基于网络药理学和实验验证探讨二氢杨梅素治疗炎症性肠病的作用机制

[目的]通过网络药理学和体外实验预测并验证二氢杨梅素(DHM)治疗炎症性肠病(IBD)的潜在靶点及作用机制。[方法]使用Pubchem数据库获取DHM作用靶点,通过GeneCards、OMIM、TTD、PharmGKB、Drugbank数据库获取IBD疾病靶点,获取药物与疾病的交集靶点。利用STRING数据库构建蛋白互作(PPI)网络并使用Cytoscape可视化筛选核心靶点。运用R语言进行基因本体(GO)功能分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。体外实验验证DHM的抗炎作用及可能机制。[结果]DHM作用靶点与IBD疾病靶点相交共得到42个交集靶点,并筛选出5个核心靶点凝血因子Ⅱ(F2)、内皮型一氧化氮合酶3(NOS3)、丝氨酸羟甲基转移酶1(SHMT1)、造血细胞激酶(HCK)、二氢叶酸还原酶(DHFR)。GO功能分析和KEGG富集分析显示DHM可能通过黏附连接、趋化因子、Ras信号通路等发挥作用。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)显示DHM能抑制脂多糖(LPS)诱导的HT-29细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)mRNA水平升高。RT-PCR提示在LPS诱导后靶点NOS3、HCK mRNA表达水平升高,而DHM干预后其表达水平下降。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测显示DHM能有效恢复LPS诱导的HT-29细胞连接蛋白的下调。[结论]研究揭示了DHM通过多通路、多靶点治疗IBD,并可能通过恢复细胞间连接改善屏障功能受损有效治疗结肠炎。

硫氧还蛋白-1在急性坏死性胰腺炎并急性胃黏膜损伤中的作用

目的探讨硫氧还蛋白-1(TRX-1)在实验性急性坏死性胰腺炎(ANP)并急性胃黏膜损伤发病机制中的作用以及抗氧化剂褪黑素对其的影响。方法72只大鼠随机分为对照组(C组,n=24)、ANP组(A组,n=24)和褪黑素干预组(M组,n=24)。A组分3次腹腔内注射6%L-精氨酸(L-Arg)1.5 g/kg建立ANP模型;C组同法注射等量生理盐水;M组于首次注射L-Arg前0.5 h腹腔内注射1%褪黑素50μg/kg。各实验组大鼠于末次腹腔内注射后6 h、12 h和24 h分批处死。光镜下观察胰腺和胃组织并进行病理学评分,采用免疫组化检测TRX-1在胃黏膜的表达,并检测胃黏膜中MDA、MPO的含量。结果A组各时点胃黏膜TRX-1的染色积分及MDA、MPO的含量明显高于C组(P均<0.05);M组各时点胃黏膜中TRX-1的染色积分及MDA、MPO的含量明显低于A组(P均<0.05),胰腺和胃组织病理改变较A组明显减轻(P均<0.05)。结论内源性的TRX-1可能是胃黏膜组织抵御氧化应激损伤的重要因子之一,TRX-1的表达量可能与组织氧化应激损伤的严重程度有关。外源性的褪黑素在ANP时可能通过其抗氧化作用,减轻胃黏膜氧化应激损伤的程度,对胃黏膜有一定的保护作用。

鞘氨醇激酶-1在结肠癌中的作用研究进展

鞘氨醇激酶(Spk)是一种新近发现的脂类激酶。近年来的研究逐渐阐明了Spk结构特征及其功能,并发现Spk1对肿瘤尤其是结肠肿瘤的发生发展具有促进作用。抑制Spk1不但能促进肿瘤细胞的凋亡,还能提高结肠肿瘤对化疗药物的敏感性。

细胞间紧密连接蛋白在结肠癌中的研究进展

细胞间紧密连接(TJ)是细胞间连接的主要结构,通过双细胞间紧密连接(bTJ)和三细胞间紧密连接(tTJ)两种形式发挥作用。密封蛋白(Claudin)家族、闭合蛋白(occludin)、闭锁小带蛋白(Zos)、三细胞紧密连接蛋白(tricellulin)、脂解刺激脂蛋白受体(LSR)、连接粘附分子(JAMs)等多种蛋白被发现是TJ发挥功能的主要因子。因此,深入研究TJ相关蛋白与各信号通路间的相互作用并鉴定出有意义的蛋白分子将有助于进一步阐明结肠癌细胞的发生发展机制。

NIK和IKKβ连接蛋白、C-myc和细胞周期蛋白D1在结肠癌组织中的表达及意义

目的检测结肠癌组织中NIK和IKKβ连接蛋白(NIBP)、磷酸化p65(p-p65)和C-myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达,并探讨其意义。方法收集广西医科大学第一附属医院结直肠外科2013年2月—2014年2月经外科手术切除及消化内科肠镜活检的部分标本151例,其中正常结肠黏膜16例、结肠腺瘤21例、结肠癌114例。采用SP免疫组化法分别检测正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织及结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率;分析结肠癌组织中NIBP、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率与p-p65阳性细胞表达率的相关性。结果正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织、结肠癌组织的NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率高于正常结肠黏膜组织和结肠腺瘤组织(P<0.017);正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织中NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异无统计学意义(P>0.017)。不同组织学类型、浸润深度及有无淋巴结转移、远处转移患者结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度越低、TNM分期越高、Duke's分期越高患者结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率越高(P<0.05)。NIBP、C-myc、cyclin D1阳性细胞表达率与p-p65阳性细胞表达率均呈正相关(P<0.05)。结论 NIBP可能通过激活核因子κB(NF-κB)信号转导通路上调C-myc和cyclin D1等的表达而影响结肠癌的治疗发生、发展、侵袭和转移,为临床发现结肠癌的治疗新靶点提供了参考依据。

姜黄素对TNF-α诱导人结直肠癌细胞上皮间充质转化、迁移的影响

目的观察姜黄素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导结直肠癌细胞上皮间充质转化(EMT)的影响,并探讨其可能的机制。方法将人结直肠癌HCT116细胞分为3组,A、B组分别以TNF-α20 ng/m L、TNF-α20 ng/m L+姜黄素25μmol/L干预48 h,C组不干预。采用相差显微镜观察细胞形态变化,划痕实验观察细胞迁移能力,Western blot法检测EMT标记物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及NF-κB信号通路的p65蛋白。结果 A组细胞多呈具有极性的纺锤状、长梭形,排列疏松,大部分出现细长伪足;B组细长伪足细胞较A组少见,凋落细胞明显多于A组;C组细胞大多数为多边形,细胞间存在一定的间隙,少量细胞出现短粗伪足。A、B、C组细胞迁移距离分别为(319.84±20.93)、(90.70±7.25)、(144.07±11.31)μm,P均<0.05。与C组比较,A组细胞E-cadherin表达减少,Vimentin、p65蛋白表达增加(P均<0.05或0.01);而B组较A组E-cadherin表达增加,Vimentin、p65蛋白表达减少(P均<0.05或0.01)。结论姜黄素可能通过NF-κB信号通路来抑制TNF-α诱导结直肠癌HCT116细胞的EMT发生、侵袭和转移。

NF-κB对人结肠癌细胞上皮间质转化及侵袭转移的影响

目的:研究核转录因子-κB(nuclear factorkappa B,NF-κB)对人结肠癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及侵袭和转移的影响.方法:将人结肠癌HCT116细胞分为NF-κB激活组,抑制组和空白对照组.分别用NF-κB活化激活剂肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),终浓度为20 ng/mL,NF-κB活化抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵(ammonium pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC),终浓度为20μmol/L干预HCT116细胞4 d.采用相差显微镜观察细胞形态变化,Transwell小室模型观察细胞侵袭迁移能力变化,Western blot检测p65、P-p65、E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达,QT-PCR检测E-cadherin和N-cadherin的mRNA表达.结果:TNF-α可上调P-p65和N-cadherin的表达,抑制E-cadherin的表达,同时明显促进HCT116细胞的EMT形态发生(如细长丝状伪足和纺锤状细胞形成),并使侵袭和迁移能力增强;相反,PDTC则降低P-p65和N-cadherin的表达,而增加E-cadherin的表达,且抑制细胞的EMT形态发生(如伪足不明显,细胞成多角形并紧密排列)及减弱细胞的侵袭迁移能力.对照组、TNF-α组及PDTC组的侵袭细胞数(97.75±3.77 vs 118.50±1.95,51.00±1.83);迁移细胞数(140.00±4.32 vs 167.00±6.36,80.00±2.53);N-cadherin mRNA的表达(1.00±0.00 vs 3.90±0.47,0.08±0.02);E-cadherin mRNA的表达(1.00±0.00 vs0.26±0.08,6.03±0.59,均P<0.05).结论:NF-κB可以促进结肠癌HCT116细胞的EMT发生、侵袭和转移.

人结肠癌组织中NIBP、VEGF及ICAM-1的表达及其意义

目的:检测结肠癌患者组织中NIK-IKK结合蛋白(NIBP)、磷酸化p65(p-p65)和VEGF、ICAM-1的表达,并探讨其意义。方法:采用免疫组化SP法分别检测26例正常结肠黏膜、20例结肠腺瘤以及114例结肠癌患者结肠组织中NIBP、p-p65、VEGF和ICAM-1的表达。结果:结肠癌组织中NIBP、p-p65、VEGF和ICAM-1的阳性表达均高于结肠腺瘤和正常结肠黏膜组织(P<0.05);而且NIBP、p-p65、VEGF和ICAM-1在结肠癌组织中的表达与浸润深度、TNM临床分期、淋巴结转移和远处转移相关(P<0.05)。同时,NIBP、VEGF和ICAM-1与p-p65有正相关关系。结论 :NIBP可能通过激活NF-κB信号通路上调VEGF和ICAM-1的表达而影响结肠癌的发生、发展、侵袭和转移。

NIBP在结肠癌细胞中通过调控NF-κB信号通路促进MMP2、MMP9表达

目的:观察慢病毒介导的NIBP(NIK and IKKβbinding protein)基因转染结肠癌细胞株HT29后,细胞迁移能力以及细胞内p65、MMP2、MMP9 m RNA和蛋白表达的变化。方法:分为未经转染的HT29细胞(HT29组)、转染空载的HT29细胞(HT29-NC组)和转染NIBP的HT29细胞(HT29-NIBP稳转组)。采用Transwell试验检测细胞迁移能力;Q-PCR法检测NIBP、p65、MMP2、MMP9的m RNA表达;Western Blot法检测NIBP、p65、磷酸化p65(p-p65)的蛋白表达;ELISA法检测MMP2、MMP9的分泌。结果:高表达NIBP能增强结肠癌细胞株HT29的迁移能力,并主要通过增加p-p65从而促进MMP2、MMP9 m RNA及蛋白表达(P<0.05)。结论:NIBP可能通过激活NF-κB信号通路促进结肠癌细胞分泌MMP-2、MMP-9,从而促进结肠癌细胞的侵袭转移。

Sphk1对人结肠癌细胞株Lovo增殖与侵袭的影响及其作用机制

目的:研究Sphk1对结肠癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响并探讨其机制.方法:将人结肠癌Lovo细胞株分成Sphk1激活组,Sphk1抑制组,空白对照组.以佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(phorbol12-myristate13-acetate,PMA)为Sphk1激活剂(终浓度为100nmol/L),N,N-二甲基鞘胺醇(erythro-sphingo-sineN,N-Dimethyl,DMS)为Sphk1抑制剂(终浓度为50μmol/L)处理Lovo细胞24h后,用MTT方法测定细胞的增殖活性,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,用Westernblot测定细胞Sphk1、ERK1/2、p-ERK1/2、NF-κBp65蛋白水平的变化.结果:PMA可以明显诱导Sphk1蛋白的表达,促进Lovo细胞生长,抑制细胞的凋亡,并促进细胞的侵袭;相反,DMS明显抑制Sphk1的表达,抑制细胞生长,促进细胞的凋亡,并抑制细胞的侵袭.Sphk1激活组、对照组、抑制组的细胞凋亡率分别是9.15%,16.25%,32.58%.与对照组相比,Sphk1激活组、抑制组的细胞相对侵袭率分别是190.57%,9.65%,差异有统计学意义(均P<0.01).PMA诱导Sphk1表达,同时伴有ERK1/2、p-ERK1/2和NF-κBp65蛋白表达的上调,DMS抑制Sphk1表达,可抑制ERK1/2、p-ERK1/2、NF-κBp65蛋白的表达.结论:Sphk1可促进Lovo细胞的生长增殖与侵袭并抑制细胞的凋亡,其机制可能与ERK1/2和NF-κB信号通路的激活有关.

Ghrelin及NF-κB在急性坏死性胰腺炎并肝损伤中的作用

目的:观察Ghrelin、NF-κB在大鼠急性坏死性胰腺炎并肝损伤及褪黑素干预时在肝脏中的表达,探讨两者在其中的作用及褪黑素对Ghrelin的影响和可能机制.方法:72只♂SD大鼠随机分为对照组(C组,n=24)、急性坏死性胰腺炎组(A组,n=24)、褪黑素干预组(M组,n=24).A组分3次腹腔注射6%左旋精氨酸(L-Arg)1.5g/kg,诱发急性坏死性胰腺炎,C组同法注射等量生理盐水,M组在首次注射L-Arg前0.5h腹腔注射1%褪黑素50μg/kg.各组大鼠在末次腹腔注射后6、12、24h分批处死.光镜下观察胰腺及肝脏病理改变并进行评分,测定血清淀粉酶水平,RT-PCR检测肝脏Ghrelin及NF-κBmRNA水平,Westernblot检测肝NF-κB蛋白表达.结果:A组各时点胰腺及肝脏病理评分、血清淀粉酶、肝NF-κBmRNA(6h:0.74±0.04vs0.40±0.05;12h:0.77±0.03vs0.40±0.02;24h:0.82±0.04vs0.40±0.03,均P=0.000)及蛋白表达(24h:0.48±0.07vs0.16±0.04,P=0.000)均较C组显著升高(均P<0.01).GhrelinmRNA较C组明显降低(6h:0.39±0.04vs0.66±0.03;12h:0.14±0.37vs0.30±0.05;24h:0.22±0.02vs0.59±0.05,均P=0.000).M组各时点胰腺及肝脏病理评分、血清淀粉酶、肝NF-κBmRNA(6h:0.50±0.05vs0.74±0.04;12h:0.54±0.04vs0.77±0.03;24h:0.57±0.03vs0.82±0.04,均P<0.05)及蛋白表达(24h:0.32±0.04vs0.48±0.07,P<0.05),均较A组显著降低(均P<0.05).GhrelinmRNA较A组升高(6h:0.54±0.03vs0.39±0.04;12h:0.40±0.09vs0.30±0.05;24h:0.39±0.04vs0.22±0.02,均P<0.05).结论:Ghrelin在急性胰腺炎并肝损伤时的表达可能与病变严重程度有关;NF-κB在该病变发展过程中起了重要作用,外源性褪黑素可以减轻急性胰腺炎的胰腺和肝脏病变,该保护作用可能与提高Ghrelin的表达、下调NF-κB的活性有关.

鞘氨醇激酶-1调控ERK和NF-κB通路促进HT-29细胞的增殖和侵袭

目的探讨鞘氨醇激酶-1(Sphk1)对结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡和侵袭转移的影响及其作用机制。方法采用(12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐(PMA)诱导人结肠癌HT-29细胞Sphk1的活化和表达,N,N-二甲基鞘氨醇(DMS)抑制Sphk1的活化和表达;采用MTT法测定细胞的增殖,流式细胞术分析细胞的凋亡,γ-32P-ATP掺入法检测Sphk1的活性,Western杂交检测蛋白的表达,Transwell小室模型观察细胞迁移和侵袭能力的变化,ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)的分泌。结果 PMA和DMS能分别有效地诱导和抑制HT-29细胞Sphk1活性和蛋白的表达;同时,PMA能促进细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞的凋亡;DMS则抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞的凋亡。诱导Sphk1的活化以及表达可促进细胞ERK、p-ERK和NF-κBp65的蛋白表达以及MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,而抑制Sphk1则抑制ERK、p-ERK和NF-κBp65的蛋白表达以及MMP-2、MMP-9和uPA的分泌。结论 Sphk1可能是通过激活ERK和NF-κB通路,上调MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,从而促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞的凋亡。

雨蛙肽联合脂多糖诱导重度急性胰腺炎体外细胞模型钙通道的变化

目的应用雨蛙肽联合脂多糖诱导AR42J细胞构建重度急性胰腺炎体外细胞模型,研究该模型构建前后细胞内钙通道的变化。方法体外培养大鼠AR42J细胞,实验分组设对照组、雨蛙肽处理组、雨蛙肽+脂多糖处理组。采用RT-PCR检测细胞Cav1.3、Cav2.1、Cav2.2、Cav3.1、Cav3.2 mRNA表达;Western blotting检测细胞Cav1.3、Cav2.1、Cav3.1蛋白表达水平;以荧光探针Fluo-4-AM标记细胞内游离钙,激光共聚焦扫描显微镜观察[Ca2+]i的变化。结果药物处理组Cav1.3、Cav2.1、Cav3.1 mRNA及蛋白表达水平较对照组均明显增高(mRNA:F=23.392,46.85,61.338;蛋白:F=33.798,43.588,79.467;P<0.01),雨蛙肽+脂多糖处理组与雨蛙肽处理组相比较上述检测指标的mRNA表达量也显著增高(P<0.01);药物处理组与对照组Cav2.2、Cav3.2mRNA表达水平无明显差异(F=0.175、0.316;P>0.05);激光共聚焦显微镜观察结果显示药物处理组比对照组[Ca2+]i升高(F=638.984,P<0.01),雨蛙肽+脂多糖处理组较雨蛙肽处理组[Ca2+]i也显著升高(P<0.01)。结论胰腺腺泡细胞内钙超载在雨蛙肽联合脂多糖诱导的重度AP细胞模型发生发展的机制中具有重要作用。

SphK1对结肠癌lovo细胞的增殖、迁移和凋亡的影响

目的:探讨鞘胺醇激酶1(SphK1)对结肠癌lovo细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制.方法:培养人结肠癌lovo细胞株,实验分3组:对照组、PMA组和DMS组.PMA组加入佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA,100nmol/L),DMS组加入N,N-二甲基鞘胺醇(DMS,50μmol/L),对照组加入等量的培养基.采用MTT法和克隆形成实验检测细胞生长增殖的变化,流式细胞术检测细胞凋亡,Tranwell小室模型观察细胞迁移能力的变化,RT-PCR检测mRNA的表达,Westernblot检测蛋白的表达.结果:PMA显著促进细胞的增殖、迁移并抑制细胞的凋亡,DMS则显著抑制细胞的增殖、迁移并促进细胞的凋亡(对照组、PMA组和DMS组的细胞增殖活力:0.71±0.03vs1.05±0.05vs0.46±0.04;克隆形成率:1.32%±0.26%vs2.17%±0.17%vs0.73%±0.13%;凋亡率:16.25%vs9.15%vs32.58%;迁移细胞数:72.19±3.36vs98.46±6.25vs40.48±4.27;均P<0.05).PMA显著促进黏着斑激酶(FAK)的活性和表达,相反DMS则抑制FAK的活性和表达[对照组、PMA组和DMS组FAKmRNA的表达强度:0.151±0.008vs0.212±0.014vs0.114±0.021;蛋白:0.332±0.022vs0.374±0.029vs0.296±0.018;磷酸化FAK(p-FAKTyr397)蛋白:0.186±0.032vs0.234±0.017vs0.112±0.023;均P<0.05].结论:SphK1可促进lovo细胞的增殖和迁移能力并抑制细胞的凋亡,其机制可能是通过激活FAK通路而发挥作用.

NIBP在结肠癌NF-κB非经典激活通路中的作用及其临床意义

目的:检测结肠癌患者组织中NIK-IKKβ结合蛋白(NIK,IKKβ-binding protein,NIBP)、磷酸化p100(p-p100)、p52和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关通路蛋白:CD44、波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,探讨NIBP蛋白的表达与非经典核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路的关系及其在结肠癌发生、发展、浸润和转移中的作用.方法:采用免疫组织化学SP法分别检测50例正常结肠黏膜、20例结肠腺瘤以及114例结肠癌患者组织中NIBP、p-p100、p52、CD44、Vimentin和E-cadherin的表达.结果:免疫组织化学结果显示有转移结肠癌组织中NIBP、p-p100、p52、CD44和Vimentin的阳性表达均高于无转移结肠癌以及结肠腺瘤和正常结肠黏膜组织,而E-cadherin则正好相反(P<0.05);且NIBP、p-p100、p52、CD44、Vimentin和E-cadherin在结肠癌组织中的表达与浸润深度、TNM临床分期、淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05);结肠癌组织中NIBP与p-p100、p52表达之间,C D44与p52、E-cadherin及Vimentin表达之间均存在明显相关性(P<0.05).结论:NIBP可能通过激活非经典NF-κB信号通路诱导EMT的发生,从而促进结肠癌的发生、发展、浸润和转移.

曲古抑菌素A对CNE2鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究曲古抑菌素A(TSA)在体外对人鼻咽癌细胞的影响,为鼻咽癌的药物治疗提供依据。方法将鼻咽癌CNE2细胞经0.125%胰酶处理制成细胞悬液,培养24 h。试验设TSA1～TSA5组及对照组,TSA1～TSA5组分别加入TSA200、300、400、500、600 nmol/L,对照组加入等量生理盐水;6、12、24、36 h后MTT法计算细胞抑制率。将CNE2细胞接种于25 ml培养瓶中,分为TSA1～TSA3组及对照组,TSA1～TSA3组分别加入300、400、500nmol/L TSA处理24 h;对照组加入等量生理盐水;流式细胞仪检测分析细胞周期及细胞凋亡率。结果 TSA可明显抑制CNE2细胞生长,同时点细胞抑制率对照组<TSA1组<TSA2组<TSA3组<TSA4组<TSA5组,并呈剂量时间效应关系,P均<0.05。TSA干预后CNE2细胞G2/M期细胞明显增多,出现G2/M期阻滞,细胞凋亡率明显升高,且呈浓度依赖性。结论 TSA能明显抑制CNE2细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有G2/M期阻滞效应,是治疗鼻咽癌的潜在药物。

早期液体复苏达标对急性胰腺炎临床预后的影响

目的探讨早期液体复苏达标对急性胰腺炎患者临床预后的影响。方法回顾性分析2018—2020年广西医科大学第二附属医院收治的124例急性胰腺炎患者的临床资料,根据液体复苏达标的5个指标,将平均动脉压>65 mm Hg、心率<120次/min、尿素氮(BUN)<7.14 mmol/L、红细胞压积(HCT)≥0.35且≤0.44、尿量>0.5 m L·kg^(-1)·h^(-1)的患者归为复苏达标组(59例,47.58%),上述指标未达以上标准的患者归为复苏未达标组(65例,52.42%)。比较两组患者的临床资料。结果复苏达标组急性坏死物积聚、急性肾损伤发生率分别为5.08%、8.47%,显著低于复苏未达标组的23.08%和24.62%(P均<0.05)。复苏未达标组重症急性胰腺炎(SAP)发生率为27.69%,显著高于复苏达标组的11.86%(P<0.05)。结论早期液体复苏达标可以减少胰腺坏死,降低急性肾损伤和SAP的发生率,改善急性胰腺炎患者的临床预后。

Ghrelin在重症急性胰腺炎并发肾损伤中的作用

目的探讨Ghrelin在重症急性胰腺炎(SAP)并肾损伤中的作用以及外源性褪黑素对其的影响。方法 72只大鼠随机分为对照组(C组,n=24)、SAP组(A组,n=24)和褪黑素干预组(M组,n=24)。A组分3次腹腔内注射6%L-精氨酸(L-Arg)1.5g·kg-1·次-1建立SAP模型;C组同法注射等量生理盐水;M组于首次注射L-Arg前0.5h腹腔内注射1%褪黑素50μg/kg。各实验组大鼠于末次腹腔内注射后6h、12h和24h分批处死。光镜下对胰腺和肾组织进行病理学评分,用血清淀粉酶试剂盒测定血清淀粉酶,用ELISA检测血清IL-6,应用RT-PCR检测肾脏Ghrelin及NF-κB p65mRNA表达。结果 A组各时点胰腺及肾脏病理评分、血清淀粉酶及IL-6、肾脏NF-κB p65mRNA表达均较C组显著升高(P<0.05),而同时点Ghrelin mRNA表达较C组明显降低(P<0.05);M组各时点胰腺及肾脏病理评分、血清淀粉酶及IL-6、肾脏NF-κB p65mRNA表达均较A组显著降低(P<0.05),而同时点Ghrelin mRNA表达较A组升高(P<0.05)。结论 Ghrelin在急性胰腺炎并肾损伤时的表达可能与病变严重程度有关。外源性褪黑素可能通过抑制NF-κB p65的表达而减轻急性胰腺炎并肾损伤,并可能使Ghrelin在肾脏中表达增多。

siRNA下调鞘氨醇激酶-1对结肠癌LOVO细胞凋亡和侵袭的影响及其机制的研究

目的研究siRNA下调鞘氨醇激酶-1(Sphk1)的表达对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡、侵袭以及ERK和p38通路的影响。方法采用siRNA抑制Sphk1的表达;采用MTT法测定细胞的增殖,流式细胞术分析细胞的凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭力的变化,Western杂交检测蛋白的表达;采用RT-PCR法检测细胞Sphk1 mRNA表达,ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)的分泌。结果 Sphk1 siRNA显著抑制Sphk1 mRNA和蛋白表达,并可诱导细胞的凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭。抑制Sphk1的表达可降低ERK和磷酸化ERK蛋白的表达,并促进p38和磷酸化p38蛋白的表达,同时可抑制细胞MMP-2、MMP-9和uPA的分泌。结论抑制Sphk1可能是通过抑制ERK并激活p38 MAPK通路,下调MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,从而抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭并促进细胞的凋亡。

鞘氨醇激酶-1激活ERK通路介导人结肠癌细胞株LoVo侵袭与迁移的实验

目的研究Sphk1对人结肠癌LoVo细胞侵袭与迁移能力的影响并探讨其作用机制。方法将人结肠癌LoVo细胞分成Sphk1激活组,Sphk1抑制组,空白对照组。以Phorbol 12-myristate 13-ace-tate(PMA)为Sphk1激活剂(终浓度为100 nM),N,N-dimethyl-D-eryt-hro-sphingosine(DMS)为Sphk1抑制剂(终浓度为50μM),NaCl(终浓度为0.9%)为空白试剂处理LoVo细胞24 h后,用Transwell Boyden小室模型测定LoVo细胞的相对侵袭率与迁移率;用Western blot方法测定细胞Sphk1、ERK1/2与p-ERK1/2蛋白水平的变化;用ELISA方法检测细胞培养上清中MMP-2、MMP-9及uPA的蛋白含量;用半定量RT-PCR检测细胞中MMP-2、MMP-9和uPA的mRNA水平。结果 Sphk1激活剂可促进LoVo细胞侵袭与迁移,同时明显增强LoVo细胞中Sphk1、ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白表达,并促进MMP-2、MMP-9及uPA的mRNA表达与蛋白分泌。Sphk1抑制剂则抑制LoVo细胞侵袭与迁移,同时抑制Sphk1、ERK1/2与p-ERK1/2的蛋白表达,并抑制MMP-2、MMP-9及uPA的mRNA表达与蛋白分泌。结论 Sphk1可促进人结肠癌细胞株LoVo细胞的侵袭与迁移,其机制可能与激活ERK1/2信号通路从而促进MMP-2、MMP-9及uPA mRNA表达与蛋白分泌有关。