多种粘附分子基因在原发性肝癌的表达及其临床意义

目的探讨多种粘附分子基因在原发性肝癌中的表达及其临床意义。方法取64例用RT-PCR法半定量检测肝癌粘附分子的基因表达情况,分析其临床意义。结果(1)原发性肝癌各粘附分子的表达率分别为E-钙粘蛋白9062%、细胞间粘附分子-19375%、粘附分子CD445000%、粘附分子CD44V9688%、整合素α5100%、整合素β1100%,CD44与其他粘附分子表达率的差异显著。(2)肝癌组织各粘附分子E-钙粘蛋白、细胞间粘附分子-1、粘附分子CD44、粘附分子CD44V、整合素α5、整合素β1mRNA的表达量分别为124±054、096±037、062±073、086±033、097±049、141±024,其中粘附分子CD44与E-钙粘蛋白、整合素β1的表达量差异显著。(3)肝癌分期与粘附分子基因mRNA表达量的关系显示E-钙粘蛋白、粘附分子CD44的表达量随分期增高而下降,其中粘附分子CD44Ⅰ-Ⅱ期和Ⅳ期的表达量差别显著;细胞间粘附分子-1、粘附分子CD44V,整合素α5、整合素β1的表达量随分期增高而增高,其中细胞间粘附分子-1Ⅰ-Ⅱ期和Ⅳ期的表达量差别显著。(4)肝癌粘附分子基因mRNA表达量与临床病理生理特点相关分析显示肝癌粘附分子基因mRNA表达量与肿瘤大小、有无转移、有无包膜和结节数目有关,与AFP水平、肝硬化情况、肝功能状况无关。

受翻译调节的肿瘤蛋白在PRL-3促进结肠癌转移中的作用

目的:研究受翻译调节的肿瘤蛋白(TCTP)在肝再生磷酸酶-3(PRL-3)促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。方法:构建载体pAcGFP-C3-PRL-3及pAcGFP-C3并分别转染至结肠癌LoVo细胞中,获得稳定表达PRL-3的LoVo-PRL-3细胞及对照细胞LoVo-control。Western blotting及real-time PCR检测2种细胞PRL-3及TCTP表达。设计并合成特异性干扰TCTP mRNA的siRNA序列(TCTP-siRNA)和阴性对照序列(control-siRNA),并将siRNA瞬时转染至LoVo-PRL-3细胞。在转染siRNA后24 h、48 h和72 h,Western blot-ting及real-time PCR检测LoVo-PRL-3细胞TCTP表达。CCK8-8和Transwell方法检测LoVo-control、LoVo-PRL-3及转染TCTP-siRNA和转染control-siRNA的LoVo-PRL-3细胞间增殖、迁移和侵袭能力差异。结果:转染PRL-3可以显著上调LoVo细胞TCTP mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。TCTP-siRNA在转染后的24 h、48h和72 h可以有效抑制LoVo-PRL-3细胞TCTP mRNA表达(P<0.01),同样TCTP蛋白在转染后的48 h和72 h也显著受到抑制(P<0.01)。转染PRL-3能显著促进LoVo细胞增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),然而siRNA干扰抑制上调的TCTP表达后又能显著抑制LoVo-PRL-3细胞增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论:PRL-3通过上调TCTP表达促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。用siRNA靶向抑制TCTP表达可能是预防和治疗结肠癌转移的有效手段。

原发性肝癌粘附分子基因的表达与化疗敏感的相关性研究

目的 :探讨原发性肝癌粘附因子基因的表达与化疗敏感的相关性。方法 :取 6 4例肝癌切除组织行ATP -TCA法肿瘤体外药敏试验 ,以RT -PCR法半定量检测肝癌多种粘附因子、多药耐药基因表达情况。结果 :肝癌组织E -cadherin ,ICAM - 1,CD44,CD44V,α5,β1基因mRNA的表达量分别为 1 .2 4± 0 .5 4 ,0 . 96± 0 .37,0 . 6 2± 0 . 73,0 .86± 0 . 33,0 . 97± 0 .4 9,1 .4 1± 0 . 2 4 ,其中CD44与E -cadherin、β1的表达量有显著差异。多药耐药基因MDR1、MRP、GST -π、LRP、TOPOⅡ的表达量分别为 1 .17± 0 . 4 7、1 5. 9± 0 .33、1 .18± 0 . 4 8、1 .0 3± 0 . 4 8、1. 0 0± 0 . 31。各粘附分子基因的表达与多药耐药基因的表达有一定的相关性 :其中ICAM - 1、α5的表达与MDR1的表达呈正相关 ,E -cadherin、CD44的表达与MDR1的表达呈负相关 ;E -cadherin的表达与MRP的表达呈负相关 ;ICAM - 1的表达与LRP的表达呈正相关 ,E -钙粘连素、CD44的表达与LRP的表达呈负相关。肝癌化疗疗效与粘附分子基因mRNA表达量的关系 :在化疗有效组E -cadherin、CD44的mRNA表达量高于无效组 ,ICAM - 1、CD44V、α5、β1的mRNA表达量低于无效组。两组差别无显著意义。结论

ATP-TCA模拟希罗达在消化道恶性肿瘤化疗中的应用效果

目的试图通过体外化疗药物敏感试验系统(ATP鄄TCA系统)模拟希罗达在消化道恶性实体肿瘤的应用效果。方法取肝癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、直肠癌共18例的手术、活检和穿刺标本应用体外药敏试验ATP鄄TCA法,其中应用20倍的氟尿嘧啶模拟希罗达。结果ATP鄄TCA的可评估率为100%;10种化疗药物的敏感率分别为:诺消灵5.88%,足叶乙甙11.76%,顺铂17.65%,,丝裂霉素23.53%,表阿霉素23.53%,草酸铂27.78%,开普拓38.89%,健择47.06%,泰素52.94%,20倍氟尿嘧啶(相当于希罗达)72.22%。结论希罗达可能适宜用于消化道恶性实体肿瘤化疗。

结直肠腺癌并神经内分泌分化研究进展

据国家癌症中心2011年统计,我国结直肠癌（colorectal cancer,CRC）发病率已上升至第三位,仅次于肺癌及胃癌,发病率为31.39/10万[1].恶性肿瘤的基本特征之一是细胞的异常分化,即向一种不成熟的方向退行性发育,出现正常细胞没有的新的分化特征或原有一些特征的变化,肿瘤细胞的神经内分泌分化（neuroendocrine cell differentiation,NED）现象是其中之一.结直肠癌肿瘤细胞的神经内分泌分化现象不仅影响肿瘤的诊断和治疗,也可能影响肿瘤的预后.

肝细胞生长因子诱导骨髓间质干细胞分化为心肌细胞

目的 :探讨肝细胞生长因子 (HGF)体外诱导骨髓间质干细胞 (MSC)定向分化心肌细胞的一种新方法。方法 :分离SD大鼠骨髓MSC ,培养至 4 - 6代后 ,添加HGF(终浓度 10 μg/L)持续培养 30d ,倒置显微镜下动态观察分化细胞的自律性搏动和对 0 1%异丙肾上腺素和无Ca2 + 孵育液的反应 ,并行心肌肌凝蛋白表达鉴定。结果 :分化第 14 - 2 0d骨髓间质干细胞增殖形成集落 ,10 % - 5 0 %克隆中开始出现持续节律收缩的细胞群体 ,节律频率为 70- 90次 /min ,异丙肾上腺素加快其搏动速率 ,无Ca2 + 孵育液则抑制之。细胞心肌肌凝蛋白表达鉴定为心肌细胞。结论 :HGF可诱导骨髓间质干细胞分化为心肌细胞 。

腹部手术后早期炎性肠梗阻的诊治分析

目的探讨腹部手术后早期炎性肠梗阻的临床特点,以及诊断和治疗分析。方法回顾性分析2005年7月至2015年7月收治的48例腹部外科手术后早期炎性肠梗阻患者的临床资料。结果 45例患者经胃肠减压,全胃肠外营养支持,应用肾上腺皮质激素、生长抑素和抗生素等非手术治疗痊愈,平均治疗时间为17.45 d。另3例患者分别于术后16、19、20 d保守治疗无效中转手术治疗,2例于术后出现肠瘘,其中1例患者于术后第9天死于严重腹腔感染。结论术后早期炎性肠梗阻应首选非手术治疗。手术治疗并发症多,疗效差。

原发性肝癌组织中生长激素受体的表达及其意义

背景与目的:重组人生长激素(recombinehumangrowthhormone,rhGH)在调节代谢、降低外科病人死亡率方面,疗效明显,然而rhGH能否用于治疗原发性肝癌患者,目前存在较大争议。由于生长激素必须通过与其受体(growthhormonereceptor,GHR)结合方能发挥作用,因此本研究旨在通过了解原发性肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)组织生长激素受体的表达情况,探讨rhGH在肝癌患者中是否适用。方法:应用放射性配体法对40例HCC组织进行GHR的检测,以6例正常肝组织作为对照,肝组织GHR的受体最大结合量(RT)和平衡解离常数(Kd)采用Scatchard法计算;并分析肝癌GHR的RT值与肝癌临床病理特点之间的关系。结果:在正常肝组织与35例HCC组织中检测到单一的生长激素(GH)特异性结合位点(即GHR),对照组肝组织GHR的RT值为(39.5467±3.4770)fmol/mgprotein,Kd为(0.6167±0.1007)nmol/L,肝癌组织GHR的RT为(18.5416±4.1686)fmol/mgprotein,肝癌组织GHR的Kd值为(0.6319±0.1978)nmol/L,与正常肝组织相比,肝癌GHR的RT显著性降低(P<0.05),而Kd无显著性改变(P>0.05);肝癌组织GHR的RT值与肿瘤大小、患者临床分期呈显著性负相关,而与肿瘤分化程度、患者年龄、是否合并肝硬变无显著性相关。在5例肝癌组织未检测到GHR。结论:本组结果显示。

含淤胆血清的培养体系从大鼠骨髓细胞中筛选与扩增肝干细胞亚群

目的 :探讨采用含淤胆血清的培养体系从骨髓细胞中筛选与扩增骨髓源性肝干细胞的可行性。方法 :制备含 2 %、5 %、7%和 10 %淤胆血清的筛选培养液 ,培养大鼠骨髓细胞 ,4d时加入肝细胞生长因子促进肝干细胞生长 ,2周时行免疫组化与RT -PCR检测肝干细胞标志、糖原染色和尿素合成试验分析功能。结果 :在 2 %淤胆血清中 ,骨髓细胞不能形成克隆 ,7%与 10 %的血清则骨髓细胞逐渐凋亡。在 5 %的淤胆血清时 ,骨髓源性肝干细胞在此病理筛选培养液中能够生存并选择性生长 ,而其他类型细胞则脱落凋亡 ;第 2周时 ,形成肝细胞样集落 ,细胞表达胚胎时期肝细胞特征性蛋白 ,具有肝细胞特有糖原和尿素合成功能。结论 :含淤胆血清的微环境筛选培养体系能够有效地从骨髓细胞中筛选骨髓源性肝干细胞 ,为临床肝细胞替代治疗的获取丰富供体细胞来源提供了新的思路。

肝癌细胞冻融抗原负载树突状细胞瘤苗的制备与活化

目的 :探讨制备肝癌树突状细胞 (DCs)瘤苗和体外诱导DCs活化的优化方法。方法 :取健康人新鲜血 5 0mL ,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞 (PBMC) ,制备肝癌细胞冻融抗原 ,采用不同因子组合培养PBMC ,诱导和激活DCs,A组 :rhGM -CSF +IL - 4 ;B组 :rhGM -CSF +IL - 4 +冻融抗原负载 ;C组 :rhGM -CSF +IL - 4+TNF -α ;D组 :rhGM -CSF +IL - 4 +TNF -α +冻融抗原负载。结果 :各组均诱导出DCs ,并高表达CD11c和CD5 4 ,冻融抗原可明显上调CD86、CD80、HLA -DR表达和IL - 12p4 0分泌 (P <0 .0 1) ,TNF -α促进CD86表达的作用更显著 ,但对IL - 12分泌无影响 ,依次用TNF -α诱导和冻融抗原负载可进一步促进CD86表达和IL12p4 0分泌 (P <0 .0 5 )。CD5 4和HLA -DR双标记免疫细胞化学染色显示 ,各组DCs大多为CD5 4 +。表达HLA -DR的DCs均为CD5 4 +HLA -DR+,其中 ,A组CD5 4 +HLA -DR+细胞数量最少 ,D组最多 ,平均每个细胞HLA -DR的表达水平也与此对应。结论 :采用rhGM -CSF、IL - 4诱导的未成熟DCs,依次使用TNF

地塞米松复合阿扎司琼对腹腔镜胆囊切除术后恶心呕吐影响的随机对照研究

目的观察地塞米松复合阿扎司琼对腹腔镜胆囊切除术后的镇吐效果.方法随机将ASAⅠ～Ⅱ150例择期行腹腔镜胆囊切除术的患者分为3组(各50例):地塞米松复合阿扎司琼组(D+A组)于术毕时静脉注射地塞米松5 mg和阿扎司琼10 mg;阿扎司琼组(A组)于术毕时静脉注射阿扎司琼10 mg;对照组(C组)则于术毕时静脉注射生理盐水2 ml.观察术后24 h内患者的恶心、呕吐的发生情况.结果 D+A组恶心发生率为4%(2/50),明显低于A组(16%,8/50)和C组(34%,17/50)(χ2＝4.00,14.62;P=0.046,0.000).D+A组呕吐发生率为2%(1/50),明显低于A组(14%,7/50)和C组(32%,16/50)(χ2＝4.89,15.95;P=0.027,0.000).A组恶心、呕吐发生率亦明显低于C组(χ2＝4.32,4.57;P=0.038,0.033).结论地塞米松复合阿扎司琼控制腹腔镜胆囊切除术后的恶心、呕吐发生率效果优于单纯使用阿扎司琼.

B7-H1阻断对未成熟树突状细胞免疫功能的影响

目的探讨B7-H1阻断对未成熟树突状细胞(DCs)的免疫刺激活性的影响。方法以细胞因子GM-CSF和IL-4体外诱导人单核细胞来源的树突状细胞,流式细胞仪检测在诱导过程中B7-H1的表达,并以B7-H1单抗阻断处理,分别以流式细胞仪、MTT法、ELISA、ELISPOT法检测B7-H1阻断对DCs的成熟和内吞能力、刺激淋巴细胞增殖、IL-12的分泌、诱导淋巴细胞分化的影响。结果DCs在诱导过程中B7-H1表达逐渐增强,第7d时的阳性表达率为54.12%,以TNF-α诱导成熟后阳性表达率为83.64%;B7-H1阻断对DCs成熟和内吞能力无影响,但可使未成熟DCs刺激淋巴细胞增殖的能力和IL-12的分泌明显增强,并诱导淋巴细胞向分泌IFN-γ的Th1/Tc1的分化。结论B7-H1阻断可增强未成熟DCs的免疫刺激活性,利用B7-H1阻断的DCs瘤苗激发抗肿瘤免疫的方案值得进一步探讨。

TIMP-3基因甲基化与结直肠癌临床病理的关系

目的:探讨TIMP-3基因甲基化与结直肠癌临床病理指标和转移复发的关系。方法:采用巢式甲基化特异性PCR技术(NMSP法)检测100例结直肠癌组织和100例癌旁非癌组织TIMP-3基因甲基化;采用RT-PCR 检测100例结直肠癌组织和100例癌旁非癌组织TIMP-3 MRNA的表达。结果:肿瘤组织TIMP-3 MRNA的表达阳性率为64％,肿瘤组织TIMP-3 MRNA的表达率明显低于癌旁非癌组织(P<0．01);TIMP-3 MRNA的表达率无淋巴结转移组(34/42)高于淋巴结转移组(30/58)(P<0．01),甲基化阳性率DUKE’S C+D期伴淋巴结转移组明显高于 DUKE’S A+B期不伴淋巴结转移组(P<0．05)。结肠近端、分化程度差的结直肠癌组织甲基化阳性率明显高于远端直肠和分化程度高者(P<0．05)。结论:TIMP-3基因甲基化容易发生在结肠近端、DUKE’S C、D期、伴淋巴结转移、细胞分化差和浸润型结直肠癌患者。

人外周血单核细胞来源树突状细胞的成熟诱导

目的:探讨诱导树突状细胞成熟的最优方法。方法:以细胞因子GM-CSF和IL-4体外诱导人单核细胞来源的树突状细胞,分别采用CD40L、LPS、TNF-α、细胞因子鸡尾酒法(TNF-α、IL-6、IL-1β、PGE2)诱导成熟,24小时后收获DCs以流式细胞仪检测其成熟表型CD80、CD83、CD86、HLA-DR和FITC-Dextran的内吞能力,ELISA法检测其IL-12的分泌,MTT法检测其刺激淋巴细胞增殖活性。结果:CD40L、LPS、TNF-α、鸡尾酒法均可诱导DCs的成熟,其中以鸡尾酒法诱导成熟的效果最优,CD83的表达率为66.91%(P<0.05);成熟DCsFITC-Dextran的内吞能力明显下降;成熟DCsIL-12分泌量明显高于未成熟DCs,其中鸡尾酒法诱导成熟的DCs的IL-12分泌量最高,成熟的DCs有较强的刺激淋巴细胞增殖能力。结论:细胞因子鸡尾酒法是诱导DCs成熟的最佳方法。

胃癌根治术后吻合口瘘临床分析

目的探讨胃癌根治术后吻合口瘘的原因、预防及治疗。方法回顾性分析我科2004年1月～2009年12月行胃癌根治术的临床资料共121例。结果本组无死亡病例,发生吻合口瘘3例,均通过保守治疗后愈合恢复。结论胃癌根治术后吻合口瘘的预防包括术前、术中及术后各个环节。吻合口瘘发生后治疗重在腹腔通畅引流,早期禁食,胃肠减压,以及积极的肠内外营养支持。

细胞因子诱导的杀伤细胞的生物学特性研究

目的 :探讨细胞因子诱导的杀伤细胞 (CIK)的生物学特性。方法 :健康人非贴壁单个核细胞用含IFN-γ、IL - 1β、IL - 2、CD3单抗诱导CIK细胞。以LAK细胞作为对照。流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测细胞表型特征 ;乳酸脱氢酶释放法分析细胞毒活性。结果 :诱导 2周后 ,CIK细胞的增殖率达到高峰 ,CD3+ 细胞占 95 %以上 ;第 3周细胞生长进入平台期。诱导 15d时 ,CD3+ CD5 6 + NKT亚群占 16 .5 % ,比例在 2 - 4周区间内无明显变化。LAK细胞增殖缓慢 ,显著低于同期CIK细胞增殖率 (P <0 .0 1)。不同效 :靶比例CIK细胞对肝癌细胞BeL - 74 0 2的特异性溶解率显著高于LAK细胞 (P <0 .0 1)。免疫细胞化学染色结果显示 ,CIK细胞高度表达HLA -DR和CD5 4抗原 ,NKT细胞体积较CD3+ CD5 6 -细胞略大 ,细胞表面有大量伪足。结论 :CIK细胞具有高度增殖能力 ,其体外杀瘤活性明显优于LAK细胞。诱导 14 - 2 1d ,CIK细胞增殖率和CD3+ CD5 6 + 阳性细胞率均达到高峰 。

阑尾腺癌治疗分析(附1例病例报告)

阑尾肿瘤是消化道肿瘤中发生率最低的一类．占胃肠道肿瘤的0．2～0．5％，其中大多是良性肿瘤，仅有17％是恶性肿瘤。阑尾恶性肿瘤中最常见的是阑尾类癌，占50％～70％，阑尾腺癌则极为少见，约仅占10％。近年来阑尾腺癌报导渐多．但均未详细阐述其治疗方法的选择，在此报告1例原发性阑尾腺癌术前误诊病例并作治疗的探讨分析。

胃肠胰神经内分泌肿瘤临床特点及预后分析

目的探讨胃肠胰神经内分泌肿瘤(GEP-NEN)临床病理特点、诊断和治疗方法及预后。方法对2003年1月-2012年5月在中山大学孙逸仙纪念医院住院治疗并经病理证实的61例GEP-NEN临床资料进行回顾性分析,并依照WHO分类依据重新进行分类,运用统计学方法分析影响预后的病理学因素。结果 61例GEP-NEN中,发病部位位于胰腺41例(67.2%),直肠10例(16.4%),胃5例(8.2%),阑尾2例(3.3%),十二指肠、回肠和结肠各1例(各占1.6%);临床分级:G1级34例(55.7%),G2级16例(26.2%),G3级11例(18%)。胰腺NEN G1、G2和G3相应1年生存率为94.2%、66.7%和25.0%,相应2年生存率为82.4%、55.6%和0.0%;胃肠NEN G1、G2和G3相应1年生存率为100.0%、66.7%和50.0%,相应2年生存率为100.0%(G1级)和66.7%(G2级),G3级无法统计。Cox回归模型分析显示肿瘤核分裂数、ki-67指数为影响GEP-NEN预后的病理因素(P1=0.039<0.05,P2=0.007<0.05)。该组病例中位生存期20个月,平均生存期24.3个月。结论 GEP-NEN缺乏特征性临床表现,确诊依赖病理学及免疫组化检查;预后与病理学分类及临床分级有关;以手术为主的综合治疗能改善其预后。

腹腔镜下胰十二指肠切除手术的护理配合

目的总结腹腔镜下胰十二指肠切除手术的术中护理管理。方法回顾性总结我院2010年7～2011年9月开展的3例腹腔镜胰头十二指肠切除手术术中护理管理的临床资料。结果 3例患者手术过程顺利,未中转开腹,均无出现术中及术后并发症。结论腹腔镜胰十二指肠切除手术,是微创肝胆胰外科难度最大的手术之一,做好充分的术前准备,熟悉掌握相关专业新技术及手术配合过程,严格遵守无瘤原则,是保证患者安全、舒适、顺利度过手术的关键。

IL-6/p-AKT/p-STAT3信号通路在PRL-3促进结肠癌细胞增殖、迁移中的机制研究

目的探讨细胞因子白介素(IL)-6信号通路在促进结肠癌细胞增殖、迁移中的作用机制。方法酶联免疫吸附试验ELISA检测空白组Lo Vo-Control(Lo Vo-C)结肠癌细胞和稳定表达PRL-3的实验组Lo Vo-PRL-3(Lo Vo-P)结肠癌细胞分别与肿瘤相关性巨噬细胞共培养后IL-6蛋白水平表达差异;Western blot检测IL-6、p-AKT、p-STAT3蛋白水平表达,划痕实验和增殖实验MTS检不同浓度(1、10、100 NG/ML)IL-6对结肠癌细胞侵袭及增值能力的影响。结果ELISA实验检测IL-6蛋白平,TAM/Lo Vo-P(102±5)PG/ML,TAM/Lo Vo-C为(56±3)PG/ML;划痕实验与MTS结果均提示共培养后Lo Vo-P增殖、侵袭能力比Lo Vo-C强;Western blot检测共培养后的结肠癌细胞Lo Vo-P、Lo Vo-C蛋白表达差异,p-AKT、p-STAT3表达Lo Vo-P明显高于Lo Vo-C,不同浓度的IL-6(1、10、100 NG/ML)作用Lo Vo-P后其增殖与侵袭能力逐渐增高,且p-AKT与p-STAT3蛋白水平逐渐增高。结论 PRL-3能诱导肿瘤相关性巨噬细胞分泌IL-6,通过IL-6上调p-AKT和p-STAT3促进结肠癌细胞增殖、侵袭。