重复超排和年龄对海门山羊超数排卵效果的影响

分别选取8只1.5~2.0岁(体重20~25 kg)、6只6.0~8.0岁(体重30~35 kg)海门山羊进行超排,比较所获得的受精卵数的差异,分析年龄和重复超排对海门山羊超排效果的影响。结果表明:1.5~2.0岁组和6.0~8.0岁组平均可用受精卵数分别为13.33枚和12.33枚,两组间差异不显著(P>0.05);第一次和第二次超排平均可用受精卵数分别为13.00枚和14.17枚,两组间差异不显著(P>0.05)。结果说明,年龄和超排次数对海门山羊超排效果无显著影响。

人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体的构建及其功能的验证

构件pbCNCS/LF36经微注射获得转基因小鼠,同时为了准确筛选出整合的单克隆细胞,增加1个Cre/LoxP-GFP-Neo系统构建成pAPLM,将其转染山羊胎儿成纤维细胞筛选阳性细胞。结果表明:小鼠受体妊娠率28.5%,产仔32个,PCR整合检测4只阳性(3♀、1♂,整合率12.5%)。构件产生的3只母鼠和4号后代母鼠乳汁中重组人乳铁蛋白(hLF)用ELISA方法检测,表达量分别为3.8、2.8、0.9mg.mL-1,4号后代3只母鼠表达量分别为4.2、3.9、3.6mg.mL-1。构件pAPLM片段转染细胞后,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养,其中8株PCR阳性克隆细胞荧光显微镜观察100%都有GFP的表达。以上结果证实,双启动子能调控外源基因在乳腺中特异高水平表达hLF,双标记基因可提高筛选阳性供核细胞的准确性,这为进一步作体细胞转基因克隆奠定基础。

不同FSH剂量·季节和重复超排对山羊超数排卵的影响

[目的]研究不同FSH剂量、季节和重复超排等因素对供体羊超排效果的影响,为扬州地区进一步做好山羊胚胎移植和胚胎生物工程研究提供必要的数据。[方法]设计不同FSH剂量(240 IU和300 IU)、季节(10～12月份和4～6月份)、重复超排(第1次和第2次),鉴定超排效果。[结果]FSH 240 IU和300 IU组的平均排卵点和可用胚数分别为10.12个、8.82枚和15.55个、13.15枚,2组间平均排卵点和可用胚数差异显著(P<0.05);在4～6月份和10～12月份的平均排卵点和可用胚数分别为9.05个、7.05枚和15.55个、13.15枚,2组间平均排卵点和可用胚数差异显著(P<0.05);供体使用1次和2次的超排效果差异不显著(P>0.05)。[结论]FSH剂量、季节因素对超排效果影响显著,供体重复使用对超排效果影响不显著。

复合催化剂降解纤维素制备5-羟甲基糠醛

以离子液体1-烯丙基-3-甲基咪唑氯盐([Amim]Cl)为溶剂,以磺酸型阳离子交换树脂和CrCl_3·6H_2O为复合催化剂,在微波辅助加热条件下采用一锅法降解微晶纤维素制备5-羟甲基糠醛,考察了催化剂加入量、反应温度、反应时间、加水量等反应条件对微晶纤维素降解反应的影响。实验结果表明,当[Amim]Cl用量为2 g、微晶纤维素质量为0.1 g、m(磺酸型阳离子交换树脂)∶m(微晶纤维素)=1∶1、n(Cr Cl_3·6H_2O)∶n(微晶纤维素)=1∶10、反应温度为160℃、反应时间为30 min、加水量为50μL时,微晶纤维素可完全转化,同时总还原糖收率为75.2%,5-羟甲基糠醛收率最高可达53.0%。

程序化冷冻对小鼠胚胎发育的影响

取小鼠原核(220枚)、2~4细胞胚胎(227枚)、桑椹胚(127枚),将其分为3组,每一时期胚胎分成两半,一半取出后立即冷冻复苏并体外培养至囊胚,另一半体外培养至囊胚后冷冻复苏,子宫冲取囊胚(78枚)冷冻复苏为对照组;各组囊胚均移植至子宫,比较程序化冷冻对小鼠早期胚胎存活率的影响。结果表明:原核、2~4细胞胚胎、桑椹胚体外培养至囊胚后冷冻复苏率分别为56.4%、72.2%、81.6%,移植产仔率分别为38.1%、41.6%、56.8%,原核、2~4细胞组复苏率和产仔率极显著或显著低于对照组,桑椹胚组与对照组差异不显著,显示体外培养对早期胚胎冷冻存活有影响;原核、2~4细胞胚胎、桑椹胚冷冻后体外培养至囊胚,胚胎移植后产仔率分别为25.3%、28.2%、42.1%,与对应胚胎时期体外培养至囊胚冷冻复苏后移植产仔率相比,原核、2~4细胞组均存在显著差异,而桑椹胚组差异不显著,显示原核、2~4细胞的早期胚胎体外培养至囊胚后冷冻可提高冷冻存活率。

锌指核酸酶技术在动物转基因中的研究进展

锌指核酸酶(zinc-finger nucleases,ZFNs)技术是近年来发展起来的一种基因修饰技术,利用ZFNs可特异识别靶位点DNA序列并使其断裂。与传统基于同源重组的基因打靶相比,ZFNs能使打靶效率提高100000倍,并使基因断裂与突变修复达到同样效果。ZFNs已经应用于多种生物,包括昆虫、两栖类生物、线虫、植物、多种动物和人类细胞。这些应用提高了人们对复杂生理系统的理解,使ZFNs成为一种生产转基因动物、细胞系和植物的有力工具,并在治疗人类疾病中发挥重要作用。文章对ZFNs技术原理及其应用于哺乳类动物转基因的研究进行了回顾和展望。

猪喘气病自家苗的制备及其效果观察

为控制和预防猪支原体肺炎,试验采用常规方法制备自家喘气病灭活苗,通过自制自家苗与市场上常用的喘气病灭活苗进行免疫比较试验,并用ELISA法检测猪血清抗体水平。结果表明:自家苗的免疫效果可靠,可用于本场猪群的免疫。

从我国科技发明落后现状谈创造力与创新能力培养

从我国诺贝尔获奖情况及科技创造发明现状与世界各发达强国的较大差距中,审视我国教育存在的严重问题——"创造性培养的缺失"!借鉴世界各创新型国家的成功经验、举措及先进教育理论和思想,探析我国基础教育创造力和创新能力的培养.

酪蛋白和巨细胞病毒复合启动子激活人乳铁蛋白cDNA基因在转基因小鼠乳腺中的表达

为了提高转基因动物乳腺特异性表达水平，构建了两种不同启动子的乳腺特异性表达载体，以比较其乳腺特异性表达效果。应用山羊β-酪蛋白或牛αs1-酪蛋白调控序列、鸡β-球蛋白隔离元件、巨细胞病毒（CMV）基因表达调控元件构建了乳腺特异性表达复合启动／增强子（Pcmv），以单一的酪蛋白启动子作为对照，与人乳铁蛋白cDNA组成乳腺特异性表达载体，并制备了转基因小鼠。经ELISA检测，复合启动／增强子构件指导人乳铁蛋白cDNA在原代转基因小鼠乳腺中重组人乳铁蛋白（rhLF）表达水平（2．0～8．1g·L^-1）明显高于单一酪蛋白启动子构件（0—12mg·L^-1），而在所有转基因小鼠的血清和唾液中未检测到rhLF。结果提示：酪蛋白-Pcmv复合启动／增强子不仅可提高转基因小鼠乳腺特异性表达水平，而且具有良好的乳腺表达特异性。

不同激素和重复超排对家猫超排效果的影响

用促卵泡素(FSH)和孕马血清促性腺激素(PMSG)对橘猫进行超数排卵,手术法冲取卵母细胞,并对卵巢上的排卵点和获卵数进行统计,探讨不同激素和重复超排对橘猫超排效果的影响。结果表明:FSH组排卵点数和卵母细胞数分别为6.8和8.8个,国产PMSG组和韩国PMSG组排卵点数和卵母细胞数分别为5.1、7.7及6.2、8.5个,3组间排卵点数和卵母细胞数差异不显著;重复超排时,国产FSH组超排获得的排卵点数和卵母细胞数分别为3.5和5.2个,国产PMSG组排卵点数和卵母细胞数分别为3.1和4.5个,两组间排卵点数和卵母细胞数差异不显著。这一研究说明FSH和PMSG均可用于家猫超数排卵,为开展家猫胚胎工程相关研究奠定了基础。

CD105在肿瘤抗血管治疗中的研究与进展

新生血管为肿瘤生长、扩散和转移提供营养来源,是肿瘤生长和转移的推动力,并为肿瘤组织的增殖提供了基础。CD105是新生血管内皮细胞增殖的标志物之一,标记具有增殖活性的内皮细胞,主要表达在肿瘤的新生血管。与以往泛血管内皮标记因子相比,CD105是一种敏感性较强的新生血管生成标志物,能更准确反映肿瘤的扩散速度和转移情况,可作为衡量血管内皮细胞增殖状态的指标之一。因此,以CD105为靶向抑制肿瘤新生血管生长的治疗肿瘤的新方法成为了目前研究的热点。

季节因素对山羊超数排卵效果的影响

文章旨在研究季节对供体奶山羊超数排卵效果的影响,为胚胎移植等生物工程技术的研究提供必要的数据。分别在春季(3~5月份)秋季(9~11月份)和冬季(12~2月份)3个季节用FSH多次递减注射法对奶山羊进行超数排卵处理,鉴定超排效果。结果:春秋冬3个季节超排的平均排卵点和平均获卵数分别为9.20个、7.15枚,10.58个、9.48枚和10.42个、10.49枚,春季平均排卵点和平均获卵数均显著低于秋冬季节(P<0.05),表明季节对奶山羊的超排效果影响显著。

我国高校体育俱乐部运行机制探析

我国高校体育俱乐部的发展几经沉浮,至今已进入发展相对迟缓期.借鉴当今世界早已处在市场经济条件下的各体育发达国家的相关成功经验,着重对我国高校体育俱乐部的运行机制进行探讨,提出我国高校体育俱乐部应采用“非营利性(no-profit)俱乐部制度运行”.目前我国高校体育俱乐部普遍存在的问题都有望得到解决.

融合条件对小鼠体细胞核移植融合率的影响

目的提高小鼠体细胞核移植过程中融合效率。方法使用CRY-3型和CE-450型细胞融合仪对B6D2F1小鼠去核卵母细胞与该品系小鼠胎儿成纤维细胞构成的重构胚进行融合，通过PEG／DMSO对供核细胞的预处理，比较了不同融合液，不同电极形状融合槽和供核细胞代次对融合率的影响。结果（1）以PEG／DMSO对供核细胞预处理5min的融合率显著高于同条件下未处理组（51．11％vs25．64％）（P〈0．05）；（2）融合液中含0．1g／L聚乙烯醇（PVA）组的融合率高于无PVA组；重构胚在甘露醇浓度为0．32mol／L融合液中的融合率（48．21％）高于其他甘露醇浓度组（27．78％，41．67％和30．11％）；（3）使用针状电极融合槽时的融合率（42．31％，43．13％）高于同条件下平行丝状电极融合槽组（30．43％，33．33％），其中又以在2000V／cm，20μs，2个脉冲时，交流电预处理30S组最高（43．13％）；（4）供核细胞传代一次后融合率随着传代次数的增加而下降。结论通过PEG／DMSO对供核细胞进行预处理，并在融合液中添加PVA时，结合优化的融合条件可以提高小鼠体细胞核移植过程中融合率。

合成载小分子肽羊胎素碳酸钙/磷酸钙纳米材料的方法研究

碳酸钙/磷酸钙是脊椎动物骨骼和牙齿的主要无机成分,具有良好的生物相容性,在生物医学领域具有良好的应用前景。从羊胎儿中提取的小分子肽羊胎素具有很好的生物学作用,为进一步提高小分子肽羊胎素在皮肤中的渗透性和功效,利用生物矿化法合成载小分子肽羊胎素碳酸钙/磷酸钙纳米材料,利用扫描电镜、傅立叶红外光谱对纳米颗粒进行表征,检测其载小分子肽能力和pH的敏感性。结果表明:利用小分子肽羊胎素溶液实现Ca^(2+)、CO_(3)^(2-)、HPO_(4)^(2-)共沉淀获得小分子肽/碳酸钙/磷酸钙复合纳米颗粒同时高效载小分子肽(1.8%),纳米颗粒具有球形结构,直径小于50 nm,且具有较好的pH响应性和蛋白质持续释放能力。在兔和猫眼上试验表明载小分子肽纳米颗粒对动物眼睛无刺激性,有较好的生物安全性。这一研究为利用天然小分子肽合成钙纳米材料提供了依据,同时为进一步开发新一代小分子肽羊胎素纳米材料应用于化妆品奠定了基础。

配电柜铜排连接松动问题研究

针对配电柜中的铜排连接松动导致的温升危害,研究和提出了扭矩和对应的接触电阻值图表,可供计算参考。并且进一步指出,配电柜铜排连接松动后不仅是单一的温升问题,而且有可能伴随着电火花腐蚀,以工程案例分析了事故的危害性。经过有限元软件仿真,验证了尖端电场对连接螺钉的潜在风险。最后总结几种防松措施方案,重申工程应用中认真实施防松技术的重要性。

犬细小病毒病的流行病学调查

犬细小病毒病是一种急性、烈性、致死性传染病,特征是非化脓性心肌炎或出血性肠炎,心肌炎型多见于4～6周龄的幼犬,临床症状未出现就突然死亡,出血性肠炎在临床上极为常见,多数能治愈,多发于幼犬,病死率为10%～50%。为了解犬细小病毒病的发病率与犬的月龄、品种、性别、发病时间之间的关系,在2010年3月至2011年2月收治105例犬细小病毒病例,根据流行病学可以看出,2、3月龄的犬发病率最高,纯种犬发病率高,在其秋冬季应当加重预防与治疗,综合本次调查,对本病提出一些科学防治的建议。

酸性离子液体催化降解纤维素的研究

以离子液体1-烯丙基-3-甲基咪唑氯盐([Amim]Cl)为溶剂,以咪唑类酸功能离子液体[Cnmim]HSO_4(n=2,3,4,5,6,7)为催化剂,在微波辅助加热条件下降解微晶纤维素(MCC),考察了反应温度、反应时间、催化剂用量、加水量、催化剂的哈米特酸度及种类等反应条件对MCC降解反应的影响。结果表明,酸性离子液体的催化效果与其酸性大小有关,其中[C_6mim]HSO_4的哈米特酸度值最小,酸性最强,作为催化剂时效果最佳,当[C_6mim]HSO_4的加入量为0.1 g,纤维素和催化剂的摩尔比为1∶1,反应温度为110℃,反应时间为40 min,加水量为70μL时,微晶纤维素转化率为100%,可还原糖收率为89.94%,葡萄糖收率高达46.24%。该反应使用常见的微波法,操作简单、方便、快速且无污染,与以往反应相比得到的葡萄糖收率较高,为在工业上应用提供了一种可行的方法。

重组人SOD1/3转基因山羊的制备及表达产物的检测

设计了以hSOD1、hSOD3为编码序列,以山羊β-酪蛋白/CMV杂合启动增强子构建乳腺特异性表达载体rhSOD1、rhSOD3,共转染母山羊胎儿成纤维细胞,采用PCR和扩增产物序列分析筛选获得SOD1/3克隆细胞株,应用体细胞核移植(SCNT)制备双转基因山羊。出生小羊经PCR和扩增产物序列分析验证是否成功整合外源基因,经Western blotting、ELISA及体外活性检来验证分析表达产物。结果表明:获得SOD1/3转基因山羊胎儿成纤维细胞系6株;原代双转基因体克隆山羊1只(♀);从该转基因羊乳汁中检测到rhSOD1、rhSOD3,浓度分别为:88.81±8.36 mg/L和267.82±12.67 mg/L;转基因羊乳汁中重组人SOD酶活性为1 432±157 U/mL。研究表明,以双载体和单标记基因转染山羊胎儿成纤维细胞可获得双基因整合转基因细胞系,并且以SOD1与SOD3功能基因均可在山羊乳腺中共同表达,表达产物具有较好的生物学活性。