滴金免疫测定法在检测日本血吸虫抗体中的应用

滴金免疫测定法(DIGFA)是以胶体金作为标记物的快速斑点免疫结合试验,抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应,阳性结果出现红色斑点。本文用血吸虫虫卵浸出液为抗原,金标记A蛋白为显示剂,建立了检测血吸虫抗体的DIG-FA。以本法检测血吸虫病患者血清81份,阳性卒92.6％;献血者血清50份,特异性为98％;42份产前检查的孕妇血清均为阴性;6例华枝睾吸虫患者未出现交叉反应;6例并殖吸虫患者中4例出现不同程度的阳性反应,其中3例环卵反应亦为阳性,环沉率8～15％。提示本法的敏感性和特异性与环卵反应相近。

抗血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体检测循环抗原及/或免疫复合物的实验研究

本文报告用单克隆抗体检测血吸虫感染兔血清中循环抗原及/或免疫复合物的实验结果.以血吸虫成虫盐水浸液抗原ACSE免疫BALB/c小鼠,取其脾脏与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得抗成虫表膜的单克隆抗体8SE_4。此抗体经DE_(52)柱层析提纯后制成HRP-8SE_4结合物.血清样本与HRP-8SE_4作用后加入PEG(mw·6000)沉淀免疫复合物,然后加入底物OPD显色,于492nm读数,OD值即反映血循环中抗原及/或免疫复合物的量。实验结果表明5只重感染兔(接种尾蚴15O0～2000条)于感染后6wk可见OD值明显升高,达到感染前的1.9～4.5倍。5只轻感染兔接种尾蚴10～500条亦于感染6wk后OD值明显上升,至感染后8wk达高峰,此后至11wk剖杀时仍维持在较高水平.5轻感染兔检虫数为4～326条,未见虫荷与检测结果有明显相关。本实验结果提示感染兔血清中有循环表膜抗原及/或其复合物存在。至于检测该抗原能否用于考核治疗效果,有待进一步研究。

多克隆与单克隆抗体夹心ELISA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原

[目的 ]检测血吸虫病患者的循环抗原。 [方法 ]用多抗与单抗夹心 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原。 [结果 ]用于检测 15 0例血吸虫病患者的循环抗原 ,其敏感性平均为 84.7% (72 .0 %～ 91.0 % ) ,40例正常人未出现假阳性反应 ,74例其他寄生虫感染者中 ,有 2例并殖吸虫病患者阳性 ,其余均未出现交叉反应。 [结论 ]多抗与单抗夹心 EL ISA法是一种较为理想的循环抗原检测方法。

日本血吸虫性别与循环抗原检出的关系

本研究用单性尾蚴感染家兔，追踪观察循环表膜抗原检出情况。结果９只雄性尾蚴感染兔（检虫１５—１３３条，平均５３．１条）及９只雌性尾蚴感染兔（检虫１—１０２条，平均３６．１条）用斑点－ＥＬＩＳＡ法定期检查１年，循环表膜抗原始终为阴性。而７只复性感染兔（检虫４－１６１条，平均６７．１条）于感染后６—１０ｗｋ先后出现斑点－ＥＬＩＳＡ阳性反应。单性雌虫在家兔体内发育不良，呈螺旋状，其寿命至少１年。单性雄虫则可发育成熟，虫体肥厚、粗壮。

斑点-ELISA法在肺吸虫病诊断中的应用

自1986年我们报告用斑点-ELISA法诊断血吸虫病以来,该法往国内已应用于黑热病、华支睾吸虫病、疟疾、包虫病等的诊断,都获得较为满意的结果。认为该法具有敏感、特异、简单易行、试剂用量少。

斑点-ELISA和独特型/抗独特型抑制试验检测日本血吸虫病患者循环表膜抗原

将血吸虫成虫表膜机原的单克隆抗体8SE4联接辣根过氧化物酶制成结合物,用于直接法斑点-ELISA检测循环抗原。结果48例血吸虫病患者的阳性率为81.3％(39例),24例正常人未出现假阳性反应。检测华支睾吸虫及并殖吸虫病患者各18例,均无交叉反应。本结果证实日本血吸虫病患者血清中有循环表膜抗原存在。直接法斑点-ELISA方法简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为诊断日本血吸虫病的补充方法。本文还报告了独特型/抗独特型(8SE_4/抗8SE_4)抑制试验检测循环表膜抗原的初步结果。

中国大陆日本血吸虫品系的研究 XI.酶联免疫电转移印迹的分析

本文报告安徽、湖北、广西、云南和四川5地日本血吸虫成虫抗原与安徽、湖北、云南、四川4地钉螺的抗血清进行酶联免疫电转移印迹(EITB)分析的结果。安徽与湖北两地日本血吸虫EITB图谱基本相似。云南和四川的日本血吸虫EITB图谱虽相近,但在84kDa处云南雌虫呈现明显条带而四川雌虫则无此反应带。广西的日本血吸虫与云南的虫体一样,雌虫在84kDa处亦呈现明显的条带。广西的雄虫在与安徽的钉螺抗血清反应后在>130kDa处有两条主要条带,这与安徽地区雄虫的一致且较之更为浓染致密,而云南、四川两地雄虫的则未见此条带。根据上述结果并结合以前有关大陆各地钉螺对日本血吸虫的易感性结果,进行了初步的分析和讨论。

两种ELISA方法检测日本血吸虫病循环抗原的比较

[目的 ]比较两种ELISA方法检测血吸虫病患者血清中的循环抗原的效果。 [方法 ]以单克隆抗体为基础的斑点 ELISA和夹心 ELISA。 [结果和结论 ]斑点 ELISA与夹心 ELISA的阳性检出率分别为 48 0 %～ 98 8%和 12 0 %～ 93 8%。两法的特异性依次为 95 4%～ 10 0 %及 90 %。

日本血吸虫病患者的抗氨肽酶抗体

蛋白溶酶在曼氏血吸虫生活史各阶段都起着重要作用(Mckerrow等1988),亮氨酸氨肽酶(Leucine aminopeptidase LAP)是其中的一种。已经证明曼氏血吸虫生活史各个时期都有此酶存在,尤以虫卵中含量最高,可达其他时期的6～17倍(Xu等1986),此酶不仅存在于虫卵匀浆的上清中,亦存在于膜结构中(Xu等1990)。成熟虫卵释放LAP至宿主组织内,并引起宿主的免疫应答反应(Xu等1988),作者之一已在曼氏血吸虫病患者血清中证明有抗LAP抗体。本文报告日本血吸虫病患者及实验感染日本血吸虫的兔血清中抗LAP抗体的检测结果。

血吸虫病兔疫诊断研究进展

血吸虫病免疫诊断自本世纪50年代以来有了很大发展.可以说,所用抗原涉及血吸虫生活史中各个时期;所用方法包括了补体结合、间接血凝、胶乳凝集、凝胶电泳(或扩散)、间接免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验、放射免疫测定以及环卵沉淀试验等.免疫诊断的依据长期来主要为检测特异抗体.由于抗体在宿主体内长期持续存在,甚至经过有效治疗后粪便中已找不到虫卵,抗体仍长期不能消失,因此不能用于区分活动性感染和既往感染,也无法反映治疗的效果.而检测循环抗原则可弥补上述之不足.因此许多学者对之竞相研究,特别是引入单克隆抗体技术,使得检测的敏感度和特异性都有显著提高.

几种猪囊尾蚴抗原用于EITB法诊断囊尾蚴病的观察

本研究对囊液10000g和100000g离心后的上清、头节抗原、全囊抗原及头节尿素溶解性抗原等5种抗原进行SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳。考马斯亮蓝染色依次出现10、10、13、14和5条显色带，银染结果依次出现20、20、21、21和13条显色带。分子量范围为＜6.6kDa－＞116kDa。选择囊液100000g（以下简称囊液）、全囊和头节尿素等3种抗原对105份各类血清进行酶联免疫电转移印斑（EITB）检测。结果囊尾蚴病患者血清与3种抗原反应可出现1－13条反应带，分子量范围6.6kDa－＞116kDa。如以≤21.5kDa条带作为判断标准，则囊液抗原、全囊抗原和头节尿素抗原的阳性率依次为54％、48％及58％，假阳性率依次为6％、10％及0％。头节尿素抗原对血吸虫、华支睾吸虫和肺吸虫病患者血清未出现交叉反应，10例包虫病患者血清中有2例出现交叉反应。

检测循环表膜抗原考核血吸虫病治疗效果的实验观察

本实验结果证明血吸虫感染免经吡喹酮治疗后循环表膜抗原逐渐下降。用斑点—ＥＬＩＳＡ检测结果表明：接种４条及１０条尾蚴的家兔于治后３个月，接种５０条及１００条尾蚴的家兔于治后６个月循环表膜抗原转为阴性．据此认为检测循环表膜抗原考核治疗效果较检测抗休具有阴转快的优点，值得在病人中进一步验证。

中国与日本不同地域品系日本血吸虫蛋白组分的SDS-PAGE和EITB分析

目的： 补充观察我国浙江、江西、台湾省和日本山梨的日本血吸虫成虫的蛋白组分， 以及上述４ 地和安徽、湖北、四川、云南省血吸虫与广西省钉螺和日本钉螺抗血清的反应性。方法： 采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳 （ＳＤＳ－ＰＡＧＥ） 和酶联免疫电转移印迹 （ＥＩＴＢ） 分析。结果与结论： 浙江、江西、台湾省和日本的血吸虫隔离群雄虫及雌虫抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后， 以考马斯亮蓝染色结果分别可见７～１７ 条（江西省和日本的血吸虫雄虫条带显色很淡） 及１～６ 条显色带；银染结果分别可见１４～２３条及４～１９ 条（台湾省的血吸虫雌虫仅见１条极淡的）显色带。台湾省血吸虫雄虫与浙江省血吸虫雄虫谱型相似， 但在８１ ｋＤａ以上组分有所不同， 江西省血吸虫雄虫５４ｋＤａ 条带明显， 日本的血吸虫雄虫不仅条带少， 谱型也与浙江、江西及台湾省的血吸虫各异。ＥＩＴＢ结果： 所试血吸虫成虫与广西省钉螺和日本的钉螺抗血清均产生反应， 证明存在交叉反应抗原组分。所试血吸虫成虫与广西省钉螺和日本的钉螺间存在共同抗原组分。

几种实验/探针系统对日本血吸虫循环抗原检出效果的比较观察

目的：比较５种试验／探针系统检测感染兔血清中循环抗原（ＳＣＡ）的效果。方法：用单雄性和单雌性尾蚴分别感染９只家兔，以复性尾蚴感染７只家兔作对照；感染后定期采血。另１５兔分３组感染２５０条尾蚴。１，２组于感染后１９ｄ和４５ｄ分别开始给予丙烯基硫脲（２９５－５９０ｍｇ／ｋｇ）以抑制虫卵形成，第３组作对照；均定期采血。检测方法计５种：１斑点－ＥＬＩＳＡ／抗成虫表膜单抗（８ＳＥ４），２斑点－ＥＬＩＳＡ／抗ＣＣＡ单抗（３Ｄ１０），３夹心斑点－ＥＬＩＳＡ／抗虫卵单抗（ＭＧ２），４夹心法－ＥＬＩＳＡ／抗虫卵单抗（２Ｈ１０），５夹心法－ＥＬＩＳＡ／抗ＣＡＡ单抗（ＩＢ１０）。结果：９只单雄性尾蚴和９只单雌性尾蚴感染兔血清１法均为阴性，２法仅１只检出雄虫１３３条的家兔出现阳性反应，５法单雌性感染均阴性、单雄性感染３／９兔阳性。服药抑制虫卵形成的兔血清，１９ｄ开始服药５兔１法及３法均未检出ＳＣＡ，４６ｄ开始服药组在感染后６－７ｗｋ二法均检出ＳＣＡ。４法服药与未服药兔均为阴性，５法感染后６ｗｋ的血清服药与未服药兔均呈阳性反应。结论：不同的试验／探针系统的检测效果不同，但所试３种方法（１，２，５种）都不能检出单雌性感染。抑制虫卵形成?

抑制血吸虫排卵对实验感染兔循环表膜抗原检测的影响

目的 :了解循环表膜抗原阳性反应与血吸虫雌虫排卵的关系。方法 :用新西兰兔 15只 ,各经肤接种日本血吸虫尾蚴 2 50条 ,于感染后不同时间口服丙烯基硫脲 ,对比感染前、后逐周血中用斑点 - EL ISA法测出的循环表膜抗原。结果 :第一组兔感染 19d后开始口服丙烯基硫脲 2 95-590 mg/ d,每周连续喂药 3d直至感染后第 8wk,循环表膜抗原始终为阴性。第二组兔于第 4 6d起服同剂量 ,感染后 6wk时斑点 - EL ISA呈阳性反应持续 2 wk。第三组对照兔于感染后 6wk开始亦出现持续 2 wk的斑点 - EL ISA阳性反应。结论 :循环表膜抗原阳性反应与雌虫排卵密切相关。

日本血吸虫循环阳极抗原(CAA)和循环阴极抗原(CCA)的纯化

近年来对血吸虫病的免疫学诊断的研究大多集中在检测循环抗原方面。理由是：①检出循环抗原可以反映活动性感染情况；②患者治疗后循环抗原消失较快，可用于判断治疗效果；③循环抗原的定量在一定程度上可反映虫负荷。所用方法主要为以单克隆抗体为基础的夹心法－ＥＬＩＳ...

多房棘球蚴病特异性诊断抗原Em18的基因克隆、表达和血清学评价

目的 克隆从我国四川省分离的多房棘球绦虫Em18抗原基因片段 ,表达重组抗原 ,用于多房棘球蚴病(AE)的诊断 ,并用患者血清对其诊断价值进行评价。 方法 PCR扩增目的基因片段与质粒载体 pET2 8a (+ )连接构建表达质粒 ,转化大肠埃希菌BL2 1(DE3 )菌株表达重组蛋白 ,用镍 次氮基三乙酸琼脂糖树脂 (NI NTAagarose)亲和层析纯化重组抗原 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)评价重组抗原的血清学诊断效果。 结果 获得两个高效表达克隆ReEm18 1和ReEm 18 2。其中ReEm18 1与预期序列一致 ,ReEm18 2为同一序列 ,但有 2 7bp的核苷酸缺失。两个克隆表达的融合蛋白相对分子质量 (Mr)分别为 2 80 0 0和 2 60 0 0。对 10 1例AE、 47例细粒棘球蚴病、3 0例囊尾蚴病、 10例肝癌、 9例血吸虫病和 40名健康人共 2 3 7份血清进行ELISA检测 ,结果显示 ,ReEm18 1和ReEm 18 2重组抗原对AE血清诊断的敏感性为 86 1%和 90 1%、特异性为 93 4%和 94 1%、阳性预期值为 90 6%和 91 9%、阴性预期值为 90 1%和 92 8%、诊断效率分别为 90 3 %和 92 4% ;对 5 8例AE患者肝脏病灶大小与重组抗原检测血清平均吸光度 (A )的相关性比较分析结果表明 ,抗体反应水平在病程早期有较好的相关性。

从平行检测和监测结果分析我国血吸虫病诊断试剂的现状

由卫生部批准，世界银行贷款血吸虫病控制项目联合科研管理委员会（ＪＲＭＣ）提供经费资助的全国血吸虫病免疫诊断检测中心，于１９９５年成立。该中心依托于中国预防医学科学院寄生虫病研究所。任务之一是对国内现有血吸虫病诊断试剂进行监测和评估，以期对现有诊断试剂...

血吸虫病患者治疗前后特异性IgG4抗体的观察

[目的 ]观察血吸虫病患者治疗前后特异性IgG4抗体的变化。[方法 ]ELISA法。 [结果 ]2 7例血吸虫病患者治疗前SEA IgG4和AWA IgG4阳性率分别为 96 3%和 10 0 % ,平均OD值分别为 1 6 2和 0 72。治疗后 6月复查 18例 ,阳性率分别为 94 4%和 10 0 % ,平均OD值分别为 1 0 6和 0 5 6。治疗后 12月复查 2 7例 ,阳性率分别为 96 3%和 92 6 % ,平均OD值分别为 0 99和 0 5 8。 [结论 ]2 7例血吸虫病患者SEA IgG4和AWA IgG4治疗前后阳性率无明显变化 ,但抗体水平有所下降。

一种改良的Dot-ELISA法

改良的Dot-ELISA法,即将点好抗原的NC膜固着于PVC浅孔软板内进行试验。本文以血吸虫卵抗原、肺吸虫成虫抗原、华枝睾吸虫成虫抗原、细粒棘球蚴囊液抗原等4种抗原膜,用改良的Dot-ELISA法,对血吸虫病、肺吸虫病、华枝睾吸虫病、细粒棘球蚴病患者血清各15例以及正常人血清33份进行试验。结果表明:各种抗原与其对应的血清反应在适宜的比例中阳性率可达93％～100％。假阳性率3％。这种改良的Dot-ELISA法,简便易行,可望发展成为一种适用于现场开展多种寄生虫调查的药盒。