茶多酚对辐照后小鼠生存状况与血中白细胞数影响的研究

为评价茶多酚对小鼠的抗辐射作用 ,将 60只小鼠作为抗辐射I组 ,动态观察白细胞数。另 60只小鼠为抗辐射Ⅱ组 ,进行存活试验。结果表明 ,小鼠经口给予不同剂量茶多酚 ,辐照后各次试验中小鼠血中白细胞数均与对照组无显著性差异 ,茶多酚在大剂量照射时对小鼠白细胞保护作用不明显。 0 83和 2 5 0mg kgBW组小鼠存活率和对照组间比较 ,均有极显著性差异 (P <0 0 1 ) ,对照组辐射后 30天无一存活。

总黄曲霉毒素ELISA定量检测试剂盒研制

目的研究并建立敏感、特异和快速的针对食品中总黄曲霉毒素的ELISA检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速定量检测试剂盒。方法在生产抗总黄曲霉毒素单克隆抗体基础上,利用间接竞争ELISA方法,研制出食品中总黄曲霉毒素快速检测试剂盒,并对试剂盒的各项技术参数进行测定。结果该试剂盒对黄曲霉毒素B+G标准品的最低检出浓度为0.26 ng/ml,标准曲线的线性范围为0.26-20.00 ng/ml,线性方程y=-0.4463x+0.3532(R2=0.9915);对黄曲霉毒素B+G50%的抑制浓度为2.08 ng/ml;试剂盒的条内变异系数为4.18%,条间变异系数为5.21%,抗体亲和力常数为1.52×10-10mol/L;对玉米3个加标水平的平均回收率分别为98.63%,94.56%和1 12.05%;对花生的3个加标水平的平均回收率分别为88.66%,87.50%和85.60%。试剂盒37℃可放置96 h以上;试剂盒对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的交叉反应率分别为100%,57.5%,104%和19%,与其他真菌毒素无交叉反应。结论研制出的ELIS试剂盒能定量检测食品中总黄曲霉毒素。

鲀毒鱼类中河鲀毒素直接竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定方法的研究

为检测毒鱼类中的河毒素 ,建立了用抗河毒素单克隆抗体检测河样品中河毒素的直接竞争抑制性酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法。结果表明 ,直接ELISA法较间接ELISA法灵敏 ,最低检出浓度为 0 1ng mL(每检测孔 0 0 1ng) ,线性范围为 5～ 5 0 0ng mL ,方法的加标回收率为73 0 %～ 118 0 %。本法与传统的小鼠生物试验相比 ,两种方法的测定结果之间在统计学上差异无显著性 (配对t检验 ,P >0 1) ,并具有良好的相关性 (r =0 94 4)。对来自江苏省东海和长江水域的河样品的毒力进行了测定 ,结果表明本方法简单、快速、灵敏 。

单克隆抗体酶联免疫法测定谷物中T-2毒素的研究

运用抗T-2毒素的单克隆抗体,建立了检测谷物(小麦、大米)中T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法。样品经三氯甲烷—无水乙醇(4∶1)提取,用中性氧化铝/活性炭柱净化,制备成样液,供ELISA检测之用。本方法最低检出量为0.1ng/检测孔(1ng/ml),敏感范围为4～1000ng/ml,平均回收率为97.2％～113.2％,精密度为5.1％～14.2％。运用该方法,首次从引起食物中毒的大米中检出T-2毒素,其含量为178.2～418.8ppb。

海藻糖对单克隆抗体热稳定性保护作用的研究

为研究海藻糖在保护单克隆抗体热稳定性方面的作用 ,将海藻糖化单克隆抗体置于室温、37℃、56℃条件下存放 ,采用倍比稀释法对抗体活性进行检测 ,同时还比较不同浓度的海藻糖对单克隆抗体热稳定性的影响。实验结果表明 :海藻糖的浓度为 0 2 50mol L ,且在室温存放的条件下 ,抗体可以存放一年而具有活性。因此 ,海藻糖可以作为一种天然保藏剂 ,有效地提高单克隆抗体的热稳定性 。

小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇酶联免疫吸附测定方法的研究

用B淋巴细胞杂交瘤技术制备了能稳定分泌抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3D7.3D7的亚类为lgG_1.运用该抗体,建立了检测小麦中DON的间接竞争性酶联免疫吸附测定法.该法最低检出量为5ng/ml,敏感范围为5—1000ng/ml;平均回收率为96.6—107.3%;精密度为6.2—13.3%.运用该方法,检测了10份小麦样品.均为阳性,其含量为56.4—1002.0ppb.

PCR方法快速检测食品中的金黄色葡萄球菌

目的建立聚合酶链反应(PCR)方法快速检测牛奶、冰淇淋及肉中的金黄色葡萄球菌(金葡菌)。方法针对金葡菌耐热核酸酶基因(nuc)、纤维蛋白原结合蛋白基因(ClfA)设计并合成2对引物进行PCR扩增,特异的检测金葡菌,并对52株金葡菌和31株非金葡菌进行扩增,验证方法的特异性。在牛奶、冰淇淋及肉中人工污染不同菌量,增菌培养,在不同时间段提取DNA进行PCR扩增,确定该方法在食品中的检出限。结果nuc、ClfA两对引物对金葡菌的检出均有很好的特异性,在3种食品中的检出限均为10cfu/g(ml),全部检测可在24h完成。结论建立了适用于牛奶、冰淇淋及肉中的金葡菌检测的快速、灵敏、特异的PCR方法。

间接竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定豚毒鱼类中河豚毒素的研究

将河豚鱼样品的组织匀浆用０．１％乙酸溶液煮沸２次，合并滤液用乙醚脱脂２次，将水相用０．０５ｍｏｌ／ＬＰＢＳ稀释后（调ｐＨ６．５～７．０）供ＥＬＩＳＡ检测之用。结果表明，本法的最低检出浓度为１．０×１０－３ｍｇ／Ｌ（０．１ｎｇ／检测孔），线性范围为０．０１～１．０ｍｇ／Ｌ，方法的加标回收率为７３．８％～１１７．４％。用传统的小鼠生物试验比较了方法的准确性。测定结果表明，两种方法之间在统计学上无显著性差异（配对ｔ检验，Ｐ＞０．２），并具有良好的相关性（ｒ＝０．９１６）。

肠炎沙门氏菌脉冲场凝胶电泳分型研究

目的 为研究肠炎沙门氏菌菌株间的关系,特建立了分子流行病学研究方法脉冲场凝胶电泳分型方法,并对从食品中分离的肠炎沙门氏菌进行了分型研究。方法 1991～2 0 0 1年间,从河南、黑龙江等省份采集食品样品,分离出肠炎沙门氏菌,挑取单个菌落增菌,用溶菌酶、蛋白酶K和TE缓冲液依次提取菌体DNA后,用限制性内切酶XbaΙ消化胶块,然后在CHEFMapper仪上进行脉冲场凝胶电泳,电泳条件:0 . 5×TBE缓冲液、14℃、1%琼脂糖、脉冲时间5s～4 5s、2 6h、6V cm。应用λ噬菌体DNA作为脉冲场凝胶分子量标准。结果 从鸡肉、牛肉、熟肉及蔬菜中分离出30株肠炎沙门氏菌,其中18株来自河南省,绝大多数菌株(2 2株)分离于2 0 0 1年。对所得菌株进行脉冲场凝胶电泳后,结果显示30株肠炎沙门氏菌分为A、B两个型,两型图谱之间有8个条带的差异。A型菌株有19株,占全部菌株的6 3. 3% ,B型菌株有11株,占36 .7%。A型之内又可以分出2个亚型,其中A1型占78 .9% ,A2亚型与A1亚型相比的差别在于,A2型在5 0kb处有一条带缺失。在菌株分型与采集时间和采集地点之间没有相关性,但所有从鸡肉中分离到的菌株均为A1型,提示了某种有待进一步研究的流行病学趋势。结论 在研究肠炎沙门氏菌不同菌株之间的分子流行病学关系方面。

玉米赤霉烯酮ELISA定量检测试剂盒研制

目的研制玉米赤霉烯酮ELISA快速定量检测试剂盒,用以检测食品中抗玉米赤霉烯酮（ZEN）.方法在ZEN单克隆抗体基础上,用间接竞争酶联免疫吸附法研究试剂盒的各项指标.结果试剂盒最低检出浓度为1ng/ml,标准曲线的线性范围为1～200ng/ml,回归方程为Y=0.99-0.40X（R^2=0.99）;抗体对ZEN 50%的抑制浓度为16.3ng/ml;对玉米和小麦的平均加标回收率分别是96.5%和95.5%,变异系数分别是13.2%和10.9%;试剂盒4℃保质期超过6个月;对参试真菌毒素的交叉反应率均小于1%;实验室内的变异系数小于15%,实验室间变异系数小于20%;用本法与HPLC法同时检测美国维康公司玉米赤霉烯酮盲样,结果均在允许范围之内,且两种检测方法无差别.结论该试剂盒各项指标符合相关技术要求,具有快速、灵敏、稳定、专一的特点.

1992～2001年食源性疾病暴发资料分析——国家食源性疾病监测网

目的 了解国家食源性疾病监测网覆盖地区人群食源性疾病爆发的发生状况。方法 对 13个监测地区 1992～ 2 0 0 1年食源性疾病爆发上报资料进行回顾性分析。结果 十年间共上报 5 770件食源性疾病暴发事件 ,涉及的患者人数达 16 2 995人。微生物引起的食源性疾病事件和涉及人数最多 ,分别占总体的38 5 %和 5 0 9%。副溶血性弧菌 (31 1% )是主要的病因物质。化学物引起的食源性疾病事件和涉及人数分别占总体的 37 5 %和 2 8 6 %。结论 应不断加强完善我国食源性疾病监测网络的建设。

食品工业用红曲菌株产桔青霉素能力的研究

为筛选出低产或不产桔青霉素的红曲霉菌株 ,选用 3 5株食品发酵工业用红曲霉 ,研究不同的培养条件对其产桔青霉素能力的影响。结果显示 ,所有菌株在大米培养基上均产桔青霉素 ,3 0个株菌 (85 71% )在液体培养基上产毒 ;两种培养基上的产毒范围分别为 0 2 8～ 2 458 80mg kg和 0 0 9～ 55 65mg kg ,毒素产量均数分别为 2 0 1 60mg kg和 11 99mg kg ,中位数分别为 61 99mg kg和 3 51mg kg ,同一菌株在大米培养基上产桔青霉素能力高于液体培养基。色价测定结果表明 ,菌株在大米培养基上的色素产量也高于液体培养基 (3～ 50 9倍 ,平均 93倍 )。本研究筛选出一株在大米培养基上色素产量最高 (113 4U g)而桔青霉素产量较低、适用于食品发酵工业用的红曲霉菌株。研究结果提示 ,用于生产食品或保健食品的红曲菌种在使用前必须进行安全性评价 ,并在全国范围内定期对生产厂家、菌种保藏单位使用和保藏的菌种进行产桔青霉素能力调查 ,对红曲发酵产品中桔青霉素污染水平进行监测 。

抗河豚毒素单克隆抗体的制备及其特性的初步研究

将用合成的匙孔形虫戚血蓝蛋白－甲醛－河豚毒素（ＫＬＨ－ＨＣＨＯ－ＴＴＸ）连接物免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Ｓｐ２／０融合，经３～４次亚克隆，建立了３个稳定分泌抗河豚毒素的杂交瘤细胞株，分别命名为１Ｇ３、４Ｇ３、６Ｄ９。其中１Ｇ３和４Ｇ３分属ＩｇＧ２ｂ亚类，６Ｄ９属ＩｇＧ１亚类。腹水的抗体稀释度为１∶１０５～１：５×１０６。用竞争抑制性酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）测定三种抗体的最低反应浓度为１×１０－３ｍｇ／Ｌ。

赭曲霉毒素A免疫学检测方法的研究

目的 建立敏感、特异和快速针对赭曲霉毒素A的酶联免疫吸附试验检测方法 ,研制具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒。方法 利用B细胞杂交瘤技术 ,建立能够分泌抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,并获得抗赭曲霉毒素A单克隆抗体。结果 建立赭曲霉毒素A的间接竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定方法(ELISA)。该方法的最低检出浓度为 0 5ng/ml,线性范围 2～ 5 0 0ng/ml,线性方程Y =0 2 72X +1 0 7(r =0 9978)。方法的加标回收率为 79 0 %～ 119 7%。利用该方法对北京市售的大米、小麦样品进行检测。结果表明 ,小麦样品的污染率为 6 0 71% ,最大值为 8 2 6 μg/kg ;大米样品的污染率为 17 86 % ,最大值为 3 4 4 μg/kg。结论 该方法简单、快速、灵敏 。

国产红曲制品中桔青霉素污染水平研究

目的了解中国红曲制品中桔青霉素的污染水平。方法用高效液相色谱方法对采自市场或厂家送检的114个红曲产品进行了研究。结果114份样品中,桔青霉素阳性者68份,阳性率59.65%,污染水平范围0.18～1739.23mgkg,平均污染水平211.61mgkg(中位数6.62mgkg)。红曲产品种类不同,桔青霉素污染水平各异,以红曲红色素粉中桔青霉素含量最高,27份样品中有25份(92.59%)检出桔青霉素,污染水平范围0.85～1739.93mgkg,平均508.40mgkg(中位数169.88mgkg)。其次为红曲米粉原料,19份样品中有12份(63.16%)桔青霉素阳性,但83.33%阳性样品中桔青霉素水平在10mgkg以下;功能性红曲中84%样品桔青霉素水平在6mgkg以下。结论国产红曲制品不同程度被桔青霉素污染,所调查样品中有15份(13.16%)色价桔青霉素比值超过日本标准。

离子对高效液相色谱法分析米曲霉发酵液中的曲酸

为建立米曲霉培养液中曲酸的离子对高效液相色谱法 ,采用 0 0 1mol L磷酸氢二钠及 2mmol四丁基溴化胺做流动相 ,选择 2 2 6nm紫外吸收波长 ,测定米曲酶发酵液中的曲酸 ,曲酸在C1 8色谱柱上获得良好的分离。本方法检出限为 0 0 1 2 μg ml;麦芽汁 蛋白胨、麦芽汁 酵母膏、马铃薯 酵母膏 蔗糖三种培养液中回收率分别为 98 2 %、1 0 3 4%、97 2 % ;RSD分别为 0 51 %、0 45 %、0 43 %。

河豚毒素单抗ELISA检测试剂盒的研制

目的研制快速检测河豚鱼类中的河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)试剂盒.方法在生产的抗TTX单克隆抗体基础上,利用间接竞争酶联免疫吸附方法研制TTX快速检测试剂盒.结果该试剂盒的最低检出浓度为5ng/ml,标准曲线的线性范围为5～500ng/ml,回归方程为Y＝-0.3546x+1.1006,r=0.99(P<0.05);河豚鱼25和100ng/ml 2个水平的加标回收率为72.45%～111.24%;试剂盒常温下可保存225d;与牛血清白蛋白(BSA)无交叉反应;实验室内的变异系数和实验室间的变异系数均<20%.结论该试剂盒快速、简单、灵敏,可满足实际工作需要.

反相高效液相色谱法测定玉米中玉米赤霉烯酮

建立了反相高效液相色谱法检测玉米中玉米赤霉烯酮的分析方法。该方法的标准曲线回归方程为y=2.97×103+5.23×104ρ(r=0.9998);玉米样品3个水平的加标回收率分别为84.8%,86.7%和89.2%;相对标准偏差分别为4.0%,5.2%和4.4%;加标浓度为50 ng/g的玉米样品日内相对标准偏差为0.69%;玉米样品日间相对标准偏差为2.6%;方法检出限为3.0 ng/g。