抗氯霉素单克隆抗体的制备及鉴定

用人工合成的氯霉素 -人血清白蛋白 (CAP- HSA)作抗原免疫 BAL B/ c小鼠 ,通过杂交瘤技术建立了 1株分泌抗CAP单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 1F9。经检测 ,其分泌的抗体亚类为 Ig G1 ,杂交瘤染色体数目 84～ 96条 ,间接EL ISA检测细胞培养上清效价为 1∶ 2 5 6 ,诱生小鼠腹水的抗体效价可达 1∶ 6× 10 5。该细胞连续培养生物学性状稳定 ,竞争间接酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)显示 ,其与供试抗生素交叉反应小 。

伪狂犬病病毒Ea株gE基因主要抗原区在巴斯德毕赤酵母中的表达

伪狂犬病病毒gE蛋白是一种重要的诊断抗原 ,可用于伪狂犬病根除计划中的鉴别诊断。为了获得大量的抗原 ,将编码gE主要抗原区域的基因片段插入毕赤酵母表达载体中 ,得到的重组表达载体转化GS1 1 5酵母 ,通过G41 8抗性筛选得到一株多拷贝的重组酵母 ,经甲醇诱导表达了截短的gE蛋白 ,并分泌到胞外。Westernblotting分析显示表达的蛋白大小为3 3kD。ELISA结果表明表达蛋白具有良好的抗原性 ,重组酵母的诱导培养上清不需纯化可直接作为抗原检测gE的抗体 。

抗氯霉素单克隆抗体的制备及鉴定

用人工合成的氯霉素－人血清白蛋白（ＣＡＰ－ＨＳＡ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过杂交瘤技术建立了一株分泌抗ＣＡＰ单克隆抗体（ ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞 １Ｆ９。经检测，其分泌的抗体亚类为 ＩｇＧ１； 杂交瘤染色体数目 ８４－ ９６ 条；间接 ＥＬＩＳＡ检测细胞培养上清效价为１：２５６，诱生腹水抗体效价可达１：６×１０５；该细胞连续培养生物学性状稳定，竞争间接酶联免疫吸附试验（ｃｉＥＬＩＳＡ）显示与供试抗生素交叉反应小。该单抗有较大的应用价值。

伪狂犬病gG-ELISA鉴别诊断方法的建立及其应用

利用gG基因表达产物建立了gG-酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴别诊断方法,以该方法检测100份猪血清,结果表明该方法可显著区分gG基因缺失疫苗免疫猪和野毒感染猪,且特异性强、敏感性高。临床应用表明,该方法结果与其它临床诊断结果符合率高。以该方法在部分使用gG基因缺失疫苗的猪场做流行病学调查,共检测842份血清,检出242份阳性,阳性率为28.74%。

应用发光酶基因对快生型大豆根瘤菌HN01结瘤作用进行检测

含发光酶基因luxAB的Tn5转座子自杀质粒pHNC3，在辅助质粒pRK2013的帮助下，转入快生型大豆根瘤菌HN01中小，pHNC3经自杀重组，其Tn5－luxAB转座插入HN01基因组中，从而赋予HN01以发光活性。挑取具有发光活性的HN01杂交单菌落，进行质粒快检和以luxAB为探针的分子杂交，选取Tn5-luxAB分别插入到HN01染色体上和不同质粒上的标记菌株，进行灭菌盆栽实验，并对一株Tn5-luxAB标记于染色体上的菌株HN01LC02进行了模拟大豆栽培条件下的有菌盆栽实验，包括对发光根瘤菌占瘤率的测定和发光根瘤在根系上分布情况的测定。

伪狂犬病毒gG基因的表达及gG-LAT诊断方法的建立

依据伪狂犬病病毒(PseudorabiesVirusPRV)Rice株序列合成针对gG基因的特异性引物,从PRV鄂A株中扩增出gG基因,并将其克隆到pBluescriptⅡSK+质粒中并测序,用SacⅠ和HindⅢ酶切,将gG基因融合到pET 28a质粒中T7启动子下游,构建成原核表达质粒pET 28a gG1,结果并未获得表达。再用NotⅠ切除gG基因后小半部分片段,构建成原核表达质粒pET 28a gG2,使其在E.coliBL21(DE3)中以IPTG诱导表达,经SDS PAGE分析,表达特异带为47KDa,斑点杂交证实表达产物具有抗原性。表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在于细菌裂解液的上清之中,上清经饱和硫酸铵溶液沉淀,透析,PEG20000浓缩,ELISA分析表明,经初步纯化的表达产物可与抗PRV猪血清发生特异性免疫反应。用该产物致敏空白乳胶建立gG 乳胶凝集试验(gG LAT),检测340份血清,结果表明gG LAT能区分gG基因缺失疫苗活苗免疫猪与自然感染野毒的血清学阳性猪,且特异性强、敏感性高。

猪白细胞介素-2在甲醇酵母中的表达

将猪白细胞介素-2(pIL-2)的完整cDNA序列克隆到甲醇酵母(Pichiapastoris)表达载体pPIC3 5K中,在E.coli体系中鉴定得到阳性克隆子pPIC3 5K-IL2。将pPIC3 5K-IL2经SacI线性化后,转化入经LiC1致敏的P.PastorisGS115菌株中,得到的重组菌株经1%浓度甲醇诱导后,利用SDS-PAGE电泳,斑点杂交及去糖基化酶消化证实,在培养上清中获得了分泌型表达的猪白细胞介素-2(蛋白分子量约为20KD),其表达量可达到80mg/L。用CTLL-2细胞进行活性检测,生物学活性可达2×106IU/ml。对其表达情况进行时间梯度分析,确定第5天表达量达到最高点,为最佳诱导时间;分析连续4个批次的重组菌株表达情况,结果表明重组菌株在适当菌体浓度下连续培养均能稳定、高效的表达外源蛋白pIL-2。本实验为进一步大规模生产pIL-2提供了理论依据。

氯霉素间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立

以人工合成的氯霉素 -牛血清白蛋白 (CAP- BSA)为包被抗原 ,氯霉素 (CAP)为竞争半抗原 ,两者与一定量的抗CAP- Mc Ab反应。结果表明 ,理想的包被抗原质量浓度为 1.2 5 mg/ L ,抗 CAP- Mc Ab稀释倍数为 1∶ 12 0 0 0 ,酶标二抗稀释倍数为 1∶ 5 0 0 0 ,最适检测范围为 1～ 10 0 μg/ L,最小检测量为 0 .1μg/ L,批内和批间变异系数分别为 3.6 2 %和 5 .19%。得到回归方程 (y =1.2 730 - 0 .6 74 5 x,r2 =0 .9779)和标准曲线 ,从而建立了快速定量测定 CAP含量的间接竞争酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)。

氯霉素抗体的制备

采用改进的混合酸酐法合成的免疫原氯霉素琥珀酸酯牛血清白蛋白 (CAP HS BSA) ,经红外波谱鉴定后 ,免疫 5只家兔 ,3个月后 ,产生合格氯霉素抗血清 ,用双向琼脂扩散方法测定效价为 1:16。此氯霉素 (CAP)抗血清与氯霉素半琥珀酸酯和琥珀酸钠氯霉素的交叉反应率分别为 85 0 .0 %、80 0 .0 % ,与磺胺二甲嘧啶、磺胺 5 甲氧嘧啶、水溶性氟哌酸、青霉素、链霉素的交叉反应率均小于 0 .0 1%。

氯霉素间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立

以人工合成的氯霉素－牛血清白蛋白（ＣＡＰ－ＢＳＡ）为包被抗原，氯霉素（Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ，ＣＡＰ）为竞争的半抗原，两者与一定量的抗ＣＡＰ单抗（ＣＡＰ－ＭｃＡｂ）反应。实验结果表明，理想的包被抗原浓度为１．２５μｇ／ｍｌ，抗ＣＡＰ－ＭｃＡｂ工作浓度为１：１２０００，酶标二抗工作浓度为 １： ５０００，可测最适范围为 １ｎｇ／ｍｌ－１００ｎｇ／ｍｌ，最小检测量为０．１ｎｇ／ｍｌ，批内和批间变异系数分别为３． ６２％和 ５． １９％。得到回归方程 ｙ ＝１．２７３０－ ０．６７４５ｘ（ｒ２＝ ０． ９７７９）和标准曲线，从而建立了快速定量测定 ＣＡＰ含量的间接竞争酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）。整个测定时间为６小时。

抗伪狂犬病病毒gG蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

以大肠杆菌表达的猪伪狂犬病病毒 (PRV) g G蛋白作为抗原 ,免疫 BAL B/c小鼠 ,经细胞融合、克隆后 ,获得了1F6、2 B92株稳定分泌抗伪狂犬病病毒 g G蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。 1F6、2 B9培养上清及小鼠腹水效价(EL ISA)分别为 1∶ 2 1 1 、1∶ 2 1 1 及 1∶ 10 0× 2 1 1 、1∶ 10 0× 2 1 2 。 1F6、2 B9的染色体众数分别为 87(80～ 94 )、84 (81～ 87)。经间接 EL ISA鉴定 ,1F6、2 B9单抗分别属于 Ig G2 a、Ig G3亚类。1F6、2 B9与猪伪狂犬病病毒 Ea株感染细胞的间接免疫荧光试验结果表明 ,1F6、2 B9确实为伪狂犬病病毒 g G蛋白的单抗。所得单抗与牛传染性鼻气管炎病毒 (IBRV)、猪细小病毒 (PPV)、猪繁殖与呼吸道综合征病毒 (PRRSV)

伪狂犬病病毒gE基因主要抗原表位区在大肠杆菌中的表达与gE乳胶凝集鉴别诊断方法的建立

将伪狂犬病病毒 (PRV)Ea株 gE 基因主要抗原表位区段融合到原核表达载体 pET2 8b的T7启动子下游 ,构建成原核表达质粒 ,经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和Westernblot印迹分析 ,证实 gE 基因主要抗原表位区在大肠杆菌中获得了表达 ,表达产物具有抗原性 ,分子量为 38kD ,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理 ,复性产物致敏乳胶 ,并对抗原致敏浓度、致敏时间、致敏温度进行优化 ,建立了gE乳胶凝集试验 (gE -LAT)。该方法不仅能显著区分 gE 基因缺失疫苗免疫猪血清和野毒感染猪血清 ,而且具有简便、快速等优点。检测临床 36 0份猪血清 ,阳性率为 5 7 78% (2 0 8/ 36 0 ) ,比国外阻断 gE -ELISA的 5 8 0 6 % (2 0 9/ 36 0 )略低 ,阳性符合率为 94 86 % (2 0 3/ 2 14 ) ,总符合率为 96 94 % (349/ 36 0 ) ,两种检测方法结果差异不显著 (P >0 0 5 )。

护理干预对头颈部肿瘤放疗病人生活质量的影响

[目的]探讨护理干预对头颈部肿瘤放疗病人生活质量的影响。[方法]将100例头颈部肿瘤放疗病人根据分层随机化分组法分为观察组、对照组,每组50例,观察组进行规范化干预护理,对照组进行常规护理,两组均护理4周。比较两组病人护理前后生活质量、护理满意度、护理依从性、1年生存情况。[结果]观察组护理后生活质量评分、护理依从性、满意度、1年生存情况优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]头颈部肿瘤放疗病人进行规范化干预护理,可改善病人的生活质量,提高生存期。

优质护理对肝癌患者介入手术治疗效果的影响

目的:探讨优质护理对肝癌患者介入手术治疗效果的影响。方法:选择40例肝癌介入手术治疗患者为研究对象,随机分为观察组和对照组各20例,对照组患者给予常规护理,观察组患者给予优质护理服务,观察比较两组患者术后并发症以及生存时间。结果:观察组患者术后并发症发生率50.00%,明显低于对照组80.00%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者12个月生存率85.00%,明显高于对照组55.00%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:优质护理能有效改善肝癌患者介入手术治疗过程中的生活质量,延长生存时间。

彝族宗教信仰对心身健康影响的初步研究

目的:彝族宗教文化绚烂多彩,从心身健康角度分析宗教在彝族生活中的作用和影响。方法:通过研读专著和期刊杂志,从宗教信仰中的崇拜观念和行为活动中论述彝族宗教信仰的对心身健康的影响。结果:彝族宗教中的毕摩仪式对心身健康有作用,生死观、自我保护意识和节日宣泄对心身健康有积极影响。结论:彝族宗教信仰以及毕摩仪式,在彝民生产生活中发挥了巨大的心理调适作用,对于彝族人民的心身健康有着巨大的积极作用,可以为以后研究中国本土心理学提供参考。