四川省16家大型禽类养殖场抗生素残留调查和细菌耐药性分析

为评估禽类养殖场粪便中抗生素的残留及细菌耐药性情况,本研究以四川省16家大型规模化禽类养殖场为监测点,重点分析粪便中抗生素残留特征和肠杆菌耐药特征,并对粪便中抗生素的选择性耐药风险熵进行评估。16份粪便样品中共检出18种抗生素,抗生素检出浓度0.54~2780.00μg·kg^(−1),其中,ZJZX中多西环素检出浓度最高,达到2780.00μg·kg^(−1);抗生素的选择性耐药风险熵为0.0040~10561.13,呈现出高选择性耐药风险;其次,从粪便中共筛选鉴定出14株肠杆菌科Enterobacteriaceae细菌,均表现出多重耐药性,且有33种耐药基因被不同程度检出。畜禽粪便中磺胺类、四环素类、氯霉素类和喹诺酮类抗生素残留较为严重,且养殖环境中肠杆菌科细菌表现出多重耐药性,建议有关部门加强畜禽养殖中多西环素、氟苯尼考和恩诺沙星等抗生素的管控,同时应加强对畜禽养殖企业中肠杆菌耐药性的监控。

红树林内生链霉菌A1626产生的抗真菌抗生素CA1189

目的研究秋茄内生链霉菌菌株A1626产生的活性代谢产物。方法发酵液经有机溶剂萃取、正相硅胶柱层析、C18柱制备色谱分离获得单体,通过紫外光谱、红外光谱、质谱、一维和二维核磁共振谱的测定解析,确证单体化合物的结构,采用微量液体稀释法对单体化合物的抗真菌活性进行测定。结果与结论活性化合物CA1189属于苯并噁唑类,与文献报道的AJI9561结构一致,其抗真菌活性为首次报道。

Production of cyclosporin C by Gliomastix luzulae isolated from different areas of the P.R.China

本文调查了１５株粘鞭菌属Ｇｌｉｏｍａｓｔｉｘｌｕｚｕｌａｅ菌种产生环孢菌素Ｃ的能力。分离自中国１１省１５个不同地区的菌种在葡萄糖－麦芽汁－蛋白胨液体培养基中于２４～２６℃发酵１０ｄ。代谢产物经ＨＰＬＣ分析，其中１１株菌株除能产生环孢菌素Ｃ外不产生任何已知的环孢菌素，另４株菌虽然不产生已知的环孢菌素，但全部都产生一未知的环孢菌素。对产生环孢菌素Ｃ的两株具有不同液体培养性状的菌株用Ｌ－丙氨酸、Ｄ－丙氨酸、Ｌ－缬氨酸、ＤＬ－α－氨基丁酸、ＤＬ－原缬氨酸和Ｌ－苏氨酸进行氨基酸前体掺入实验，发现所有氨基酸前体均只能调节菌株合成环孢菌素Ｃ的能力，而不能使其合成相应的其它环孢菌素，其中Ｌ－丙氨酸和Ｄ－丙氨酸具有相近但比其他氨基酸更强的提高菌株合成环孢菌素Ｃ的能力，提示该类菌的合成机制与已知环孢菌素Ａ产生菌的合成机制明显不同。

微生物培养基优化方法及其OPTI优化软件

通过对多种多因素发酵培养基优化方法的分析比较和运用,选择了Packett-Burman法、限制性随机平衡法、响应面优化设计法、均匀设计法和改良单纯形优化法作为微生物培养基优化程序OPTI软件的设计对象.本文结合所采用的5种优化方法的使用原理介绍了OPTI软件的使用功能,其中前两种方法主要用于从众多的因素中确定出重要因素,而后三种方法用于确定重要因素的最佳水平.同时对这些优化方法的联用以及实验中的注意事项进行了说明.

利用棒曲霉特异形态变异模型筛选出具有免疫抑制活性的抗真菌剂

利用环孢菌素Ａ引起棒曲霉ＳＩＡ－Ｆ４７７０形态的特异变化，建立筛选具有免疫抑制活性抗真菌剂的琼脂平板法。并用已知抗生素证实了方法的有效性。该方法不仅可根据检测菌不同的形态变异定向筛选具有免疫抑制活性和抗真菌活性的微生物代谢产物，而且具有简单、快速、选择性高和不受代谢产物中其他抗真菌组分干扰等优点。用该方法过筛４５００个真菌代谢产物粗品，从中筛选到环孢菌素Ａ的已知产生菌、环孢菌素Ｃ的新产生菌和多种青霉产生的共同代谢产物ｂｒｅｆｅｌｄｉｎＡ。

环孢菌素C的新产义菌

从真菌ＳＩＩＡ－Ｆ４８２９的发酵液中，分离出一种具有抗真菌活性的化合物ＳＩＩＡ－Ｃ４８２９Ａ，经理化性质鉴别，证明ＳＩＩＡ－Ｃ４８２９Ａ与环孢菌素Ｃ同质。这是首次从半知菌亚门，丝孢纲，丛梗孢目，暗色孢科的菌株中发现环孢菌素类化合物的产生菌。

细胞粘附分子ELAM-1的抑制剂——布雷菲德氏真青霉产生的布雷菲尔德菌素A

在筛选真菌活性代谢产物过程中，从分离自四川省蜀南竹海的土壤真菌ＳＩＡ－Ｆ４０３的发酵液中，分离出能抑制粘附分子ＥＬＡＭ－１的活性代谢产物ＳＩＡ－Ｃ４０３，其理化性质和波谱分析表明为已知的抗肿瘤抗生素布雷菲尔德菌素Ａ。菌种经鉴定被命名为布雷菲德氏真青霉Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｉｕｍｂｒｅｆｅｌｄｉａｎｕｍ（Ｂ．Ｄｏｄｇｅ）Ｓｔｏｌｋ＆Ｓｃｏｔ。这是首次报道布雷菲尔德菌素Ａ具有抑制粘附分子ＥＬＡＭ－１的新活性。

A new producer of mevastatin

摘要从分离自浙江省普陀山土壤真菌ＳＩＡ－Ｆ３９３３的代谢产物中分离出美伐他汀。菌种经鉴定被命名为詹司克氏青霉ＰｅｎｉｃｉｌｉｕｍｊａｎｃｚｅｗｓｋｉＺａｌｅｓｋｉ，是未见报道的美伐他汀新产生菌。

六味地黄煎剂对心、肾、脑缺血的实验治疗

六味地黄煎剂(LD)po 5g/kg,qd×3d,能明显对抗大鼠由于左冠脉结扎而引起的心肌中超氧化物歧化酶(SOD)活性的降低及丙二醛(MDA)含量的增加。提示它能明显抑制梗塞心脏中氧自由基的大量生成。形态学指标亦证实,LD po 5g/kg,qd×5d,能明显缩小心肌缺血再灌大鼠的梗塞区面积,同时增加灌流区面积。LD对大鼠肾缺血有一定的保护作用,而对大鼠脑缺血及小鼠肾、脑缺血均无明显作用。

基于网络药理学探讨地榆抗菌活性成分研究及初步实验验证

目的采用网络药理学方法探讨地榆抗菌活性成分,并结合抗菌药效学实验进行验证。方法基于TCMSP数据库获取地榆化学成分及其对应靶点,通过Gene cards和OMIM数据库获取细菌感染靶点。通过Cytoscape构建药物-疾病-靶点网络图,利用STRING数据库构建蛋白互作网络,采用DAVID数据库开展预测靶点的GO和KEGG分析。采用琼脂二倍稀释法对预测的活性成分进行体外最低抑菌浓度(MIC)测定,进一步利用临床分离菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)建立秀丽隐杆线虫感染和药物救治模型,观察线虫的存活情况,计算存活率。结果共筛选出8个潜在活性成分,其中山奈酚和槲皮素Degree值高于平均Degree值,得到17个关键靶点;GO和KEGG富集分析显示地榆抗细菌感染主要涉及细胞增殖、细胞凋亡、免疫应答等生物学过程,主要作用与调控Toll样受体、TNF、MAPK等信号通路相关。山奈酚对革兰阳性菌MRSA和MSSA的MIC_(50)和MIC_(90)均为128μg/mL。山奈酚、槲皮素对革兰阴性菌铜绿假单胞菌的MIC_(50)和MIC_(90)均为128μg/mL。与菌对照组比较,山奈酚(2.56 mg/mL)对MRSA和铜绿假单胞菌感染的秀丽隐杆线虫存活率明显升高(P<0.05),槲皮素(5.12 mg/mL)可明显提高铜绿假单胞菌感染线虫的存活率(P<0.05)。结论该研究初步揭示了山奈酚和槲皮素可能是地榆抗菌作用的物质基础之一,其作用机制可能与网络药理学预测的调节机体免疫和炎症反应等有关,为进一步实验研究奠定一定基础。

SILA-C2191-A和B，黄灰链霉菌产生的多环San酮类新抗生素 Ⅰ．菌种分类，发酵，分离纯化和生物学活性

在筛选具有生物活性的放线菌新代谢产物的过程中，从放线菌SIIA-A02191的发酵产物中发现了新的多环San酮类抗生素SIIA-C2191A及其溴代类似物SIIA-C2191B。基于形态学、化学分类和16SrDNA等数据，将分离自渤海湾沙地土壤的产生菌鉴定为灰黄链霉菌。活性化合物采用减压快速层析法和制备型高效液相进行分离纯化。化合物SIIA-C2191A和SIIA-C2191B均对革兰氏阳性菌显示强抗菌活性，但对革兰氏阴性菌的抗菌活性较弱。

附子内生放线菌EA12432抗真菌次级代谢产物研究

目的对一株分离自四川江油附子的放线菌EAl2432，研究其产生的抗真菌次级代谢产物。方法采用多相分类方法对菌株进行鉴定；采用有机溶剂萃取、硅胶柱层析和制备型HPLC分离获得活性单体，通过紫外可见光谱、质谱和核磁共振谱测定分析及天然产物数据库检索，对化合物进行结构确证；采用微量液体稀释法对化合物进行抗烟曲霉、抗白色念珠菌和抗新型隐球菌的活性测定。结果鉴定内生菌EAl2432为白长链霉菌，其发酵产物中分离获得5个次级代谢产物，其结构分别与文献报道的SF2738A、B、C、D及F同质。化合物1、2和4具有较强抗真菌活性，其IC90值的范围为1．74—57．92μmol／L。结论首次报道了从江油附子样本中分离出内生白长链霉菌EAl2432，其产生5个2，2’-联吡啶类已知化合物，化合物4（SF2738D）具有中等强度的抗真菌活性。

亲水作用色谱法测定纽莫康定B0及其杂质的研究

目的建立同时检测纽莫康定发酵液中纽莫康定A0、Bo和C0的含量的HILIC方法a方法采用Xlon色谱柱（4．6mm×250mm，10μm）进行分离，以乙腈和水（87：13）为流动相；流速为2．0mL／min;检测波长：210rim；柱温：30℃进样量10此。结果纽莫康定A0、B0和c0三者质量浓度与峰面积分别在0．23-150μg／mL、0．12～100μg／mL、0．34～70μg／mL范围内线性关系良好，尺。均大于0．9993，平均加样回收率分别为96．73％（RSD，1．52％）、99．62％（RSD，1．77％）、102．35％（RSD，2．08％）。结论HILIC法同时检测纽莫康定A0、Bo和co含量的方法简单可行、精密度高、重复性好，为工业生产中分离纯化及质量控制提供依据。

非达霉素活性降解产物的制备

目的 制备非达霉素活性降解产物.方法 以非达霉素为起始原料,研究其活性降解产物的制备条件,并通过核磁共振波谱和质谱分析鉴定降解产物的结构.结果 非达霉素在碱性溶液中易发生水解反应,最佳反应条件为：碱水浓度0.1～0.2mol/L,温度20℃～30℃,时间20～24h;水解产物经ODS纯化后色谱纯度大于98.5％;经核磁共振波谱和质谱分析鉴定为去丁酰化的非达霉素.结论 建立了非达霉素活性降解产物的制备方法,并进行了结构鉴定,为其进一步研究提供了参考.

以FK506结合蛋白52为靶点的高通量药物筛选模型的建立及应用

目的发现新的FKBP52抑制剂类药物,建立以人FKBP52为靶点的高通量药物筛选模型。方法通过大肠埃希菌表达系统重组表达FKBP52蛋白,并进行纯化。基于FKBP52的肽基-脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIase)的活性特性,建立FKBP52高通量药物筛选体系。对本公司化合物库中的31558个放线菌及真菌次级代谢产物粗提物进行筛选。结果成功构建重组表达菌株BL21(rosetta)/pET-30a/FKBP52。纯化后的重组表达人FKBP52蛋白纯度大于90%,并具有很好的PPIase活性。阳性药FK506能剂量依赖地抑制FKBP52活性,IC50为12.035ng/m L。筛选得到121个抑制率大于80%的样品,其中11株放线菌的次级代谢产物中含FK506,6株放线菌的次级代谢产物中含FK520,7株放线菌的次级代谢产物中含雷帕霉素。对随机抽取的100块96孔板筛选数据进行统计,模型的信号/本底比平均值为2.35±0.26,Z'因子平均值为0.78±0.1。结论本研究成功建立了人FKBP52抑制剂高通量药物筛选模型,该方法具有快捷、灵敏度高、稳定性好的特点,不仅可以快速进行新FKBP52抑制剂的筛选,还可以实现对FKBP52已知抑制剂如FK506、FK520和雷帕霉素等产生菌的定向筛选。

黄灰链霉菌SIIA-A02191产生的多环口山酮类新抗生素Bromoxantholipin(英文)

目的研究海洋链霉菌SIIA-A02191产生的抗菌成分。方法用有机溶剂萃取发酵液，采用减压快速层析和制备HPLC分离纯化活性化合物，根据化合物的理化性质、紫外光谱、红外光谱、质谱、一维和二维核磁共振谱的测定数据，解析并确证化合物的结构。结果化合物1为xanfllolipin的溴代类似物，命名为bromoxantholipin，具有抗MRSA等革兰阳性细菌的强活性，MIC值范围为0．06～0．25μg／mL。结论化合物1为一新的多环口山酮类抗生素。

内生真菌SEF15927对截短侧耳素的微生物羟化研究

目的研究植物内生真菌SEF15927对截短侧耳素的转化作用。方法利用液体培养生长细胞对截短侧耳素进行生物转化。发酵液经乙酸乙酯萃取和硅胶柱层析分离获得一个羟化产物。运用质谱和核磁共振光谱鉴定结构。结果转化产物为2-羟基截短侧耳素。结论植物内生真菌SEF15927为一具有高转化率的截短侧耳素羟化菌株,

刺糖多孢菌高产菌株转录组及其多杀菌素合成代谢调控研究

目的 通过对高产多杀菌素的刺糖多孢菌进行转录组分析,挖掘多杀菌素合成相关代谢通路的差异基因,并在此基础上结合发酵优化进一步提高多杀菌素产量。方法 利用RNA-seq技术对高产株SS-168及低产野生菌株SS-WT进行比较转录组分析,通过荧光定量PCR验证差异基因表达,再通过发酵培养基优化考察高产菌株的发酵水平。结果 转录组分析表明,与低产菌株相比高产株中有1341个差异表达基因,GO注释表明DEGs主要参与氧化还原生物过程和脂质代谢及辅因子结合和辅酶结合,主要分布在甘氨酸/丝氨酸/苏氨酸代谢、脂肪酸降解等通路。荧光定量PCR结果与转录组数据一致性达到100%。采用分别含有不同浓度的甘氨酸/丝氨酸/苏氨酸的发酵培养进行筛选,多杀菌素发酵水平显著提高。结论 本研究通过新颖的转录组学方法获得了刺糖多孢菌高产菌株的差异基因,并对其高产机制和发酵优化进行了初步分析,为改良刺糖多孢菌菌株和优化发酵工艺提供重要的理论基础和参考依据。

四环素荧光法区分大鼠梗塞心脏中梗塞区、灌流区及非梗塞区

大鼠iv四环素30 min后,按荧光强度将梗塞心脏(缺血60 min—再灌23 h)分为无荧光区(梗塞区),强荧光区(灌流区)和弱荧光区(非梗塞区)。电镜及SOD测定证实区分合理,与Evans蓝—红四氮唑染色配对比较,结果一致。普萘洛尔能显著缩小无荧光区及增加强荧光区的重量。

弯孢马利亚霉SIIA-F12361产生的新代谢产物研究

目的对海洋生境来源菌株SIIA-F12361进行分类学鉴定以及次级代谢产物的化学研究。方法采用形态学与18S rDNA序列分析对菌株进行分类学鉴定。通过硅胶柱层析、LH-20分子筛层析和反相制备HPLC诸方法,对新化合物进行分离纯化,并根据高分辨质谱、紫外、红外光谱和核磁共振数据对化合物SIIA-C12361进行结构鉴定。结果鉴定菌株SIIA-F12361为弯孢马利亚霉,其产生的新次级代谢产物属于倍半萜烯内酯类化合物。结论弯孢马利亚霉SIIA-F12361产生一新倍半萜烯内酯化合物。