湘南地区梅毒螺旋体基因分型的初步研究

目的了解湘南梅毒螺旋体(Treponemapallidum,TP)的分子亚型的分布,为梅毒分子流行病学研究提供依据。方法收集湘南地区疑似硬下疳的标本52例,经TPpolAPCR筛选后,阳性者用PCR扩增各标本中TP的arp和tpr基因,酶切tpr基因扩增产物,分析各TP菌株arp基因长度和tpr基因的限制性片段长度多态性(RFLP),进行分型。结果TPpolAPCR阳性者43例,可用于分型者38例,分为10个亚型,其中14d亚型为16例,其它亚型包括10d(2),12a(2),12g(1),13d(4),14a(3),14b(2),14f(2),15d(5),16d(1)。结论湘南地区存在TP的多亚型,以14d亚型为主(占42.1%)。

解脲脲原体临床株对氟喹诺酮类药物的敏感性研究

目的 检测自衡阳地区分离的解脲脲原体 (Uu)临床株对氟喹诺酮类药物的敏感性 ,为临床治疗提供参考依据。 方法 应用微量肉汤稀释法检测了 86株Uu对临床应用的六种氟喹诺酮类药物的敏感性。 结果 在六种药物中司帕沙星和加替沙星抗Uu活性最强 ,MIC50 分别为 0 .2 5 μg/mL和 0 .5 μg/mL ,MIC 90 均为 4μg/mL。其次为左氧氟沙星和氧氟沙星 ,MIC50 分别为 1μg/mL和 2 μg/mL ,MIC90 分别为 4μg/mL和 8μg/mL。诺氟沙星和环丙沙星的抗Uu活性较差。 结论 氟喹诺酮类药物司帕沙星、左氧氟沙星和加替沙星的抗Uu活性较老一代药物更强 ,而Uu对老一代氟喹诺酮类药物存在不同程度的耐药现象。

黄花菜中总黄酮的提取及其药理作用初步观察

目的 提取黄花菜中总黄酮并初步观察总黄酮的清除羟自由基和抑菌作用。方法 总黄酮提取采用乙醇索氏提取器粗提 ,聚酰胺柱层析精制 ;采用比色法测定总黄酮对OH·的清除作用 ,采用细菌培养抑制法检验总黄酮的抑菌作用。结果 黄花菜总黄酮对OH·清除率可达 48.7% ,总黄酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌抑制率随含量增加而增大。结论 黄花菜总黄酮对OH·有良好的清除能力 。

人型支原体和解脲脲原体对氟喹诺酮类药物的敏感性研究

目的 探讨人型支原体和解脲脲原体对氟喹诺酮类药物的敏感性，指导临床合理用药。方法 采用微量肉汤稀释法测定人型支原体和解脲脲原体对6种氟喹诺酮类药物的敏感性。结果 司帕沙星和加替沙星对人型支原体和解脲脲原体具有良好的抑菌活性，其MIC50分别为0．03125、0．25mg／L和0．25、0．50mg／L。左氧氟沙星和氧氟沙星对两种支原体的MIC50均分别为1．0、2．0mg/L。诺氟沙星对两种支原体的活性较差，MICl卯分别为16．0、32．0mg／L。环丙沙星对人型支原体的MIC50为2．0mg／L，而对解脲脲原体的MIC50则为8．0mg／L。结论 氟喹诺酮类药物新品种司帕沙星、加替沙星和左氧氟沙星的抗Mh和抗Uu活性强于环丙沙星和氧氟沙星等老一代氟喹诺酮类药物，本结果可为选择氟喹诺酮类药物治疗泌尿生殖道支原体感染提供实验依据。

衡阳地区梅毒螺旋体基因分型的实验研究

目的了解衡阳地区梅毒螺旋体(TP)的分子亚型的分布,为梅毒螺旋体感染分子流行病学研究提供实验依据。方法收集衡阳地区疑似硬下疳的标本52例,经TP polA PCR筛选后,阳性者用PCR扩增各标本中TP的ARP和TPR基因,酶切TPR基因扩增产物,分析各TP菌株ARP基因长度和TPR基因的限制性片段长度多态性(RFLP),进行分型。结果TP polAPCR阳性者43例,可用于分型者38例,分为10个亚型,其中14d亚型有16例,其它亚型包括10d(2)、12a(2)、12g(1)、13d(4)、14a(3)、14b(2)、14f(2)、15d(5)、16d(1)。结论衡阳地区存在TP的多亚型,且以14d亚型为主(42.1%)。

生殖支原体粘附素蛋白MgPa的表达及其多克隆抗体的制备与纯化

目的:制备并纯化生殖支原体(Mg)粘附素蛋白(MgPa)的多克隆抗体,为进一步探讨MgPa的生物学功能及其在Mg的临床诊断与预防方面的应用提供实验基础。方法:构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达生殖支原体粘附素蛋白(rMgPa′),重组蛋白经Western blot鉴定后用Ni-NAT亲和层析柱纯化,然后免疫新西兰兔以制备兔抗rMgPa′血清。用饱和硫酸铵法和溴化氰活化的琼脂糖4B亲和层析柱纯化多克隆抗体,并经Western blot鉴定免疫血清的特异性,用间接ELISA法检测免疫血清的效价。结果:在大肠杆菌中成功表达一分子量约为37kD的6×His-rMgPa′融合蛋白,免疫新西兰兔后获得了相应的多克隆抗体,利用饱和硫酸铵法和亲和层析法纯化后得到具有较高纯度的多克隆抗体,SDS-PAGE分析的结果表明所制备的多克隆抗体分子量约为150kD,Western blot结果表明制备的抗体具有较高的特异性,ELISA结果显示抗体的效价为1∶25600。结论:成功制备了高效价、高特异性的兔抗rMgPa′的多克隆抗体,为进一步研究MgPa的生物学功能、Mg的临床诊断与预防提供了重要的实验基础。

淋病奈瑟菌表面蛋白A真核表达载体的构建及表达

目的构建淋病奈瑟菌外膜蛋白———奈瑟菌表面蛋白A(neisseria surface protein A,NspA)的真核表达载体并使其在真核细胞中表达。方法用PCR方法扩增NspA基因,将扩增的产物连接于测序载体pUCm-T上,并构建重组体pcDNA3.1(+)/NspA。以脂质体法转染RAW264.7和COS-7细胞,用RT-PCR检测NspA mRNA的水平,免疫组化染色法检测蛋白表达。结果扩增的目的基因包括了全段NspA基因,长度约525bp。以脂质体转染RAW264.7和COS-7细胞后,用RT-PCR和免疫组化染色法检测表明,细胞可转录和表达NspA。结论成功构建了重组真核表达载体pcD-NA3.1(+)/NspA,并在真核细胞中得到表达,为研究此蛋白的免疫原性以及淋病基因疫苗的研制提供了物质基础。

某高校大学生泌尿生殖道支原体感染状况的调查及其影响因素分析

目的通过对大学生泌尿生殖道支原体的检测,了解大学生泌尿生殖道支原体的感染状况.并分析影响大学生泌尿生殖道支原体感染的流行病学因素,为大学生泌尿生殖道支原体的预防提供科学依据。方法以某高校医学院2005级学生为研究对象,进行2次调查。按文献制备支原体培养基,取研究对象的中段尿,利用解脲脲原体和人型支原体在生长过程中分别水解尿素和精氨酸产生氨而使培养基变碱,从而使培养基由桔黄色变为紫红色而判断为阳性,2次均为阳性者才算为真阳性。同时采用问卷调查研究对象的基本情况和可能的影响因素,数据库建立和统计学分析采用SPSS 13.0,2χ检验用于单因素分析,成组Logistic回归分析用于多因素分析。结果共检测了998例大学生的尿标本,65例为阳性,其中女性54例,男性11例,总阳性率为6.51%。经单因素2χ检验,发现性别和是否会游泳与泌尿生殖道支原体的感染有关,经多因素成组Logistic回归分析,发现性别、父母健在情况和家庭居住地与泌尿生殖道支原体的感染有关。结论大学生人群存在泌尿生殖道支原体感染,并且女性感染率明显高于男性。父母健在情况、家庭居住地是影响大学生泌尿生殖道支原体感染的危险因素。

改革医学微生物学实验教学 培养创新型医学人才

医学微生物学实验准备工作质量的高低与实验教学效果有密切的关系。本文对实验技术人员自身素质、实验准备计划的制定、实验预做、实验技术人员和实验带教教师的关系、实验方法改革、实验准备模式等方面进行了改革和探索，为提高实验教学质量，培养医学生创新能力提供参考和借鉴。

性病患者及性病高危人群解脲脲原体和人型支原体感染状况分析

目的探讨泌尿生殖道支原体在STD患者及性病高危人群中的感染状况。方法采用培养法对421例STD患者、84例性乱者和185例性病伴侣进行解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)的检测。结果STD患者、性乱者和性病伴侣泌尿生殖道支原体感染率分别为42.28%、35.71%和40.0%,与健康人群(13.48%)比较,差异有显著性(χ2=56.61,19.44,38.16,P<0.005);前三者之间比较,差异无显著性(χ2=1.25,0.28,0.45,P>0.05)。Uu感染率(15.22%)与Mh(5.22%)比较,前者明显高于后者(χ2=37.61,P<0.005)。男性Uu和Mh感染率(分别为8.57%、2.08%)与女性(分别为23.61%、9.18%)比较,女性明显高于男性(χ2=29.82,17.36,P<0.005)。Uu和Mh混合感染率(20.43%)明显高于Uu(15.22%)或Mh(5.22%)的单独感染(χ2=6.41,71.45,P值分别为P<0.05,P<0.005)。结论Uu和Mh在STD患者、性乱者和性病伴侣中流行广、感染率高,在性病的防治和监测工作中应加以重视。

空肠弯曲菌感染及其药物敏感性研究

本文检测1854例急性腹泻患者粪便标本,从中分离出空肠弯曲菌165株,阳性率为8.9%。其中,儿童患者的阳性率(9.5%)高于成人患者(6.9%);农村患者的阳性率高于城市患者。在不同年龄患者中,以1～2岁和15～24岁年龄组的阳性率较高。对各月份阳性病例的统计表明,空肠弯曲菌感染性腹泻的发病高峰在夏秋两季。在正常及非腹泻人群中,空肠弯曲菌的带菌率为1.5%。检测158株空肠弯曲菌对九种常用抗菌药物的敏感性,以对 SMZco 和四环素产生耐药性的菌株较多。

小儿感染性腹泻常见病原菌研究

本文对志贺氏菌、沙门氏菌、EPEC及空肠弯曲菌所致小儿腹泻进行了检测,从1638例粪便标本中分离出病原菌593株,检出率为36.2％。其中,农村患儿的检出率明显高于市区患儿(P<0.005);夏秋季患儿的检出率明显高于冬春季患儿(P<0.005)。在四种病原菌中,以志贺氏菌感染率最高(15.1％),其后为空肠弯曲菌(9.5％)、EPEC(7.0％)、沙门氏菌(4.6％)。志贺氏菌属中以福氏菌检出率居首位,沙门氏菌属以肠炎杆菌、鼠伤寒杆菌的感染多见,EPEC所致腹泻则以O127:B8菌型居多。三年检测结果统计显示,空肠弯曲菌肠炎的增长具有显著性(P<0.05)。药物敏感试验表明,志贺氏菌和EPEC的耐药菌株感染具有普遍性。

HBVpreS2真核载体的构建及其表达

目的扩增乙型肝炎病毒(HBV)前S2基因(preS2),并构建其真核表达载体,为研究HBV树突状细胞疫苗奠定实验基础。方法从慢性乙型肝炎患者血清中提取HBVDNA,用聚合酶链反应技术扩增全长preS2基因,将其克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,经PCR、酶切和DNA测序鉴定筛选阳性克隆,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-preS2,并将其转染巨噬细胞48h后,ELISA检测细胞裂解液中preS2的表达。结果从慢性乙型肝炎患者血清抽提的DNA中扩增得到约860bp大小的目的片段,preS2基因片段正确插入pcDNA3.1(+)载体,得到HBVpreS2真核表达载体pcDNA3.1(+)-pre2。结论成功地构建了含preS2基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-preS2,并能在巨噬细胞中表达目的蛋白HBVpreS2。

性高危人群泌尿生殖道支原体感染状况调查

目的探讨泌尿生殖道支原体在性高危人群中的感染状况。方法采用培养法对468例按摩妇女、95例性乱者和212例性病伴侣进行解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)的检测。结果按摩妇女、性乱者和性病伴侣泌尿生殖道支原体感染率分别为64.7%、35。8%和39.1%,与健康人群(13.5%)比较差异有显著性(χ2=162.14、20.91、37.98,P<0.005)。按摩妇女支原体感染率与性乱者和性病伴侣比较,差异有显著性(χ2=27.55、38.93,P<0.005),性乱者和性病伴侣之间比较,差异无显著(χ2=0.31,P>0.05)。Uu感染率(21.0%)与Mh(4.1%)比较,前者明显高于后者(χ2=100.67,P<0.005)。女性支原体感染率(63.0%)明显高于男性(24.5%),差异有显著性(χ2=74.55,P<0.005。男性Uu感染率(9.0%)与女性(24.0%)比较,女性明显高于男性(χ2=16.79,P<0.005。Uu和Mh混合感染率(30.2%)明显高于Uu(21.0%)或Mh(4.1%)的单独感染(χ2=17.06、185.17,P<0.005)。结论Uu和Mh在按摩妇女、性乱者和性病伴侣中流行广、感染率高,在性病的防治和监测工作中应加以重视。

钩端螺旋体LipL21基因真核表达载体pcDNA3.1(+)/LipL21的构建与鉴定

目的构建钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL21基因片段的真核表达载体,寻找新的预防钩端螺旋体感染的候选疫苗。方法应用PCR技术从钩端螺旋体黄疸出血群赖型56601株基因组模板中扩增LipL21基因,纯化回收后克隆入pUCm-T载体,再亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)。结果双酶切及测序鉴定证明成功构建了LipL21真核表达载体pcDNA3.1(+)/LipL21,DNA测序显示重组质粒含有561 bp的目的基因片段,读码框架正确,无碱基错配及移码突变。测序后结果经与GenBank登录的序列做blast比较,载体上所连目的基因片段序列与GenBank登录的LipL21基因序列完全一致。结论成功构建了钩端螺旋体LipL21基因真核表达载体pcDNA3.1(+)/LipL21。

穿透支原体脂质相关膜蛋白对小鼠巨噬细胞核因子κB活性的影响

目的研究穿透支原体脂质相关膜蛋白能否诱导激活小鼠巨噬细胞核因子κB(NF-κB),以了解穿透支原体潜在的致病性。方法用从穿透支原体中提取的脂质相关膜蛋白刺激小鼠巨噬细胞,经Westernblot和间接免疫荧光等方法检测NF-κB是否被激活,以及NF-κB抑制剂PDTC对NF-κB活性的影响。结果穿透支原体脂质相关膜蛋白能诱导小鼠巨噬细胞激活NF-κB,且NF-κB抑制剂PDTC能部分抑制穿透支原体脂质相关膜蛋白所诱导的NF-κB激活。结论穿透支原体脂质相关膜蛋白能激活小鼠巨噬细胞NF-κB,因而可能与其致病性有关。

性病门诊女性患者性病病原体检测

检测性病门诊３００例女性患者的淋球菌（Ｇｃ）、沙眼衣原体（Ｃｔ）、解脲脲原体Ｕｕ）、念珠菌（Ｃｄ）及阴道毛滴虫（Ｔｖ），结果：Ｇｃ１９例（６．３％）、Ｃｔ５０例（１６．７％）、Ｕｕ１６３例（５４．３％）、Ｃｄ７２例（２４．０％）、Ｔｖ２１例（７．０％），各年龄组间Ｇｃ、Ｃｔ阳性率无显著性差异，而Ｕｕ有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。２７２例患者同时检出细菌３８４株，主要为白色葡萄球菌、大肠杆菌、粪链球菌等条件致病菌。提示女性性病患者应进行多种性病病原体检测。

人型支原体对五种大环内酯类药物敏感性研究

目的检测人型支原体(Mh)对14环(红霉素、罗红霉素和克拉霉素)、15环(阿奇霉素)和16环(交沙霉素)大环内酯类药物的敏感性,为临床合理用药提供参考依据。方法采用微量肉汤稀释法检测了5种大环内酯类药物对106株Mh的最低抑菌浓度(MIC)。结果在5种药物中,交沙霉素抗Mh活性最强,MIC50为0.125 mg/L,MIC90为0.5 mg/L,较弱的为罗红霉素、克拉霉素和阿奇霉素,其MIC50分别为4 mg/L3、2 mg/L和64 mg/L,MIC90分别为32 mg/L1、28 mg/L和512 mg/L,最弱的为红霉素,MIC50为64 mg/L,MIC90为512 mg/L,结论Mh对大环内酯类药物存在不同程度的耐药,16环大环内酯类药物交沙霉素,抗Mh活性强于14环和15环大环内酯类药物。

HPD—利凡诺抗动物早孕实验

利凡诺(2,5—二氨基—7—乙氧基吖啶乳酸盐)是中期妊娠常用的引产药物之一;临床作用效果比天花粉快,较安全,无严重并发症,很少引起感染。依据近几年发现天花粉有抗早孕效果,我们为探讨利凡诺有无抗早孕的功能进行了动物实验研究。利凡诺在安全剂量内一般无毒性反应,但大剂量可发生肝肾中毒症状及溶血性血尿等。为此,我们还探讨了减小剂量的方法。

用协同凝集试验和SPA—固相免疫电镜技术检测EHFV抗原

本文建立了检测流行性出血热病毒(EHFV)抗原的协同凝集试验(COA)和SPA—固相免疫电镜技术(SPA—SPIEM)。COA检测粗制抗原时,先以正常鼠脑和肺悬液吸收用于致敏的抗血清,并用Cowanl株葡萄球菌预先处理抗原,可排除非特异性凝集反应。SPA—SPIEM似较COA敏感。研究结果提示COA和SPA—SPIEM均可用于EHFV抗原的检测,有可能被用于EHF疫区宿主流行病学调查和疾病的快速诊断。