,启动其卵裂,并促使早期胚胎的继续发育。

卧床舒适度对奶牛泌乳性能的影响研究

为研究卧床舒适度对奶牛日产奶量和乳成分的影响,本试验选取60头泌乳天数相近、胎次相同的健康的中国荷斯坦奶牛为研究对象,将其分为A、B、C三组并分别圈养于三栋卧床舒适度不同的牛舍中,分析每组奶牛的日产奶量和乳成分变化情况。结果显示,随着卧床舒适度提高,奶牛日产奶量显著增加(P<0.05),体细胞数(somat⁃ic cell count,SCC)显著下降(P<0.05),乳脂率、乳蛋白率无明显变化(P>0.05)。由此得出,卧床舒适度的提高可促进奶牛产奶量的提升以及牛奶中SCC的下降,提高牧场经济效益。

变频器工艺难题探讨

根据烧结配料系统的工艺要求，通过对所使用变频器的模拟量输入／输出接口中可编程参数的研究和计算，并对相应参数进行了修改和试验，对同一控制电流输入的两台相关设备，实现了转速比的无级调整。

健康教育联合心理疏导对伴有躯体疾病抑郁症患者的护理效果分析

目的 观察分析伴有躯体疾病抑郁症患者的护理中，健康教育联合心理疏导的治疗效果。方法选取我院收治的伴有躯体疾病抑郁症患者90例作为研究对象；分为2组。每组45例，对照组单纯应用常规护理路径；实验组在对照组的前提下融入健康教育联合心理疏导护理路径。观察分析2组的护理效果。结果2组治疗前SAS评分、SDS评分差异不具有统计学意义(P＞0.05)；在治疗后，实验组的SAS评分、SDS评分明显低于对照组，差异具有计学意义(P＜0.05)；同时实验组的护理满意度为95.6%，对照组中为77.8%，实验组的护理满意度明显优于对照组，2组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论在对伴有躯体疾病抑郁症患者的护理中，健康教育联合心理疏导护理路径的护理效果比常规护理路径更为显著，有效优化躯体疾病伴焦虑抑郁患者的抑郁评分和焦虑评分，护理满意度明显提高，值得应用。

绵羊NYD-SP27基因对卵母细胞体外发育的影响

为探究绵羊精子提取物NYD-SP27影响绵羊早期胚胎体外发育的分子机理,研究其是否可以作为一种新型的卵母细胞激活物质,为进一步揭示哺乳动物早期胚胎发育的分子机制提供理论基础。分别将pEGFP-N1-NYD-SP27重组质粒,pEGFP-N1显微注射到MⅡ绵羊卵母细胞中,在显微镜下观察绵羊卵母细胞体外发育的情况,统计发育率。结果显示,注射pEGFP-N1-NYD-SP27组出现卵裂情况并可继续发育到桑葚胚,然而注射pEGFP-N1组发育停滞。表明NYD-SP27基因可以促使绵羊卵母细胞在体外发育。

“秋水共长天一色” 海南西部海岸的浪漫湿地

连绵数百里的绿色长城——木麻黄海防林带,是一道壮观的风景线;紫水鸡在野菠萝树丛间出没,它有着“最美水鸟”之称,却一度被误以为已然灭绝;这里是海南保护较好的湿地之一,也是比较稀缺的内陆淡水沼泽湿地……这里,就是海南的昌江海尾国家湿地公园。从1998年到2018年,20年的打造和生态恢复,让昔日环境恶劣的荒滩,如今已是处处美景。

拉莫三嗪治疗双相抑郁的疗效观察

目的探讨拉莫三嗪治疗双相抑郁的临床疗效。方法 72例双相抑郁患者,按照随机原则分为研究组和对照组,每组36例。对照组给予丙戊酸钠治疗,研究组给予拉莫三嗪治疗,疗程均为8周。比较两组患者治疗前后汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分和汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评分变化以及治疗效果。结果治疗前两组患者HAMD评分和HAMA评分比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后两组患者HAMD评分和HAMA评分均明显降低,且研究组降低更为明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组患者治疗后总有效率为91.7%,明显高于对照组的66.7%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论拉莫三嗪能够明显改善双相抑郁患者的抑郁程度,效果优于丙戊酸钠,值得在临床中推广应用。

齐拉西酮治疗首发精神分裂症的效果分析

目的探讨齐拉西酮治疗首发精神分裂症患者的临床效果。方法 92例首发精神分裂症患者,按照随机原则分为对照组和研究组,每组46例。对照组患者给予利培酮治疗,研究组患者采用齐拉西酮治疗,疗程均为12个月。采用阳性与阴性症状量表(PANSS)评价治疗效果,采用不良反应症状量表(TESS)评价不良反应。结果两组基线PANSS总分、阳性症状分、阴性症状分和精神病理学评定量表(PRS)分比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后6个月及12个月两组PANSS总分、阳性症状分、阴性症状分和PRS均明显降低,与同组基线相比差异均有统计学意义(P<0.05),但两组间同时间点相比差异无统计学意义(P>0.05)。治疗期间对照组不良反应发生率为45.7%(21/46),研究组患者不良反应发生率为30.4%(14/46),研究组不良反应发生率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论齐拉西酮治疗首发精神分裂症的临床效果与利培酮相当,且不良反应更少,值得在临床中推广应用。

帕罗西汀联合利培酮治疗难治性抑郁症临床分析

目的观察帕罗西汀(乐友)联合利培酮治疗难治性抑郁症的疗效。方法 94例难治性抑郁症患者,随机分为对照组和研究组,各47例。对照组予帕罗西汀治疗,研究组予帕罗西汀联合利培酮治疗。比较两组治疗效果。结果两组治疗前汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组HAMD评分比较,研究组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组总有效率比较,研究组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组的不良反应发生情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论帕罗西汀联合利培酮治疗难治性抑郁症,安全、效果显著,值得临床推广应用。