SLC9A3-AS1调控miR-148a-3p/ROCK1信号轴影响肾癌细胞生物学功能

目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://gepia2.cancer-pku.cn/)分析TCGA数据库中SLC9A3-AS1在ccRCC组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SLC9A3-AS1在不同肾癌细胞系、24例ccRCC组织与癌旁正常肾脏组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Transwell小室迁移实验检测敲低SLC9A3-AS1表达对肾癌细胞增殖与迁移的影响;应用蛋白质免疫印迹法检测增殖与迁移相关信号通路蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证SLC9A3-AS1与miR-148a-3p/ROCK1轴的靶向调控关系。结果GEPIA2软件分析结果显示,相较正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,相较癌旁正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在24例ccRCC组织中表达显著上调(P<0.01);相较永生化肾小管上皮细胞,SLC9A3-AS1在4种肾癌细胞系中表达均显著上调,以786-O细胞最为显著(P<0.01)。干扰SLC9A3-AS1表达,可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力,上调E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、MMP2的蛋白表达水平(均P<0.05);过表达miR-148a-3p可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,SLC9A3-AS1可特异性结合miR-148a-3p,后者进一步靶向结合ROCK1 mRNA的3′UTR区域;过表达miR-148a-3p可明显下调ROCK1 mRNA的表达水平,敲低miR-148a-3p表达则产生相反的效应;敲低SLC9A3-AS1表达可显著下调786-O细胞中ROCK1 mRNA与蛋白的表达水平(P<0.01);下调miR-148a-3p表达可部分逆转SLC9A3-AS1沉默对786-O细胞增殖与迁移的抑制作用(P<0.05)。结论SLC9A3-AS1在ccRCC中通过调控miR-148a-3p/ROCK1轴发挥促癌作用,有望成为ccRCC的一个新的分子标志物。

LncRNA FOXP4-AS1调控EZH2/LATS2轴对膀胱尿路上皮癌细胞增殖与迁移的影响

目的分析lncRNA FOXP4-AS1调控EZH2/LATS2轴对膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BUC)细胞增殖与迁移的影响。方法利用TCGA数据库与实时荧光定量PCR分析FOXP4-AS1和LATS2 mRNA在BUC组织中的表达;MTT实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移;Western blot检测LATS2与H3K27me3蛋白表达;RNA免疫沉淀(RIP)和染色质免疫沉淀(ChIP)验证FOXP4-AS1、EZH2与LATS2的关系。结果相较正常膀胱组织,BUC组织中FOXP4-AS1表达升高,而LATS2 mRNA表达降低(P<0.01);相较SV-HUC-1,FOXP4-AS1在BUC细胞系(EJ、T24、BIU-87及5637)中表达升高(P<0.01);沉默FOXP4-AS1可显著抑制BUC细胞增殖、迁移及H3K27me3蛋白表达,而显著促进LATS2 mRNA与蛋白的表达,过表达FOXP4-AS1则产生相反效应(P<0.05);RIP与ChIP实验表明FOXP4-AS1可募集EZH2至LATS2启动子区域,导致H3K27me3在该区域富集;敲低LATS2或EZH2表达可部分逆转FOXP4-AS1沉默或过表达对BUC细胞增殖、迁移及LATS2表达的影响。结论FOXP4-AS1在BUC中高表达,其通过招募EZH2至LATS2基因启动子区域负性调控LATS2的表达,进而调控BUC细胞的增殖与迁移。

Linc01419调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖与侵袭

目的:探讨长链非编码RNA Linc01419对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法:通过UALCAN软件(https://ualcan.path.uab.edu/)分析TCGA数据库中Linc01419在膀胱癌组织与正常膀胱组织中的表达差异;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测Linc01419在不同膀胱癌细胞系、22例经病理证实为膀胱癌的手术患者的肿瘤组织及癌旁正常膀胱组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验和Transwell小室侵袭实验检测敲低Linc01419表达对膀胱癌细胞增殖与侵袭的影响;采用双荧光素酶报告基因检测法分析Linc01419与miR-34a-5p及miR-34a-5p与E2F3之间的靶向调控关系。结果:UALCAN数据库分析显示相较正常膀胱组织,Linc01419在膀胱癌组织中显著高表达(P<0.001);RT-qPCR分析结果显示相较癌旁正常膀胱组织,Linc01419在22例膀胱癌组织中表达明显上调(P<0.001),与UALCAN数据库分析结果一致;Linc01419在4株膀胱癌细胞中的表达明显高于正常膀胱上皮细胞(P<0.01);敲低Linc01419表达,可显著抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭及N-cadherin、PCNA蛋白的表达,而显著促进E-cadherin的蛋白表达(P<0.05);miR-34a-5p过表达对膀胱癌细胞具有类似的抑制作用;双荧光素酶报告基因实验、RIP及Pull-down实验证实Linc01419可靶向结合miR-34a-5p,而后者进一步介导了对E2F3的靶向调控;抑制miR-34a-5p表达,可显著削弱Linc01419沉默对膀胱癌细胞生物学行为及E-cadherin、N-cadherin、PCNA、E2F3表达的影响。结论:Linc01419在膀胱癌中异常高表达,其通过调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖和侵袭,很可能是膀胱癌发生、发展过程中的一个重要环节。

额肌瓣悬吊治疗重度先天性上睑下垂

目的：观察额肌瓣悬吊治疗重度上睑下垂的临床效果。方法：观察额肌瓣悬吊法矫正先天性中重度上睑下垂的手术效果及并发症，评价手术方式的合理性。结果：本组患者共56例（65眼），随访观察2～24个月，有3例低矫，2例重睑形态不佳，其余患者均眼裂恢复正常大小，重睑弧线流畅，形态自然，无上睑结膜脱垂，倒睫等并发症。结论：额肌瓣悬吊术治疗先天性上睑下垂效果满意，安全可靠。

单侧唇裂鼻畸形解剖特点及整复分析

目的：探讨单侧唇裂鼻畸形的解剖学特征及治疗方法。方法：采用经鼻小柱“V”形切口，解剖出畸形的鼻大翼软骨，根据患者鼻畸形的解剖学缺陷，采取软骨头侧切除、软骨缝合加强固定、外侧脚松解、基底组织充填等措施矫正患侧鼻畸形。结果：2005年1月-2014年12月，共收集单侧唇裂鼻畸形患者38例。年龄15～48岁，其中男20例，女18例。经开放性综合鼻整形术修复后，效果良好，患者满意。术后随访3～6个月，除2例患者外侧脚矫正不到位，鼻孔不对称。1例鼻小柱偏斜，1例患侧鼻基底偏低外，其余均满意。结论：唇裂鼻支撑结构的解剖复位是获得稳定术后效果的关键。

改良脱细胞异种真皮的制备与动物埋藏实验

目的:研制一种新型异种人工真皮。方法:应用鼠尾胶原和异种(猪)脱细胞真皮复合制备成新型复合真皮,将复合真皮与交联型脱细胞真皮分别埋藏于Balb/C小白鼠皮下,观察新型材料的组织相容性及促胶原代谢能力。结果:所有试验小鼠在早期均有毛发脱失现象,交联型真皮组持续时间长并伴有肉芽组织形成。4周后,新型复合真皮显示组织结构致密有序,降解时间更长;组织相容性及促自体胶原代谢能力均较交联型真皮更为优越。结论:新型材料具有更好的组织相容性和更强的促胶原代谢能力,是良好的皮肤组织工程支架材料。

B超引导下经皮肾镜钬激光碎石术治疗上尿路结石的疗效

目的:探讨B超引导建立皮肤肾脏通路,行经皮肾镜联合钬激光治疗上尿路结石的安全性和临床疗效。方法:2005年4月至今采用B超引导穿刺建立通路,行经皮肾镜联合钬激光治疗上尿路结石患者117例,并记录碎石取石时间、结石取净率及手术并发症。结果:117例患者均一期成功建立皮肤肾脏通路,102例行一期碎石术,15例行二期碎石术。碎石手术时间80～150min。1例患者术后输血800ml,无气胸、腹腔脏器损伤等严重并发症发生。术后复查,98例患者排净结石,19例有结石残余,结石清除率为83.8%(98/117)。结论:采用B超引导穿刺经皮肾镜碎石术治疗上尿路结石安全、方便,疗效可靠。

欧式眼成形术后畸形的整复

目的：探讨欧式眼成形术后畸形的整复方法。方法：根据患者眼睛畸形成度分别采用粘连组织松解、自体组织填充的方法一次性修复上睑凹陷畸形。结果：25例患者应用单纯粘连松解治疗5例,粘连松解＋组织充填术治疗20例。术后随访3-6个月,所有患者术后恢复良好,眼睑形态满意,上睑凹陷得到纠正。1例自体游离脂肪充填患者因脂肪吸收,术后两侧轻度不对称,两次充填后形态满意。结论：采用一次性手术修复＂欧式眼＂成形术后畸形可以达到满意的临床疗效。

原位杂交技术检测增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸对BIU-87细胞体外增殖的影响

运用原位杂交技术检测脂质体介导增殖细胞核抗原 ( PCNA)反义寡脱氧核苷酸抑制人膀胱癌细胞 BIU- 87PCNA m RNA的表达水平。结果表明脂质体介导 PCNA反义寡脱氧核苷酸处理组中 BIU- 87细胞 PCNA m RNA的表达水平明显低于对照组。结果提示脂质体介导 PCNA反义寡脱氧核苷酸可抑制人膀胱癌细胞 BIU- 87体外增殖活性 ,其抑制作用可通过阻断 PCNA蛋白表达来实现。

人毛囊干细胞构建组织工程表皮实验分析

目的:总结人毛囊干细胞构建组织工程表皮实验方法,并分析体外构建人毛囊干细胞对皮肤缺损的影响。方法:分离培养毛囊角质细胞,并制备体外构建表皮膜片,同时选取12只裸鼠进行皮肤缺损修复处理,采用制备的毛囊干细胞壳聚糖明胶膜片对裸鼠创面进行覆盖,同时选取12只裸鼠进行皮肤缺损处理,仅采用壳聚糖明胶膜片覆盖固定,比较其效果。结果:术后1周修复组大鼠创面干燥并可见新生上皮,而空白材料对照组大鼠创面仍未愈合;回植后1个月,修复组大鼠无显著收缩现象明显优于对照组(P<0.05);且修复后1周,修复组大鼠创面可见新生上皮,且表皮分化良好明显优于对照组(P<0.05),且两组大鼠经HE染色检测显示均有复层表皮结构,但修复组大鼠创面表皮层层次较多,且厚度明显优于对照组大鼠。结论:体外构建人毛囊干细胞有利于促进皮肤缺损恢复,临床价值显著,值得推广应用。

输尿管镜钬激光碎石术治疗输尿管上段结石手术中是否联合应用NTrap网篮的疗效比较

目的探讨在输尿管镜钬激光碎石术治疗输尿管上段结石手术中应用NTrap网篮的有效性和安全性。方法分析比较输尿管镜钬激光碎石术治疗输尿管上段结石手术中联合应用NTrap网篮治疗(第1组)以及未联合应用(第2组)的患者的临床资料,对碎石成功率、结石清除率、并发症等进行统计分析。结果一次性治疗成功率第1组为98.5%,第2组为90%;第1组效率商为0.98,第2组为0.9。结论输尿管镜钬激光碎石术治疗输尿管上段结石时应用NTrap网篮可以有效防止结石移位,减少术后残留结石的发生,手术安全可靠。

人表皮干细胞的体外分离与培养

目的探索人表皮干细胞(ep iderm a l stem ce lls,ESC s)的分离方法和培养体系。方法用Ⅳ型胶原纯化、富集ESC s,将黏附细胞(实验组)和未黏附细胞(对照组)分别接种在Ⅳ型胶原基质(实验组为A1,对照组为A2)和3T 3细胞滋养层(实验照组为B1,对照组为B2),培养体系为:低糖无钙DM EM培养基(添加10%胎牛血清、表皮生长因子10μg/L、氯化钙0.05 mm o l/L、氢化可的松0.8 m g/L),观察细胞能否呈克隆状生长,用流式细胞仪和免疫细胞化学染色,对ECSs周期和表型进行分析。结果实验组细胞呈克隆状生长,G0/G1期细胞和α6briCD71d im细胞百分率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),实验组角蛋白19免疫细胞化学染色呈阳性,对照组呈阴性。结论人ESC s可通过Ⅳ型胶原快速黏附分选,并可在适当的培养体系里扩增。

微创经皮肾镜技术与F-URS治疗老年复杂输尿管上段结石的效果评价

输尿管上段结石是泌尿外科常见的疾病之一,其引起的并发症较多,如输尿管梗阻、肾积水、肾绞痛及感染等,严重影响患者的生活质量[1]。输尿管上段结石的微创手术方法包括经尿道输尿管镜取石术（URL）、体外震波碎石术（ESWL）、腹腔镜输尿管切开取石术（LU）等。复杂性输尿管上段结石常并发结石远端炎性息肉、狭窄、输尿管扭曲,ESWL疗效不明显,URL镜体到达结石所在部位困难。

肿胀麻醉技术在常规整形美容手术中的应用研究

目的:探讨在隆乳、除皱、扩张器置入等手术中向剥离层次内注入肿胀液的方法及其临床意义。方法:在22例隆乳、15例扩张器置入、10例额颞部除皱术、25例巨痣切除手术中,向手术区注入适量肿胀液后再剥离,并与未注射肿胀液的28例类似的手术进行比较,分析其临床优势和意义。结果:在局部注射肿胀液的病例中,术中剥离时出血少,术后1～3天疼痛减轻,术后局部瘀血、红肿发生率都大为降低。结论:术中局部注射肿胀液能明显减轻术中出血、术后早期疼痛及减少术后局部瘀血红肿的发生率。

倍频Nd:YAG激光两种波长治疗血管瘤效果比较

目的观察比较倍频Nd:YAG 532 nm和1 064 nm激光治疗皮肤血管瘤的疗效。方法分别使用532 nm和1 064 nm两种波长治疗皮肤血管瘤108例,观察病变范围的大小和色泽变化,并结合病理切片比较两者疗效。结果倍频Nd:YAG 532 nm和1 064 nm两种波长治疗血管瘤4次后有效率分别为75.9%和94.4%,总有效率为85.2%,不良反应发生率低。病理切片结果显示,两种治疗波长照射后瘤体内血管数量减少,血管腔变细,且1 064 nm较532 nm治疗后的改变更明显。结论倍频Nd:YAG 1 064 nm激光治疗皮肤血管瘤是一种安全、有效的方法。